專(zhuān)利名稱(chēng)：延緩細(xì)胞衰老的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總體上涉及用于延緩細(xì)胞衰老的組合物；尤其是包含能有效延緩皮膚細(xì)胞自然衰老或者應(yīng)激誘導(dǎo)(stress-induced)細(xì)胞衰老的六肽_11的化妝品組合物。本發(fā)明還涉及用于延緩皮膚細(xì)胞衰老的方法。
背景技術(shù)：
大多數(shù)細(xì)胞因?yàn)閺?fù)制衰老或細(xì)胞衰老而不能無(wú)限地分裂。大約30年前Hayflick和Moorhead首次發(fā)現(xiàn)了復(fù)制衰老或細(xì)胞衰老現(xiàn)象并提出了在細(xì)胞水平上的衰老模型。他們?nèi)〉昧酥卮蟮陌l(fā)現(xiàn)，即體外培養(yǎng)的細(xì)胞的群體倍增數(shù)往往只能增長(zhǎng)到50-60倍，接著它們就到達(dá)一個(gè)稱(chēng)為復(fù)制衰老的點(diǎn)，在該點(diǎn)它們不再產(chǎn)生新的DNA，但是它們會(huì)繼續(xù)進(jìn)行新陳代謝和產(chǎn)生ATP。進(jìn)入復(fù)制衰老的細(xì)胞，通常會(huì)在經(jīng)歷一系列統(tǒng)稱(chēng)為細(xì)胞凋亡的破壞性事件后，最終死亡。細(xì)胞會(huì)因?yàn)橹T如毒素、紫外線(xiàn)輻射或其他氧化事件等應(yīng)激事件而提前開(kāi)始衰老。這種現(xiàn)象稱(chēng)為應(yīng)激誘導(dǎo)早衰或者SIPS。因?yàn)閾?jù)信細(xì)胞衰老是老化的一個(gè)重要因素，已經(jīng)開(kāi)始投入精力研發(fā)延緩細(xì)胞衰老的方法。例如，公開(kāi)的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)2002/01235 披露了維甲酸在延緩角化細(xì)胞的細(xì)胞衰老中的用途。公開(kāi)的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)2009/0075902披露了延緩細(xì)胞衰老的方法，該方法利用了能作用于核轉(zhuǎn)錄因子κ β (Nuclear Factor Kappa Beta) (NF-κ β)以抑制NF-κ β蛋白活性的尼莫結(jié)合域(Nemo Binding Domain) (NBD)蛋白，使這種關(guān)鍵細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子基本上處于失活狀態(tài)。最近公開(kāi)的世界專(zhuān)利申請(qǐng)W02009/046436公開(kāi)了局部應(yīng)用藥物雷帕霉素(rapamycin)能通過(guò)抑制mTOR(雷帕霉素哺乳動(dòng)物靶標(biāo))基因和途徑從而延緩細(xì)胞衰老。Won等人批露，標(biāo)記為CGK733的藥物，市售合成的乙酰胺類(lèi)似物，能夠真正扭轉(zhuǎn)“衰老時(shí)鐘”，從而把復(fù)制性衰老細(xì)胞，特別是成纖維細(xì)胞，逆轉(zhuǎn)回到有復(fù)制活性的細(xì)胞。參見(jiàn) Nat.化學(xué)·生物學(xué).2 (7) :369-374(2006) (Nat. Chem. Biol. 2(7) :369-374 (2006)) Won等人在以后的出版物中撤回了衰老逆轉(zhuǎn)的說(shuō)法。參見(jiàn)Won等人.Nat化學(xué)生物學(xué)2006 (Wonet al. Nat Chem Biol 2008)。迄今為止，在現(xiàn)有技術(shù)中，用于延緩細(xì)胞衰老的材料，例如NBD蛋白，其合成是昂貴的。因此，它們作為治療性局部應(yīng)用是不理想的。肽的局部應(yīng)用和在化妝品中的應(yīng)用是眾所周知的。例如，美國(guó)專(zhuān)利US 6, 492, 326披露了五肽可用于刺激產(chǎn)生膠原蛋白表達(dá)，從而影響皮膚外觀。片山等人批露同樣的五肽可用來(lái)促進(jìn)傷口愈合。參見(jiàn)片山等人，生物化學(xué)雜志，268，9941-9944 (1993) (Katayama etal, JBiol Chem. , 268,9941-9944 (1993)) 類(lèi)似地，已公開(kāi)的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng) 2004/0141939披露了用于護(hù)膚的肽，這些肽顯示能夠促進(jìn)皮膚細(xì)胞之間的附著。美國(guó)專(zhuān)利5，554，375公開(kāi)了一種含有銅的肽，該肽顯示了能改善受損皮膚和傷口，并刺激毛發(fā)的生長(zhǎng)。
在文獻(xiàn)中提到有六肽的局部應(yīng)用。例如，萊因哈特(Reinhart)等人的美國(guó)專(zhuān)利US20070202216揭示了使用結(jié)構(gòu)為絲氨酸-異亮氨酸_賴(lài)氨酸_纈氨酸_丙氨酸_纈氨酸的六肽來(lái)改善老化皮膚的外觀。萊因哈特的美國(guó)專(zhuān)利US200815^K)6介紹了結(jié)構(gòu)為乙酰-谷氨酸-谷氨酸-蛋氨酸-谷氨酸-精氨酸-精氨酸的乙?；牧?，用于改善老化皮膚的外觀。Laloeuf的IE200601M公開(kāi)了結(jié)構(gòu)為甘氨酸_脯氨酸_谷氨酰胺_甘氨酸_脯氨酸-谷氨酰胺用于改善老化皮膚外觀的六肽。同樣地，根據(jù)賓利等人，Arch Surg，第 125 卷，1990，641 (Bentley et al. , ArchSurg, vol. 125，1990,641)，酵母提取物的衍生肽，尤其是釀酒酵母菌(saccharomycescerevisiae)又稱(chēng)面包酵母菌的提取物，可以局部起作用改善傷口愈合和皮膚外觀。含有苯丙氨酸-纈氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸(INCI命名六肽-11)的氨基酸序列的肽是從酵母酵素中分離出來(lái)的，據(jù)稱(chēng)能使老化皮膚變得堅(jiān)實(shí)。參見(jiàn)盧波等，皮膚科治療，第 20 卷，2007，343 (Lupo et al,Dermatol Therapy, vol. 20, 2007, 343) 該文獻(xiàn)沒(méi)有披露該肽用于傷口愈合目的的用量。但是，這些專(zhuān)利和論文都沒(méi)有表明，任何所列的肽能夠延緩細(xì)胞復(fù)制衰老。因此，仍然需要有成本效益的能延緩細(xì)胞衰老的活性試劑。本發(fā)明對(duì)這種需求提供了一個(gè)答案。

發(fā)明內(nèi)容
在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及延緩細(xì)胞衰老的組合物，其包括占該組合物總重量的約0.01wt%至約5wt%的六肽-11，和皮膚病學(xué)可接受的肽載體，該載體選自水、油、醇、硅酮和它們的混合物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及用于延緩諸如皮膚成纖維細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞(epidermal keratinocyte)和真皮乳頭細(xì)胞等細(xì)胞的自然衰老和應(yīng)激誘導(dǎo)早衰的方法。該方法包括用組合物接觸細(xì)胞，該組合物含有占所述組合物總重量約0. 01wt%至約5wt%的六肽-11和皮膚病學(xué)可接受的肽載體，所述載體選自水、油、醇、硅酮和它們的混合物。


圖1是一個(gè)柱狀圖，顯示了用SA-i3_Gal的表達(dá)測(cè)定的自然老化的皮膚成纖維細(xì)胞的衰老的延緩。圖2是一個(gè)柱狀圖，顯示了用ATM測(cè)定的表皮角化細(xì)胞H2O2應(yīng)激誘導(dǎo)早衰的延緩。圖3是一個(gè)柱狀圖，顯示了用p53表達(dá)測(cè)定的表皮角化細(xì)胞H2A應(yīng)激誘導(dǎo)早衰的延緩。圖4是一個(gè)柱狀圖，顯示了用SA-β -Gal表達(dá)測(cè)定的真皮乳頭細(xì)胞UV應(yīng)激誘導(dǎo)早衰的延緩。圖5是一個(gè)柱狀圖，顯示了六肽對(duì)細(xì)胞DNA修復(fù)酶Oggl的細(xì)胞表達(dá)的影響。
具體實(shí)施例方式令人吃驚地發(fā)現(xiàn)，根據(jù)SA-β -半乳糖苷酶(SA-β -Gal)表達(dá)的測(cè)定、ATM或p53的抑制作用的測(cè)定、或者通過(guò)用例如MTT法等細(xì)胞活性檢測(cè)測(cè)定的細(xì)胞活力增加的測(cè)定，純度至少為50%的、濃度為約0. 01%到約5%的六肽，優(yōu)選是六肽-11，表現(xiàn)出了能延緩皮膚細(xì)胞的自然衰老或者應(yīng)激誘導(dǎo)早衰的能力。本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所知曉的是，延緩衰老，可以通過(guò)多個(gè)體外檢測(cè)試驗(yàn)來(lái)測(cè)定。尤其是SA-β -半乳糖苷酶、ATM、ATR、p53、p21和pl6的表達(dá)以及用MTT法測(cè)定的細(xì)胞活力增加，都可以用來(lái)表征細(xì)胞衰老的延緩。也可以通過(guò)已進(jìn)入衰老狀態(tài)的細(xì)胞的形態(tài)變化來(lái)觀察細(xì)胞衰老。最主要的是觀察SA-β -半乳糖苷酶表達(dá)的減少，SA-β -半乳糖苷酶已知是一種在自然衰老細(xì)胞或者應(yīng)激誘導(dǎo)衰老細(xì)胞中被細(xì)胞表達(dá)的獨(dú)特細(xì)胞標(biāo)記物。細(xì)胞衰老標(biāo)記的表達(dá)可通過(guò)多種體外實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)，但兩種非常實(shí)用的方法是人類(lèi)基因微陣列法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法。第一種技術(shù)采用基因芯片(genomicmicrochips)，例如那些由Affymetrix(Santa Clara,CA)提供的產(chǎn)品，來(lái)檢測(cè)特定的處理是否會(huì)影響成纖維細(xì)胞通過(guò)增加或減少RNA的表達(dá)來(lái)合成蛋白質(zhì)和酶的遺傳傾向。第二種檢測(cè)方法通過(guò)使用熒光標(biāo)記的對(duì)相關(guān)的蛋白質(zhì)有特異性的抗體測(cè)定所需衰老蛋白質(zhì)的實(shí)際表達(dá)。通過(guò)廣泛和深入的研究，首次發(fā)現(xiàn)六肽，尤其是六肽-11，能夠有效延緩例如成纖維細(xì)胞和真皮乳頭細(xì)胞等皮膚細(xì)胞的自然細(xì)胞衰老或者應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞衰老。例如，研究表明，六肽可以抑制某些關(guān)鍵細(xì)胞蛋白的表達(dá)，例如SA- β -半乳糖苷酶、ATM、或p53細(xì)胞蛋白表達(dá)。還發(fā)現(xiàn)六肽能夠提高一些諸如DNA修復(fù)酶，Oggl等重要細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)。因此，在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了組合物，其含有占該組合物總量的約 . ^^^至日襯^，優(yōu)選是約0.01至約2 %，更優(yōu)選是約0. 1至約的六肽，和皮膚病學(xué)可接受的載體。優(yōu)選的六肽是具有純度至少50%的，優(yōu)選至少75%的，更優(yōu)選至少90 %的或更高的六肽-11(苯丙氨酸-纈氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸(Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro))。該組合物能夠有效延緩皮膚細(xì)胞的自然細(xì)胞衰老或者應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞衰老，尤其是能夠有效延緩成纖維細(xì)胞，角化細(xì)胞和真皮乳頭細(xì)胞的衰老。成纖維細(xì)胞在皮膚的真皮層中生長(zhǎng)，負(fù)責(zé)表達(dá)進(jìn)入皮膚的新的膠原蛋白和彈性蛋白。角化細(xì)胞在皮膚表皮層中生長(zhǎng)，負(fù)責(zé)皮膚中角質(zhì)層和脂質(zhì)的形成。真皮乳頭細(xì)胞也是在皮膚的真皮層中生長(zhǎng)，負(fù)責(zé)表達(dá)毛發(fā)纖維。這種細(xì)胞可以在體外條件下在培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)，用于測(cè)定局部處理的有利影響。本發(fā)明的組合物可用于局部應(yīng)用和調(diào)節(jié)皮膚老化的跡象，尤其是與老化相關(guān)的可見(jiàn)的和/或觸覺(jué)可感知的皮膚紋理的間斷?！罢{(diào)節(jié)皮膚老化的跡象”包括預(yù)防性調(diào)節(jié)和/或治療性調(diào)節(jié)一個(gè)或多個(gè)這樣的跡象(同樣地，調(diào)節(jié)特定的皮膚老化的跡象，例如，皺紋和褶子或毛孔，包括預(yù)防性調(diào)節(jié)和/或治療性調(diào)節(jié)該跡象)。此處使用的預(yù)防性調(diào)節(jié)這樣的跡象，包括延緩，最大限度地減少和/或預(yù)防皮膚老化的跡象。此處使用的治療性調(diào)節(jié)這樣的跡象包括改善，例如減少，最大限度地減少和/或消除皮膚老化的跡象?！捌つw老化跡象”，包括但不限于，所有外在可見(jiàn)的和觸覺(jué)可感知的表現(xiàn)，以及由于皮膚老化導(dǎo)致的任何其他宏觀或微觀的影響。這種跡象可因內(nèi)在因素或外在因素誘發(fā)或造成，這些因素如，年代老化和/或環(huán)境損傷(例如，陽(yáng)光、紫外線(xiàn)、煙霧、臭氧、污染物、壓力等)。這些跡象可能由一些進(jìn)程導(dǎo)致，其包括，但不僅限于，紋理間斷的發(fā)展，例如，皺紋，包括細(xì)淺的皺紋和粗深的皺紋，皮膚紋路，面部皺眉線(xiàn)，表情紋，皺紋，皮膚曬傷(dermatoheliosis)，光損傷，皮膚早衰，裂痕，腫脹，凹痕，毛孔粗大(例如，與諸如汗腺導(dǎo)管、皮脂腺或者毛囊等皮膚附屬器相關(guān))，皮膚外觀為“橘皮”，干燥，鱗狀，片狀和/或其他形式皮膚不平整或粗糙；例如皮脂產(chǎn)生過(guò)多，皮膚油膩，面部油光，粉底突破(foundationbreakthrough)等皮膚油脂分泌過(guò)多的問(wèn)題；諸如鱗狀，片狀，角化，過(guò)度角化等異常脫皮(或脫落)或異常表皮分化(例如，異常皮膚更新時(shí)間(abnormal skin turnover))；如皮膚屏障破壞，環(huán)境干燥等引起的皮膚濕潤(rùn)(或水化)不足；皮膚彈性蛋白丟失(功能性皮膚彈性蛋白缺失和/或失活)，例如，彈性蛋白組織變性，下垂(包括在眼睛周?chē)拖马灨∧[)，肌膚堅(jiān)實(shí)性的缺失，皮膚緊致性的缺失，皮膚變形后回復(fù)能力缺失；非黑色素相關(guān)的色素沉著，例如，眼袋(imdereye circles)，斑點(diǎn)(例如，由于如酒糟鼻等引起的分布不均的紅著色)，面色蠟黃(蒼白色)，由毛細(xì)血管擴(kuò)張引起的疹斑；皮膚區(qū)域黑色素相關(guān)的過(guò)度色素沉著(或不均勻色素沉著)；炎癥后過(guò)度色素沉著，例如，繼炎癥事件后發(fā)生(如痤瘡損害，向內(nèi)生毛，昆蟲(chóng)/蜘蛛叮咬或螫傷，劃傷，切傷，傷口，擦傷，等等)的過(guò)度色素沉著；萎縮，例如，但不僅限于，與老化，使用類(lèi)固醇或使用昆蟲(chóng)、蛇或細(xì)菌毒素(例如肉毒桿菌毒素)相關(guān)的萎縮；皮膚成分的其他組織學(xué)或鏡下改變，如基質(zhì)(如透明質(zhì)酸，粘多糖等)，膠原蛋白的分解和結(jié)構(gòu)改變或變異(例如，角質(zhì)層，真皮層，表皮層，皮膚血管系統(tǒng)的改變，如毛細(xì)血管擴(kuò)張)；對(duì)諸如疥瘡或瘙癢等損害的皮膚神經(jīng)系統(tǒng)、組織反應(yīng)；和皮下組織改變(例如，皮下脂肪，脂肪團(tuán)，肌肉，小柱(trabeculae)，分隔(s印tae)，等等)，尤其是那些最靠近皮膚的?？梢岳斫獾氖?，本發(fā)明不僅限于調(diào)節(jié)上面提到的由于與皮膚老化相關(guān)的機(jī)制引起的“皮膚老化跡象”，還包括調(diào)節(jié)不論何種起源機(jī)制的跡象。此處所用的“調(diào)節(jié)皮膚狀況”意在包括調(diào)節(jié)不論何種起源機(jī)制的跡象。本發(fā)明對(duì)于治療性調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物皮膚紋理的可見(jiàn)的和/或觸覺(jué)可感知的間斷，包括與皮膚老化相關(guān)的紋理間斷，是特別有用的。此處使用的治療性調(diào)節(jié)這些間斷包括改善，例如，減少，最大限度地減少和/或消除哺乳動(dòng)物皮膚紋理的可見(jiàn)的和/或觸覺(jué)可感知的間斷，從而提供改善的皮膚外觀和/或感覺(jué)，例如，更光滑，甚至更平滑的外觀和/或感覺(jué)。這種皮膚紋理的可見(jiàn)的和/或觸覺(jué)可感知的間斷，包括裂痕，腫脹，毛孔粗大，細(xì)紋，皺紋，鱗狀，片狀和/或與皮膚老化相關(guān)的其他形式的紋理不勻或粗糙。例如，紋路和/或皺紋的長(zhǎng)度，深度，和/或其他尺寸的減少，毛孔的直徑明顯減小，或者毛孔開(kāi)口周?chē)M織的外表高度接近皮膚附屬器(interadnexal skin)的高度。本發(fā)明對(duì)預(yù)防性調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物皮膚可見(jiàn)的和/或觸覺(jué)可感知的紋理間斷，包括與皮膚老化相關(guān)的紋理間斷，也特別有用。此處使用的預(yù)防性調(diào)節(jié)這種間斷，包括延緩，最大限度地減少和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物皮膚可見(jiàn)的和/或觸覺(jué)可感知的紋理間斷，從而提供改善的皮膚外觀和/或感覺(jué)，例如，更光滑，甚至更平滑的外觀和/或感覺(jué)。本發(fā)明的組合物，包括必要組分和可選組分，在下文詳細(xì)描述。本發(fā)明的組合物用于治療禿頂也可能是有效的。Bahta AW等人披露，相較于從非禿頂個(gè)體分離的真皮乳頭細(xì)胞，從禿頂?shù)幕蛘诙d頂?shù)膫€(gè)體分離的真皮乳頭細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了更嚴(yán)重的細(xì)胞早衰。參見(jiàn)Bahta AW等人，J.投資皮膚科128 (2009) 1088-1094 (Bahta Affet al.，J. Invest Dermatol 128 (2009) 1088-1094) 作者用 ATM 和 SA-β -半乳糖苷酶測(cè)量法來(lái)說(shuō)明他們的研究成果。因此，本發(fā)明組合物對(duì)于通過(guò)抑制細(xì)胞衰老治療禿頭可能是有效的。
必要組分肽本發(fā)明一個(gè)必要組分是，通過(guò)諸如發(fā)酵等生物手段或諸如固相或液相合成化學(xué)方法等傳統(tǒng)手段分離的肽。更特別的是，對(duì)于本發(fā)明來(lái)說(shuō)的很重要是實(shí)質(zhì)上包含6個(gè)氨基酸的肽，統(tǒng)稱(chēng)為六肽。六肽的氨基酸，可以是自然形成的任何氨基酸，或者它可含有通過(guò)非自然的合成方法形成的氨基酸。本發(fā)明的肽能用本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所知的方法做進(jìn)一步的化學(xué)衍生，所述方法包括，但不限于，形成鹽，酯，酰胺及類(lèi)似物。肽也可以并入到傳遞系統(tǒng)，其能夠提高肽在皮膚的局部滲透。這種傳遞系統(tǒng)在本領(lǐng)域是眾所周知，其包括但不限于，脂質(zhì)體，非離子脂質(zhì)體，微膠囊(nanosomes)及類(lèi)似物。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的六肽，是最初從酵母酵素中分離的六肽，稱(chēng)為六肽-11。(化學(xué)結(jié)構(gòu)苯丙氨酸-纈氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸)[盧波等，皮膚科治療學(xué)2007 (Lupo et al. , Dermatol Therapy 2007)]。六肽-11 的結(jié)構(gòu)的示意圖如下
六肽-1權(quán)利要求
1.用于延緩細(xì)胞衰老的組合物，其包括占該組合物總重量約0.01wt%至約5wt%的六肽-11 (苯丙氨酸-纈氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸)，和皮膚病學(xué)可接受的肽載體，該載體選自水、油、醇、硅酮和它們的混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述油選自礦物油、植物油和它們的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述載體是乳劑，其選自油包水、水包油、水包油包水、和水硅油乳液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述肽是合成的或者是發(fā)酵工藝的成分。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中，所述肽是合成的肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述六肽的濃度為以重量計(jì)占該組合物總重量的約0.01%到約2%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述六肽的純度至少為50%。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其中，所述六肽的純度至少為75%。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述六肽的純度至少為90%。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述六肽被包封入傳遞載體，該傳遞載體選自脂質(zhì)體、非離子脂質(zhì)體、微膠囊和它們的混合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物進(jìn)一步包括由下列物質(zhì)組成的群組中選出的至少一種成分羥基酸、脫落劑或如脫皮劑、遮光劑、防曬劑、抗炎劑、抗氧化劑/自由基清除劑、金屬螯合劑、酮酸、脫毛劑、美白劑、抗脂肪劑、保濕劑、抗微生物藥物、抗雄激素、皮膚防護(hù)劑、乳化穩(wěn)定劑、防腐劑、芳香劑、濕潤(rùn)劑、防水劑、水溶性膜劑、油溶性膜劑、陽(yáng)離子聚合物、維生素、和它們的混合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述組合物能有效抑制SA-β-半乳糖苷酶、ATM或ρ53細(xì)胞蛋白的表達(dá)。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述組合物能有效增加DNA修復(fù)酶Oggl的表達(dá)。
14.用于延緩皮膚細(xì)胞衰老方法，該方法包括用組合物接觸細(xì)胞，該組合物含有占該組合物總重量約0. 01wt%至約5wt%的六肽-11和皮膚病學(xué)可接受的肽載體，所述載體選自水、油、醇、硅酮和它們的混合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述的皮膚細(xì)胞是成纖維細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞和真皮乳頭細(xì)胞。
16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述的載體是乳劑，該乳劑選自油包水、水包油、水包油包水、和水硅油乳液。
17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述六肽的濃度為以重量計(jì)占該組合物總重量的約0.01%到約2%。
18.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述六肽的純度至少為50%。
19.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述六肽被包封入傳遞載體，該傳遞載體選自脂質(zhì)體、非離子脂質(zhì)體、微膠囊和它們中的混合物。
20.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，皮膚細(xì)胞自然或者應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞衰老的延緩是通過(guò)SA-β -半乳糖苷酶表達(dá)測(cè)定的、ATM或p53蛋白的抑制測(cè)定的或者由細(xì)胞活力試驗(yàn)測(cè)定的細(xì)胞活力增加檢測(cè)的。
全文摘要
此處披露了用于延緩細(xì)胞衰老的組合物，其包括占該組合物總重量約0.01wt％至約5wt％的六肽-11(苯丙氨酸-纈氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸)，和皮膚病學(xué)可接受的肽載體，該載體選自水、油、醇、硅酮和它們的混合物。
文檔編號(hào)C12P21/06GK102575276SQ201080041626
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月1日
發(fā)明者詹姆斯·文森特·格魯伯 申請(qǐng)人:奧麒個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品公司