專利名稱：3-甾酮-△1-脫氫酶和工程菌及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，更具體地，涉及一種3-甾酮-Δ 1-脫氫酶和工程菌及應(yīng)用。 許多真菌，例如 Aspergillus sp.、Metarhizium sp.、Fusarium sp.、Neurospora
sp. , Neosartorya sp.等，可產(chǎn)生留型抗生素。留體型抗生素包括煙曲霉酸、夫西地酸及相關(guān)類似物，其中，結(jié)構(gòu)式I分別顯示了環(huán)戊烷多氫菲(Cyclopentanoperhydrophen antrene)、膽固醇(Cholesterol)、煙曲霉酸(Helvolic acid)與夫西地酸(Fusidic acid) 的結(jié)構(gòu)。這些留型抗生素對(duì)細(xì)菌具有較好的抑制作用，例如夫西地酸在臨床上已應(yīng)用三十多年；但是，對(duì)于一些真菌而已，留型抗生素又會(huì)是一種重要致病性毒力因子，例如煙曲霉酸是金龜子綠僵菌殺昆蟲(chóng)的一種毒力因子。
權(quán)利要求
1.一種3-留酮-Δ 1-脫氫酶的基因，是下列核苷酸序列之一1)其為序列表中SEQID NO 1所示的堿基序列；2)編碼由序列表中SEQID NO :2所示的氨基酸序列或其無(wú)義突變序列組成的蛋白質(zhì)。
2.一種3-留酮-Δ 1-脫氫酶，其是序列表中SEQ ID NO :2所示氨基酸序列或其無(wú)義突變序列組成的蛋白質(zhì)。
3.包括權(quán)利要求1所述的3-留酮-Δ1-脫氫酶基因的核苷酸序列的表達(dá)載體。
4.一種高效表達(dá)3-留酮-1-脫氫酶的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株表達(dá)3-甾酮-Δ 1-脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示或?yàn)槠錈o(wú)義突變序列。
5.如權(quán)利要求4所述的基因工程菌株，其特征在于，編碼所述3-留酮-△1-脫氫酶的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示。
6.如權(quán)利要求4所述的基因工程菌株，其特征在于，編碼所述3-留酮-△1-脫氫酶的基因位于重組質(zhì)粒上或整合在染色體上。
7.如權(quán)利要求4所述的基因工程菌株，其是將權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到宿主微生物中得到的基因工程菌株。
8.如權(quán)利要求7所述的基因工程菌株，其特征在于，該宿主微生物為畢赤酵母ΚΜ71或 GS115，得到的基因工程菌株為畢赤酵母KM71-ksdDl或GS115-ksdDl。
9.如權(quán)利要求4或5所述的3-留酮-Δ1-脫氫酶基因工程菌株在用于轉(zhuǎn)化3-酮基甾體化合物中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述的轉(zhuǎn)化3-酮基留體化合物是將雄甾-4-烯-3，17- 二酮轉(zhuǎn)化為雄留-1,4- 二烯-3，17- 二酮或?qū)毜ね?br> 全文摘要
本發(fā)明提供了3-甾酮-△1-脫氫酶基因及其編碼的膽固醇氧化酶，提供了含有其基因序列的表達(dá)載體和含有該表達(dá)載體的基因工程重組菌株，提供了制備該3-甾酮-△1-脫氫酶的方法。本發(fā)明提供的3-甾酮-△1-脫氫酶為一新的3-甾酮-△1-脫氫酶，本發(fā)明提供的重組菌株可用于轉(zhuǎn)化3-酮基甾體化合物，其中優(yōu)選的重組菌株還可用于將雄甾-4-烯-3，17-二酮轉(zhuǎn)化為寶丹酮，且表達(dá)的目的蛋白為可溶性蛋白，打破了以往工業(yè)生產(chǎn)中膜蛋白的瓶頸，對(duì)于KSDD的工業(yè)化生產(chǎn)具有重大意義。還實(shí)現(xiàn)甾體化合物的微生物轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)，提高了甾體醫(yī)藥生產(chǎn)體系的生產(chǎn)效率與產(chǎn)品品質(zhì)，降低生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)C12N9/02GK102168099SQ20111002453
公開(kāi)日2011年8月31日 申請(qǐng)日期2011年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月21日
發(fā)明者林良才, 王風(fēng)清, 陳苗苗, 魏東芝 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)