專利名稱：毛發(fā)形狀易感性基因的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及與毛發(fā)形狀相關(guān)的基因、以及對于毛發(fā)形狀的遺傳易感性的判定、毛發(fā)形狀類型的檢測和/或判定、以及用于對毛發(fā)形狀的調(diào)節(jié)有效的成分的篩選的標(biāo)記、以及該標(biāo)記的用途。
背景技術(shù)：
根據(jù)毛發(fā)的卷曲程度，人的自然毛發(fā)形狀一般可以分為直發(fā)、波浪發(fā)(wavy hair)、卷發(fā)(curly hair)、卷縮發(fā)(kinky hair,coiled hair)。因為毛發(fā)形狀和發(fā)型是作為人的身體特征而容易識別的特性之一，另外，也是決定人的第一印象的重要因素，所以成為不論男女老少在美容上都重要關(guān)心的事。在卷曲程度強的卷縮發(fā)和卷發(fā)的情況下，因為發(fā)型的自由度受到限制而出現(xiàn)不能形成期望的造型等煩惱。另一方面，即使在直發(fā)的情況下，又會出現(xiàn)沒有發(fā)量，容易看出素顏等煩惱。作為改變毛發(fā)形狀和發(fā)型的方法，廣泛進行的有通過各種定型劑和吹風(fēng)機/燙發(fā)器進行的理發(fā)、卷曲/拉直燙發(fā)處理等。但是雖然這些處理能夠有效地改變毛發(fā)的形狀，卻對決定毛發(fā)形狀的原因完全沒有效果。因此，這些解決對策不是根本的對策，只是一時的方法，要維持毛發(fā)的形狀以及發(fā)型的話需要頻繁地重復(fù)這些處理，反而會增大對毛發(fā)的傷害， 結(jié)果損壞美容上的價值。因此，期待開發(fā)出在毛發(fā)生長出來的時候就能改變毛發(fā)的形狀，從根本上調(diào)節(jié)毛發(fā)形狀的調(diào)節(jié)方法。探索決定毛發(fā)形狀的原因，希望在開發(fā)從根本上調(diào)節(jié)毛發(fā)形狀的調(diào)節(jié)方法上，認定作為其原因的基因可以提供有用的信息。對于有關(guān)毛發(fā)形狀的因素和基因，在引起毛發(fā)形狀變化的遺傳病(非專利文獻1 ；3)和藥劑產(chǎn)生的后天的卷發(fā)(非專利文獻4)，或者卷發(fā)模型動物(非專利文獻5、6)等中有報告。但是，其中展示的因素和基因只不過是表示對毛發(fā)形狀產(chǎn)生影響的一個特殊例子，很難認為是決定人的自然毛發(fā)的形狀的原因。但是，近些年來基因組分析技術(shù)也有飛躍的進步，疾病和基因之間的關(guān)聯(lián)性也慢慢被解開。特別是，不僅僅是在由單基因發(fā)生變異或者異常所產(chǎn)生的所謂遺傳病中，而且在以糖尿病、高血壓等生活習(xí)慣病為首的頻率高的常見疾病(Common Disease)這樣以低的外顯率(Penetrance 在某種基因中具有變異的個體患有某疾病的比例)為特征的多基因性疾病中，頻繁進行使用了患病同胞對連鎖分析等的非參數(shù)連鎖分析方法的發(fā)病基因 (responsible gene)的探索(例如，參照非專利文獻7)。另外，世界上也在大力進行基于常見疾病的疾病關(guān)聯(lián)基因的變異為頻率高的基因多態(tài)性(Common Variant)，雖然在健康人中也存在，但是在患者身上保有率顯著較高的假說(Common Disease-Common Variant)，通過使用了基因多態(tài)性(例如，SNP(Single Nucleotide Polymorphism)單核苷酸多態(tài)性) 的連鎖不平衡分析來尋找發(fā)病基因(例如，參照非專利文獻8)。進一步，最近根據(jù)國際人類基因單倍體型圖計劃(The International HapMap Project)的進展，整理了 4個人群體中100萬處以上的頻率高的一般多態(tài)性(SNP)的數(shù)據(jù)庫，不僅是對常見疾病，還對關(guān)系到取決于人種或者群體其表現(xiàn)型不同的一般特性、例如皮膚顏色和頭發(fā)顏色、眼睛顏色等的基因的研究也在進行中(例如，參照非專利文獻9、10)。認為關(guān)于人的自然毛發(fā)的形狀也是同樣，也是根據(jù)人種或者群體其表現(xiàn)型不同的一般的特性。概括來說，亞洲人種多為直發(fā)，非洲人種主要為卷縮發(fā)(或者卷發(fā))。印歐人種則為這中間的波浪發(fā)(wavy hair)特性的比例較高。對于此遺傳模式，Rostand，J等首先觀察，報告了相對于直發(fā)，卷發(fā)為常染色體(半)顯性的特性(非專利文獻11)。另外， NCBI的人的孟德爾式遺傳數(shù)據(jù)庫(0MIM、http://www. ncbi.nlm. nih. gov/omim/)中也有關(guān)于卷發(fā)特性的記載。但是，對于成為決定人的自然的頭發(fā)形狀的原因的基因，還沒有徹底地進行系統(tǒng)的基因組分析研究，因此尚未發(fā)現(xiàn)?，F(xiàn)有技術(shù)文獻非專利文獻非專利文獻1 =Norgett EE et al.，Hum. Mol. Genet. 9 (18)，p. 2761-2766，2000非專利文獻 2 :Moller LB et al. , Hum. Mutat. 26 (2), p. 84-93, 2005非專利文獻3 =Kjaer Kff et al. , Am. J. Med. Genet. Α. 127A(2), p. 152-157，2004非專利文獻4 :Cullen SI et al. , Arch. Dermatol. 125 (2), p. 252-255,1989非專利文獻5 :Du X et al. Genetics. 166 (1)，p. 331-340，2004非專利文獻6:Mann GB et al. , Cell. 73(2), p. 249-61,1993非專利文獻7 =Hanis CL et al. , Nat. Genet. 13 (2)，pl61_166，1996非專利文獻 8 =Altshuler D et al.，Nat. Genet. 26 (1)，p. 76—80，2000非專利文獻9 =Sulem P et al. , Nat. Genet. 39(12), p. 1443-1452，2007非專利文獻10 :Sabeti PC et al.，Nature. 449 (7164)，p. 913-918，2007非專禾丨J文獻 11 :Rostand J et al. ,「An Atlas of Human Genetics」，Hutchinson Scientific & Technical, London,pp.26-29,196
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種毛發(fā)形狀易感性基因，所述毛發(fā)形狀易感性基因是與以下單倍域相重疊的基因，并且是包含該單倍域的堿基序列的一部分或者全部的基因，其中，所述單倍域是人1號染色體的lq21. 3區(qū)域(D1S^96 D1S2346)上的、通過對等位基因頻率在具有卷發(fā)特性的群體和具有非卷發(fā)特性的群體之間在統(tǒng)計學(xué)上顯著不同的單核苷酸多態(tài)性 (SNP)標(biāo)記進行連鎖不平衡分析而確定的、并且由序列號1 5中任意一個所表示的堿基序列構(gòu)成的單倍域。另外，本發(fā)明還提供一種毛發(fā)形狀判定標(biāo)記，所述毛發(fā)形狀判定標(biāo)記是包含以下部分堿基序列的寡核苷酸或者多核苷酸或者它們的互補鏈，其中，所述部分堿基序列是上述單倍域的堿基序列中的部分堿基序列，并且，所述部分堿基序列由連續(xù)的堿基序列構(gòu)成， 所述連續(xù)的堿基序列含有一個以上的單核苷酸多態(tài)性，所述單核苷酸多態(tài)性包括等位基因頻率在具有卷發(fā)特性的群體和具有非卷發(fā)特性的群體之間在統(tǒng)計學(xué)上顯著不同的單核苷酸多態(tài)性(SNP)、以及與該SNP連鎖的SNP。另外，本發(fā)明還提供一種對被檢測者的毛發(fā)形狀的遺傳易感性的判定方法，其中， 包括以下工序(a) (c)(a)調(diào)制來自被檢測者的基因組DNA的工序；
(b)從該基因組DNA中，檢測出存在于上述單倍域中，等位基因頻率在具有卷發(fā)特性的群體和具有非卷發(fā)特性的群體之間在統(tǒng)計學(xué)上顯著不同的單核苷酸多態(tài)性(SNP)以及和該SNP連鎖的單核苷酸多態(tài)性(SNP)的工序；以及(c)在該檢測出的SNP的等位基因頻率在卷發(fā)者群體中比在非卷發(fā)者群體中在統(tǒng)計學(xué)上顯著高的情況下，判定為該被檢測者具有卷發(fā)的遺傳素質(zhì)，在該被檢測出的SNP的等位基因頻率在任意非卷發(fā)者群體中比在卷發(fā)者群體中在統(tǒng)計學(xué)上顯著高的情況下，判定為該被檢測者不具有卷發(fā)的遺傳素質(zhì)的工序。另外，本發(fā)明還提供一種對被檢測者的毛發(fā)形狀的遺傳易感性的判定方法，其中， 所述判定方法包含在來自被檢測者的基因組DNA中的序列號1 5所表示的堿基序列中的下述表中所示的堿基號的堿基的任意一個以上中，識別該堿基是堿基(i)還是堿基(ii)， 在為堿基(i)的情況下，判定為被檢測者具有卷發(fā)的素質(zhì)，在為堿基(ii)的情況下，判定為被檢測者不具有卷發(fā)的素質(zhì)的工序。[表1-1]
權(quán)利要求
1.一種毛發(fā)形狀易感性基因，其中，所述毛發(fā)形狀易感性基因是與以下單倍域相重疊的基因，并且是包含該單倍域的堿基序列的一部分或者全部的基因，其中，所述單倍域是人1號染色體的lq21. 3區(qū)域(D1S^96 D1S2346)上的、通過對等位基因頻率在具有卷發(fā)特性的群體和具有非卷發(fā)特性的群體之間在統(tǒng)計學(xué)上顯著不同的單核苷酸多態(tài)性(SNP)標(biāo)記進行連鎖不平衡分析而確定的、并且由序列號1 5中任意一個所表示的堿基序列構(gòu)成的單倍域。
2.如權(quán)利要求1所述的毛發(fā)形狀易感性基因，其中，所述基因選自 ANXA9、FAM63A、LCE5A、CRCTl、LCE2B、LCE2A、SMCP 以及 IVL。
3.一種毛發(fā)形狀判定標(biāo)記，其中，所述毛發(fā)形狀判定標(biāo)記是包含以下部分堿基序列的寡核苷酸或者多核苷酸或者它們的互補鏈，其中，所述部分堿基序列是權(quán)利要求1所述的單倍域的堿基序列中的部分堿基序列，并且，所述部分堿基序列由連續(xù)的堿基序列構(gòu)成，所述連續(xù)的堿基序列含有一個以上的單核苷酸多態(tài)性，所述單核苷酸多態(tài)性包括等位基因頻率在具有卷發(fā)特性的群體和具有非卷發(fā)特性的群體之間在統(tǒng)計學(xué)上顯著不同的單核苷酸多態(tài)性(SNP)、以及與該SNP連鎖的 SNP。
4.如權(quán)利要求3所述的毛發(fā)形狀判定標(biāo)記，其中，所述SNP是選自以下的堿基中的SNP (1)序列號1所表示的堿基序列中，堿基號1(dbSNP數(shù)據(jù)庫ID :rs375421U A或者 G) ,2405 (rs3754210、T 或者 G) ,5874 (rsl6832604、G 或者 A)、7121 (rs2305814、C 或者 T)、 8494 (rs7532008、C 或者 A)、18980 (rsl673160、T 或者 A)、以及 23252 (rs771205、T 或者 C)所表示的堿基；(2)序列號2所表示的堿基序列中，堿基號2355(rsll581947、A或者G)、 2569(rs6658925、G 或者 A)、3897 (rs2105117、A 或者 G) ,8196 (rsl053590, C 或者 Τ)、 9510 (rs548252、T 或者 C)、13643 (rs493133、C 或者 G)、15387 (rsl970283、C 或者 G)、 15708 (rsl001834、A 或者 C)、16017 (rsll205018、G 或者 Τ)、17106 (rs545418、T 或者 C)、 17453 (rsl2116609、T 或者 C) ,17579 (rs526099, C 或者 Τ)、17634 (rs525960、A 或者 Τ)、 26924 (rs4845443、A 或者 G)、28383 (rs569032、T 或者 C) ,31275 (rs528427, C 或者 G)、 31301 (rs478926、T 或者 G)、31653 (rsl337338、A 或者 G)、31903 (rs6587681、T 或者 C)、 32209 (rsl856120、A 或者 G) ,33199 (rs474086、T 或者 C) ,33822 (rs578382、A 或者 G)、 34100 (rs549044、T 或者 C) ,35791 (rsll23567, A 或者 G)、36884 (rsl538083、G 或者 A)、 37072 (rsl538082、G 或者 A) ,37365 (rs7532535, A 或者 Τ)、37613 (rs7518654、G 或者 C)、 38062 (rs533917、G 或者 A) ,39063 (rs564107、T 或者 C)、46580 (rs7530609、A 或者 C)、 49618 (rs4240885、C 或者 G)、50164 (rs4240886、A 或者 Τ)、50278 (rs4240887、G 或者 A)、 50662 (rs6687126、G 或者 Τ)、50822 (rs6674451、T 或者 C)、50981 (rs7550769、A 或者 G)、 51133 (rs7529157、A 或者 C) ,51263 (rsl988805、G 或者 Τ)、以及 51397 (rs7529441、T 或者 C)所表示的堿基；(3)序列號3所表示的堿基序列中，堿基號2509(rsll205072、G或者A)、`5167 (rs3753453, T 或者 C) ,8449 (rs3737859、T 或者 G)、17598 (rs3904414、G 或者 A)、 18481 (rsl2074783、T 或者 C)、20891 (rs3908717、C 或者 G)、21734 (rs3904415、C 或者 Τ)以及23382(rsll205079、A或者T)所表示的堿基；(4)序列號4所表示的堿基序列中，堿基號1(rsl6834715、T或者C)、 3308(rsl2022319、C 或者 Τ)、4715 (rs4845490、G 或者 A)、4985 (rs4845491、C 或者 Τ)、 6354 (rs3737861、C 或者 A) ,8553 (rsl6834728, C 或者 Τ)、以及 8818 (rs4845492、C 或者 G) 所表示的堿基；以及(5)序列號5所表示的堿基序列中，堿基號l(rsl8M779、C或者T)、540(rs 16834751、 C 或者 A)、759 (rs4523473,C 或者 T)、1007 (rsll205131、A 或者 G)、1018 (rs7528862、G 或者 A)、1075 (rs7517189、G 或者 C)、1939 (rs2229496、G 或者 A)、以及 3440 (rs913996、A 或者 G) 所表示的堿基。
5.如權(quán)利要求3或4所述的毛發(fā)形狀判定標(biāo)記，其中，所述毛發(fā)形狀判定標(biāo)記由10 601個堿基長度的連續(xù)堿基序列構(gòu)成。
6.一種對被檢測者的毛發(fā)形狀的遺傳易感性的判定方法，其中，包括以下工序(a) (c)(a)調(diào)制來自被檢測者的基因組DNA的工序；(b)從該基因組DNA中，檢測出存在于權(quán)利要求1所述的單倍域中的、等位基因頻率在具有卷發(fā)特性的群體和具有非卷發(fā)特性的群體之間在統(tǒng)計學(xué)上顯著不同的單核苷酸多態(tài)性(SNP)以及與該SNP連鎖的單核苷酸多態(tài)性(SNP)的工序；以及(c)在該檢測出的SNP的等位基因頻率在卷發(fā)者群體中比在非卷發(fā)者群體中在統(tǒng)計學(xué)上顯著高的情況下，判定為該被檢測者具有卷發(fā)的遺傳素質(zhì)；在該被檢測出的SNP的等位基因頻率在任意非卷發(fā)者群體中比在卷發(fā)者群體中在統(tǒng)計學(xué)上顯著高的情況下，判定為該被檢測者不具有卷發(fā)的遺傳素質(zhì)的工序。
7.一種對被檢測者的毛發(fā)形狀的遺傳易感性的判定方法，其中，包括以下的工序在來自被檢測者的基因組DNA中的序列號1 5所表示的堿基序列中的下述表中所示的堿基號的堿基中的任意一個以上中，識別該堿基是堿基(i)還是堿基(ii)，在為堿基(i) 的情況下，判定為被檢測者具有卷發(fā)的素質(zhì)；在為堿基(ii)的情況下，判定為被檢測者不具有卷發(fā)的素質(zhì)的工序。[表 15-1]
8.一種對被檢測者的毛發(fā)形狀的遺傳易感性的判定用試藥，其中，所述判定用試藥含有在嚴格的條件下與權(quán)利要求3 5中任一項所述的毛發(fā)形狀判定標(biāo)記雜交的探針和/或引物。
9.如權(quán)利要求8所述的試藥，其中，所述探針和/或引物與所述標(biāo)記中含有權(quán)利要求5所述的SNP的區(qū)域雜交。
10.一種對被檢測者的毛發(fā)形狀的遺傳易感性的判定用試劑盒，其中，所述判定用試劑盒含有權(quán)利要求8或9所述的試藥。
11.一種篩選毛發(fā)形狀調(diào)節(jié)劑的方法，其中，包括以下工序(a)和(b)(a)用被檢測物質(zhì)向含有權(quán)利要求1或者2中所述的毛發(fā)形狀易感性基因的細胞給藥的工序；以及(b)從給藥的被檢測物質(zhì)中，選擇能夠使存在于該毛發(fā)形狀易感性基因上或者其附近、 并且等位基因頻率在具有卷發(fā)特性的群體和具有非卷發(fā)特性的群體之間在統(tǒng)計學(xué)上顯著不同的單核苷酸多態(tài)性(SNP)以及和該SNP連鎖的單核苷酸多態(tài)性(SNP)標(biāo)記的堿基的多態(tài)性變換為其它多態(tài)性的物質(zhì)作為毛發(fā)形狀調(diào)節(jié)劑的工序。
12.一種毛發(fā)形狀類型的標(biāo)記，其中，所述毛發(fā)形狀類型的標(biāo)記由多核苷酸或者其部分多核苷酸構(gòu)成；或者由多肽或者其部分多肽構(gòu)成，其中，所述多核苷酸由序列號44、序列號46、序列號48、序列號50或者序列號52所表示的堿基序列、與其互補的堿基序列構(gòu)成；所述多肽由序列號45、序列號47、序列號49、序列號51或者序列號53所表示的氨基酸序列構(gòu)成。
13.如權(quán)利要求12所述的標(biāo)記，其中，所述部分多核苷酸為15個堿基以上的多核苷酸。
14.一種用于擴增權(quán)利要求12所述的標(biāo)記的引物，其中，所述引物由多核苷酸的部分多核苷酸構(gòu)成，其中，所述多核苷酸由序列號44、序列號46、序列號48、序列號50或者序列號52所示的堿基序列或者與其互補的堿基序列構(gòu)成。
15.一種用于檢測權(quán)利要求12所述的標(biāo)記的探針，其中，所述探針由多核苷酸或者其部分多核苷酸構(gòu)成，其中，所述多核苷酸由序列號44、序列號46、序列號48、序列號50或者序列號52所示的堿基序列或者與其互補的堿基序列構(gòu)成。
16.一種用于檢測權(quán)利要求12所述的標(biāo)記的抗體，其中，所述抗體特異性識別由序列號45、序列號47、序列號49、序列號51或者序列號53所示的氨基酸序列構(gòu)成的多肽或者其部分多肽。
17.一種毛發(fā)形狀類型的檢測和/或判定方法，其中，包括以下工序(a) (c)(a)測定在來自被檢測者的樣品中權(quán)利要求12所述的標(biāo)記的表達量的工序；(b)將該(a)的測定結(jié)果與非卷發(fā)者的測定結(jié)果相比較的工序；以及，(c)基于(b)的結(jié)果判斷毛發(fā)形狀類型的工序。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述來自被檢測者的樣品是由從被檢測者采集的活體樣品調(diào)制的RNA或者由該RNA轉(zhuǎn)錄的互補多核苷酸。
19.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述工序(a)是使從被檢測者采集的活體樣品和權(quán)利要求16所述的抗體相接觸，測定與該抗體結(jié)合的該活體樣品中的權(quán)利要求12所述的標(biāo)記的量的工序。
20.如權(quán)利要求17 19中任一項所述的方法，其中，從被檢測者采集的活體樣品為來自上皮組織或者上皮細胞的活體樣品。
21.一種毛發(fā)形狀調(diào)節(jié)劑的評價或者選擇方法，其特征在于，包括以下(a) (d)的工序(a)使被檢測物質(zhì)與權(quán)利要求1所述的毛發(fā)形狀易感性基因或者由該基因編碼的蛋白質(zhì)能夠表達的細胞相接觸的工序；(b)測定被接觸的細胞的該基因或者該蛋白質(zhì)的表達量的工序；(c)將(b)中測定的表達量與不接觸被檢測物質(zhì)的對照細胞的該基因或者該蛋白質(zhì)的表達量進行比較的工序；(d)基于(c)的結(jié)果，選擇使該基因或者該蛋白質(zhì)的表達量減少或者增多的被檢測物質(zhì)作為毛發(fā)形狀調(diào)節(jié)劑的工序。
22.一種毛發(fā)形狀調(diào)節(jié)劑的評價或者選擇方法，其特征在于，包括以下的(a) (c)的工序(a)向權(quán)利要求1所述的毛發(fā)形狀易感性基因能夠表達的細胞中，導(dǎo)入該毛發(fā)形狀易感性基因的表達控制區(qū)域和報告基因的融合基因，并在被檢測物質(zhì)的存在條件下以及不存在條件下培養(yǎng)該細胞的工序；(b)測定在被檢測物質(zhì)的存在條件下培養(yǎng)的細胞培養(yǎng)物中的報告基因表達產(chǎn)物的表達量，并將該量與在被檢測物質(zhì)的不存在條件下培養(yǎng)的細胞培養(yǎng)物中的報告基因表達產(chǎn)物的表達量進行比較的工序；(c)基于所述(b)的比較結(jié)果，選擇使報告基因表達產(chǎn)物的表達量增減的被檢測物質(zhì)作為毛發(fā)形狀調(diào)節(jié)劑的工序。
23.一種毛發(fā)形狀調(diào)節(jié)劑的評價或者選擇方法，其特征在于，包括以下的(a) (c)的工序(a)使被檢測物質(zhì)和含有權(quán)利要求1所述的毛發(fā)形狀易感性基因編碼的蛋白質(zhì)的水溶液、細胞或者由該細胞調(diào)制的細胞組分接觸的工序；(b)測定接觸了該被檢測物質(zhì)的水溶液、細胞或者細胞組分中的該蛋白質(zhì)的機能或者活性，并將該機能或者活性與不接觸被檢測物質(zhì)的對照水溶液、對照細胞或者對照細胞組分中所述蛋白質(zhì)的機能或者活性比較的工序；(c)基于所述(b)的比較結(jié)果，選擇使該蛋白質(zhì)的機能或者活性增減的被檢測物質(zhì)作為毛發(fā)形狀調(diào)節(jié)劑的工序。
24.一種毛發(fā)形狀類型的調(diào)節(jié)方法，其特征在于，控制人的毛發(fā)發(fā)根部的權(quán)利要求1所述的毛發(fā)形狀易感性基因的表達。
全文摘要
本發(fā)明提供一種與毛發(fā)形狀相關(guān)的基因多態(tài)性和毛發(fā)形狀易感性基因，以及用于判定各個被檢測者中對毛發(fā)形狀的遺傳易感性的方法。所述毛發(fā)形狀易感性基因是與以下單倍域相重疊的基因，并且是包含該單倍域的堿基序列的一部分或者全部的基因，其中，所述單倍域是人1號染色體的1q21.3區(qū)域(D1S2696～D1S2346)上的、通過對等位基因頻率在具有卷發(fā)特性的群體和具有非卷發(fā)特性的群體之間在統(tǒng)計學(xué)上顯著不同的單核苷酸多態(tài)性(SNP)標(biāo)記進行連鎖不平衡分析而確定的、并且由序列號1～5中任意一個所表示的堿基序列構(gòu)成的單倍域。并且，所述毛發(fā)形狀易感性基因是包含所述單倍域的堿基序列的一部分或者全部的基因。
文檔編號C12N15/09GK102549157SQ201080044858
公開日2012年7月4日 申請日期2010年10月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月5日
發(fā)明者吉田寬, 布施千繪, 有波忠雄, 田口浩之 申請人:花王株式會社