專利名稱：誘導(dǎo)型啟動子在甲硫氨酸生產(chǎn)中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及誘導(dǎo)型啟動子在通過發(fā)酵進行的甲硫氨酸生產(chǎn)中的用途。
背景技術(shù)：
含硫化合物例如半胱氨酸、高半胱氨酸、甲硫氨酸或S-腺苷甲硫氨酸對于細胞代謝是關(guān)鍵的，并且通過工業(yè)生產(chǎn)以用作食物或飼料添加劑和藥劑。特別地，不能由動物合成的必需氨基酸甲硫氨酸在許多機體功能中起重要作用。除了其在蛋白質(zhì)生物合成中的作用夕卜，甲硫氨酸涉及轉(zhuǎn)甲基作用以及硒和鋅的生物利用度。甲硫氨酸還直接用作對于病癥如變態(tài)反應(yīng)和風濕熱的治療。然而，生產(chǎn)的大多數(shù)甲硫氨酸加入動物飼料中。
隨著由于BSE和雞流感造成的動物衍生的蛋白質(zhì)的減少使用，關(guān)于純甲硫氨酸的需求已經(jīng)增加。在化學(xué)上，D，L-甲硫氨酸通常由丙烯醛、甲硫醇和氰化氫產(chǎn)生。然而，外消旋混合物不如純L-甲硫氨酸一樣表現(xiàn)良好,如例如在雞飼料添加劑中(Saunderson,C. L. , (1985)British Journal of Nutrition 54,621-633)。純 L-甲硫氨酸可以例如通過對N-乙酰-D，L-甲硫氨酸的?；柑幚碜酝庀琢虬彼岙a(chǎn)生，這急劇增加生產(chǎn)成本。對純L-甲硫氨酸的漸增需求連同對環(huán)境的關(guān)注使甲硫氨酸的微生物生產(chǎn)變得有吸引力。誘導(dǎo)型啟動子在生物技術(shù)工藝中的使用是在化學(xué)生物合成領(lǐng)域中。這些啟動子通常響應(yīng)分別由丙酸鹽(W02007005837)、鋅(W02004020640)和阿拉伯糖(W01998011231)或溫度(Microbial conversion of glycerol tol,3-propanediol by an engineeredstrain of Escherichia coli. Tang X, Tan Y, Zhu H, Zhao K, Shen W. AppI EnvironMicrobiol. 2009Mar ；75(6) : 1628-34.)和光例示的化學(xué)或物理刺激。甲硫氨酸生產(chǎn)依賴幾個前體提供途徑。有效的甲硫氨酸生產(chǎn)需要這些途徑的細調(diào)。對于最大限度甲硫氨酸生產(chǎn)，能夠在工藝過程中調(diào)整特定關(guān)鍵酶的表達可以是有利的。例如(i)特定酶的表達僅在生產(chǎn)階段過程中是需要的，而在生物質(zhì)生成過程中則不是，或反之亦然。其他酶僅在靜止相中是有利的。因此，誘導(dǎo)型啟動子的使用在改善在工業(yè)水平生產(chǎn)甲硫氨酸的總體得率方面可以是令人感興趣的。然而，由于甲硫氨酸代謝途徑的復(fù)雜性和這些途徑針對改善的甲硫氨酸生產(chǎn)的細調(diào)，從未考慮且報道誘導(dǎo)型啟動子控制涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的基因表達的用途。本發(fā)明人目前已發(fā)現(xiàn)當用于調(diào)節(jié)涉及復(fù)雜代謝途徑例如甲硫氨酸生物合成的基因的基因表達時，誘導(dǎo)型啟動子可以是有利的。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于在發(fā)酵工藝中生產(chǎn)甲硫氨酸、其前體或衍生物的方法，其包括如下步驟-在包含碳源、硫源和氮源的合適培養(yǎng)基中培養(yǎng)經(jīng)修飾的微生物，和-從所述培養(yǎng)基中回收甲硫氨酸和/或其衍生物，其中在所述經(jīng)修飾的微生物中，涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種基因的表達在異源誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。本發(fā)明還涉及經(jīng)修飾用于改善的甲硫氨酸生產(chǎn)的微生物，其中涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種基因的表達在異源誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。在一個特定實施方案中，基因thrA、cysE和metA在異源誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及用于在發(fā)酵工藝中生產(chǎn)甲硫氨酸、其前體或衍生物的方法，其包括如下步驟 在包含碳源、硫源和氮源的合適培養(yǎng)基中培養(yǎng)經(jīng)修飾的微生物，和 從所述培養(yǎng)基中回收甲硫氨酸和/或其衍生物，
其中在所述經(jīng)修飾的微生物中，涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種基因的表達在異源誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“發(fā)酵過程/工藝”、‘發(fā)酵’或‘培養(yǎng)’可互換使用，以指示在含有碳源、硫源和氮源的合適生長培養(yǎng)基上的細菌生長?！昂线m的培養(yǎng)基”是適合于微生物的培養(yǎng)和生長的培養(yǎng)基。此類培養(yǎng)基是微生物發(fā)酵領(lǐng)域中眾所周知的，取決于待培養(yǎng)的微生物。術(shù)語“微生物”指示細菌、酵母或真菌。優(yōu)選地，微生物選自腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、芽抱桿菌科(Bacillaceae)、鏈霉菌科(Streptomycetaceae)和棒狀桿菌科(Corynebacteriaceae)。更優(yōu)選地,微生物是埃希氏菌屬(Escherichia)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、泛菌屬(Pantoea)、沙門氏菌屬(Salmonella)或棒狀桿菌屬(Corynebacterium)的菌種。甚至更優(yōu)選地，微生物是菌種大腸桿菌(Escherichia coli)或谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacterium glutamicum)。術(shù)語“經(jīng)修飾的微生物”是經(jīng)修飾用于改善的甲硫氨酸生產(chǎn)的微生物，并且指示已經(jīng)遺傳修飾的微生物，目的是改善甲硫氨酸的生產(chǎn)得率。根據(jù)本發(fā)明，“改善的”或“改善”意指與相應(yīng)未經(jīng)修飾的微生物相比較，通過微生物生產(chǎn)的甲硫氨酸量，并且特別是甲硫氨酸得率(生產(chǎn)的甲硫氨酸/碳源的比)在經(jīng)修飾的微生物中更高。通常的修飾包括通過轉(zhuǎn)化和重組將基因的缺失引入微生物內(nèi)、和用于表達異源基因的載體的引入。在本發(fā)明的方法中使用的經(jīng)修飾的微生物具有兩種特征-它經(jīng)修飾用于改善的甲硫氨酸生產(chǎn)，和-涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種基因的表達在誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。短語“從培養(yǎng)基中回收甲硫氨酸和/或其衍生物”指示回收甲硫氨酸和可能的S-?；琢虬彼岷蚇-?；琢虬彼峄衔铮鏝-乙酰甲硫氨酸和N-丙酰甲硫氨酸，和所有其他獲得的衍生物的動作。術(shù)語“誘導(dǎo)型啟動子”指示其活性在外部刺激后可以是增加或減少的啟動子。刺激可以在實質(zhì)上是物理或化學(xué)的，例如溫度、光、化學(xué)物質(zhì)等。靶基因的誘導(dǎo)可以經(jīng)由刺激的直接或間接傳遞而獲得。當一種靶基因的表達在誘導(dǎo)型啟動子的控制下時，實現(xiàn)直接傳遞。間接傳遞可以是通過使用異源RNA聚合酶實現(xiàn)的，所述異源RNA聚合酶在誘導(dǎo)型啟動子的控制下，并且識別驅(qū)動涉及甲硫氨酸生物合成的靶基因表達的特異性啟動子。在這種情況下，誘導(dǎo)型啟動子不與靶基因的啟動子直接連接，但驅(qū)動轉(zhuǎn)錄所述靶基因的啟動子的RNA聚合酶的表達。這些異源RNA聚合酶可以是例如T3 RNA聚合酶、T7 RNA聚合酶或本領(lǐng)域?qū)＜乙阎钠渌酆厦?。‘間接傳遞’還指一種特定基因的誘導(dǎo)性表達對其鄰近基因的表達的‘極性效應(yīng)’?！皹O性效應(yīng)”指示基因中的遺傳修飾對在所述經(jīng)修飾的基因下游的一種或多種基因表達的影響。在本發(fā)明的特定方面，涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的特定基因的誘導(dǎo)可以導(dǎo)致所述特定基因下游基因的誘導(dǎo)。短語“在異源誘導(dǎo)型啟動子的控制下”指示誘導(dǎo)型啟動子不是基因的天然啟動子且以至少部分控制與之可操作地連接的基因表達水平的方式引入的事實。誘導(dǎo)型啟動子的 活性通過生物或非生物因子的存在或不存在誘導(dǎo)。基因的表達可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的需要打開或關(guān)閉。這些啟動子可以是化學(xué)調(diào)節(jié)的(在四環(huán)素、激素等的存在下)或物理調(diào)節(jié)的，特別是通過熱或光調(diào)節(jié)的。在本發(fā)明的特定實施方案中，涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種基因的表達在誘導(dǎo)型啟動子的直接控制下。在本發(fā)明的第一個方面，誘導(dǎo)型啟動子是物理誘導(dǎo)型啟動子，特別是溫度誘導(dǎo)型啟動子或光誘導(dǎo)型啟動子。啟動子有利地是優(yōu)選通過噬菌體λ經(jīng)修飾的阻遏物調(diào)節(jié)的溫度誘導(dǎo)型啟動子、啟動子PR或PR的衍生物、啟動子PL或PL的衍生物(A genetic switch. PtashneM. Blackwell Scientific，Cambridge, MA. 1986 ；A genetic switch Phage lambdarevisited. Ptashne M. Cold Spring Harbor Lab Press. Cold Spring Harbor，NY. 2004 ；The bacteriophages，Part II Life of phages,8. Gene regulatory circuitry ofphage λ . Little J.第 2 版 2004. Richard Calendar.編輯 Oxford University Press)、和通過溫度敏感的Lac阻遏物調(diào)節(jié)的經(jīng)修飾的Iac啟動子。阻遏物通過結(jié)合啟動子區(qū)中的特異性結(jié)合位點阻遏來自同源(cognate)啟動子的表達，從而限制RNA聚合酶對啟動子的接近且減少轉(zhuǎn)錄的起始或延伸。有利地，所述阻遏物是入阻遏物等位基因 cI857 (On a thermosensitive repression system in theEscherichia coli lambda bacteriophage. Sussman R，Jacob F. C. R. Hebd. Seances Acad.Sci. 1962，254，第1517頁)或cl入阻遏物的另一種溫度敏感的等位基因。在本發(fā)明的特定方面，在用于甲硫氨酸生產(chǎn)的經(jīng)修飾的微生物中，編碼recA的基因已被缺失。蛋白質(zhì)RecA已知充當對于Cl的蛋白酶。因此，編碼RecA的基因的缺失排除λ阻遏物Cl的蛋白水解。溫度誘導(dǎo)型啟動子可以有利地選自啟動子PR或衍生物、和啟動子PL或衍生物。在另一個實施方案中，溫度誘導(dǎo)型啟動子是由溫度敏感的Lac阻遏物調(diào)節(jié)的經(jīng)修飾的Iac啟動子。在本發(fā)明的第二個方面，誘導(dǎo)型啟動子是化學(xué)調(diào)節(jié)的。特別地，啟動子活性的誘導(dǎo)與碳分解代謝產(chǎn)物的阻遏中的變化連接。由碳分解代謝產(chǎn)物阻遏激活的啟動子是在低濃度的葡萄糖或在不存在葡萄糖的情況下經(jīng)由激活物CRP正調(diào)節(jié)的。有利地，誘導(dǎo)型啟動子由碳源或糖醇的存在誘導(dǎo)。由碳源或糖醇誘導(dǎo)的啟動子的例子分別包括阿拉伯糖或棉子糖啟動子和甘露醇啟動子或葡糖醇啟動子。根據(jù)本發(fā)明的特定方面，目的基因的表達是經(jīng)由“間接傳遞”調(diào)節(jié)的，即涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種基因由其表達在誘導(dǎo)型啟動子控制下的異源RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄。在本發(fā)明的特定實施方案中，異源RNA聚合酶選自T7、T3聚合酶。根據(jù)本發(fā)明，涉及甲硫氨酸生產(chǎn)或其前體生產(chǎn)的至少一種基因在異源誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下；如先前解釋的，基因在誘導(dǎo)型啟動子的直接控制下，或基因由誘導(dǎo)性RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄或二者組合。涉及微生物中的甲硫氨酸生產(chǎn)的基因是本領(lǐng)域已知的，并且包含涉及甲硫氨酸特異性生物合成途徑的基因以及涉及前體提供途徑的基因和涉及甲硫氨酸消耗途徑的基因。
甲硫氨酸的有效生產(chǎn)要求甲硫氨酸特異性途徑和幾個前體提供途徑的最佳化。甲硫氨酸生產(chǎn)菌株已在專利申請 WO 2005/111202、WO 2007/077041、WO 2009/043803 和 WO2009/043372中描述，并且作為參考文獻弓I入本申請內(nèi)。對于其抑制劑SAM和甲硫氨酸具有減少的反饋敏感性的過表達高絲氨酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶等位基因的甲硫氨酸生產(chǎn)菌株在專利申請WO 2005/111202中描述。這個申請還描述了這些等位基因與甲硫氨酸阻遏物MetJ(GenBankl790373)的缺失的組合,如專利申請JP 2000/157267中提出的，所述甲硫氨酸阻遏物MetJ負責甲硫氨酸調(diào)節(jié)子的下調(diào)。此外，兩種修飾與天冬氨酸激酶/高絲氨酸脫氫酶的過表達的組合在專利申請WO 2005/111202中描述?；騝ysE、metH和metF的過表達已在WO 2007/077041中提出。為了增加甲硫氨酸生產(chǎn)，涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種下述基因可以在誘導(dǎo)型啟動子的控制下。a)涉及硫同化的基因的表達可以有利地在誘導(dǎo)型啟動子或RNA聚合酶的控制下
基_ 登號她
cysK 1788754 半胱氨酸合酶α Ζ §1788753 cysK 的 ORF 上游α Ν §1789108 ATP 硫酸化酶cv.vD §1789109 硫酸腺苷酏轉(zhuǎn)移酶cv.vC §1789107 腺苷觥硫酸激酶cysZ 1788753 疏酸鹽轉(zhuǎn)運
sbp 1790351 周質(zhì)硫酸鹽結(jié)合蛋白b)添補反應(yīng)可以通過表達下述基因得到加強ppc 1790393 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶pps 1787994 磷酸烯醇式丙酮酸合酶pyc CAB13359 丙酮酸羧化酶(例如來自枯草芽孢桿菌(B. subtilis))c)乙酸鹽消耗反應(yīng)可以過表達以下基因得到加強acs 1790505 乙酸-CoA 合成酶
d)直接涉及甲硫氨酸生物合成的酶
metA丨790443高絲氨酸O-輸?shù)络牾；?br> IiietB1790375胱硫醚γ-合酶
metC1789383胱硫醚β-裂解酶
metE23673045-曱基四氫蝶酰三谷氨酸-高半胱氨酸S-甲基轉(zhuǎn)
移酶
metF17903775，I O-亞甲基四氫葉酸還原酶
metH1790450B12-依賴性高半胱氨酸-NS-甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)甲
基酶
metK 1789311 甲硫氣酸腺苷轉(zhuǎn)移酶
metL 1790376 天冬氣酸激酶11/高絲氨竣Λ氬酶IIe)涉及天冬氨酸鹽代謝的酶asd 1789841 天冬氨酸-半醒脫氫酶aspC 1787159 天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶IysC 1790455 天冬氨酸激酶 III在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，至少一種基因thrA和/或cysE的表達在誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。酶ThrA或任何其同源物(MetL、LysC)催化在天冬氨酸鹽至高絲氨酸(甲硫氨酸的前體)的轉(zhuǎn)化中的反應(yīng)。酶CysE催化絲氨酸的O-乙?；?，以形成作為半胱氨酸的直接前體的O-乙酰-絲氨酸，其繼而又充當用于甲硫氨酸生物合成的硫供體。甲硫氨酸的生產(chǎn)可以進一步通過使用改變的metB等位基因增加，所述改變的metB等位基因優(yōu)先地或?qū)Ｒ坏厥褂肏2S且因此由O-琥珀酰-高絲氨酸生產(chǎn)高半胱氨酸，如引入本文作為參考的專利申請WO 2004/076659中描述的。甲硫氨酸生產(chǎn)中的進一步增加可以通過減弱基因pykA、pykF和/或purU的表達而獲得，如專利申請W02009043803中描述的。這還可以是通過使用誘導(dǎo)型啟動子直接或間接實現(xiàn)的。本申請還描述了甲硫氨酸生產(chǎn)菌株，其中操縱子cysPUWAM、cysJIH和gcvTHP以及基因serA、serB、serC、Ipd和glyA是過表達的。類似地,這可以是通過使用誘導(dǎo)型啟動子直接或間接實現(xiàn)的。降解甲硫氨酸的途徑(參見下文列表)或脫離甲硫氨酸生產(chǎn)途徑的基因的更多表達可以使用誘導(dǎo)型啟動子直接或間接減弱。在這個背景下的減弱描述通過手段減少酶的細胞內(nèi)活性，所述手段例如減少其表達、減少酶的穩(wěn)定性、增加其降解和/或本領(lǐng)域?qū)＜乙阎钠渌鉀Q方案。這可以通過減少誘導(dǎo)型啟動子的表達來完成，即消除誘導(dǎo)誘導(dǎo)型啟動子的刺激或減少誘導(dǎo)性RNA聚合酶的表達?；鶉唢L萃奈盡_

ackA1788633乙酸激酶
pta1788635磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶
aceE丨786304丙酮酸脫氫酶EI
aceF1786305雨氫酶 E2
Ipd1786307丙酮酸脫氫酶E3
sucC1786948琥珀酰-CoA合成酶，P販基
sucD1786949破 白酜-CoA合成酶，α亞基
pck1789807磷黢烯醇式丙SB__羧激酶
maeB
poxB1787096丙酮酸氧化酶
/ZvB1790104乙醃羥酸合酶I，大亞基
ι/ν-Ν1790103乙聽羥酸合酶I,小置基
ilvG1790202乙酏羚酸合酶II,大亞基
1790203
HvM1790204乙酰羥酸合酶II,小亞基
UvI1786265乙醍羥ft 酶III5大業(yè)基
HvE1786266乙緩羥酸合酶III，小亞基
am￥1788953DAHP 合成酶
amG1786969DAHP 合成酶
imM1787996DAHP 合成酶
IhrB1786184高絲氨酸激酶
IhrC1786185蘇氨酸合酶
Siktk1788116絲氨酸脫氨酶
SiiuE1789161絲氨S交脫氨酶
JfpeD1786311S-腺苷甲硫氨酸Λ羧臻
speC1789337鳥氨酸脫羧酶
m/A1788043精氨酸琥珀ft轉(zhuǎn)移酶
dapk1788823二氫吡咬二羧酸合酶
mdh1789632蘋果酸脫氫酶
mqo1788539蘋果酸脫氫峰· FAD/NAD《P)-結(jié)合結(jié)構(gòu)域《
gltA1786939檸檬酸合酶
aceE 1786304 兩酮酸脫氫酶，El
aceF 1786305 丙酮酸脫氫酶，E2在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，至少一種基因thrA、cysE、metA的表達在誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。在另一個特定實施方案中，基因thrA、cysE和metA在誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，thrA基因的表達在誘導(dǎo)型啟動子的直接控制下，并且cysE基因的表達在thrA基因的誘導(dǎo)性表達的‘極性效應(yīng)’下。在本發(fā) 明的另一個優(yōu)選實施方案中，thrA基因的表達在誘導(dǎo)型啟動子的直接控制下，并且cysE和metA基因的表達在thrA基因的誘導(dǎo)性表達的‘極性效應(yīng)’下。在特定實施方案中，三種基因thrA、cysE和metA在相同誘導(dǎo)型啟動子例如上文和實施例中公開的溫度誘導(dǎo)型啟動子的控制下。在本發(fā)明中，“thrA基因”意指天然thrA基因或?qū)τ谔K氨酸具有減少的反饋敏感性的thrA等位基因，例如W02005/108561中描述的。根據(jù)本發(fā)明，“metA基因”意指天然metA基因或編碼對于甲硫氨酸和S-腺苷甲硫氨酸具有減少的反饋敏感性的酶的metA突變體等位基因，例如W02005/108561中描述的。由誘導(dǎo)型啟動子控制的基因可以在染色體上的其天然位置處或整合到非天然位置處。由誘導(dǎo)型啟動子控制的基因的一次或幾次整合可能是最佳甲硫氨酸生產(chǎn)所需的。類似地，調(diào)節(jié)基因的一個或多個拷貝可能是最佳表達所需的。阻遏基因拷貝和啟動子的不同比例可以用于細調(diào)表達。在誘導(dǎo)型啟動子控制下的基因優(yōu)先整合到基因座內(nèi)，其修飾對甲硫氨酸生產(chǎn)不具有負面影響。關(guān)于基因可以整合到其內(nèi)的基因座的例子是
權(quán)利要求
1.一種用于在發(fā)酵工藝中生產(chǎn)甲硫氨酸、其前體或衍生物的方法，其包括如下步驟 -在包含碳源、硫源和氮源的合適培養(yǎng)基中培養(yǎng)經(jīng)修飾的微生物，和 -從所述培養(yǎng)基中回收甲硫氨酸和/或其衍生物， 其中在所述經(jīng)修飾的微生物中，涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種基因的表達在異源誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。
2.權(quán)利要求I的方法，其中所述涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種基因的表達在異源誘導(dǎo)型啟動子的直接控制下。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述誘導(dǎo)型啟動子通過物理或化學(xué)刺激誘導(dǎo)。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述誘導(dǎo)型啟動子通過物理刺激誘導(dǎo)，所述誘導(dǎo)型啟動子 選自由溫度誘導(dǎo)型啟動子或光誘導(dǎo)型啟動子組成的組。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述溫度誘導(dǎo)型啟動子選自由通過噬菌體λ經(jīng)修飾的阻遏物調(diào)節(jié)的啟動子、啟動子PR或PR的衍生物、啟動子PL或PL的衍生物、和通過溫度敏感的Lac阻遏物調(diào)節(jié)的經(jīng)修飾的Iac啟動子組成的組。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述噬菌體λ經(jīng)修飾的阻遏物是λ阻遏物等位基因cI857或λ阻遏物cl的任何其他溫度不穩(wěn)定的等位基因。
7.權(quán)利要求5或6的方法，其中在所述經(jīng)修飾的微生物中，基因recA是缺失的。
8.權(quán)利要求3的方法，其中所述誘導(dǎo)型啟動子通過化學(xué)刺激誘導(dǎo)，所述刺激選自由下述組成的組 -碳分解代謝產(chǎn)物的阻遏中的變化； -特定碳源的存在，或 -糖醇的存在。
9.權(quán)利要求I的方法，其中涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種基因在異源誘導(dǎo)型啟動子的間接控制下，所述基因由其表達在誘導(dǎo)型啟動子控制下的異源RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述異源RNA聚合酶選自由T7和T3聚合酶組成的組。
11.權(quán)利要求I- 10中任一項的方法，其中其表達在異源啟動子的直接或間接控制下的所述至少一種基因選自由下述組成的組cysK、cysZ、cysN、cysD、cysC、cysZ、sbp、ppc、pps、pyc、acs、metA、metB、metC、metE、metF、metH、metK、metL、asd、aspC、lysC、pykA、pykF、purU、操縱子 cysPUWAM、cysJIH 和 gcvTHP、serA、serB、serC、lpd、glyA、ackA、pta、aceE、aceF、lpd、sucC、sucD、pck、maeB、poxB、ilvB、ilvN、ilvG、ilvM、ilvl、ilvH、aroF、aroG、aroH、thrB、thrC、sdaA、sdaB、sped、speC、astA、dapA、mdh、mqo、gltA、aceE、aceF。
12.權(quán)利要求1-11中任一項的方法,其中至少一種基因thrA、cysE、metA的表達在異源誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述基因thrA、cysE和metA在異源誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。
14.一種經(jīng)修飾用于甲硫氨酸的改善生產(chǎn)的微生物，其中在所述經(jīng)修飾的微生物中，涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種基因的表達在異源誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。
15.權(quán)利要求14的微生物,其包含權(quán)利要求2-13中描述的至少一種修飾。
全文摘要
本發(fā)明涉及誘導(dǎo)型啟動子在通過發(fā)酵進行的甲硫氨酸生產(chǎn)中的用途。本發(fā)明涉及用于在發(fā)酵工藝中生產(chǎn)甲硫氨酸、其前體或衍生物的方法，其包括如下步驟在包含碳源、硫源和氮源的合適培養(yǎng)基中培養(yǎng)經(jīng)修飾的微生物，和從所述培養(yǎng)基中回收甲硫氨酸和/或其衍生物，其中在所述經(jīng)修飾的微生物中，涉及甲硫氨酸生產(chǎn)的至少一種基因的表達在異源誘導(dǎo)型啟動子的直接或間接控制下。本發(fā)明還涉及在該方法中使用的經(jīng)修飾的微生物。
文檔編號C12P13/12GK102762736SQ201080063823
公開日2012年10月31日 申請日期2010年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月14日
發(fā)明者P.瓦索爾, R.菲格 申請人:代謝探索者公司