專利名稱：驢奶中分離的益生微生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及已知為益生菌的微生物領(lǐng)域及其在食品工業(yè)、人或動物食品中的使用。特別地，本發(fā)明涉及從生驢奶中分離的益生菌。
背景技術(shù)：
益生微生物，或簡稱為益生菌，可定義為當(dāng)以適當(dāng)?shù)膭┝拷o予時可能賦予健康或營養(yǎng)益處的微生物。它們屬于所謂的功能食品的范疇。已知益生菌在乳制品中，如DANONE出售的Actimel⑧或Activia 牌產(chǎn)品、YakultHonsha出售的Yakult 牌產(chǎn)品、或NESTLE出售的LCl 牌產(chǎn)品。這些細(xì)菌屬于乳酸細(xì)菌的 不同屬種，例如雙歧桿菌屬某些種(Bifidus spp.)、干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)或約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)盡管不知道益生菌作用的具體機(jī)制，但是廣泛認(rèn)為益生菌通過其能夠?qū)δc道菌群平衡具有影響而有益于健康或營養(yǎng)。近年來，對驢奶的興趣大大提高，主要是因為其組分，所以認(rèn)為驢奶是嬰幼兒營養(yǎng)奶粉、豆奶粉或其他配方的有效替換物。事實上，由于其多不飽和脂肪酸的組成、其鈣/磷比率及其蛋白質(zhì)含量，驢奶被認(rèn)為非常接近于人奶。此外，驢奶富含溶菌酶，一種能夠水解微生物細(xì)胞壁多糖的糖苷酶。多種科學(xué)證據(jù)證明了溶菌酶對營養(yǎng)和健康的重要性。高含量 的乳糖對于鈣的腸吸收具有積極效果，并負(fù)責(zé)口味。即使在生命的最初幾個月后，驢奶也可增強(qiáng)骨質(zhì)礦化并在那些嚴(yán)重Ig-E介導(dǎo)的牛奶蛋白過敏的兒童中構(gòu)成重要的營養(yǎng)支持，因此在有效的免疫系統(tǒng)形成中發(fā)揮作用。在較大的年紀(jì)中，驢奶可發(fā)揮對抗不同心血管疾病和低血膽固醇飲食中的積極效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供新穎的益生乳細(xì)菌。為此目的，本發(fā)明的實施例提出益生乳細(xì)菌，尤其分離自驢奶并選自保藏在布達(dá)佩斯條約下的“德國微生物與細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心”(DSMZ)(德國布倫瑞克)中的下列編錄號的菌株在 2008 年 12 月 8 日的 DSM 22098、DSM 22099、DSM 22100、DSM 22102、DSM22101，以及在2010年4月26日的DSM 23558、DSM 23559和DSM 23560，可從所述菌株獲得的突變菌株，以及屬于植物乳桿菌群簇的菌株，其呈現(xiàn)出與選自保藏在DSM 22102、DSM22101、DSM 23558、DSM 23559、和DSM 23560下的菌株的菌株至少70%的DNA-DNA同源性和至少99. 5%的16S RNA同一性。這種群簇定義了下文稱為驢奶乳桿菌(Lactobacillusasini)的新種。突變體可通過推斷本發(fā)明菌株遺傳物質(zhì)改變或推斷本發(fā)明菌株遺傳物質(zhì)與其他分子重組的基因工程技術(shù)獲得。典型地，為了獲得這種突變菌株，本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用常用的誘變技術(shù)，如UV照射或暴露于化學(xué)誘變產(chǎn)品。本發(fā)明的另一個實施例提出包括一種或眾多上述的本發(fā)明益生乳細(xì)菌種類或菌株的組合物。所述的組合物可以是人或動物食用的食品組合物或飲料組合物。本發(fā)明的進(jìn)一步實施例提供制造食品組合物或飲料組合物的方法。所述的方法可至少包括下列步驟一用上述本發(fā)明的活的多種益生乳細(xì)菌接種食品，一將接種后的食品放置在利于所述益生乳細(xì)菌代謝的條件下，一將所述食品發(fā)酵直至得到至少[106]CFU/mL菌群的食品。在另一個實施例中，制造食品組合物或飲料組合物的方法至少包含下列步驟一將上述益生乳細(xì)菌發(fā)酵直至達(dá)到至少[106]CFU/mL的菌群，一例如，通過包裹的方式，保護(hù)所述益生乳細(xì)菌， 一將食品與所述被保護(hù)的益生乳細(xì)菌混合。當(dāng)達(dá)到發(fā)酵穩(wěn)定期時終止發(fā)酵，優(yōu)選在將所述的益生乳細(xì)菌放在利于其代謝的條件下24小時內(nèi)終止。本發(fā)明的另一個實施例提出益生乳細(xì)菌在制備用于治療與病原微生物粘膜定植關(guān)聯(lián)的疾病的組合物中的用途。粘膜包括但不局限于，腸粘膜、胃粘膜。例如，病原微生物可以是腸病原體。例如，根據(jù)本發(fā)明所述的乳桿菌菌株的抑制活性可對抗腸病原體(例如腸炎沙門氏菌(Salmonella enteriditis)、霍亂弧菌(Vibrio cholereae)、大腸桿菌(Escherichia coli))。本發(fā)明的另一個實施例提出益生乳細(xì)菌用于使發(fā)酵食品防護(hù)食品病原體的用途，所述食品病原體如李斯特菌(Lysteria)或沙門氏菌(Salmonella)、彎曲菌(Campylobacter)或梭菌(Clostridium),通過抑制所述食品病原體滋生的進(jìn)行。本發(fā)明的另一個實施例提出如上定義的本發(fā)明益生乳細(xì)菌用于在發(fā)酵期間利用所述細(xì)菌生產(chǎn)丁酸的用途。本發(fā)明的另一個實施例提供生產(chǎn)丁酸的方法，包括下列步驟在適當(dāng)?shù)臈l件下發(fā)酵本發(fā)明的益生乳細(xì)菌和收集上述細(xì)菌的發(fā)酵過程中產(chǎn)生的丁酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員通過閱讀此處提供的公開內(nèi)容與附圖
，本發(fā)明的這些方面以及其他方面、特征和優(yōu)點將變的明顯。詳細(xì)的描述，同時指出本發(fā)明的優(yōu)選實施例，將僅以舉例說明的方式給出。附圖簡述圖I顯示驢奶中本發(fā)明的克隆和參比菌株在24h溫育過程中pH的演變。圖2顯示從生驢奶中分離的8個克隆的DNA指紋圖譜。圖3a至3e分別顯示DNA指紋分析后克隆37、38、41、43和48的電泳圖譜。圖4顯示使用dUTP地高辛作為探針標(biāo)記的植物乳桿菌DNA，克隆37、38和48之間DNA-DNA雜交的結(jié)果。圖5顯示克隆37、38和48之間DNA-DNA雜交的結(jié)果是在植物乳桿菌(L. plantarum)、類植物乳桿菌(L. paraplantarum)、戍糖乳桿菌(L. pentosus)菌株類型DNA內(nèi)與克隆37中標(biāo)記的DNA探針的DNA-DNA雜交。詳細(xì)說明在過去的幾十年里，益生菌在人類健康中的作用通過引起其市場需求的顯著增長，以及其更大規(guī)模的產(chǎn)品生產(chǎn)和消費，在科學(xué)水平和工業(yè)水平都取得了緊密關(guān)聯(lián)。在生存力方面，益生菌菌株具有克服胃酸的極低PH和膽汁鹽的清洗效果并以存活生理狀態(tài)到達(dá)作用位點腸上皮的能力，這是極為重要的。益生細(xì)菌能夠在結(jié)腸定植，以積極影響病原細(xì)菌的感染效果，從而刺激免疫系統(tǒng)并減少不利的代謝物濃度。此外，一些菌株，包括本發(fā)明的細(xì)菌，能夠一定程度地減少膽固醇和甘油三酯的血漿濃度。在通過腸胃道的過程中，要求益生菌培養(yǎng)物耐受胃部胃蛋白酶和低pH的存在、十二指腸中富含蛋白酶的環(huán)境、和膽汁鹽的抗微生物活性。盡管胃部的pH在攝取食物后可升高至6. 0或更高，但是其主要范圍是從2. 5至3. 5。通過胃部以后，小腸是腸胃道中的第二個主要障礙。盡管小腸的pH( S卩，7.0至8. 5)更有利于細(xì)菌生存，但是膽汁鹽的存在可具有不利效果。傳統(tǒng)地，益生菌候選物在消化道運輸中的生存能力使用常規(guī)鍍飾技術(shù)進(jìn)行評估，該技術(shù)在模擬消化道液中進(jìn)行溫育的過程中，提供活的并且可再生的細(xì)胞數(shù)目的信息，例如，如 Charteris 等《Development of an in vitro methodology to determine thetransit tolerance of potentially probiotic Lactobacillus and Bifidobacteriumspecies in the upper gastrointestinal tract)), J. Appl. Microbiol 84, 759-768 (1998) 中描述的。因而，多種基于培養(yǎng)的方法可用于表征益生微生物，如胃液抗性、膽汁鹽抗性、膽汁鹽水解能力、疏水性評價、抗微生物活性、抗生素敏感性。這些測試方法在下列實例部分充分描述。在本發(fā)明的實施例中，益生細(xì)菌符合至少一項下列標(biāo)準(zhǔn)一至少75% CFU/mL在此處描述的胃液抗性評價后得以保留，一至少75% CFU/mL在此處描述的胃液抗性和膽汁鹽抗性評價后得以保留，一在此處描述的疏水性測試中，具有0. 5M硫酸銨或更少，優(yōu)選0. IM硫酸銨或更少的顯微鏡玻片上可見微生物聚集，一對其他乳桿菌某些種的抗微生物活性低，S卩，用暈圈法(halo test)測量，小于
0.5cm的暈圈,優(yōu)選如此處所述的小于0. 2cm,—對綠胺桿菌(Pseudomonasaeruginosa)、臘狀桿菌(Bacillus cereus)、或大腸桿菌(Escherichia coli)的抑制活性，即，用暈圈法測量，即，大于0. 5cm的暈圈,優(yōu)選如此處所述的大于0. 8cm。克隆37、38、48、43、41、32、34和57代表本發(fā)明的特定實施例。它們已于2008年12月8日(克隆37、38、48、43、41)和2010年4月26日(克隆32、34、57)保藏在符合布達(dá)佩斯條約的“德國微生物與細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心”(DSMZ)中，編錄號為克隆37 DSM 22098克隆38 DSM 22099克隆48 DSM 22100克隆43 DSM 22102克隆41 DSM 22101克隆32 DSM 23558克隆34 DSM 23559克隆57 DSM 23560?？寺?7、38 和 48 屬于植物乳桿菌驢奶亞種(Lactobacillus plantarum asini),并且克隆43、32、34、57和41屬于驢奶乳桿菌種。更具體地，克隆32屬于稱為驢奶乳桿菌丁酸菌(Lactobacillus asini ssp. butyricus)的亞種、克隆34屬于稱為驢奶乳桿菌乳酸菌(Lactobacillus asini ssp. lactis)的亞種、以及克隆57屬于稱為驢奶乳桿菌尾狀菌(Lactobacillus asini ssp. caudatus)的亞種。所述的益生細(xì)菌可作為鮮培養(yǎng)物或干燥食品補(bǔ)充物提供，如膳食補(bǔ)充物。就后者而言，生物質(zhì)可以是冷凍干燥或噴霧干燥的，以提供高質(zhì)量的培養(yǎng)物粉末，包括例如至少108CFU/g，優(yōu)選超過 109CFU/g。根據(jù)本發(fā)明，益生細(xì)菌可用于制備食品或飲料，以供人或動物消費。食品和飲料包括發(fā)酵的食品，如鮮乳制品、發(fā)酵奶、酸奶。奶通常指牛奶。在本發(fā)明的語境中，盡管其他奶也可用于制備乳制品，包含馬奶、山羊奶、駱駝奶、綿羊奶，但是優(yōu)選驢奶。制備這種發(fā)酵乳制食品的方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員力所能及的。優(yōu)選地，以存活形式提供或保持所述益生細(xì)菌，直到使用?？墒褂悯r奶或奶粉并用水重新調(diào)和。可向奶中加入各種成分，以改進(jìn)發(fā)酵或向消費者提供額外的健康益處(如添加維生素或礦物質(zhì))。 發(fā)酵后，奶可轉(zhuǎn)化為白干酪(cottage-cheese)或夸克蛋糕(quark),例如通過向發(fā)酵的奶中添加凝乳酶(rennet)。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知這些過程。在另一個實施例中，益生細(xì)菌作為成分用于食品或飲料組合物中，而不對所述組合物進(jìn)行發(fā)酵。換句話說，所述的益生細(xì)菌是膳食或營養(yǎng)補(bǔ)充物。在這種情形中，益生細(xì)菌優(yōu)選以活菌形式提供。根據(jù)本發(fā)明所述的益生乳細(xì)菌也可用于保護(hù)食品，如發(fā)酵食品，通過抑制上述食品病原體的滋生而抵御食品病原體，如李斯特菌或沙門氏菌、彎曲菌或梭菌。在上述情形中，食品或飲料中混合了包括如此處所述的期望益生細(xì)菌的組合物?；旌虾蟮漠a(chǎn)品獨立于包括期望益生細(xì)菌的組合物而發(fā)酵。無論如何，發(fā)酵持續(xù)時間優(yōu)選不超過約24小時。通常，益生菌株在上述時間內(nèi)達(dá)到發(fā)酵的穩(wěn)定期。在本發(fā)明的實施例中，發(fā)酵在達(dá)到發(fā)酵穩(wěn)定期時停止，優(yōu)選在將接種后的食品放在有利于所述益生乳細(xì)菌代謝的條件下24小時內(nèi)。本發(fā)明也涉及益生乳細(xì)菌在制備用于治療與病原微生物粘膜定植關(guān)聯(lián)的疾病的組合物中的用途。粘膜包含但不局限于，腸粘膜和胃粘膜。例如，原微生物可以是腸病原體。例如，根據(jù)本發(fā)明所述的乳桿菌菌株的抑制活性可對抗腸病原體(例如沙門氏菌、霍亂弧菌、大腸桿菌)。這與益生細(xì)菌附著上皮細(xì)胞，如腸道細(xì)胞的能力相關(guān)聯(lián)，如目前已知的，能力可在一定程度上將此類病原細(xì)菌逐出腸道。相應(yīng)地，這可能與益生細(xì)菌的疏水性有關(guān)。本發(fā)明也涉及本發(fā)明的益生乳細(xì)菌用于在發(fā)酵期間利用所述細(xì)菌生產(chǎn)丁酸的用途，例如發(fā)酵已接種有這種細(xì)菌的食品，然后由用戶攝取，菌落在結(jié)腸內(nèi)的內(nèi)部發(fā)酵或在適當(dāng)條件中合適培養(yǎng)基的發(fā)酵，允許收集所述細(xì)菌發(fā)酵過程中生產(chǎn)的丁酸。優(yōu)選的細(xì)菌是DSM23558、DSM 22098、DSM 22100、和 DSM 22099。
具體實施例方式基于培養(yǎng)的方法(益生菌測試、膽汁鹽水解能力、疏水性評價、抗微生物活性、抗生素敏感性、有機(jī)酸的生產(chǎn)、溫育過程中PH的演變)用無菌生理液(NaCl 0. 85% )連續(xù)稀釋從有機(jī)飼養(yǎng)獲得的生驢奶，并接種在特用于乳桿菌屬分離的MRS (Man, de Rogosa and Sharpe)瓊脂平板上。在不同溫度下將平板在厭氧環(huán)境(Anaerogen, Oxoid)中溫育48h。從最高稀釋度的MRS瓊脂平板中任意選擇乳酸細(xì)菌分離物(約150個)。分離物在MRS液體培養(yǎng)基中次培養(yǎng)，并劃線至MRS瓊脂上。益生性測試I)胃液抗性生長后，將每個菌落離心，并在無菌生理液中洗滌，并用相同的溶液重新懸浮至原始體積。胃液抗性的評價根據(jù)De Giulio等《Use of alginate and cryo-protectivesugars to improve the viability of lactic acid bacteria after freezing andfreeze-drying》World Journal of Microbiology & Biotechnology 2005 年 21 期，739-746頁中的描述進(jìn)行評估，但作一些修改。等分樣品在模擬胃液(胃蛋白酶3g/L，pH2.5)中溫育，在溫育的不同時間取出，直至180分鐘，并進(jìn)行鋪平板。使用并接種未處理的細(xì)胞作為陰性對照。對胃液的抗性通過菌落形成單位(CFU)/mL進(jìn)行評價并與陰性對照比 較。2)對胃液和膽汁鹽的抗性對胃液具有的抗性的菌落在由含有0. 3%膽汁鹽的MRS組成的模擬膽汁液中溫育，最多3h，然后接種到MRS瓊脂平板上，根據(jù)De Giulio等(2005)所述。未處理的菌落用作陰性對照。對膽汁鹽的抗性通過菌落形成單位(CFU)/mL進(jìn)行評價并與陰性對照比較。結(jié)果在從生驢奶中分離的150個細(xì)菌菌落中，只有8個鑒定為屬于乳桿菌屬(暫時命名為克隆32、克隆34、克隆37、克隆38、克隆41、克隆43、克隆48、和克隆57)，展示出對胃液和膽汁鹽的抗性，并顯示形成約75%的CFU/mL，對比于未處理的對照乳桿菌的100%。其最佳生長溫度約為30至31°C。150個菌落中只出現(xiàn)8個展示了對模擬胃液和對膽汁鹽存在的良好抗性。然后研究這些菌落的下列活性疏水性測試、篩選具有膽汁鹽水解活性的培養(yǎng)物、抗微生物活性和抗生素敏感性。3)疏水性測試菌落潛在地附著到腸上皮細(xì)胞的能力通過使用Strus等《The in vitro activityof vaginal Lactobacillus with probiotic properties against Candida)) InfectiousDiseases in obstetrics and Gynaecology, 2005 年 13 卷第 2 期 69-75 頁，以及 Ljungh 等((High surface hydrophobicity of autoaggregating Staphylococcus aureus strainsisolated from human infections studied with the salt aggregation test))Infectionand immunity, 1985年47期522-526頁中的間接疏水性方法進(jìn)行評價。菌落在MRS液體培養(yǎng)基中生長24h。微生物懸浮液與等體積硫酸銨混合，硫酸銨預(yù)先以不同摩爾濃度制備(范圍從20mM至4M)。能夠引起顯微鏡載玻片上可見微生物聚集的硫酸銨最小濃度與鹽聚集測試成反比。等滲溶液用作對照。結(jié)果—0. IM硫酸銨的可見聚集克隆32、37、43和57—0. 5M硫酸銨的可見聚集克隆34、38、41和48。從這些數(shù)據(jù)，可假設(shè)克隆32、37、43和57對于腸上皮細(xì)胞具有更強(qiáng)的體外附著能力。4)篩選具有膽汁鹽水解活性的培養(yǎng)物膽汁鹽水解是哺乳動物膽汁鹽代謝中重要的代謝反應(yīng)。近年來，使用膽汁鹽水解以影響人和動物的膽固醇代謝的興趣升高。膽汁鹽的水解和膽固醇向細(xì)胞膜的摻入具有降低人血清膽固醇濃度的潛力。經(jīng)由小腸中結(jié)合膽汁鹽水解的游離膽汁鹽的釋放導(dǎo)致糞便中更多膽汁鹽的排泄。膽固醇從人體移除的主要方式是以水解膽汁鹽的形式排泄。大部分結(jié)合膽汁鹽經(jīng)由進(jìn)入肝循環(huán)而再循環(huán)。排泄了的膽汁鹽必須由新的膽酸代替，新的膽酸從人體中的膽固醇形成。因此，排泄的膽汁鹽越多，人體庫中使用的膽固醇越多。此外，游離膽汁鹽不支持從小腸吸收膽固醇和其他脂質(zhì)，但是結(jié)合膽汁鹽支持。菌落的膽汁鹽水解活性遵照Minelli等《Assessment of novel probioticLactobacillus casei strains for the production of functional dairy foods)) Int. Dairy J.，2004年14期723-726頁中描述的方法定性評價。簡言之，菌株的過夜液體培養(yǎng)物(5 u L)在含有0. 5%結(jié)合膽汁鹽混合物和0. 37g/L CaCl2的MRS瓊脂上形成斑點，并如上所述進(jìn)行溫育。斑點周圍析出膽酸(不透明暈圈)的出現(xiàn)被認(rèn)為是陽性結(jié)果，顯示菌落水解膽汁鹽的能力。結(jié)果定性上評價了水解膽汁提取物的能力。所有菌株均能水解膽汁提取物。5)抗微生物活性使用瓊脂平板分析上的抑制暈圈測試以研究微生物菌株的抗微生物活性。測試樣本對抗下列細(xì)菌一非病原株嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)DSM 20079、干釀乳桿菌(Lactobacillus casei)ATCC 9595、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)DSM 20081、沙克乳桿菌(Lactobacillus sakei)DSM 20494、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)DSM 20711 ；一革蘭氏陽性病原株蠟狀桿菌GN IOU DSM 4313和DSM 4384，以及糞腸球菌(Enterococcus faecal is)ATCC 29212，一革蘭氏陰性病原株大腸桿菌(DSM 8579)和綠膿桿菌(DSM 50071)。所有菌株均購自德國微生物與細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心(德國DSMZ)。每種菌株在其特定生長培養(yǎng)基中37°C溫育18h :乳酸細(xì)菌在Man de Rogosa Sharpe (MRS)液體培養(yǎng)基(Oxoid)中生長,大腸桿菌、糞腸球菌、綠膿桿菌和臘狀桿菌在營養(yǎng)液體培養(yǎng)基(Oxoid)中生長。微生物懸浮液(lX108CFU/mL)均勻涂布在特定固體培養(yǎng)基平板上。50 ii L的每種培養(yǎng)物單個地放在接種的平板上。室溫下無菌環(huán)境中靜置30min后，取決于菌株，在37°C平板溫育24至48h。準(zhǔn)確測量平板上顯示的清澈區(qū)直徑，其為以cm表示的抗微生物活性。使用無菌去離子水作為陰性對照；標(biāo)準(zhǔn)抗微生物試劑氯霉素用作陽性對照，如Dall' Agnol等《Antimicrobial activity of some Hypericum species》Phytomedicine 10 :511-516.(2003)中的描述。結(jié)果a)對其他乳桿菌屬某些種的抗微生物活性克隆不展示對沙克乳桿菌20494的抗微生物活性(除了克隆57以非常低的程度外)。一克隆37、38、和48展示對干酪乳桿菌ATCC 9595、保加利亞乳桿菌ATCC 11842、發(fā)酵乳桿菌DSM 20052、鼠李糖乳桿菌DSM 20711的低抑制活性；一克隆41展示對發(fā)酵乳桿菌DSM 20052、鼠李糖乳桿菌DSM 20711、嗜酸乳桿菌DSM 20079的低抑制活性；一克隆43展示對發(fā)酵乳桿菌DSM 20052和嗜酸乳桿菌DSM 20079的低抑制活性。這種結(jié)果被認(rèn)為是正常的，這是因為通過所有乳酸細(xì)菌生產(chǎn)的抗微生物物質(zhì)，如細(xì)菌素，其不僅能夠?qū)χ虏〖?xì)菌進(jìn)行作用，同時作為“領(lǐng)土防御機(jī)制”，也對其他乳桿菌進(jìn)行作用。b)對致病細(xì)菌的抗微生物活性 下表顯示結(jié)果
權(quán)利要求
1.益生乳細(xì)菌，所述益生乳細(xì)菌特別地從驢奶中分離，并選自以編錄號DSM22098、DSM 22099、DSM 22100、DSM 22102、DSM 22101、DSM 23558、DSM 23559、和 DSM 23560保藏在DSMZ中的菌株，可從所述菌株獲得的突變菌株，并且所述菌株屬于植物乳桿菌(Lactobacillus Plantarum)群簇，表現(xiàn)出與選自以編錄號 DSM 22102、DSM 22101、DSM23558、DSM 23559、和DSM 23560保藏的菌株的菌株至少70%的DNA-DNA同源性和至少99. 5%的 16S RNA 同一性。
2.組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種或眾多益生乳細(xì)菌種類或菌株。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述的組合物為食品組合物或飲料組合物。
4.制造食品組合物或飲料組合物的方法，至少包含下列步驟 一用根據(jù)權(quán)利要求I所述的活益生乳細(xì)菌接種食品， 一將接種后的食品放置在有利于所述益生乳細(xì)菌代謝的環(huán)境中， 一發(fā)酵所述食品直至獲得至少[106]CFU/mL菌群的食品。
5.制造食品組合物或飲料組合物的方法，至少包含下列步驟 一發(fā)酵根據(jù)權(quán)利要求I所述的益生乳細(xì)菌直至獲得至少[106]CFU/mL的菌群， 一保護(hù)所述的益生乳細(xì)菌， 一將食品與所述被保護(hù)的益生乳細(xì)菌混合。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中所述的發(fā)酵在其到達(dá)發(fā)酵穩(wěn)定期時終止，優(yōu)選在將所述益生乳細(xì)菌放置在利于其代謝的條件下約24小時內(nèi)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的益生乳細(xì)菌在制備用于治療與病原微生物粘膜定植關(guān)聯(lián)的疾病的組合物中的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其中所述的粘膜選自腸粘膜和胃粘膜。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的用途，其中所述的病原微生物是腸病原體，如腸炎沙門氏菌(Salmonella enteriditis)、霍舌匕弧菌(Vibrio cholereae)、大腸桿菌(Escherichiacoli)。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的益生乳細(xì)菌用于使發(fā)酵食品防護(hù)食品病原體的用途，所述食品病原體如李斯特菌(Lysteria)或沙門氏菌(Salmonella)、彎曲菌(Campylobacter)或梭菌(Clostridium),通過抑制所述食品病原體滋生的進(jìn)行。
11.根據(jù)權(quán)利要求I所述的益生乳細(xì)菌用于在發(fā)酵期間利用所述細(xì)菌生產(chǎn)丁酸的用途。
12.用于生產(chǎn)丁酸的方法，包括下列步驟在適當(dāng)?shù)臈l件下發(fā)酵根據(jù)權(quán)利要求I所述的益生乳細(xì)菌和收集所述細(xì)菌在發(fā)酵期間產(chǎn)生的所述丁酸。
全文摘要
本發(fā)明公開了分離自驢奶的乳桿菌屬的益生乳細(xì)菌，及其在食品或飲料組合物如發(fā)酵奶制產(chǎn)品中的應(yīng)用。
文檔編號A23C9/12GK102753701SQ201080019943
公開日2012年10月24日 申請日期2010年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月5日
發(fā)明者A·康提, F·納扎羅, P·奧蘭度 申請人:優(yōu)羅拉克提斯集團(tuán)公司