專(zhuān)利名稱(chēng)：組織特異性衰老生物標(biāo)志物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及動(dòng)物中健康和長(zhǎng)壽的營(yíng)養(yǎng)支持領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明提供了研發(fā)動(dòng)物中衰老的組織特異性通用生物標(biāo)志物的方法，并通過(guò)這些方法鑒定了幾組加強(qiáng)的生物標(biāo)志物，以及所述組織特異性通用衰老生物標(biāo)志物在動(dòng)物中鑒定具有抗衰老特性的營(yíng)養(yǎng)物和其他功能性成分或試劑的用途。相關(guān)技術(shù)的說(shuō)明正好處于隨意攝取水平以下的限量熱量攝入已經(jīng)在許多動(dòng)物物種，包括哺乳動(dòng)物例如嚙齒類(lèi)動(dòng)物和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中顯示出增加壽命、降低或延緩許多年齡相關(guān)的疾病的發(fā)病、改善應(yīng)激抗性和減緩功能衰退(參見(jiàn)，例如D. K. Ingram等人O004)Arm. N. Y. Acad. Sci. 1019 :412-423)。事實(shí)上，臨床試驗(yàn)已經(jīng)開(kāi)始評(píng)價(jià)熱量限制(CR)在人類(lèi)中的長(zhǎng)壽促進(jìn)作用。但是在人類(lèi)和動(dòng)物中一樣，由于所需限制的程度和長(zhǎng)短，在大多數(shù)個(gè)體中，CR似乎不可能是提高壽命的可行策略。為此，已經(jīng)將研究集中于在不實(shí)質(zhì)改變飲食攝入的情況下，鑒定能模擬CR的作用的物質(zhì)，例如，藥物試劑、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。嘗試已經(jīng)直接朝向鑒定可以模擬CR的一種或多種生理或生物化學(xué)作用的試劑(參見(jiàn)，例如，digram等人，2004，上述的)或者可以在某些組織和器官中模擬與CR 相關(guān)的基因表達(dá)譜的試劑(例如，Spindler，美國(guó)專(zhuān)利6，406，853;美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi) 2003/0124540)。關(guān)于后者，已經(jīng)公開(kāi)了用于分析與CR相關(guān)的基因和篩選基于基因表達(dá)譜的CR模擬物的方法(Spindler等人，美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)2004/0180003,2004/0191775和 2005/0013776 ；Pan 等人，美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi) 2007/0231371)。盡管可得到上面所總結(jié)的方法，但對(duì)于篩選可以延遲或逆轉(zhuǎn)衰老過(guò)程、促進(jìn)健康衰老和增加長(zhǎng)壽的試劑更強(qiáng)大的、更快和更少花費(fèi)的方法，仍存在需求。本發(fā)明滿(mǎn)足了該需求。發(fā)明概述因此，本發(fā)明的目的是提供在所選擇的組織中鑒定衰老的加強(qiáng)和通用可行的基因表達(dá)標(biāo)志物的方法，并提供了通過(guò)這些方法鑒定的幾組加強(qiáng)的和通用可行的基因表達(dá)標(biāo)志物。本發(fā)明的另一目的是提供與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上基因或基因區(qū)段。本發(fā)明另外的目的是提供包含與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的多個(gè)多核苷酸的組合。本發(fā)明的另一目的是提供適合于檢測(cè)與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的基因的表達(dá)的兩個(gè)或兩個(gè)以上多核苷酸或多肽探針的組合，以及例如含有該探針的基質(zhì)陣列的裝置。本發(fā)明另外的目的是提供用于檢測(cè)與年輕受試者或標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上基因的差異表達(dá)的方法。本發(fā)明的另一目的是提供用于測(cè)量與年輕受試者或標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照比較，測(cè)試物質(zhì)對(duì)在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上基因的表達(dá)譜的影響的方法。使用鑒定組織特異性衰老生物標(biāo)志物的新方法，以及代表與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的基因和基因區(qū)段的多核苷酸或多肽的新組合，實(shí)現(xiàn)了一個(gè)或一個(gè)以上這些另外的目的。用于產(chǎn)生組合物、探針的多核苷酸、基于探針的裝置， 以及用于測(cè)定與年輕受試者或標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的多核苷酸的狀態(tài)的方法，對(duì)于實(shí)現(xiàn)以上定義的目的，例如，在所選擇的組織中預(yù)測(cè)和診斷與衰老有關(guān)的疾病和對(duì)于在特定的組織中篩選物質(zhì)以測(cè)定它們是否可能具有抗衰老作用，是有用的。也提供了包含探針的組合、使用探針的裝置、和物質(zhì)的多種試劑盒，以及用于操縱信息的多種計(jì)算機(jī)程序和用于交流涉及差異表達(dá)基因的信息的通信介質(zhì)和使用其方法。本發(fā)明其他的和另外的目的、特性和優(yōu)點(diǎn)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。發(fā)明詳述定義如通篇所用，范圍在本文中作為簡(jiǎn)寫(xiě)使用，以避免必須詳細(xì)顯示和描述該范圍內(nèi)的每一個(gè)值。可以根據(jù)需要選擇該范圍內(nèi)的任意適當(dāng)?shù)闹底鳛樵摲秶纳舷拗怠⑾孪拗祷蚪K值。應(yīng)理解，此處包含本文中所示的任一范圍或區(qū)間之間的任一和所有全部或部分整數(shù)。如在本文和所附權(quán)利要求書(shū)中所用，單詞的單數(shù)形式包括其復(fù)數(shù)，并且反之亦然， 除非另外清楚指明。因此，指代詞“一個(gè)”、“一”和“所述”(“a”、“an”和“the”)一般包括各個(gè)術(shù)語(yǔ)的復(fù)數(shù)。例如，提到“動(dòng)物”、“方法”或“物質(zhì)”時(shí)包括此類(lèi)“動(dòng)物”、“方法”或“物質(zhì)”的復(fù)數(shù)。類(lèi)似地，應(yīng)當(dāng)將詞語(yǔ)“包含”、“包括”和“含有”解釋為包含在內(nèi)而不是不包含。術(shù)語(yǔ)“動(dòng)物”指人類(lèi)或其他動(dòng)物，包括禽類(lèi)、牛、犬、馬、貓、hicrine、鼠類(lèi)、綿羊和豬等動(dòng)物。當(dāng)將該術(shù)語(yǔ)用于比較測(cè)試受試者的情況時(shí)，比較的動(dòng)物是相同物種的和可能的相同品種或種類(lèi)的動(dòng)物?！鞍閭H動(dòng)物”是任一馴養(yǎng)的動(dòng)物，且包括但不限于，貓、狗、兔子、豚鼠、 雪貂、倉(cāng)鼠、小鼠、沙鼠、馬、牛、山羊、綿羊、驢、豬等。優(yōu)選地，動(dòng)物是人類(lèi)或伴侶動(dòng)物例如犬或貓。術(shù)語(yǔ)“抗體”指任一與特異抗原結(jié)合的免疫球蛋白，包括IgG、IgM、IgA、IgD和 IgE抗體。該術(shù)語(yǔ)包括多克隆抗體、單克隆抗體、單價(jià)抗體、人源化抗體、雜共軛對(duì)配合物 (heteroconjugate)、具有多表位特異性的抗體組合物、嵌合抗體、雙特異性抗體、雙抗體、 單鏈抗體和抗體片段例如Fab、Fab，、F (ab，)2和Fv或者其他抗原結(jié)合片段。術(shù)語(yǔ)“陣列，，指在基質(zhì)上順序排列的至少兩種探針。探針的至少一個(gè)是對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)，并且探針的至少一個(gè)是診斷性探針。在基質(zhì)上從約2個(gè)至約40，000個(gè)探針的排列確保探針和樣品多核苷酸或多肽之間形成的每一標(biāo)記復(fù)合物的大小和信號(hào)強(qiáng)度是分別可區(qū)別的。術(shù)語(yǔ)“結(jié)合復(fù)合物”指當(dāng)樣品中的多肽與結(jié)合配偶體，例如抗體或其功能性片段特異結(jié)合(如本文中所定義)時(shí)形成的復(fù)合物。
術(shù)語(yǔ)“卡路里限制”或“熱量限制”指在沒(méi)有營(yíng)養(yǎng)不足的情況下的任一低熱量飲食方案。一般而言，該限制是源自糖類(lèi)、脂肪和蛋白質(zhì)的總熱量的限制。盡管沒(méi)有限制到全部， 但限制一般是相對(duì)于隨意消耗的約25%至約40%的熱量攝入術(shù)語(yǔ)“飲食補(bǔ)充物”指除動(dòng)物的正常飲食外擬被消化的產(chǎn)物。飲食補(bǔ)充物可以以任一形式，例如固體、流體、凝膠、片劑、膠囊、粉末等。優(yōu)選地，它們以方便的劑型提供。在一些實(shí)施方案中，它們以散裝消費(fèi)包裝例如散裝粉末或液體提供。在其他實(shí)施方案中，補(bǔ)充物以可以包含到其他食物物品例如點(diǎn)心、加工處理物(treats)、補(bǔ)充棒(supplement bar)、 飲料等中的散裝量提供。術(shù)語(yǔ)“差異表達(dá)”或“差異地表達(dá)”指如通過(guò)在樣品中轉(zhuǎn)錄信使RNA或翻譯蛋白質(zhì)的不存在、存在或至少兩倍量的改變所檢測(cè)到的增加的或上調(diào)的(unregulated)基因表達(dá)或者降低的或下調(diào)的基因表達(dá)。如本文中所述，術(shù)語(yǔ)“有效量”指化合物、材料、組合物、藥物或其他材料對(duì)實(shí)現(xiàn)特別的生物結(jié)果，例如在所選擇的組織中逆轉(zhuǎn)或延遲衰老是有效的量。術(shù)語(yǔ)“食物”或“食物組合物”指意圖由動(dòng)物，包括人類(lèi)消耗的，并為其提供營(yíng)養(yǎng)的組合物。如本文中所述，“為人類(lèi)消耗配制的食物產(chǎn)品”是特別地意圖由人類(lèi)攝食的任一組合物。“寵物食物”是意圖由寵物，優(yōu)選地由伴侶動(dòng)物消耗的組合物?！巴耆暮蜖I(yíng)養(yǎng)均衡的寵物食物”是以合適的量和比例，例如基于伴侶動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)領(lǐng)域中公認(rèn)的權(quán)威機(jī)構(gòu)的推薦，含有對(duì)食物的預(yù)期接受者或消費(fèi)者所有已知的所需營(yíng)養(yǎng)物的寵物食物。因此，在沒(méi)有添加補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)源的情況下，能將此類(lèi)食物用作為飲食攝入的唯一源以維持生命或促進(jìn)生產(chǎn)。營(yíng)養(yǎng)均衡的寵物食物組合物在本領(lǐng)域是廣泛已知并廣泛使用的。術(shù)語(yǔ)“片段”指(1)為完整序列的一部分的寡核苷酸或多核苷酸序列，并且對(duì)于特定的用途，其具有與完整多核苷酸序列相同的或類(lèi)似的活性，或者( 為完整序列的一部分的肽或多肽序列，并且對(duì)于特定的用途，其具有與完整多肽序列相同的或類(lèi)似的活性。此類(lèi)片段可以包含認(rèn)為適合于特定用途的任一數(shù)目的核苷酸或氨基酸。一般而言，寡核苷酸或多核苷酸片段含有來(lái)自完整序列至少約10、50、100、或1000個(gè)核苷酸，并且多肽片段含有至少約4、10、20或50個(gè)來(lái)自完整序列的連續(xù)氨基酸。該術(shù)語(yǔ)包括片段的多核苷酸變體和多肽變體。術(shù)語(yǔ)“基因”指參與產(chǎn)生多肽的全部或部分DNA區(qū)段，包括在編碼區(qū)之前和之后的區(qū)域(前導(dǎo)區(qū)和非轉(zhuǎn)錄尾區(qū))和在單個(gè)編碼區(qū)段(外顯子)之間的間插序列(內(nèi)含子)。 該術(shù)語(yǔ)包括與基因編碼序列的互補(bǔ)區(qū)(complement)雜交的任一 DNA序列。術(shù)語(yǔ)“基因產(chǎn)物”指基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，例如mRNA或其衍生物(例如，cDNA)或者基因轉(zhuǎn)錄物的翻譯產(chǎn)物。術(shù)語(yǔ)“基因產(chǎn)物”一般指翻譯產(chǎn)物，其是蛋白質(zhì)。在本文中，術(shù)語(yǔ)“基因產(chǎn)物”可以與術(shù)語(yǔ)“蛋白質(zhì)”互換使用。術(shù)語(yǔ)“同系物”指(1)多核苷酸，包括來(lái)自相同的或不同的動(dòng)物物種的多核苷酸， 具有與對(duì)照核苷酸大于30^^50%,70%或90%的序列相似性，并且具有與對(duì)照多核苷酸相同的或基本上相同的特性，并執(zhí)行與對(duì)照多核苷酸相同的或基本上相同的功能，或者具有在嚴(yán)格條件下與對(duì)照多核苷酸特異雜交的能力或O)多肽，包括來(lái)自相同的或不同的動(dòng)物物種的多肽，具有與對(duì)照多肽大于30150170%或90%的序列相似性，并且具有與對(duì)照多肽相同的或基本上相同的特性，并執(zhí)行與對(duì)照多肽相同的或基本上相同的功能或者具有與對(duì)照多肽特異結(jié)合的能力。當(dāng)指全長(zhǎng)編碼序列的片段時(shí)，這些片段的功能可能僅僅是編碼某序列多肽的選定部分或者是可以與編碼該多肽的另一多核苷酸片段雜交的合適類(lèi)似序列。當(dāng)指多肽的片段時(shí)，這些片段的功能可能僅僅是形成適合于產(chǎn)生抗體的表位。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，例如Karl in和Altschul算法(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87 2264-2268(1990))可以確定兩個(gè)多肽序列或兩個(gè)多核苷酸序列的序列相似性。此類(lèi)算法已經(jīng)合并入 Altschul 等人的 NBLAST 和 XBLAST 程序中(J. Mol. Biol. 215 :403-410 (1990))。 為了獲得用于比較目的的空位比對(duì)，可以使用如在Altschul等(Nucl.Acids Res. 25 3389-3402(1997))中所述的 Gapped Blast。當(dāng)使用 BLAST 和 Gapped BLAST 程序時(shí)，使用各個(gè)程序(例如，XBLASI^PNBLAST)的默認(rèn)參數(shù)。參見(jiàn) http: //ww.ncbi.nlm.nih.gov。術(shù)語(yǔ)“雜交復(fù)合物”指當(dāng)一個(gè)多核苷酸的嘌呤與互補(bǔ)的多核苷酸的嘧啶形成氫鍵， 例如，5’ -A-G-T-C-3’與3’ -T-C-A-G-5’堿基配對(duì)時(shí)，在樣品多核苷酸之間形成的復(fù)合物。 互補(bǔ)的程度和核苷酸類(lèi)似物的用途影響雜交反應(yīng)的有效性和嚴(yán)格性。術(shù)語(yǔ)“結(jié)合(in conjunction)”指將藥物、食物或其他物質(zhì)(1)與組合物，特別地食物組合物一起施用給動(dòng)物，或( 使用相同或不同的施用途徑在大約相同的時(shí)間或定期地分別以相同的或不同的頻率施用給動(dòng)物。“定期地”指對(duì)于特定物質(zhì)，以可接受的劑量方案施用物質(zhì)?！按蠹s相同的時(shí)間”一般指在相同的時(shí)間或在彼此間隔約72小時(shí)內(nèi)施用物質(zhì) (食物或藥物)?！敖Y(jié)合”特別包括施用方案，其中將物質(zhì)例如藥物在規(guī)定的時(shí)期施用，并將本發(fā)明的組合物無(wú)限定地施用。術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”當(dāng)指動(dòng)物時(shí)，指任一物種或種類(lèi)的個(gè)體動(dòng)物。該術(shù)語(yǔ)可以與術(shù)語(yǔ)“受
試者”互換使用。術(shù)語(yǔ)“長(zhǎng)壽” 一般指對(duì)于特定的物種，或者當(dāng)在物種內(nèi)存在區(qū)分時(shí)，對(duì)于在該物種內(nèi)的特定品系、品種或種群(ethnic group)而言，生命的持續(xù)超過(guò)了平均預(yù)期壽命?！疤岣叩膲勖被颉霸黾拥膲勖敝柑囟▌?dòng)物的壽命的任一顯著的超過(guò)了該動(dòng)物所屬物種的平均預(yù)期壽命的延長(zhǎng)。術(shù)語(yǔ)“多核苷酸”或“寡核苷酸”指核苷酸的聚合物。該術(shù)語(yǔ)包括DNA和RNA(包括 cDNA和mRNA)分子，單鏈的或雙鏈的，如果是單鏈的，其互補(bǔ)序列為線(xiàn)性或環(huán)狀形式。該術(shù)語(yǔ)也包括作為合適序列的片段、變體、同系物和等位基因，其具有與原始序列相同的或基本上相同的特性，并執(zhí)行相同的或基本上相同的功能。特別地，該術(shù)語(yǔ)包括來(lái)自不同物種，例如小鼠和狗或貓的同系物。當(dāng)比對(duì)時(shí)，該序列可以是完全互補(bǔ)的(沒(méi)有錯(cuò)配)或者可以具有至多約30%的序列錯(cuò)配。優(yōu)選地，對(duì)于多核苷酸，鏈含有約50至10，000個(gè)核苷酸，更優(yōu)選地約150至3，500個(gè)核苷酸。優(yōu)選地，對(duì)于寡核苷酸，鏈含有約2至100個(gè)核苷酸，更優(yōu)選地約6至30個(gè)核苷酸。多核苷酸或寡核苷酸的確切大小取決于多種因素和特定的應(yīng)用， 以及多核苷酸或寡核苷酸的用途。該術(shù)語(yǔ)包括合成的和從天然源分離并純化的核苷酸聚合物。術(shù)語(yǔ)“多核苷酸”包括“寡核苷酸”。術(shù)語(yǔ)“多肽”、“肽”或“蛋白質(zhì)”指氨基酸的聚合物。該術(shù)語(yǔ)包括天然存在的和非天然存在的(合成的)聚合物和其中用人工化學(xué)模擬物取代了一個(gè)或一個(gè)以上氨基酸的聚合物。該術(shù)語(yǔ)也包括片段、變體和同系物，其具有與原始序列相同的或基本上相同的特性并執(zhí)行相同的或基本上相同的功能。該術(shù)語(yǔ)包括任一長(zhǎng)度的聚合物，優(yōu)選地含有約2至1000 個(gè)氨基酸，更優(yōu)選地約5至500個(gè)氨基酸的聚合物。該術(shù)語(yǔ)包括合成的和從天然源分離并純化的氨基酸聚合物。術(shù)語(yǔ)“探針”指(1)寡核苷酸或多核苷酸，RNA或者DNA，不管是作為在純化的限制酶消化中天然存在的還是合成產(chǎn)生的，其能與具有與探針互補(bǔ)的序列的多核苷酸退火或者特異雜交或者( 化合物或物質(zhì)，包括肽或多肽，其能特異地結(jié)合特定的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段，而基本上排斥其他蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段。寡核苷酸或多核苷酸探針可以是單鏈的或者雙鏈的。探針的確切長(zhǎng)度取決于許多因素，包括溫度、來(lái)源和用途。例如，對(duì)于診斷性應(yīng)用，取決于靶序列的復(fù)雜性，寡核苷酸探針一般含有約10個(gè)至100個(gè)、15個(gè)至50個(gè)或者 15個(gè)至25個(gè)核苷酸。在某些診斷性應(yīng)用中，多核苷酸探針含有約100-1000、300-600個(gè)核苷酸，優(yōu)選地約300個(gè)核苷酸。在本文中，選擇與特定靶序列的不同鏈“基本上”互補(bǔ)的探針。這意味著在一組預(yù)測(cè)定的條件下，該探針必須是足夠互補(bǔ)的，以與它們的各自靶序列特異雜交或者退火。因此，探針序列不需要反映靶的確切互補(bǔ)序列。例如，非互補(bǔ)的核苷酸片段可以附著于探針的5’或3’端，而探針序列的剩下部分與靶序列互補(bǔ)。備選地，非互補(bǔ)堿基或更長(zhǎng)的序列可以散布在探針中，條件是該探針序列具有與靶多核苷酸序列足夠的互補(bǔ)性，以特異地與靶多核苷酸退火。肽或多肽探針可以是與蛋白質(zhì)或肽特異結(jié)合的任一分子， 包括DNA(對(duì)于DNA結(jié)合蛋白質(zhì))、抗體、細(xì)胞膜受體、肽、輔因子、凝集素、糖、多糖、細(xì)胞、細(xì)胞膜、細(xì)胞器和細(xì)胞器膜。術(shù)語(yǔ)“樣品”指含有例如，多核苷酸、多肽、抗體、代謝物等的任一動(dòng)物組織或流體，包括細(xì)胞和包含DNA和RNA的其他組織。實(shí)例包括脂肪、血液、軟骨、結(jié)締組織 (connective)、上皮、淋巴、肌肉、神經(jīng)、痰等。樣品可以是固體的或流體的，并且可以是DNA、 RNA、cDNA、體液例如血液或尿液、細(xì)胞、其細(xì)胞制備物或其可溶性組分或者培養(yǎng)基整分試樣、染色體、細(xì)胞器等。術(shù)語(yǔ)“單獨(dú)包裝”指試劑盒的組分與一個(gè)或一個(gè)以上容器物理相關(guān)或包含在其內(nèi)，并將其作為生產(chǎn)、分配、銷(xiāo)售或使用的單位。容器包括但不限于，包、箱、瓶、熱縮塑料包 (shrink wrap packages)、主要的或另外固定的組分或者其組合。單獨(dú)包裝可以是物理相關(guān)的單獨(dú)的食物組合物的容器，以將它們作為生產(chǎn)、分配、銷(xiāo)售或使用的單位。術(shù)語(yǔ)“特異結(jié)合”指兩個(gè)分子之間特異的和精確的相互作用，其取決于它們的結(jié)構(gòu)，特別地它們的分子側(cè)基。例如，調(diào)節(jié)蛋白嵌入到DNA分子的大溝中、兩單鏈核酸之間沿主鏈的氫鍵鍵合或者蛋白質(zhì)的表位與激動(dòng)劑、拮抗劑或抗體之間的結(jié)合。術(shù)語(yǔ)“特異地雜交”指具有足夠互補(bǔ)序列的兩單鏈多核苷酸之間的締合，以在本領(lǐng)域一般使用的預(yù)測(cè)定條件下允許該雜交(有時(shí)也稱(chēng)為“基本上互補(bǔ)”)。例如，該術(shù)語(yǔ)可以指多核苷酸探針與包含在根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面的單鏈DNA或RNA分子內(nèi)的基本上互補(bǔ)的序列雜交，以基本上排除多核苷酸探針與非互補(bǔ)序列的單鏈多核苷酸雜交。當(dāng)適合于其使用的上下文時(shí)，術(shù)語(yǔ)“標(biāo)準(zhǔn)”指(1)與含有來(lái)自施用了測(cè)試物質(zhì)的受試者的組織的樣品比較，含有來(lái)自施用了對(duì)照或參考物質(zhì)或者沒(méi)有施用物質(zhì)的受試者的組織的對(duì)照樣品，例如，以測(cè)定測(cè)試物質(zhì)是否會(huì)引起差異的基因表達(dá)。術(shù)語(yǔ)“嚴(yán)格條件”指(1)在具有0. 牛血清白蛋白、0. 菲可、0. 聚乙烯吡咯烷酮、PH6. 5，含有750mM NaCl、75mM檸檬酸鈉的50mM磷酸鈉緩沖液的50% (體積/體積)甲酰胺中，在42°C雜交，⑵在42°C，在50%甲酰胺、5XSSC(0. 75M NaCl、0.075M檸檬酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH6.8)、0. 1 %焦磷酸鈉、5XDenhardt雜交溶液、超聲的鮭魚(yú)精子DNA(50y g/ml)、0. 1% SDS 和 10%葡聚糖硫酸酯中雜交；在 42°C，在 0. 2XSSC和 0. 1% SDS 中洗滌或者在50°C，用0.015M NaCUO. 0015M檸檬酸鈉、0. 1 % Na2SO4洗滌或者應(yīng)用類(lèi)似的低離子強(qiáng)度和高溫洗滌劑以及類(lèi)似的變性劑進(jìn)行類(lèi)似的方法。如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“組織特異性標(biāo)志物”或“組織特異性生物標(biāo)志物”指與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的基因和它們的表達(dá)產(chǎn)物。術(shù)語(yǔ)“組織特異性”旨在包括組織和器官。例如，所選擇的組織可以是來(lái)自心臟的平滑肌組織，并且可以將該組織特異性標(biāo)志物稱(chēng)為“心臟特異性”。作為另一實(shí)例，所選擇的組織可以是脂肪組織，其可以不與任一特定的器官相關(guān)。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解在整個(gè)說(shuō)明書(shū)的上下文中使用的這些術(shù)語(yǔ)。術(shù)語(yǔ)“變體”指(1)含有來(lái)自多核苷酸序列的任一替換、變異、修飾、取代、缺失或添加一個(gè)或一個(gè)以上核苷酸的多核苷酸序列或?qū)Χ嗪塑账嵝蛄羞M(jìn)行任一替換、變異、修飾、 取代、缺失或添加一個(gè)或一個(gè)以上核苷酸的多核苷酸序列，并且其具有與原始序列相同的或基本上相同的特性，并執(zhí)行相同的或基本上相同的功能和( 含有來(lái)自多肽序列任一替換、變異、修飾、取代、缺失或添加一個(gè)或一個(gè)以上氨基酸的多肽序列或?qū)Χ嚯男蛄羞M(jìn)行任一替換、變異、修飾、取代、缺失或添加一個(gè)或一個(gè)以上氨基酸的多肽序列，并且其具有與原始序列相同的或基本上相同的特性，并執(zhí)行相同的或基本上相同的功能。因此，該術(shù)語(yǔ)包括單核苷酸多態(tài)性(SNP)和等位變異，并包括多肽中保守或非保守氨基酸替換。根據(jù)需要，該術(shù)語(yǔ)也包括化學(xué)衍生化的多核苷酸或多肽，以及用天然不存在的核苷酸或氨基酸替換的核苷酸或氨基酸。術(shù)語(yǔ)“虛擬包裝”指試劑盒組分通過(guò)關(guān)于一個(gè)或一個(gè)以上物理或虛擬試劑盒組分的說(shuō)明而聯(lián)合在一起，其指導(dǎo)用戶(hù)如何獲取其他組分，例如，在一個(gè)包裝(bag)中含有一個(gè)組分和指導(dǎo)用戶(hù)前往網(wǎng)址、聯(lián)系記錄的信息、查看可見(jiàn)信息或者聯(lián)系醫(yī)務(wù)工作者 (caregiver)或指導(dǎo)者以獲取如何使用試劑盒的說(shuō)明。“年輕的”一般指處于成年早期，即經(jīng)過(guò)青春期或青年期的成熟的個(gè)體，如由物種或者由物種內(nèi)的品系、品種或種群，根據(jù)已知的參數(shù)定義。如本文中所用，“年老的”或“老年的”指身體上或時(shí)間上在其平均預(yù)期壽命的最后30%內(nèi)的個(gè)體，如由物種或者由物種內(nèi)的品系、品種或種群，根據(jù)已知的參數(shù)確定。此處公開(kāi)的方法和組合物以及其他進(jìn)展并不限于本文中所述的特定方法、步驟和試劑，因?yàn)?，?duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，他們是可以變化的。此外，本文中所用的術(shù)語(yǔ)僅用于描述特定的實(shí)施方案的目的，并且并不意圖和并非限制公開(kāi)的或要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍。除非另外定義，本文中所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)，專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)和縮寫(xiě)具有由本發(fā)明領(lǐng)域中或使用該術(shù)語(yǔ)的領(lǐng)域中普通技術(shù)人員通常理解的含義。盡管可以將與本文中所述的組合物、方法、生產(chǎn)的物品或其他方法或材料類(lèi)似的或等同的那些任一組合物、方法、生產(chǎn)的物品或其他方法或材料用于本發(fā)明的實(shí)踐，但在本文中描述了優(yōu)選的組合物、方法、生產(chǎn)的物品或其他方法和材料。本文中引用的或提及的所有專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)、出版物和其他參考文獻(xiàn)在此處以受適用的法律允許的程度引用作為參考。這些參考文獻(xiàn)的討論僅旨在總結(jié)其中所進(jìn)行的推斷。并未做出關(guān)于任一此類(lèi)專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)、出版物或參考文獻(xiàn)或其任何部分是相關(guān)的、重要的或現(xiàn)有技術(shù)的承諾。特別保留了反對(duì)此類(lèi)專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)、出版物和其他參考文獻(xiàn)為相關(guān)的、重要的或現(xiàn)有技術(shù)的任一主張的準(zhǔn)確性和適用性的權(quán)利。發(fā)明本發(fā)明部分源于發(fā)明人研發(fā)的用于在所選擇的組織中鑒定衰老的加強(qiáng)基因表達(dá)標(biāo)志物的方法。該方法涉及在物種中多個(gè)品系、品種和種群中的所選擇的組織中篩選差異基因表達(dá)的步驟，并使用必須在篩選的大多數(shù)品系、品種或種群中差異表達(dá)的候選基因表達(dá)標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)。使用該標(biāo)準(zhǔn)和，任選地，一個(gè)或一個(gè)以上次級(jí)篩選標(biāo)準(zhǔn)，已經(jīng)鑒定了在多個(gè)所選擇的組織中的多組加強(qiáng)的衰老基因表達(dá)標(biāo)志物。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，將標(biāo)志物用于測(cè)量至少一個(gè)差異表達(dá)基因的表達(dá)。 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將標(biāo)志物用于測(cè)量?jī)蓚€(gè)或兩個(gè)以上差異表達(dá)基因的表達(dá)。測(cè)量?jī)蓚€(gè)或兩個(gè)以上差異表達(dá)基因提供了所選擇組織的基因表達(dá)模式或基因表達(dá)譜。更優(yōu)選地，可以在幾種所選擇的組織中進(jìn)行多次差異表達(dá)基因的測(cè)量，這提供了基因表達(dá)模式或譜的其他信息。在本發(fā)明的多種實(shí)施方案中，可以以一種或兩種方式測(cè)量基因表達(dá)的改變(1) 通過(guò)檢測(cè)由特定的基因產(chǎn)生的mRNA來(lái)測(cè)量轉(zhuǎn)錄；和⑵通過(guò)檢測(cè)由特定的轉(zhuǎn)錄物產(chǎn)生的蛋白質(zhì)來(lái)測(cè)量翻譯。使用本領(lǐng)域用于定量多核苷酸的任一熟知方法，例如，如PCR(包括但不限于， RT-PCR和qPCR)、RNA酶保護(hù)、Northern印跡法、微陣列、大陣列(macroarray)和其他雜交方法，在RNA水平測(cè)量減少的或增加的表達(dá)。根據(jù)本發(fā)明測(cè)定的或討論的基因一般為mRNA 或反轉(zhuǎn)錄mRNA的形式?；蚩梢允强寺〉暮?或擴(kuò)增的?？寺”旧硭坪醪⒉黄蚧蛟谌后w內(nèi)的表現(xiàn)。然而，優(yōu)選地是將聚腺苷酸+RNA用作為源，因?yàn)樗梢砸愿俚募庸げ襟E使用。因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于在所選擇的組織中鑒定衰老的基因表達(dá)標(biāo)志物的方法。該方法包括使用基因在物種多個(gè)品系、品種或種群中的所選擇組織中差異表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)選地以預(yù)測(cè)定的顯著水平(例如，P < 0. 10、P <0. 05、P < 0.01)，選擇與年輕受試者比較，在老年受試者的組織中，差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上基因。在某些實(shí)施方案中，基因在2種、3種、4種、5種、6種、7種、8種、9種或10種或更多的品系、品種或種群中差異表達(dá)。在其他實(shí)施方案中，將該標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置為基因在大多數(shù)測(cè)試的品系、品種或種群中差異表達(dá)，并且可以提高該標(biāo)準(zhǔn)，以使基因在至少50%、60%、70%、80%、90%或100%的測(cè)試品系、品種或種群中差異表達(dá)?？梢詫⒃摲椒▽?shí)踐于任一物種的品系、品種或種群上。在特別的實(shí)施方案中，物種是哺乳動(dòng)物，并特別地人類(lèi)或伴侶動(dòng)物，例如犬或貓、或者如上所定義的其他伴侶動(dòng)物。選擇用于實(shí)踐該方法的組織可以是任一組織或器官，包括但不限于脂肪、膀胱、血液、骨、骨髓、腸、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)、乳房、支氣管、軟骨、結(jié)腸直腸、結(jié)締組織、內(nèi)分泌系統(tǒng)、 眼、雌性生殖器官、腺體、心臟、腸、腎臟、肝臟、肺和鼻/支氣管系統(tǒng)、淋巴結(jié)和淋巴器官、雄性生殖器官、口和舌、除腦/CNS的神經(jīng)組織、胰臟、腹膜、脾和胃等。在示例性實(shí)施方案中， 該組織選自心臟、肌肉、腦或脂肪組織。上述方法可以進(jìn)一步包括用于在所選擇的組織中鑒定衰老的加強(qiáng)標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)。 例如，該方法可以進(jìn)一步包括標(biāo)準(zhǔn)與年輕受試者比較，在老年受試者中差異表達(dá)基因的差異表達(dá)至少部分受到熱量限制的逆轉(zhuǎn)。該方法也可以進(jìn)一步包括標(biāo)準(zhǔn)已知或疑是與一種或多種衰老相關(guān)的生理功能有關(guān)的，與年輕受試者比較，在老年受試者中差異表達(dá)的基因。 可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)或通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員可得到的文獻(xiàn)確定基因產(chǎn)物的功能。將上述方法用于鑒定所選擇的組織中衰老的生物標(biāo)志物。因此，在另一方面， 本發(fā)明提供了包含與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的、在其中表達(dá)的多個(gè)多核苷酸或蛋白質(zhì)的組合，其中多核苷酸選自編碼表2、表5、表8或表10 中所列的蛋白質(zhì)或其片段的基因。這些表列出了基因符號(hào)、基因名稱(chēng)和“Entrez”號(hào)，其使得可以在 National Institutes of Health National Center for Biotechnology Information(NCBI)數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得基因和基因產(chǎn)物的全部說(shuō)明。在一個(gè)實(shí)施方案中，所選擇的組織是心臟，并且多核苷酸選自編碼Amyl、Apod、 Bdhl、C3、Casql、Ccl8、Kcnd2、Lcn2、Mt2、Myot、Pah、Prkcq、Serpina3n、Skap2> Tmeml6k 禾口 Vgll2的兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因。在該組中，通過(guò)熱量限制，在C3、Ccl8、Lcn2、Mt2、Pah、 Prkcq、Serpina3n、Tmeml6k 和 Vgl 12 中逆轉(zhuǎn)了差異表達(dá)。在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是脂肪組織，并且多核苷酸選自編碼Aspn、 Clec4n、Col6a2、Coi 18al、Cox8b、Crip2、Earl l、Emilin2、Otopl、Pla2g2d、Rhbdl3、Slc6al3 和Sycp3的兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因。在該組中，通過(guò)熱量限制，在Aspn、Col6a2、Crip2、 Emilin2、0topl、Pla2g2d、Rhbdl3 和 Slc6al3 中逆轉(zhuǎn)了差異表達(dá)。在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是腦，并且多核苷酸選自編碼Apod、B2m、Clqa、 Clqb、Cd68、Clec7a、Cst7、CtscU Gfap, 1133、Lgals3、Lyzs 和 Sppl 的兩個(gè)或多個(gè)的基因。 在該組中，通過(guò)熱量限制，在Apod、B2m、Clqa、Clqb、CtscU Gfap, 1133、Lyzs和Sppl中逆轉(zhuǎn)了差異表達(dá)。在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是肌肉，并且多核苷酸選自編碼C4、Cdkn2c、 Cdsl、ColIal、Colla2、Col3al、Dusp26、Edg2、Igh_6、Mt2、Plk2、Rhpn2 和 Syt9 的兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因。在該組中，通過(guò)熱量限制，在C4、Cdkn2c、CdsU CollaU Colla2、Col3al、 Edg2、Igh-6、Mt2、Plk2 和 Syt9 中逆轉(zhuǎn)了差異表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合包含兩個(gè)或兩個(gè)以上多核苷酸或表達(dá)自多核苷酸的蛋白質(zhì)。優(yōu)選地，對(duì)于合適的特定物種、組織和用途，組合包含了多個(gè)多核苷酸或表達(dá)自多核苷酸的蛋白質(zhì)，一般地約3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)、6個(gè)、7個(gè)、8個(gè)、9個(gè)、10個(gè)、11個(gè)、12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、 15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)、18個(gè)、19個(gè)、20個(gè)、25個(gè)、30個(gè)、35個(gè)、40個(gè)、45個(gè)、50個(gè)、60個(gè)、70個(gè)、 80個(gè)、90個(gè)、100個(gè)或更多的多核苷酸或蛋白質(zhì)，或者其片段。當(dāng)組合包含一個(gè)或一個(gè)以上片段時(shí)，該片段可以是任意大小的保留了原始多核苷酸或蛋白質(zhì)的特性和功能，優(yōu)選地約 30%、60%或90%的原始特性和功能的片段。多核苷酸和蛋白質(zhì)可以來(lái)自任一動(dòng)物包括人類(lèi)，特別地犬和貓，最特別地犬。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)信息庫(kù)(standard information mining)和本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的分子方法，可以獲得來(lái)自不同動(dòng)物物種的多核苷酸和蛋白質(zhì)的同系物。例如，可以將基因或蛋白質(zhì)的名稱(chēng)、 公共數(shù)據(jù)庫(kù)檢索號(hào)或功能的描述輸入到幾個(gè)公共可獲得的數(shù)據(jù)庫(kù)之一中，其會(huì)產(chǎn)生提供有關(guān)來(lái)自不同物種的信息，包括序列信息的資源列表。此類(lèi)數(shù)據(jù)庫(kù)的一種是“^formation Hyperlinked over Proteins (iHOP) ” 數(shù)據(jù)庫(kù)，其可以通過(guò) url ihop-net. org 在因特爾網(wǎng)上獲得。備選地，可以使用已知基因或蛋白質(zhì)的公共數(shù)據(jù)庫(kù)檢索號(hào)，以獲得該基因或蛋白質(zhì)的序列信息，并且使用序列比對(duì)搜索，搜索其他物種中的同系物或直向同源物。例如，可以在 National Institutes of Health' s National Center for Biotechnology Information (NCBI)數(shù)據(jù)庫(kù)中輸入來(lái)自小鼠的基因或蛋白質(zhì)的GenBank檢索號(hào)，從而獲得該小鼠基因的DNA或多肽序列。使用相同的數(shù)據(jù)庫(kù)，在小鼠DNA或蛋白質(zhì)序列、或者其足夠定義基因或蛋白質(zhì)的長(zhǎng)度的片段上進(jìn)行BLAST搜索，以鑒定來(lái)自其他物種，例如，貓的足夠同源序列。然后，可以將來(lái)自其他目的物種的序列的檢索號(hào)輸入到數(shù)據(jù)庫(kù)中，以獲得涉及那些全長(zhǎng)核苷酸或蛋白質(zhì)序列的信息，以及其他描述性信息。在另一方面，本發(fā)明提供了包含用于檢測(cè)與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異基因表達(dá)的兩個(gè)或兩個(gè)以上探針的組合。在某些實(shí)施方案中，所選擇的組織是心臟、脂肪、腦或肌肉組織，并且探針包含(a)與編碼表2、表5、表8或表10中列出的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上基因特異雜交的多核苷酸；或者(b)與選自表2、表5、表 8或表10中列出的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上多肽特異結(jié)合的多肽結(jié)合劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所選擇的組織是心臟，并且由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是 Amyl、Apod、Bdhl、C3、Casql、Ccl8、Kcnd2、Lcn2、Mt2、Myot、Pah、Prkcq、Serpina3n、Skap2Λ TmemWk和Vgll2。在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是脂肪，并且由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是 Aspn、Clec4n、Col6a2、Coll8al、Cox8b、Crip2、Earll、Emilin2、0topl、Pla2g2d、 I hbdl3、SlC6a13和Sycp3。在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是腦，并且由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是 Apod、B2m、Clqa、Clqb、Cd68、Clec7a、Cst7、CtscU Gfap> 1133、Lgals3、Lyzs 和Sppl。又在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是肌肉，并且由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是 C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Dusp26、Edg2、Igh-6、Mt2、Plk2、Rhpn2 和 Syt9。在特別的實(shí)施方案中，差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是(a)心臟中的 C3、Ccl8、Lcn2、Mt2、Pah、Prkcq、Serpina3n、Tmem 16k 禾口 Vgll2 ； (b) 脂肪組織中的 Aspn、Col6a2、Crip2、Emilin2、OtopU Pla2g2d、Rhbdl3 和 Slc6al3 ； (c)腦中的 Apod、B2m、Clqa、Clqb、CtscUGfap、1133、Lyzs 和 Sppl ；或(d)肌肉中的 C4、Cdkn2c、 Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Edg2、Igh_6、Mt2、Plk2 和 Syt9。優(yōu)選地，對(duì)于合適的特定物種、組織和用途，組合物包含用于檢測(cè)多核苷酸或蛋白質(zhì)，或者其片段的多個(gè)探針，一般約5個(gè)、10個(gè)、15個(gè)、20個(gè)、25個(gè)、30個(gè)、35個(gè)、40個(gè)、45個(gè)、 50個(gè)、60個(gè)、70個(gè)、80個(gè)、90個(gè)、100個(gè)、200個(gè)、500個(gè)或更多的探針。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以使用針對(duì)單一靶基因或蛋白質(zhì)的多個(gè)不同探針，以完善使用該探針的測(cè)定的敏感性和準(zhǔn)確性。例如，可以使用與靶多核苷酸上不同的序列特異雜交的幾個(gè)寡核苷酸探針。 同樣地，可以使用對(duì)靶蛋白上不同的表位免疫學(xué)上特異的幾個(gè)抗體。使用在本文中所列的任一基因的序列信息，可以制備針對(duì)來(lái)自任一物種，優(yōu)選地犬或貓的所討論樣品的一個(gè)或一個(gè)以上寡核苷酸或多核苷酸探針。該探針應(yīng)當(dāng)具有足夠的長(zhǎng)度，以基本上專(zhuān)門(mén)地與合適的互補(bǔ)基因或轉(zhuǎn)錄物特異雜交。在某些實(shí)施方案中，寡聚核苷酸探針為至少約10個(gè)、12個(gè)、14個(gè)、16個(gè)、18個(gè)、20個(gè)或25個(gè)長(zhǎng)度的核苷酸。在一些實(shí)施方案中，期望的是至少約30個(gè)、40個(gè)、50個(gè)、60個(gè)、70個(gè)、80個(gè)、90個(gè)或100個(gè)核苷酸的更長(zhǎng)探針，和在一些實(shí)施方案中，合適的是長(zhǎng)于約100個(gè)核苷酸的探針。探針可以包含編碼功能蛋白質(zhì)的全長(zhǎng)序列。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，例如，從核苷酸體外合成、從天然源分離和純化或者酶促地切割本發(fā)明的多核苷酸，可以制備或獲得核酸探針。
可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的多種方法檢測(cè)包含與本發(fā)明的多核苷酸雜交的核酸探針的雜交復(fù)合物。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，可以將固定化的核酸探針用于多核苷酸和它們的表達(dá)模式的快速和特異檢測(cè)。一般地，核酸探針與固相支持體連接，并且靶多核苷酸 (例如，基因、轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、擴(kuò)增子或最常見(jiàn)地?cái)U(kuò)增混合物)與探針雜交。一般用熒光團(tuán)或其他標(biāo)記，例如鏈親和素，標(biāo)記探針或靶或者二者。在標(biāo)記靶的情況下，可以通過(guò)檢測(cè)結(jié)合的熒光檢測(cè)雜交。在標(biāo)記探針的情況下，一般通過(guò)淬滅標(biāo)記來(lái)檢測(cè)雜交。在探針和靶二者都標(biāo)記的情況下，一般通過(guò)監(jiān)測(cè)由兩個(gè)結(jié)合標(biāo)記的接近產(chǎn)生的顏色轉(zhuǎn)變(color shift)來(lái)進(jìn)行雜交的檢測(cè)。多種標(biāo)記策略、標(biāo)記物等，特別地對(duì)于基于熒光的應(yīng)用都是本領(lǐng)域已知的。在另一實(shí)施方案中，探針包含多肽結(jié)合劑，其與由本文中所列的一個(gè)或一個(gè)以上多肽的表達(dá)產(chǎn)生的多肽或其片段特異地結(jié)合?？梢允褂每傻玫降脑诒?、表5、表8和表10 中鑒定的任一蛋白質(zhì)或其片段的序列信息制備此類(lèi)蛋白質(zhì)結(jié)合探針?？梢杂糜跍y(cè)定樣品中蛋白質(zhì)的水平的測(cè)定技術(shù)也是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。此類(lèi)測(cè)定技術(shù)包括免疫放射測(cè)定法、競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定法、蛋白印跡分析和ELISA測(cè)定法。在使用抗體的測(cè)定方法中，多克隆抗體和單克隆抗體二者都適用于在本發(fā)明中使用。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員正常理解，此類(lèi)抗體可以是對(duì)特定的蛋白質(zhì)、或蛋白質(zhì)的表位、或蛋白質(zhì)片段免疫學(xué)上特異的。制備對(duì)蛋白質(zhì)或多肽免疫學(xué)上特異的多克隆抗體和單克隆抗體的方法也是本領(lǐng)域熟知的。本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案可以使用用于檢測(cè)和定量由本文所述的基因的表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的抗體。盡管可以通過(guò)免疫沉淀、親和分離、蛋白質(zhì)印跡分析等檢測(cè)蛋白質(zhì)，但是優(yōu)選的方法是使用ELISA型方法，其中將抗體固定在固相支持體上，并將靶蛋白質(zhì)或多肽暴露于固定化的抗體。探針或靶，或者二者都可以標(biāo)記。多種標(biāo)記策略、標(biāo)記物等都是本領(lǐng)域已知的。在另一方面，本發(fā)明提供了包含固定了陣列的固相支持物的裝置，所述陣列包含用于檢測(cè)與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異基因表達(dá)的多個(gè)探針。在某些實(shí)施方案中，所選擇的組織是心臟、脂肪、腦或肌肉組織，并且探針包含(a)與編碼表 2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上基因特異雜交的多核苷酸； 或(b)與選自表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上多肽特異結(jié)合的多肽結(jié)合劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將裝置用于檢測(cè)來(lái)自犬或貓的基因的差異表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所選擇的組織是心臟，并且由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Amy1、Apod、Bdh1、C3、Casql、Cc18、Kcnd2、Lcn2、Mt2、Myot、Pah、Prkcq、Serpina3n、Skap2、 TmemWk和Vgll2。在另一實(shí)施方案中，選擇的組織是脂肪，并且由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Aspn、Clec4n、Col6a2、Coll8al、Cox8b、Crip2、Earll、Emilin2、0topl、Pla2g2d、 I hbdl3、SlC6a13和Sycp3。在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是腦，并且由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Apod、B2m、Clqa、Clqb、Cd68、Clec7a、Cst7、CtscUGfap、1133、Lgals3、Lyzs 和Sppl。又在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是肌肉，并且由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Dusp26、Edg2、Igh_6、Mt2、Plk2、Rhpn2 和在特別的實(shí)施方案中，差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是(a)心臟中的 C3、Ccl8、Lcn2、Mt2、Pah、PrkcqJerpina3n、Tmeml6k 和 Vgll2 ； (b)脂肪組織中的 Aspn, Col6a2、Crip2、Emilin2、OtopU Pla2g2d、Rhbdl3 和 Slc6al3 ； (c)腦中的 Apod、B2m、Clqa、Clqb、Ctsd、Gfap、I133、Lyzs 和 Sppl ；或(d)肌肉中的 C4、Cdkn2c、 Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Edg2、Igh_6、Mt2、Plk2 和 Syt9。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以使用寡核苷酸或多核苷酸探針的陣列，而另一實(shí)施方案可以使用與差異表達(dá)的基因產(chǎn)物特異結(jié)合的抗體或其他蛋白質(zhì)的陣列?？梢愿鶕?jù)已知的方法，例如，如在固相支持體上原位合成或通過(guò)微印刷(micro-printing)技術(shù)將預(yù)合成的探針連接到固相支持體，定制此類(lèi)陣列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，定制核酸或蛋白質(zhì)結(jié)合探針的陣列以特異地檢測(cè)由本文所述的兩個(gè)或兩個(gè)以上差異表達(dá)的基因或基因片段產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄物或蛋白質(zhì)。在另一方面，本發(fā)明提供了用于檢測(cè)與標(biāo)準(zhǔn)或與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上基因的差異表達(dá)。在特別的實(shí)施方案中，組織是心臟、脂肪、腦或肌肉，并且該方法一般包括(a)提供探針，其包含(i)與編碼表2、表 5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上基因特異雜交的多核苷酸；或 ( )與選自表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上多肽特異結(jié)合的多肽結(jié)合劑；(b)將探針以能使探針與樣品中的mRNA雜交或能使探針與樣品中的蛋白質(zhì)結(jié)合的方式加入到包含來(lái)自老年受試者的mRNA或蛋白質(zhì)的樣品中，從而在樣品中形成雜交或結(jié)合復(fù)合物；(c)任選地，將探針以能使探針與第二樣品中的mRNA雜交或能使探針與第二樣品中的蛋白質(zhì)結(jié)合的方式加入到包含來(lái)自年輕受試者的mRNA或蛋白質(zhì)的另一樣品中，從而在其他樣品中形成雜交或結(jié)合復(fù)合物；(d)檢測(cè)樣品中的雜交復(fù)合物；和(e)將來(lái)自第一樣品的雜交或結(jié)合復(fù)合物與來(lái)自標(biāo)準(zhǔn)或，任選地，來(lái)自其他樣品的雜交或結(jié)合復(fù)合物比較，其中與標(biāo)準(zhǔn)或，任選地，與其他樣品比較，在樣品中雜交或結(jié)合的量之間的至少一個(gè)差異，表明在老年受試者中差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上基因的差異表達(dá)?？梢詫⒃摲椒ㄓ糜跈z測(cè)編碼表2、5、8或10中或其子集中所述的基因產(chǎn)物的基因的差異表達(dá)。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，所選擇的組織是心臟，并且由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Amyl、Apod、Bdhl、C3、Casql、Ccl8、Kcnd2、Lcn2、Mt2、Myot> Pah、Prkcq、 Serpina3n, Skap2、TmemWk和Vgll2。在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是脂肪，并且由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Aspn、Clec4n、Col6a2、Coll8al、Cox8b、Crip2、EarlU Emilin2、OtopU Pla2g2d、Rhbdl3, Slc6al3 和 Sycp3。在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是腦，并且由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是Apod、B2m、Clqa、Clqb、Cd68、Clec7a、Cst7、 Ctsd、Gfap, 1133、Lgals3、Lyzs和Sppl0又在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是肌肉，并且由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Dusp26、 Edg2、Igh-6、Mt2、Plk2、Rhpn2 和 Syt9。在特別的實(shí)施方案中，差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是(a)心臟中的 C3、Ccl8、Lcn2、Mt2、Pah、Prkcq JerpinaSnJmemiek 和 Vgll2 ； (b) 脂肪組織中的 Aspn、Col6a2、Crip2、Emilin2、OtopU Pla2g2d、Rhbdl3 和 Slc6al3 ； (c)腦中的 Apod、B2m、Clqa、Clqb、Ctsd、Gfap、1133、Lyzs 和 Sppl ；或(d)肌肉中的 C4、Cdkn2c、 Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Edg2、Igh_6、Mt2、Plk2和 Syt9。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將該方法用于檢測(cè)來(lái)自犬或貓的基因的差異表達(dá)。在特別的實(shí)施方案中，優(yōu)選地在陣列中，將探針與底物結(jié)合。
步驟(c)和步驟(d)和(e)的一部分是任選的，并且當(dāng)相對(duì)同時(shí)地進(jìn)行兩個(gè)或兩個(gè)以上測(cè)試系統(tǒng)(即，來(lái)自老年和年輕受試者的組織)的比較時(shí)才使用。然而，在另一實(shí)施方案中，用于比較的標(biāo)準(zhǔn)是基于使用該方法以前獲得的數(shù)據(jù)。在該實(shí)施方案中，將探針暴露于樣品以形成雜交或結(jié)合復(fù)合物，檢測(cè)所述雜交或結(jié)合復(fù)合物，并與標(biāo)準(zhǔn)的那些雜交或結(jié)合復(fù)合物比較。來(lái)自樣品和標(biāo)準(zhǔn)的雜交或結(jié)合復(fù)合物之間的差異表明多核苷酸的差異表達(dá)，和因此在老年受試者對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)的組織中差異表達(dá)的基因，所述標(biāo)準(zhǔn)可以包含以前從年輕受試者或另一類(lèi)型的對(duì)照受試者中分離的mRNA。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，制備探針以特異地檢測(cè)由通過(guò)本發(fā)明鑒定的一個(gè)或一個(gè)以上基因或基因片段所產(chǎn)生的多核苷酸或其片段。 用于檢測(cè)雜交復(fù)合物的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。本文所述的使用組織特異性生物標(biāo)志物檢測(cè)衰老相關(guān)的轉(zhuǎn)錄和翻譯產(chǎn)物的測(cè)定， 在用于測(cè)定受試者的組織的生理年齡的方法中是有用的。可以將此類(lèi)方法用于執(zhí)行、促進(jìn)或指導(dǎo)抗衰老方案，例如熱量限制和/或營(yíng)養(yǎng)方案。此類(lèi)方法包括獲取來(lái)自接受了該方案的受試者的所選擇的組織樣品。然后，使用基因或蛋白質(zhì)陣列或者本文所述的其他檢測(cè)方法，分析該組織樣品相對(duì)于年輕與老年表型有關(guān)的一個(gè)或一個(gè)以上基因的調(diào)節(jié)表達(dá)。分析的結(jié)果將顯示在組織中，該方案在推遲或逆轉(zhuǎn)衰老過(guò)程中是否有效。在另一方面，本發(fā)明提供了測(cè)定測(cè)試物質(zhì)，當(dāng)施用給動(dòng)物時(shí)，是否可以在至少一種所選擇的組織中用于逆轉(zhuǎn)或推遲衰老過(guò)程的方法。該方法包括(a)在不存在測(cè)試物質(zhì)的情況下，在測(cè)試系統(tǒng)中，通過(guò)測(cè)量選自編碼表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的基因的兩個(gè)或兩個(gè)以上多核苷酸的轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物，測(cè)定第一基因表達(dá)譜；(b)在存在測(cè)試物質(zhì)的情況下，在測(cè)試系統(tǒng)中，通過(guò)測(cè)量選自編碼表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的基因的兩個(gè)或兩個(gè)以上多核苷酸的轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物，測(cè)定第二基因表達(dá)譜；和 (c)將第一基因表達(dá)譜與第二基因表達(dá)譜比較，其中與第一基因表達(dá)譜比較，第二基因表達(dá)譜的改變表明測(cè)試物質(zhì)，當(dāng)施用給動(dòng)物時(shí)，可以用于逆轉(zhuǎn)或推遲衰老過(guò)程。當(dāng)將第一基因表達(dá)譜與第二基因表達(dá)譜比較時(shí)，比較可以在單個(gè)轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物水平或者作為對(duì)所有轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物的平均衰老改變。該方法可以用于產(chǎn)生衰老推遲指數(shù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所選擇的組織是心臟，并且由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是 Amyl、Apod、Bdhl、C3、Casql、Ccl8、Kcnd2、Lcn2、Mt2、Myot、Pah、Prkcq、Serpina3n、Skap2Λ TmemWk和Vgll2。在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是脂肪，并且由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是 Aspn、Clec4n、Col6a2、Col 18al、Cox8b、Crip2、Earll、Emilin2、Otopl、Pla2g2d、 I hbdl3、SlC6a13和Sycp3。在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是腦，并且由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是 Apod、B2m、Clqa、Clqb、Cd68、Clec7a、Cst7、CtscU Gfap> 1133、Lgals3、Lyzs 和Sppl。又在另一實(shí)施方案中，所選擇的組織是肌肉，并且由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是 C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Dusp26、Edg2、Igh-6、Mt2、Plk2、Rhpn2 和 Syt9。在特別的實(shí)施方案中，差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是(a)心臟中的 C3、Ccl8、Lcn2、Mt2、Pah、Prkcq JerpinaSnJmemiek 和 Vgll2 ； (b) 脂肪組織中的 Aspn, Col6a2、Crip2、Emilin2、OtopU Pla2g2d、Rhbdl3 和 Slc6al3 ； (c)腦中的 Apod、B2m、Clqa、Clqb、CtscUGfap、1133、Lyzs 和 Sppl ；或(d)肌肉中的 C4、Cdkn2c、 Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Edg2、Igh_6、Mt2、Plk2和 Syt9。在某些實(shí)施方案中，該方法可以進(jìn)一步包括至少將第二基因表達(dá)譜與獲得的對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)基因表達(dá)譜比較的步驟，通過(guò)在存在當(dāng)施用給動(dòng)物時(shí)，在特定的組織中已知逆轉(zhuǎn)或推遲衰老的對(duì)照物質(zhì)或組合物的情況下，在測(cè)試系統(tǒng)中測(cè)量選自編碼表2、5、8或10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的基因的兩個(gè)或兩個(gè)以上多核苷酸的轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物。在一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)試系統(tǒng)包含培養(yǎng)的細(xì)胞群體。將包含根據(jù)本發(fā)明的衰老相關(guān)基因的核酸構(gòu)建體引入到培養(yǎng)的宿主細(xì)胞中。宿主細(xì)胞可以是哺乳動(dòng)物細(xì)胞系，例如但不限于，NIH3T3、CHO、HELA和COS，然而也可以使用非哺乳動(dòng)物細(xì)胞例如酵母、細(xì)菌和昆蟲(chóng)細(xì)胞。將基因的編碼序列與適合于使用的特定宿主細(xì)胞的合適調(diào)節(jié)表達(dá)元件有效連接。根據(jù)本領(lǐng)域的任一可接受的方法，包括但不限于，轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)化、磷酸鈣沉淀、電穿孔和脂轉(zhuǎn)染， 可以將核酸構(gòu)建體引入到宿主細(xì)胞中。此類(lèi)技術(shù)是本領(lǐng)域熟知且常規(guī)的。可以將轉(zhuǎn)化的細(xì)胞用于鑒定調(diào)節(jié)衰老相關(guān)基因的表達(dá)的化合物?；虮磉_(dá)測(cè)定可以使用包含與報(bào)告基因有效連接的所選擇的衰老相關(guān)基因的啟動(dòng)子的基因構(gòu)建體來(lái)實(shí)施?？梢詫?bào)告子構(gòu)建體引入到合適的培養(yǎng)細(xì)胞中，包括但不限于， 上述的標(biāo)準(zhǔn)宿主細(xì)胞系或者新近分離自受試者的細(xì)胞，例如脂肪或肌肉細(xì)胞。通過(guò)在存在或不存在測(cè)試化合物的情況下監(jiān)測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)來(lái)進(jìn)行測(cè)定。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，測(cè)試系統(tǒng)包括動(dòng)物。一般地，將測(cè)試化合物施用給受試者， 并分析在受試者的所選擇組織中的基因表達(dá)譜，以測(cè)定測(cè)試化合物對(duì)本發(fā)明的衰老相關(guān)基因或基因產(chǎn)物的轉(zhuǎn)錄或翻譯的影響?？梢栽换螂x體外分析基因表達(dá)，以測(cè)定測(cè)試化合物的作用。在另一實(shí)施方案中，將測(cè)試化合物施用給受試者，并根據(jù)本領(lǐng)域合適的任一方法， 原位或離體外分析表達(dá)自基因的蛋白質(zhì)的活性，以測(cè)定測(cè)試化合物對(duì)目的蛋白質(zhì)的活性的影響。此外，在將測(cè)試化合物施用給受試者的情況下，也可以評(píng)價(jià)化合物的生理性、全身性和物理性作用，以及化合物的可能毒性。測(cè)試物質(zhì)可以是任一物質(zhì)和物質(zhì)的組合，相對(duì)于年輕受試者，其對(duì)老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的多核苷酸或基因具有影響。合適的測(cè)試物質(zhì)包括但不限于，氨基酸；蛋白質(zhì)、肽、多肽、核酸、寡核苷酸、多核苷酸、小分子、大分子、維生素、礦物質(zhì)、簡(jiǎn)單糖； 復(fù)合糖；多糖；碳水化合物；中鏈三酰甘油(MCT)；三酰甘油(TAG)、η-3(Ω-;3)脂肪酸包括 DHA,EPA,ALA ；η-6 ( Ω -6)脂肪酸包括LA、γ -亞油酸(GLA)和ARA ；SA、綴合的亞油酸(CLA)； 膽堿源例如卵磷脂；脂溶性維生素包括維生素A和其前體例如類(lèi)胡蘿卜素(例如，(β -胡蘿卜素))、維生素D源例如維生素D2 (麥角鈣化醇)和維生素D3 (膽鈣化醇)、維生素E源例如生育酚(例如，α -生育酚)和生育三烯酚、和維生素K源例如維生素Kl (葉綠醌)和維生素Κ2(甲萘醌)；水溶性維生素包括B族維生素例如核黃素、尼克酸(包括煙酰胺和煙酸)、吡哆素、泛酸、葉酸、生物素和鈷胺素；和維生素C(抗壞血酸)；抗氧化劑，包括上面列出的一些維生素、特別地維生素E和C ；并且生物類(lèi)黃酮例如兒茶素、槲皮素和茶黃素；醌例如泛醌；類(lèi)胡蘿卜素例如番茄紅素和番茄黃素；白藜蘆醇；和α-硫辛酸；L-肉堿；D-檸烯； 葡糖胺；S-腺苷甲硫氨酸；和脫乙酰殼多糖。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，測(cè)試物質(zhì)是營(yíng)養(yǎng)物，其可以添加到食物中或者作為補(bǔ)充物消耗。也將通過(guò)前述方法鑒定的物質(zhì)考慮為本發(fā)明的一部分。在另一方面，本發(fā)明提供了試劑盒，其以在單獨(dú)包裝中的單獨(dú)容器或者以虛擬包裝中的單獨(dú)容器中，包含與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異基因表達(dá)的兩個(gè)或兩個(gè)以上探針。在某些實(shí)施方案中，組織是心臟、脂肪、腦或肌肉組織，并且探針包含(a)與編碼表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上基因特異雜交的多核苷酸；或(b)與選自表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上多肽特異結(jié)合的多肽結(jié)合劑；其中，該試劑盒進(jìn)一步包含至少一種(1)在基因表達(dá)測(cè)定中怎樣使用探針用于在受試者的所選擇組織中檢測(cè)差異基因表達(dá)的說(shuō)明，( 用于使用探針的試劑和設(shè)備，和(3)已知當(dāng)施用給受試者時(shí)，在所選擇的組織中逆轉(zhuǎn)或推遲衰老過(guò)程的組合物。當(dāng)試劑盒包含虛擬包裝時(shí)，該試劑盒受限于與一個(gè)或一個(gè)以上物理試劑盒組分組合的在虛擬環(huán)境中的說(shuō)明。在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒含有探針和/或其他物理組分，并且用于使用探針和其他組分的說(shuō)明可以通過(guò)國(guó)際互聯(lián)網(wǎng)得到。試劑盒可以含有其他物品例如用于混合樣品、探針，和試劑的裝置，以及用于使用該試劑盒裝置，例如試管或混合器具。在另一方面，本發(fā)明提供了計(jì)算機(jī)系統(tǒng)，其包括含有有關(guān)與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的多核苷酸的信息數(shù)據(jù)庫(kù)。該數(shù)據(jù)庫(kù)可以含有鑒定選自編碼表2、5、8或10中所列蛋白質(zhì)的基因的一個(gè)或一個(gè)以上多核苷酸和/或與表2、5、8或 10中所列蛋白質(zhì)特異結(jié)合的多肽的表達(dá)水平的信息，以及與數(shù)據(jù)庫(kù)交流，特別是輸入、操作和查看不同動(dòng)物或動(dòng)物種類(lèi)的信息的用戶(hù)界面。在一個(gè)實(shí)施方案中，數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步含有鑒定表2、5、8或10中所列的一個(gè)或一個(gè)以上多肽的活性水平的信息。在另一實(shí)施方案中，數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步包含如在表2、5、8或10中所列的一個(gè)或一個(gè)以上多核苷酸或多肽的序列信息， 優(yōu)選來(lái)自多種物種的序列的信息。在其他實(shí)施方案中，數(shù)據(jù)庫(kù)含有涉及基因在一種或多種動(dòng)物物種中的說(shuō)明的其他信息。計(jì)算機(jī)系統(tǒng)是能包含并操作數(shù)據(jù)且能與用戶(hù)交流的任一電子裝置，例如，一般的計(jì)算機(jī)或者旨在有助于使用本發(fā)明和輸出與動(dòng)物的狀態(tài)有關(guān)的結(jié)果的分析儀器。在另一方面，本發(fā)明提供了用于有關(guān)本文所述的一種或多種組合物和方法的交流信息或者說(shuō)明的介質(zhì)(media)。該介質(zhì)一般包含含有信息或說(shuō)明的文件、數(shù)字存儲(chǔ)介質(zhì)、光學(xué)存儲(chǔ)介質(zhì)、聲學(xué)報(bào)告、可視顯示等。例如，交流介質(zhì)可以是顯示的網(wǎng)址、kiosk、小冊(cè)子、產(chǎn)品標(biāo)簽、包裝說(shuō)明書(shū)、廣告、散發(fā)材料、公開(kāi)宣布的錄音帶、錄影帶、DVD、⑶、計(jì)算機(jī)可讀芯片、計(jì)算機(jī)可讀卡、計(jì)算機(jī)可讀盤(pán)、計(jì)算機(jī)存儲(chǔ)器或它們的任一組合。有用的信息包括一個(gè)或一個(gè)以上(1)用于促進(jìn)動(dòng)物的健康狀況和健康的方法和( 如果動(dòng)物工作者對(duì)本發(fā)明和其用途存在疑問(wèn)，用于動(dòng)物工作者以使用的聯(lián)系信息。有用的說(shuō)明包括使用探針的技術(shù)、進(jìn)行基因表達(dá)測(cè)定的說(shuō)明，以及物質(zhì)的施用量和頻率。交流方法對(duì)于指導(dǎo)有益使用本發(fā)明是有用的。實(shí)施例本發(fā)明的多種方面可以通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，除非另外指明，這些實(shí)施例僅提供為說(shuō)明的目的，并不限制本文所公開(kāi)的發(fā)明的范圍。實(shí)施例1該實(shí)施例簡(jiǎn)要描述了測(cè)試某些物質(zhì)的組合，在沒(méi)有降低飲食攝入的情況下，模擬熱量限制(CR)的生命延長(zhǎng)作用的能力的研究。用基于AIN93M制劑(用于維持成熟嚙齒類(lèi)動(dòng)物的American Institute of Nutrition (AIN)純化飲食制劑)的對(duì)照飲食或具有類(lèi)似的營(yíng)養(yǎng)組合物但具有25%熱量限制(CR)的飲食喂飼C57BL6小鼠。在第5月齡和第25月齡時(shí)，收集來(lái)自用對(duì)照飲食喂飼的小鼠的組織；在第25月齡時(shí)，收集來(lái)自營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充的小鼠的組織。從組織中分離RNA，并使用Eppendorf "realplex2" 儀器，通過(guò)qPCR測(cè)定基因表達(dá)改變。對(duì)于單個(gè)基因的數(shù)據(jù)，將在某些后續(xù)實(shí)施例中描述。實(shí)施例2該實(shí)施例描述了心臟組織中衰老的生物標(biāo)志物的鑒定。將Affymetrix Mouse Genome 4302. O陣列用于鑒定基因表達(dá)在幾種品系的小鼠 (U9、C57BL6、Balbc、C3H、CBA、DBA和B6C3HF1)的心臟中的改變。對(duì)于年輕對(duì)比老年小鼠， 使用雙尾t-檢測(cè)(two-tailed t-tests)測(cè)定表達(dá)的顯著改變(P < 0. 05，每年齡組每品系 11 = 7只小鼠)。在第5月齡時(shí)測(cè)試年輕小鼠，在第25月齡時(shí)測(cè)試?yán)夏晷∈?。?顯示，在每一品系中，隨年齡表達(dá)顯著改變的基因的數(shù)目(P < 0. 05)，并且表2列出了在7種品系的至少4種中表達(dá)改變的基因。表1
品系轉(zhuǎn)錄物的數(shù)目1294，954B62，190Balbc2，137C3H3，236CBA1，118DBA1，521Fl1，287表權(quán)利要求
1.在所選擇的組織中鑒定衰老的基因表達(dá)標(biāo)志物的方法，其包括使用在預(yù)確定的顯著性水平，在物種的多個(gè)品系、品種或種群中基因是差異表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)，選擇與年輕受試者比較，在老年受試者的組織中差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上基因。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所選擇的基因是在3個(gè)或3個(gè)以上的品系、品種或種群中差異表達(dá)的。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其中所選擇的基因是在5個(gè)或5個(gè)以上的品系、品種或種群中差異表達(dá)的。
4.權(quán)利要求1所述的方法，其中所選擇的基因是在至少50%的測(cè)試品系、品種或種群中差異表達(dá)的。
5.權(quán)利要求1所述的方法，其中所選擇的基因是在至少75%的測(cè)試品系、品種或種群中差異表達(dá)的。
6.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組織是心臟、肌肉、腦或脂肪組織。
7.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述顯著性水平是ρ< 0. 10、p < 0. 05或？ < 0. 01。
8.權(quán)利要求1所述的方法進(jìn)一步包括與年輕受試者比較，在老年受試者中差異表達(dá)的基因的差異表達(dá)至少部分受熱量限制逆轉(zhuǎn)的標(biāo)準(zhǔn)。
9.權(quán)利要求1所述的方法進(jìn)一步包括如下標(biāo)準(zhǔn)，所述標(biāo)準(zhǔn)為與年輕受試者比較，在老年受試者中差異表達(dá)的基因已知與或疑似與一個(gè)或一個(gè)以上的衰老有關(guān)的生理功能相關(guān)。
10.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述物種是犬或貓。
11.組合，其包括與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的多個(gè)多核苷酸，其中所選擇的組織是心臟、脂肪、腦或肌肉組織，并且所述多核苷酸選自編碼表2、 表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的基因。
12.權(quán)利要求11所述的組合，其中所選擇的組織是心臟，并且所述多核苷酸選自編碼 Amyl、Apod、Bdhl、C3、Casql、Ccl8、Kcnd2、Lcn2、Mt2、Myot、Pah、Prkcq、Serpina3n、Skap2> Tmeml6k和Vgll2的兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因。
13.權(quán)利要求12所述的組合，其中所述差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且所述多核苷酸選自編碼 C3、Ccl8、Lcn2、Mt2、Pah、Prkcq、Serpina3n、Tmeml6k 和 Vgll2 的兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因。
14.權(quán)利要求11所述的組合，其中所選擇的組織是脂肪，并且所述多核苷酸選自編碼 Aspru Clec4n> Col6a2> Coll8aU Cox8b> Crip2、EarlU Emilin2> OtopU Pla2g2d> Rhbdl3> Slc6al3和Sycp3的兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因。
15.權(quán)利要求14所述的組合，其中所述差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且所述多核苷酸選自編碼 Aspn、Col6a2、Crip2、Emilin2、0topl、Pla2g2d、Rhbdl3 和 Slc6al3 的兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因。
16.權(quán)利要求11所述的組合，其中所選擇的組織是腦，并且所述多核苷酸選自編碼 Apod、B2m、Clqa、Clqb、Cd68、Clec7a、Cst7、Ctsd、Gfap、1133、Lgals3、Lyzs 禾口 Sppl 的兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因。
17.權(quán)利要求16所述的組合，其中所述差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且所述多核苷酸選自編碼々 0(1、82111、(切3、(切13、(^8(1、6€3 、1133、1^28和Sppl的兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因。
18.權(quán)利要求11所述的組合，其中所選擇的組織是肌肉，并且所述多核苷酸選自編碼C4、Cdkn2c、Cdsl、ColIal、Colla2、Col3al、Dusp26、Edg2、Igh_6、Mt2、Plk2、Rhpn2 和 Syt9 的兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因。
19.權(quán)利要求18所述的組合，其中所述差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且所述多核苷酸選自編碼 C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Edg2、Igh_6、Mt2、Plk2 和 Syt9 的兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因。
20.權(quán)利要求11所述的組合，其中所述多核苷酸是犬的或貓的多核苷酸。
21.組合物，其包含用于檢測(cè)與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異基因表達(dá)的兩個(gè)或兩個(gè)以上的探針，其中所選擇的組織是心臟、脂肪、腦或肌肉組織，并且所述探針包含a)多核苷酸，其與編碼表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上基因特異雜交；或b)多肽結(jié)合劑，其與選自表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上多肽特異結(jié)合。
22.權(quán)利要求21所述的組合物，其中所述多肽結(jié)合劑是抗體。
23.權(quán)利要求21所述的組合物，其中(a)所選擇的組織是心臟，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Amyl、Apod、Bdhl、C3、Casql、Ccl8、Kcnd2、Lcn2、Mt2、Myot, Pah、 Prkcq、Serpina3n, Skap2、Tmeml6k和Vgll2 ； (b)所選擇的組織是脂肪，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Aspn, Clec4n、Col6a2、Coll8al、Cox8b、Crip2、Earll、Emilin2、 0topl、Pla2g2d、Rhbdl3、SlC6al3和Sycp3 ； (c)所選擇的組織是腦，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是々 0(1、82111、(切3、(切13丄(168、(16073丄8{7、(^8(1、6€3 、1133、1^3183、 Lyzs和Sppl ；或(d)所選擇的組織是肌肉，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Dusp26、Edg2、Igh-6、Mt2、Plk2、Rhpn2 和 Syt9。
24.權(quán)利要求23所述的組合物，其中所述差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且所述由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是(a)C3、Ccl8、Lcn2、Mt2、Pah、Prkcq、Serpina3n、Tmeml6k 和 Vgll2 ； (b)Aspn、Col6a2、Crip2、Emilin2、OtopU Pla2g2d、Rhbdl3 和 Slc6al3 ； (c)Apod、 B2m、Clqa、Clqb、Ctsd、Gfap、1133、Lyzs 和 Sppl ；或(d) C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、 Col3al、Edg2、Igh_6、Mt2、Plk2 和 Syt9。
25.權(quán)利要求21所述的組合物，其中所述探針與犬的或貓的多核苷酸或多肽特異地雜交或結(jié)合。
26.裝置，其包含固定了陣列的固相支持體，所述陣列包含用于檢測(cè)與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇的組織中差異基因表達(dá)的多個(gè)探針，其中所述組織是心臟、脂肪、腦或肌肉，并且所述探針包含a)多核苷酸，其與編碼表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或更多基因特異雜交；或b)多肽結(jié)合劑，其與選自表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上多肽特異結(jié)合。
27.權(quán)利要求26所述的裝置，其中所述多肽結(jié)合劑是抗體。
28.權(quán)利要求26所述的裝置，其中(a)所選擇的組織是心臟，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 AmyU Apod、Bdhl、C3、Casql、Ccl8、Kcnd2、Lcn2、Mt2、Myot, Pah、 Prkcq、Serpina3n, Skap2、Tmem 16k和Vgll2 ； (b)所選擇的組織是脂肪，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Aspn, Clec4n、Col6a2、Coll8al、Cox8b、Crip2、Earll、Emilin2、0topl、Pla2g2d、Rhbdl3、SlC6al3和Sycp3 ； (c)所選擇的組織是腦，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是々 0(1、82111、(切3、(切13丄(168、(16073丄8{7、(^8(1、6€3 、1133、1^3183、 Lyzs和Sppl ；或(d)所選擇的組織是肌肉，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Dusp26、Edg2、Igh-6、Mt2、Plk2、Rhpn2 和 Syt9。
29.權(quán)利要求28所述的裝置，其中所述差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且所述由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是(a)C3、Ccl8、Lcn2、Mt2、Pah、Prkcq、Serpina3n、Tmeml6k 和 Vgll2 ； (b)Aspn、Col6a2、Crip2、Emilin2、0topl、Pla2g2d、Rhbdl3 和 Slc6al3 ； (c)Apod、B2m、Clqa、 Clqb, Ctsd, Gfap, 1133、Lyzs 和 Sppl ；或(d)C4、Cdkn2c、CdsU CollaU Colla2、Col3al、 Edg2、Igh-6、Mt2、Plk2 和 Syt9。
30.權(quán)利要求26所述的裝置，其中所述探針與犬的或貓的多核苷酸或多肽特異地雜交或結(jié)合。
31.方法，其用于與標(biāo)準(zhǔn)或與年輕受試者比較，檢測(cè)在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上基因的差異表達(dá)，其中所述組織是心臟、脂肪、腦或肌肉，所述方法包括(a)提供探針，其包含(i)多核苷酸，其與編碼表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上基因特異雜交；或(ii)多肽結(jié)合劑，其與選自表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或多個(gè)多肽特異結(jié)合；(b)將所述探針以能使探針與樣品中的mRNA雜交或能使探針與樣品中的蛋白質(zhì)結(jié)合的方式加入到包含來(lái)自老年受試者的mRNA或蛋白質(zhì)的樣品中，從而在樣品中形成雜交或結(jié)合復(fù)合物；(c)任選地，將所述探針以能使探針與第二樣品中的mRNA雜交或能使探針與第二樣品中的蛋白質(zhì)結(jié)合的方式加入到包含來(lái)自年輕受試者的mRNA或蛋白質(zhì)的另一樣品中，從而在該其他樣品中形成雜交或結(jié)合復(fù)合物；(d)檢測(cè)樣品中的所述雜交復(fù)合物；和(e)將來(lái)自第一樣品的所述雜交或結(jié)合復(fù)合物與來(lái)自標(biāo)準(zhǔn)或，任選地，來(lái)自其他樣品的雜交或結(jié)合復(fù)合物比較，其中與標(biāo)準(zhǔn)或任選地其他樣品比較，在樣品中雜交或結(jié)合的量之間的至少一個(gè)差異表明在老年受試者中差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上的基因的差異表達(dá)。
32.權(quán)利要求31所述的方法，其中(a)所選擇的組織是心臟，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Amyl、Apod、Bdhl、C3、Casql、Ccl8、Kcnd2、Lcn2、Mt2、Myot、Pah、Prkcq、 Serpina3n, Skap2、Tmeml6k和Vgll2 ； (b)所選擇的組織是脂肪，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Aspn, Clec4n、Col6a2、Coll8al、Cox8b、Crip2、Earll、Emilin2、OtopU Pla2g2d、Rhbdl3、SlC6al3和Sycp3 ； (c)所選擇的組織是腦，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Apod、B2m、Clqa、Clqb、Cd68、Clec7a、Cst7、CtscU Gfap> 1133、Lgals3、Lyzs 和Sppl ；或(d)所選擇的組織是肌肉，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是C4、 Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Dusp26、Edg2、Igh_6、Mt2、Plk2、Rhpn2 和 Syt9。
33.權(quán)利要求32所述的方法，其中所述差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且所述由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是(a)C3、Ccl8、Lcn2、Mt2、Pah、Prkcq、Serpina3n、Tmeml6k 和 Vgll2 ； (b)Aspn、Col6a2、Crip2、Emilin2、0topl、Pla2g2d、Rhbdl3 和 Slc6al3 ； (c) Apod、B2m、Clqa、 Clqb、CtscU Gfap, 1133、Lyzs 和 Sppl ；或(d)C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Edg2、Igh-6、Mt2、Plk2 和 Syt9。
34.權(quán)利要求31所述的方法，其中所述探針與犬的或貓的多核苷酸或多肽特異地雜交或結(jié)合。
35.權(quán)利要求31所述的方法，其中所述探針與底物結(jié)合。
36.權(quán)利要求35所述的方法，其中所述探針為陣列的形式。
37.權(quán)利要求31所述的方法，其中所述檢測(cè)間隔地進(jìn)行，并且用于監(jiān)測(cè)動(dòng)物在至少一種所選擇的組織中的衰老過(guò)程。
38.用于測(cè)定當(dāng)將測(cè)試物質(zhì)施用給動(dòng)物時(shí)，該測(cè)試物質(zhì)是否可以用于在至少一種所選擇的組織中逆轉(zhuǎn)或推遲衰老過(guò)程的方法，所述方法包括(a)在不存在測(cè)試物質(zhì)的情況下，在測(cè)試系統(tǒng)中，通過(guò)測(cè)量選自編碼表2、表5、表8或表 10中所列蛋白質(zhì)或其片段的基因的兩個(gè)或兩個(gè)以上的多核苷酸之轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物，測(cè)定第一基因表達(dá)譜；(b)在存在測(cè)試物質(zhì)的情況下，在測(cè)試系統(tǒng)中，通過(guò)測(cè)量選自編碼表2、表5、表8或表 10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的基因的兩個(gè)或兩個(gè)以上的多核苷酸之轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物，測(cè)定第二基因表達(dá)譜；和(c)將第一基因表達(dá)譜與第二基因表達(dá)譜比較，其中與第一基因表達(dá)譜比較，第二基因表達(dá)譜的改變表明該測(cè)試物質(zhì)當(dāng)施用給動(dòng)物時(shí)可以用于逆轉(zhuǎn)或推遲衰老過(guò)程。
39.權(quán)利要求38所述的方法進(jìn)一步包括至少將第二基因表達(dá)譜與對(duì)照基因表達(dá)譜比較，所述對(duì)照基因表達(dá)譜通過(guò)在存在當(dāng)施用給動(dòng)物時(shí)，在至少一種選擇的組織中已知逆轉(zhuǎn)或推遲衰老過(guò)程的對(duì)照物質(zhì)的情況下，在測(cè)試系統(tǒng)中測(cè)量選自編碼表2、5、8或10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的基因的兩個(gè)或兩個(gè)以上多核苷酸的轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物獲得。
40.權(quán)利要求38所述的方法，其中(a)所選擇的組織是心臟，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 AmyU Apod、Bdhl、C3、Casql、Ccl8、Kcnd2、Lcn2、Mt2、Myot, Pah、 Prkcq, Serpina3n, Skap2、Tmeml6k和Vgll2 ； (b)所選擇的組織是脂肪，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Aspn, Clec4n、Col6a2、Coll8al、Cox8b、Crip2、Earll、Emilin2、 0topl、Pla2g2d、Rhbdl3、SlC6al3和Sycp3 ； (c)所選擇的組織是腦，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是々 0(1、82111、(切3、(切13丄(168、(16073丄8{7、(^8(1、6€3 、1133、1^3183、 Lyzs和Sppl ；或(d)所選擇的組織是肌肉，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Dusp26、Edg2、Igh-6、Mt2、Plk2、Rhpn2 和 Syt9。
41.權(quán)利要求40所述的方法，其中所述差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且所述由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是(a)C3、Ccl8、Lcn2、Mt2、Pah、Prkcq、krpina3n、Tmeml6k 和 Vgll2 ； (b)Aspn、Col6a2、Crip2、Emilin2、0topl、Pla2g2d、Rhbdl3 和 Slc6al3 ； (c)Apod、B2m、Clqa、 Clqb, Ctsd, Gfap, 1133、Lyzs 和 Sppl ；或(d)C4、Cdkn2c、CdsU CollaU Colla2、Col3al、 Edg2、Igh-6、Mt2、Plk2 和 Syt9。
42.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述測(cè)試系統(tǒng)包含培養(yǎng)的細(xì)胞群體。
43.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述測(cè)試系統(tǒng)包含動(dòng)物。
44.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述探針與底物結(jié)合。
45.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述探針為陣列的形式。
46.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述樣品包含來(lái)自犬或貓的mRNA或蛋白質(zhì)。
47.物質(zhì)，其通過(guò)權(quán)利要求38所述的方法鑒定為當(dāng)施用給動(dòng)物時(shí)可以在所選擇的組織中逆轉(zhuǎn)或推遲衰老過(guò)程。
48.試劑盒，其包含在單獨(dú)包裝中的獨(dú)立容器中或者在虛擬包裝中的獨(dú)立容器中的兩個(gè)或兩個(gè)以上的探針，所述探針用于檢測(cè)與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異的基因表達(dá)，其中所述組織是心臟、脂肪、腦或肌肉組織，并且所述探針包含(a)多核苷酸，其與編碼表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上基因特異雜交；或(b)多肽結(jié)合劑，其與選自表2、表5、表8或表10中所列的蛋白質(zhì)或其片段的兩個(gè)或兩個(gè)以上多肽特異結(jié)合；其中，所述試劑盒進(jìn)一步包含下述的至少一種(1)在用于檢測(cè)受試者的所選擇組織中差異的基因表達(dá)的基因表達(dá)測(cè)定中，如何使用所述探針的說(shuō)明，( 用于使用所述探針的試劑和設(shè)備，和(3)當(dāng)施用給受試者時(shí)，在所選擇的組織中已知逆轉(zhuǎn)或推遲衰老過(guò)程的組合物。
49.權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中(a)所選擇的組織是心臟，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 AmyU Apod、Bdhl、C3、Casql、Ccl8、Kcnd2、Lcn2、Mt2、Myot, Pah、 Prkcq, Serpina3n, Skap2、Tmeml6k和Vgll2 ； (b)所選擇的組織是脂肪，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Aspn, Clec4n、Col6a2、Coll8al、Cox8b、Crip2、Earll、Emilin2、 0topl、Pla2g2d、Rhbdl3、SlC6al3和Sycp3 ； (c)所選擇的組織是腦，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 Apod、B2m、Clqa、Clqb、Cd68、Clec7a、Cst7、Ctsd、Gfap、I133、Lgals3、 Lyzs和Sppl ；或(d)所選擇的組織是肌肉，并且所述由差異表達(dá)的基因編碼的蛋白質(zhì)是 C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、Col3al、Dusp26、Edg2、Igh-6、Mt2、Plk2、Rhpn2 和 Syt9。
50.權(quán)利要求49所述的試劑盒，其中所述差異表達(dá)受熱量限制逆轉(zhuǎn)，并且所述由差異表達(dá)基因編碼的蛋白質(zhì)是(a)C3、Ccl8、Lcn2、Mt2、Pah、Prkcq、Serpina3n、Tmeml6k 和 Vgll2 ； (b)Aspn、Col6a2、Crip2、Emilin2、OtopU Pla2g2d、Rhbdl3 和 Slc6al3 ； (c)Apod、 B2m、Clqa、Clqb、Ctsd、Gfap、I133、Lyzs 和 Sppl ；或(d) C4、Cdkn2c、Cdsl、Collal、Colla2、 Col3al、Edg2、Igh_6、Mt2、Plk2 和 Syt9。
51.權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中將所述探針固定于固相支持體的已知位置處。
52.權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中所述多肽結(jié)合劑是抗體。
53.權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中所述探針與犬或貓多核苷酸或多肽結(jié)合或雜交。
54.計(jì)算機(jī)系統(tǒng)，其包含數(shù)據(jù)庫(kù)，所述數(shù)據(jù)庫(kù)含有鑒定與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上多核苷酸之表達(dá)水平的信息，其中所述多核苷酸選自編碼表2、表5、表8和表10任一中所列蛋白質(zhì)或其片段的基因，以及使得用戶(hù)可以使用或操縱數(shù)據(jù)庫(kù)中的信息的用戶(hù)界面。
55.介質(zhì)，其用于交流下述的一個(gè)或一個(gè)以上的信息或者說(shuō)明(1)使用編碼表2、表5、 表8或表10之一所列的蛋白質(zhì)的多核苷酸，或者由此編碼的蛋白質(zhì)或者其片段，用于檢測(cè)與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇的組織中差異表達(dá)的基因的表達(dá)；( 使用編碼表2、表5、表8或表10之一所列的蛋白質(zhì)的多核苷酸，或者由此編碼的蛋白質(zhì)或者其片段，用于測(cè)量與年輕受試者比較，測(cè)試物質(zhì)對(duì)老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)基因的表達(dá)的影響；C3)使用編碼表2、表5、表8或表10之一所列的蛋白質(zhì)的多核苷酸，或者由此編碼的蛋白質(zhì)或者其片段，用于篩選測(cè)試物質(zhì)，以確定與年輕受試者比較，所述測(cè)試物質(zhì)是否可以調(diào)節(jié)老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的基因的表達(dá)；(4)使用編碼表2、表5、表8或表10之一所列的蛋白質(zhì)的多核苷酸，或者由此編碼的蛋白質(zhì)或者其片段，用于調(diào)節(jié)與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上基因的表達(dá)； (5)使用包含數(shù)據(jù)庫(kù)的計(jì)算機(jī)系統(tǒng)，所述數(shù)據(jù)庫(kù)含有鑒定與年輕受試者比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達(dá)的一個(gè)或一個(gè)以上多核苷酸之表達(dá)水平的信息，其中所述多核苷酸選自編碼表2、表5、表8或表10之一所列的蛋白質(zhì)或其片段的基因；和(6)施用物質(zhì)，通過(guò)物質(zhì)引起編碼表2、表5、表8或表10之一所列的蛋白質(zhì)的一個(gè)或一個(gè)以上基因的差異表達(dá)的能力將其鑒定為當(dāng)施用給動(dòng)物時(shí)，所述物質(zhì)可以用于在選擇的組織中逆轉(zhuǎn)或推遲衰老過(guò)程；其中所述介質(zhì)包含含有信息或說(shuō)明的一個(gè)或一個(gè)以上文件、數(shù)字存儲(chǔ)介質(zhì)、光學(xué)存儲(chǔ)介質(zhì)、聲學(xué)報(bào)告或可視顯示。
56.權(quán)利要求55所述的介質(zhì)，其是顯示的網(wǎng)址、kiosk、小冊(cè)子、產(chǎn)品標(biāo)簽、包裝說(shuō)明書(shū)、 廣告、散發(fā)材料、公開(kāi)宣布的錄音帶、錄影帶、DVD、CD、計(jì)算機(jī)可讀芯片、計(jì)算機(jī)可讀卡、計(jì)算機(jī)可讀盤(pán)、計(jì)算機(jī)存儲(chǔ)器或其組合。
全文摘要
本發(fā)明提供了研發(fā)組織特異性衰老生物標(biāo)志物的方法，通過(guò)這些方法鑒定的幾組加強(qiáng)的生物標(biāo)志物，以及該生物標(biāo)志物鑒定具有抗衰老特性的營(yíng)養(yǎng)物和其他功能性成分或試劑的用途。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102348810SQ201080011377
公開(kāi)日2012年2月8日 申請(qǐng)日期2010年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月11日
發(fā)明者J·L·巴杰, J·R·杰克森, R·H·溫德魯赫, R·P·米德?tīng)栴D, S·S·漢娜, T·A·普羅拉, T·D·普, Y·潘 申請(qǐng)人:生命基因科技有限責(zé)任公司, 雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司