專利名稱：煙絲生產(chǎn)用復(fù)合酶菌制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種煙絲生產(chǎn)用復(fù)合酶菌制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前，在卷煙生產(chǎn)過程中會加入添加劑來掩蓋煙絲點燃時產(chǎn)生的青澀雜氣，以及改變點燃時產(chǎn)生的煙霧對吸食者所能產(chǎn)生的感覺。但是這些添加劑價格較高，且多數(shù)為化
學(xué)合成品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種在卷煙的煙絲生產(chǎn)過程中添加的生態(tài)、無毒、廉價的復(fù)合酶菌制劑，及其制備方法。本發(fā)明提供的煙絲生產(chǎn)用復(fù)合酶菌制劑，所述復(fù)合酶菌制劑含有液A與液B;所述液A為保藏于CGMCC(中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心) 登記入冊編號為CGMCC No. 4121的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液或保藏于CGMCC登記入冊編號為 CGMCC No. 4121的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液經(jīng)過預(yù)處理后的處理液，所述處理液含菌絲體；所述液B為保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4120的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液或為保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCCNo. 4120，分類命名枯草芽孢桿菌，分類命名拉丁文名稱=Bacillus subtilis的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液經(jīng)過預(yù)處理后的處理液，所述處理液含菌絲體。本發(fā)明的有益效果是，使用本發(fā)明的添加劑后，卷煙的色澤、香氣質(zhì)、香氣量、勁頭、 雜氣、刺激性、余味、燃燒性、灰色等指標顯著提高。其中，所述酶菌制劑中液A與液B的體積比為1 2。本發(fā)明還提供了一種所述的復(fù)合酶菌制劑的制備方法，所述制備方法包括以下步驟a.取保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4121的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液或保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4121的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液經(jīng)過預(yù)處理后的處理液制得液A ；取保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4120的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液或為保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4120的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液經(jīng)過預(yù)處理后的處理液制得液B ；b.將液A與液B混合或?qū)⒁篈與液B混合后加入可接受的輔助液。根據(jù)上述方法制備出的復(fù)合酶菌制劑能施用于煙葉加工，所加工的煙葉生產(chǎn)出的卷煙的色澤、香氣質(zhì)、香氣量、勁頭、雜氣、刺激性、余味、燃燒性、灰色等指標顯著提高。其中，所述保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4121的菌種與保藏于CGMCC 登記入冊編號為CGMCC No. 4120的菌種發(fā)酵過程具體如下a、菌種活化從斜面保藏管中取1環(huán)登記入冊編號為CGMCCNo. 4121的菌種的菌苔至30mL液體培養(yǎng)基中，在37°C下、200—250rpm搖床培養(yǎng)20—M小時，制得培養(yǎng)好的搖瓶 A；從斜面保藏管中取1環(huán)登記入冊編號為CGMCC No. 4120的菌種的菌苔至30mL液體培養(yǎng)基中，在37°C下、200—250rpm搖床培養(yǎng)20—M小時，制得培養(yǎng)好的搖瓶B ；b、發(fā)酵罐培養(yǎng)將培養(yǎng)好的搖瓶A接種到發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)，接種方式采用火焰接種，接種量為1%，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌轉(zhuǎn)速180—200rpm，通氣量1 1，罐壓0. 02MPa， 培養(yǎng)時間20-Mh，制得發(fā)酵液A將培養(yǎng)好的搖瓶B接種到發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)，接種方式采用火焰接種，接種量為 1%，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌轉(zhuǎn)速180—200rpm，通氣量1 1，罐壓0. 02MPa，培養(yǎng)時間 20-Mh，制得發(fā)酵液B;斜面的固體培養(yǎng)基制備方法如下15% (重量與去離子水的比例)的豆芽和3% (重量，與去離子水的比例)煙葉加去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補足體積，加5% (重量)葡萄糖、2% (重量)瓊脂粉溶解混勻，調(diào)整pH值至7.0，121°C滅菌30分鐘后制得固體
培養(yǎng)基，菌株搖瓶與發(fā)酵罐培養(yǎng)用培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，制備方法如下15% (重量)豆芽和3% (重量)煙葉加去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補足體積，加入5% (重量)葡萄糖溶解混勻，調(diào)整PH值至7. 0,121°C滅菌30分鐘后制得。 其中，所述液A的制備方法為，將發(fā)酵液A以4000--5000rpm離心5分鐘后取上層液，所述液B的制備方法為，將發(fā)酵液B以4000--5000rpm離心5分鐘后取上層液。
具體實施例方式為詳細說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、構(gòu)造特征、所實現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實施方式詳予說明。制備液A的方法將保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCCNo. 4121的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液固液分離制得液A，具體如下菌種活化從斜面保藏管中取1環(huán)保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4120 的菌種(以下簡稱菌種A)的菌苔至30mL液體培養(yǎng)基中，在37°C下、200-250rpm搖床培養(yǎng) M小時，制得培養(yǎng)好的搖瓶A ；發(fā)酵罐培養(yǎng)將培養(yǎng)好的搖瓶A接種到發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)，接種方式采用火焰接種， 接種量為1%，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌轉(zhuǎn)速180-200rpm，通氣量1 1，罐壓0. 02MPa，培養(yǎng)時間20-Mh，制得發(fā)酵液A;將發(fā)酵液A以4000-5000rpm離心5分鐘后取上層液，制得液A ；離心除去大部分菌絲體，但還有少部分菌體，并不是完全固液分離，菌體在改善煙絲品質(zhì)過程中起了不可或缺的作用。上述過程中所用培養(yǎng)基通過以下方法分別制備所述斜面的固體培養(yǎng)基制備方法如下15% (重量)(注本發(fā)明中，注明(重量) 的即為與去離子水重量的百分比)的豆芽和3% (重量)煙葉加去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補足體積，加5% (重量)葡萄糖、2% (重量)瓊脂粉溶解混勻，調(diào)整pH值至7.0， 121°C滅菌30分鐘后制得固體培養(yǎng)基，
所述菌株搖瓶與發(fā)酵罐培養(yǎng)用培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，制備方法如下15% (重量， 與去離子水的比例)豆芽和3% (重量，與去離子水的比例)煙葉加去離子水煮沸20分鐘， 過濾除渣，補足體積，加入5% (重量)葡萄糖溶解混勻，調(diào)整pH值至7.0，121°C滅菌30分鐘后制得。制備液B的方法將保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCCNo. 4120的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液固液分離制得液B，具體如下菌種活化從斜面保藏管中取1環(huán)保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4120 的菌種(以下簡稱菌種B)的菌苔至30mL液體培養(yǎng)基中，在37°C下、200-250rpm搖床培養(yǎng) 20-24小時，制得培養(yǎng)好的搖瓶B ；發(fā)酵罐培養(yǎng)將培養(yǎng)好的搖瓶B接種到發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)，接種方式采用火焰接種， 接種量為1%，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌轉(zhuǎn)速180-200rpm，通氣量1 1，罐壓0. 02MPa，培養(yǎng)時間20-Mh，制得發(fā)酵液B ；將發(fā)酵液B以4000_5000rpm離心5分鐘后取上層液，制得液B ；離心除去大部分菌絲體，但還有少部分菌體，并不是完全固液分離，菌體在改善煙絲品質(zhì)過程中起了不可或缺的作用。所述斜面的固體培養(yǎng)基制備方法如下15% (重量，與去離子水的比例)的豆芽和 3% (重量，與去離子水的比例)煙葉加去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補足體積，加5% (重量)葡萄糖、2% (重量)瓊脂粉溶解混勻，調(diào)整pH值至7.0，121°C滅菌30分鐘后制得固體培養(yǎng)基，所述菌株搖瓶與發(fā)酵罐培養(yǎng)用培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，制備方法如下15% (重量， 與去離子水的比例)豆芽和3% (重量，與去離子水的比例)煙葉加去離子水煮沸20分鐘， 過濾除渣，補足體積，加入5% (重量)葡萄糖溶解混勻，調(diào)整pH值至7.0，121°C滅菌30分鐘后制得。由上述描述可知液B制備過程中所用固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基可以采用液A制備過程中所用培養(yǎng)基。將制得的液A與液BWl 2的體積比混合，制得復(fù)合酶菌制劑，在卷煙制造工藝的加料潤葉時加入復(fù)合酶菌制劑，制劑中的酶和菌協(xié)調(diào)煙絲內(nèi)在化學(xué)成分，改善吃味(這是香煙品吸的一個專業(yè)名詞)，提高煙絲品質(zhì)，約90分鐘后進入煙絲干燥工藝，此時溫度達到200°C以上，酶和菌短時滅活，作用終止。本發(fā)明的菌種A及菌種B為鮮活煙葉表面分離篩選出的活菌，其中菌種A為煙葉增香菌，由其發(fā)酵制得的液A為增香菌培養(yǎng)液，菌種B為煙堿降解菌，由其發(fā)酵制得的液B 為煙堿降解菌培養(yǎng)液。以下是采用本發(fā)明的復(fù)合酶菌制劑與常規(guī)方式(添加化學(xué)添加劑)生產(chǎn)的煙絲以及清水對照組(不使用復(fù)合酶菌制劑及化學(xué)添加劑)的對比試驗
權(quán)利要求
1.一種煙絲生產(chǎn)用復(fù)合酶菌制劑，其特征在于，所述復(fù)合酶菌制劑含有液A與液B ；所述液A為保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4121的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液或保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4121的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液經(jīng)過預(yù)處理后的處理液，所述處理液含有菌絲體；所述液B為保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4120的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液或為保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCCNo. 4120的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液經(jīng)過預(yù)處理后的處理液，所述處理液含有菌絲體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合酶菌制劑，其特征在于，所述復(fù)合酶菌制劑中液A與液B 的體積比為1:2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合酶菌制劑的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟a.取保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCCNo. 4121的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液或保藏于 CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4121的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液經(jīng)過預(yù)處理后的處理液制得液A ；取保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4120的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液或為保藏于 CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4120的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液經(jīng)過預(yù)處理后的處理液制得液B ；b.將液A與液B混合或?qū)⒁篈與液B混合后加入可接受的輔助液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述保藏于CGMCC登記入冊編號為 CGMCC No. 4121的菌種與保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No. 4120的菌種發(fā)酵過程具體如下a、菌種活化從斜面保藏管中取1環(huán)登記入冊編號為CGMCCNo.4121的菌種的菌苔至 30mL液體培養(yǎng)基中，在37°C下、200—250rpm搖床培養(yǎng)20—M小時，制得培養(yǎng)好的搖瓶A ；從斜面保藏管中取1環(huán)登記入冊編號為CGMCC No. 4120的菌種的菌苔至30mL液體培養(yǎng)基中，在37°C下、200—250rpm搖床培養(yǎng)20—M小時，制得培養(yǎng)好的搖瓶B ；b、發(fā)酵罐培養(yǎng)將培養(yǎng)好的搖瓶A接種到發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)，接種方式采用火焰接種，接種量為1%，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌轉(zhuǎn)速180—200rpm，通氣量1 1，罐壓0. 02MPa，培養(yǎng)時間20-Mh，制得發(fā)酵液A將培養(yǎng)好的搖瓶B接種到發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)，接種方式采用火焰接種，接種量為1 %，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌轉(zhuǎn)速180—200rpm，通氣量1 1，罐壓0. 02MPa，培養(yǎng)時間20—24h, 制得發(fā)酵液B;斜面的固體培養(yǎng)基制備方法如下15% (重量，與去離子水的比例)的豆芽和3% (重量，與去離子水的比例)煙葉加去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補足體積，加5% (重量) 葡萄糖、2% (重量)瓊脂粉溶解混勻，調(diào)整pH值至7.0，121°C滅菌30分鐘后制得固體培養(yǎng)基，菌株搖瓶與發(fā)酵罐培養(yǎng)用培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，制備方法如下15% (重量)豆芽和 3% (重量)煙葉加去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補足體積，加入5% (重量)葡萄糖溶解混勻，調(diào)整PH值至7. 0,121°C滅菌30分鐘后制得。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述液A的制備方法為，將發(fā)酵液A以4000--5000rpm離心5分鐘后取上層液，所述液B的制備方法為，將發(fā)酵液B以 4000—5000rpm離心5分鐘后取上層液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種煙絲生產(chǎn)用復(fù)合酶菌制劑，所述復(fù)合酶菌制劑含有液A與液B，所述液A為保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No.4121的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液清液；所述液B為保藏于CGMCC登記入冊編號為CGMCC No.4120的菌種發(fā)酵后的發(fā)酵液清液。使用本發(fā)明的添加劑后，卷煙的色澤、香氣質(zhì)、香氣量、勁頭、雜氣、刺激性、余味、燃燒性、灰色等指標顯著提高。
文檔編號C12N1/00GK102258213SQ201110046320
公開日2011年11月30日 申請日期2011年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月25日
發(fā)明者丁延芹, 姚良同, 杜秉海, 林金新, 董少英 申請人:福州農(nóng)博士生物技術(shù)有限公司