專利名稱：輔助鑒定豬鏈球菌2型與豬鏈球菌7型的專用引物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種輔助鑒定豬鏈球菌2型與豬鏈球菌7型的專用引物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
豬鏈球菌(Str印tococcus suis, SS)是一種重要的人獸共患病原菌，可侵害各年 齡階段的豬，病豬通常以敗血癥、腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、淋巴結(jié)炎為主要特征。根據(jù)豬鏈球菌的莢 膜多糖抗原(CPS)可將其分為35個血清型，其中能引起人和動物發(fā)病的致病性豬鏈球菌血 清型主要是1型(SSl)、2型(SS2)、7型(SS7)和9型(SS9)。不同血清型分布不同，加拿大 以2、1/2、3、4、8型流行最廣；意大利以2型流行最廣，其次是1、9、1/2、3、7、4、8型；荷蘭法 國以2和9型為主；巴西以2型流行最廣，其次14、9、7、11、8、1、1/2、3、5、6、10型。近年來 這些高致病性血清型菌株的流行呈上升趨勢，造成了巨大的經(jīng)濟損失，并引起多例人的感 染和死亡。SS2和SS7都是能夠同時感染人和豬的病原菌。但目前對于這兩類病原菌血清 型鑒別的報道還相對較少。近些年國外學(xué)者對SS2的鑒定研究主要利用限制性片段長度多態(tài)性分析、免疫色 譜法、間接熒光抗體試驗、ELISA、多位點酶電泳法、脈沖場凝膠電泳法、隨機擴增核酸片段 多態(tài)性分析以及原位分子雜交等研究方法，這些方法作為科學(xué)研究的方法是十分有效和必 要的，但作為SS2的快速診斷就顯得無力了。對于SS7亞型的研究，1999年，Smith HE等人， 根據(jù)SS7CPS基因的特異性，設(shè)計引物并建立了 SS7型PCR診斷方法；2003年，Okwumabua 0 等人，根據(jù)GDH基因設(shè)計一條可擴增出688bp基因片段長度的引物，可用來檢測各種血清型 的SS ；同時根據(jù)SS各血清型間CPS基因的差異，建立了 1/2、1、2、7、9型的多重PCR鑒別診 斷方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種輔助鑒定豬鏈球菌2型與豬鏈球菌7型的專用引物及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的輔助鑒定豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型的專用引物，由序列表 的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4 所示DNA組成。所述專用引物可用于制備輔助鑒定豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型的試劑盒。本發(fā)明還保護一種輔助鑒定豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型的試劑盒，所述專 用引物。所述試劑盒還可包括PCR擴增的常規(guī)試劑，瓊脂糖凝膠電泳的常規(guī)試劑等。所述專用引物或所述試劑盒可用于輔助鑒定豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型。本發(fā)明還保護輔助鑒定豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型的方法I，包括如下步 驟(1)提取待測細(xì)菌的基因組DNA ；
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(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，用所述專用引物進行PCR擴增；如果得 到了 211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為候選的豬鏈球菌2型；如果得到了 347bp的PCR擴 增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為候選的豬鏈球菌7型；如果沒有得到211bp或347bp的PCR擴增產(chǎn)物， 待測細(xì)菌為候選的非豬鏈球菌2型且為候選的非豬鏈球菌7型。本發(fā)明還保護輔助鑒定豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型的方法II，包括如下步 驟(1)提取待測細(xì)菌的基因組DNA ；(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，分別用引物對甲和引物對乙進行PCR 擴增；如果應(yīng)用所述引物對甲得到了 211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為候選的豬鏈球菌2 型；如果應(yīng)用所述引物對甲沒有得到211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為候選的非豬鏈球菌 2型；如果應(yīng)用所述引物對乙得到了 347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為候選的豬鏈球菌7 型；如果應(yīng)用所述引物對乙沒有得到347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為候選的非豬鏈球菌 7型；所述引物對甲是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成的引物對； 所述引物對乙是序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成的引物對。本發(fā)明還保護鑒別豬鏈球菌2型和豬鏈球菌7型的方法III，包括如下步驟(1)提取待測細(xì)菌的基因組DNA ；所述待測細(xì)菌為豬鏈球菌2型或豬鏈球菌7型；(2)以步驟⑴提取的基因組DNA為模板，用所述專用引物進行PCR擴增；如果得 到了 211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為豬鏈球菌2型；如果得到了 347bp的PCR擴增產(chǎn) 物，待測細(xì)菌為豬鏈球菌7型。本發(fā)明還保護鑒別豬鏈球菌2型和豬鏈球菌7型的方法IV，包括如下步驟(1)提取待測細(xì)菌的基因組DNA ；所述待測細(xì)菌為豬鏈球菌2型或豬鏈球菌7型；(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，分別用引物對甲和引物對乙進行PCR擴 增；如果應(yīng)用所述引物對甲得到了 211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為豬鏈球菌2型；如果 應(yīng)用所述引物對乙得到了 347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為豬鏈球菌7型。本發(fā)明還保護一種檢測來自死亡動物的樣品中是否攜帶豬鏈球菌2型和/或豬鏈 球菌7型的方法V，包括如下步驟(1)提取待測樣品的基因組DNA ；(2)以步驟⑴提取的基因組DNA為模板，用所述專用引物進行PCR擴增；如果得 到了 211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測樣品疑似含有豬鏈球菌2型；如果得到了 347bp的PCR擴 增產(chǎn)物，待測樣本疑似含有豬鏈球菌7型；如果沒有得到211bp或347bp的PCR擴增產(chǎn)物， 待測樣本疑似不含有豬鏈球菌2型和豬鏈球菌7型。本發(fā)明還保護一種檢測來自死亡動物的樣品中是否攜帶豬鏈球菌2型和/或豬鏈 球菌7型的方法VI，包括如下步驟(1)提取待測樣品的基因組DNA ；(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，分別用引物對甲和引物對乙進行PCR 擴增；如果應(yīng)用所述引物對甲得到了 211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測樣品疑似含有豬鏈球菌2 型；如果應(yīng)用所述引物對甲沒有得到211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測樣本疑似不含有豬鏈球菌 2型；如果應(yīng)用所述引物對乙得到了 347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測樣本疑似含有豬鏈球菌7 型；如果應(yīng)用所述引物對乙沒有得到347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測待測樣本疑似不含有豬鏈球菌7型；所述引物對甲是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成的引 物對；所述引物對乙是序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成的引物對。所述方法I和/或所述方法II和/或所述方法III和/或所述方法IV和/或所 述方法V和/或所述方法VI中，所述PCR擴增的反應(yīng)條件為94°C 2min預(yù)變性；94°C 10s, 55°C 15s，72°C 15s，30個循環(huán)；72°C延伸lOmin。所述方法I和/或所述方法II中，所述待 測細(xì)菌可為豬鏈球菌2型、豬鏈球菌7型、豬大腸埃希氏菌、豬布氏桿菌或金黃色葡萄球菌。 所述方法V和/或所述方法VI中，所述動物可為豬。所述方法I和/或所述方法II和/ 或所述方法III和/或所述方法IV均可用于待測細(xì)菌的分類鑒定。本發(fā)明提供的專用引物可以輔助鑒定和鑒別豬鏈球菌2型和豬鏈球菌7型，應(yīng)用 本發(fā)明提供的專用引物進行檢測，具有特異、靈敏、快速等優(yōu)點，可以防患于未然，對人和動 物感染豬鏈球菌的防控具有重要意義。


圖1為SS2特異性引物對和SS7特異性引物對鑒定豬鏈球菌2型陽性樣本的結(jié)果； 1 =DNA Marker DL5000 ；2 :SS2特異性引物對；3 :SS7特異性引物對；4 陰性對照。圖2為SS2特異性引物對和SS7特異性引物對鑒定豬鏈球菌7型陽性樣本的結(jié)果； 1 =DNA Marker DL5000 ；2 :SS7特異性引物對；3 :SS2特異性引物對；4 陰性對照。圖3為為SS2特異性引物對和SS7特異性引物對鑒定雙陽性樣本的結(jié)果；1 DNAMarker DL5000 ；2 :SS2特異性引物對；3 :SS7特異性引物對；4 陰性對照。圖4為SS2特異性引物對敏感性試驗結(jié)果；1 =DNA Marker DL5000 ；2 豬鏈球菌 2型107CFU/mL ；3 豬鏈球菌2型106CFU/mL ；4 豬鏈球菌2型105CFU/mL ；5 豬鏈球菌2型 104CFU/mL ；6 豬鏈球菌 2 型 103CFU/mL ；7 豬鏈球菌 2 型 102CFU/mL。圖5為SS7特異性引物對敏感性試驗結(jié)果；1 =DNA Marker DL5000 ；2 豬鏈球菌 7型107CFU/mL ；3 豬鏈球菌7型106CFU/mL ；4 豬鏈球菌7型105CFU/mL ；5 豬鏈球菌7型 104CFU/mL ；6 豬鏈球菌 7 型 103CFU/mL ；7 豬鏈球菌 7 型 102CFU/mL。圖6為SS2特異性引物對和SS7特異性引物對特異性試驗結(jié)果；1、5 =DNA MarkerDL5000 ；2 豬鏈球菌2型；3 豬鏈球菌7型；4 大腸埃希氏菌；6 豬布氏桿菌；7 金 黃色葡萄球菌。
具體實施例方式以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為 自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。杜X大X長三元雜交豬(杜X大X長三元雜交豬 即杜洛克豬、大白豬和長白豬的三元雜交豬)購自北京大興種豬種禽廠。豬鏈球菌2型 (Streptococcus suis type 2，SS2 ；又稱豬鏈球菌血清2型或豬鏈球菌莢膜2型)購自中 國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，產(chǎn)品目錄號為CVCC1940。豬大腸埃希氏菌購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所， 產(chǎn)品目錄號為CVCC216。豬布氏桿菌購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，產(chǎn)品目錄號為CVCC1079。 金黃色葡萄球菌購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，產(chǎn)品目錄號為CVCC3052。以下實施例中的定 量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。
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豬鏈球菌7 型(Sti^ptococcus suis sequence type 7，SS7)公眾可以從中國科 學(xué)院微生物研究所獲得；參考文獻(xiàn):Ye C,Bai X,Zhang J，et al. Spread ofStreptococcus suis sequence type 7, China. Emerg Infect Dis. ,2008,14(5) :787_791。豬鏈球菌2型和豬鏈球菌7型的形態(tài)特征和生理特征如下在綿羊血瓊脂培養(yǎng)基 上培養(yǎng)豬鏈球菌2型和豬鏈球菌7型菌落均呈灰綠色，但豬鏈球菌7型溶血特性更易于觀 察到，豬鏈球菌2型顯示α溶血環(huán)，豬鏈球菌7型顯示β溶血環(huán)；在顯微鏡下觀察，二者豬 鏈球菌2型和豬鏈球菌7型均顯球形或卵圓形、多呈鏈狀，但豬鏈球菌2型菌體比豬鏈球菌 7型菌體略小。實施例1、豬鏈球菌的特異型引物的設(shè)計在菌屬保守序列、CPS2J基因引物序列區(qū)域設(shè)計SS2特異性引物對如下SS-CPS2J-F :5，-CGGTTACCAAATGGTGGTG-3，(序列表的序列 1)；SS-CPS2J-R :5，-ACTTTTGCAGCTCAGATTCTTG-3’ (序列表的序列 2)。目的擴增片段長度為211bp (靶序列見序列表的序列5)。在菌屬保守序列、CPS7H基因引物序列區(qū)域設(shè)計SS7特異性引物對如下SS-CPS7H-F :5，-GGCAGCTCTAACACGAAATAAG-3，(序列表的序列 3)；SS-CPS7H-R :5，-TCTTACACAATTGAAGTAATATCGC-3，(序列表的序列 4)。目的擴增片段長度為347bp (靶序列見序列表的序列6)。實施例2、樣本的制備一、雙陽性樣本的制備每只杜X大X長三元雜交豬口腔上顎扁桃體部位噴霧接種Iml濃度為IO4Cfu/ ml的豬鏈球菌2型菌液和Iml濃度為101(lCfU/ml的豬鏈球菌7型菌液。接種感染后第5天，采集扁桃體試紙，分離細(xì)菌進行形態(tài)特征和生理特征鑒定，可 以鑒定出豬鏈球菌2型和豬鏈球菌7型的豬為雙陽性樣本。二、豬鏈球菌2型陽性樣本的制備每只杜X大X長三元雜交豬口腔上顎扁桃體部位噴霧接種Iml濃度為IO4Cfu/ ml的豬鏈球菌2型菌液。接種感染后第5天，采集扁桃體試紙，分離細(xì)菌進行形態(tài)特征和生理特征鑒定，可 以鑒定出豬鏈球菌2型且沒有鑒定出豬鏈球菌7型的豬為豬鏈球菌2型陽性樣本。三、豬鏈球菌7型陽性樣本的制備每只杜X大X長三元雜交豬口腔上顎扁桃體部位噴霧接種Iml濃度為IOltlCfu/ ml的豬鏈球菌7型菌液。接種感染后第5天，采集扁桃體試紙，分離細(xì)菌進行形態(tài)特征和生理特征鑒定，可 以鑒定出豬鏈球菌7型且沒有鑒定出豬鏈球菌2型的豬為豬鏈球菌7型陽性樣本。實施例3、豬鏈球菌的特異型引物的應(yīng)用分別取實施例2制備的雙陽性樣本、豬鏈球菌2型陽性樣本和豬鏈球菌7型陽性 樣本的扁桃體試紙進行檢測。一、基因組DNA的提取(1)在血液中加入3倍體積的紅細(xì)胞裂解液，顛倒混勻，室溫放置5分鐘，期間再顛 倒混勻幾次，IOOOOrpm離心Imin (或5000rpm離心5min也可)，棄上清，用100 μ LTE緩沖液充分懸浮沉淀；(2)取IOOyL步驟(1)得到的溶液，加入50yL溶菌酶(100μ g/mL)，37°C處理 lh。(3)每管加入200 μ L裂解緩沖液，震蕩15s。(4)每管加入100 μ L 5mol/L NaCl水溶液，充分混勻后，12000rpm離心IOmin,除
去蛋白質(zhì)復(fù)合物及細(xì)胞壁等殘渣，取上清。(5)將上清轉(zhuǎn)移到新離心管中，加入等體積的Tris飽和酚，充分混勻后，12000rpm 離心3min，進一步沉淀蛋白質(zhì)。(6)吸取離心后水層，加等體積的氯仿，顛倒混勻，12000rpm離心3min，去除苯酚。(7)吸出上清，加入兩倍體積預(yù)冷的無水乙醇，15000rpm高速離心15min，棄上清
液，收集沉淀。(8)用900 μ L 70%酒精洗滌兩次。(9)真空干燥后，用10 μ L-30 μ L ΤΕ(用超純水也可)溶解DNA，進行檢測或_20°C 冰箱放置備用。二、豬鏈球菌的PCR的檢測以步驟一提取的基因組DNA為模板，分別用實施例1設(shè)計的SS2特異性引物對 (SS-CPS2J-F 和 SS-CPS2J-R)和 SS7 特異性引物對(SS-CPS7H-F 和 SS-CPS7H-R)進行 PCR 擴增，得到PCR擴增產(chǎn)物。PCR反應(yīng)體系甲見表1。滅菌雙蒸水作為陰性對照。表IPCR反應(yīng)體系甲
權(quán)利要求
1.輔助鑒定豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型的專用引物，由序列表的序列1所示 DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成。
2.權(quán)利要求1所述專用引物在制備輔助鑒定豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型的試劑 盒中的應(yīng)用。
3. 一種輔助鑒定豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型的試劑盒，包括權(quán)利要求1所述專 用引物。
4.權(quán)利要求1所述專用引物或權(quán)利要求3所述試劑盒在輔助鑒定豬鏈球菌2型和/或 豬鏈球菌7型中的應(yīng)用。
5.輔助鑒定豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型的方法，為方法I或方法II；所述方法I包括如下步驟(1)提取待測細(xì)菌的基因組DNA；(2)以步驟⑴提取的基因組DNA為模板，用專用引物進行PCR擴增；如果得到了211bp 的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為候選的豬鏈球菌2型；如果得到了 347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待 測細(xì)菌為候選的豬鏈球菌7型；如果沒有得到21 Ibp或347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為 候選的非豬鏈球菌2型且為候選的非豬鏈球菌7型；所述專用引物由序列表的序列1所示 DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成；所述方法II包括如下步驟(1)提取待測細(xì)菌的基因組DNA；(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，分別用引物對甲和引物對乙進行PCR擴增； 如果應(yīng)用所述引物對甲得到了 211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為候選的豬鏈球菌2型；如 果應(yīng)用所述引物對甲沒有得到211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為候選的非豬鏈球菌2型； 如果應(yīng)用所述引物對乙得到了 347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為候選的豬鏈球菌7型；如 果應(yīng)用所述引物對乙沒有得到347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為候選的非豬鏈球菌7型； 所述引物對甲是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成的引物對；所述 引物對乙是序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成的引物對。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述待測細(xì)菌為豬鏈球菌2型、豬鏈球菌7 型、豬大腸埃希氏菌、豬布氏桿菌或金黃色葡萄球菌。
7.鑒別豬鏈球菌2型和豬鏈球菌7型的方法，為方法III或方法IV；所述方法III包括如下步驟(1)提取待測細(xì)菌的基因組DNA；所述待測細(xì)菌為豬鏈球菌2型或豬鏈球菌7型；(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，用專用引物進行PCR擴增；如果得到了211bp 的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為豬鏈球菌2型；如果得到了 347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌 為豬鏈球菌7型；所述專用引物由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列 表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成；所述方法IV包括如下步驟(1)提取待測細(xì)菌的基因組DNA；所述待測細(xì)菌為豬鏈球菌2型或豬鏈球菌7型；(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，分別用引物對甲和引物對乙進行PCR擴增； 如果應(yīng)用所述引物對甲得到了 211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為豬鏈球菌2型；如果應(yīng)用 所述引物對乙得到了 347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測細(xì)菌為豬鏈球菌7型；所述引物對甲是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成的引物對；所述引物對乙是序列表 的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成的引物對。
8.—種檢測來自死亡動物的樣品中是否攜帶豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型的方 法，包括如下步驟(1)提取待測樣品的基因組DNA；(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，用專用引物進行PCR擴增；如果得到了211bp 的PCR擴增產(chǎn)物，待測樣品疑似含有豬鏈球菌2型；如果得到了 347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待 測樣本疑似含有豬鏈球菌7型；如果沒有得到21 Ibp或347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測樣本疑 似不含有豬鏈球菌2型和豬鏈球菌7型；所述專用引物由序列表的序列1所示DNA、序列表 的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成。
9.一種檢測來自死亡動物的樣品中是否攜帶豬鏈球菌2型和/或豬鏈球菌7型的方 法，包括如下步驟(1)提取待測樣品的基因組DNA；(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，分別用引物對甲和引物對乙進行PCR擴增； 如果應(yīng)用所述引物對甲得到了 211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測樣品疑似含有豬鏈球菌2型；如 果應(yīng)用所述引物對甲沒有得到211bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測樣本疑似不含有豬鏈球菌2型； 如果應(yīng)用所述引物對乙得到了 347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測樣本疑似含有豬鏈球菌7型；如 果應(yīng)用所述引物對乙沒有得到347bp的PCR擴增產(chǎn)物，待測待測樣本疑似不含有豬鏈球菌 7型；所述引物對甲是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成的引物對； 所述引物對乙是序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成的引物對。
10.如權(quán)利要求5至9中任一所述的方法，其特征在于所述PCR擴增的反應(yīng)條件為 940C 2min 預(yù)變性；94°C 10s，55°C 15s，72°C 15s，30 個循環(huán)；72°C延伸 lOmin。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種輔助鑒定豬鏈球菌2型與豬鏈球菌7型的專用引物及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的專用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成。本發(fā)明提供的專用引物可以輔助鑒定和鑒別豬鏈球菌2型和豬鏈球菌7型，應(yīng)用本發(fā)明提供的專用引物進行檢測，具有特異、靈敏、快速等優(yōu)點，可以防患于未然，對人和動物感染豬鏈球菌的防控具有重要意義。
文檔編號C12Q1/14GK102146468SQ201110041448
公開日2011年8月10日 申請日期2011年2月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月21日
發(fā)明者劉文軍, 李晶, 畢玉海 申請人:中國科學(xué)院微生物研究所