專利名稱：蝴蝶蘭miR172編碼序列及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)、基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及蝴蝶蘭MTtVZ^及其應(yīng)用， 包含蝴蝶蘭MTfVD的蝴蝶蘭轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體，引物序列，轉(zhuǎn)基因純系植株，以及通過純系植株所驗(yàn)證的該基因的功能應(yīng)用。
背景技術(shù)：
蝴蝶蘭(/^^amoAsimffl^i/is)屬于被子單子葉植物蘭花綱蝴蝶蘭科，是一種氣生蘭花，有氣根，能吸收空氣中的養(yǎng)分而生存。多生長于亞洲熱帶潮濕地區(qū)，適應(yīng)高溫高濕通風(fēng)的環(huán)境。單莖短，葉片肉質(zhì)肥厚，花朵形似展翅的蝴蝶，顏色鮮艷多彩，是一種重要的經(jīng)濟(jì)花卉，近年來越來約受到消費(fèi)者的喜愛。具有很好的經(jīng)濟(jì)效益。但是蝴蝶蘭開花周期很長，一般2年以后才能開花。而且其成花要求的條件很嚴(yán)格，無法實(shí)現(xiàn)周年開花。目前主要催花的方法是通過春化作用，低溫誘導(dǎo)開花。但是低溫催花的耗電量大，增加了培養(yǎng)成本， 而且能源的過量消耗不符合可持續(xù)發(fā)展的戰(zhàn)略要求。同時，低溫催花需要很好的密閉環(huán)境， 容易滋生灰霉菌等真菌病害，降低了經(jīng)濟(jì)效益。由于MTtVD對開花具有促進(jìn)作用，一經(jīng)過量表達(dá)，即可顯著促進(jìn)植物開花。對蝴蝶蘭成花途徑相關(guān)皿TtVD的研究和進(jìn)一步應(yīng)用有助于低成本的實(shí)現(xiàn)蝴蝶蘭周年催花，具有很強(qiáng)的實(shí)踐意義。microRNA是一類參與動植物發(fā)育、細(xì)胞分裂分化時間調(diào)控的重要基因，位于非編碼區(qū)，表達(dá)時轉(zhuǎn)錄后經(jīng)過剪切加工形成長度在21nt左右的短核苷酸分子。MicroRNA基因不編碼蛋白質(zhì)，而是通過編碼形成小分子RNA引發(fā)靶基因mRNA的裂解或與之特異性結(jié)合從而抑制把基因的表達(dá)，這種調(diào)控機(jī)制依賴于microRNA基因編碼的microRNA序列與之所調(diào)控的目的基因序列所存在的不同程度的互補(bǔ)(David et al., 2004)。MicroRNA的研究最早開始于20世紀(jì)九十年代(Wightman et al.，1993)，但局限于動物microRNA。2003年Lee 等人發(fā)表了皿TtV72在植物開花過程中的功能研究，首次證明microRNA在植物發(fā)育過程中也同樣存在重要的作用，其中M7t77J 之后被證明是調(diào)控開花和發(fā)育的重要基因(Aukerman et al., 2003)，屬于AP2基因家族，并被定位在調(diào)控開花的光周期通路中(Schmid et al., 2003)。目前已克隆該基因的植物有擬南芥，玉米，蘋果等。JfoTtVZ^在不同物種中的作用也有細(xì)微的差別，例如在擬南芥中主要表現(xiàn)為促進(jìn)開花和引發(fā)干旱逃逸(Schmid et al., 2003)，在玉米中更多地參與花朵性別決定和細(xì)胞分裂的控制(Jae-Hoon Jung et al.，2007)。但在具有經(jīng)濟(jì)價值的高等觀賞植物中卻鮮有報道。本發(fā)明通過設(shè)計引物，首次從蝴蝶蘭全基因組中獲得蝴蝶蘭MTtVZ^基因；經(jīng)過 PCR擴(kuò)增后電泳分離純化獲得長度約250bp的片段；并且通過原位雜交、mRNA分離驗(yàn)證了該基因的表達(dá)；以農(nóng)桿菌質(zhì)粒為載體將皿TtVD轉(zhuǎn)基因到擬南芥中表達(dá)；通過育種篩選培養(yǎng)出具有明顯表型早花和頂端分生組織活躍的轉(zhuǎn)基因擬南芥，充分證明了蝴蝶蘭miRNA的功能。為組7 似77^ 在植物中功能的全面了解提供了可靠的理論基礎(chǔ)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于通過將單子葉植物蝴蝶蘭的MTtVZ^基因轉(zhuǎn)入雙子葉植物擬南芥中，獲得具有明顯表型的純系植株，并鑒定在轉(zhuǎn)基因植株中的表達(dá)，驗(yàn)證蝴 m^miRNA172 的功能。本發(fā)明提供首次克隆得到蝴蝶蘭組7 似77^ 基因序列，以及其編碼的組7 似77^ 的二級結(jié)構(gòu)。該基因序列如SEQ ID NO. 1所示。本發(fā)明還提供用于從蝴蝶蘭全基因組序列中，根據(jù)同源組7 似77^ 保守特異性區(qū)域兩端非保守區(qū)域設(shè)計的引物序列，該引物序列如SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 3所示。本發(fā)明還提供含有上述基因的用于轉(zhuǎn)基因的PHB植物表達(dá)載體。該載體含有如 SEQ ID NO. 1所示的目的基因序列和潮霉素抗性標(biāo)記基因，可轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌并侵染擬南芥，能穩(wěn)定遺傳。本發(fā)明所述載體在擬南芥開花和頂端分生組織調(diào)控中發(fā)生作用，具體轉(zhuǎn)基因操作步驟如下
(1)將編碼序列可操作的連接于植物表達(dá)載體，形成含有SEQ ID NO. 1序列的表達(dá)載
體；
(2 )將步驟(1)中的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化擬南芥；
(3)通過抗生素篩選，RT-PCR鑒定，獲得轉(zhuǎn)基因陽性單株，自交獲得轉(zhuǎn)基因純合體，該純合體開花提前，頂端分生組織活躍。本發(fā)明還提供一種用于檢測蝴蝶蘭花苞內(nèi)miR172表達(dá)量的方法，包括用SEQ ID NO. 1所示序列制備RNA探針與蝴蝶蘭花苞石蠟切片樣本雜交，檢測探針是否發(fā)生結(jié)合。本發(fā)明還提供一對用于擴(kuò)增PhmiR172在蝴蝶蘭中的靶基因TOEl的引物序列。該序列如
Ph-TOEl-F: AAGTTCACAGTATAGAGG (SEQ ID N0. 4) Ph-TOEl-R: GCATGCCTGCAGGTCGAC (SEQ ID NO. 5)
本發(fā)明還提供一種用于鑒定蝴蝶蘭中PhmiR172表達(dá)量的方法，包括用SEQ ID N0. 2和 SEQ ID N0. 3、SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 5所述引物分別對樣品進(jìn)行半定量PCR反應(yīng)，然后比較蝴蝶蘭不同器官中miR172和TOEl表達(dá)情況。本發(fā)明還提供一種用于檢測轉(zhuǎn)基因擬南芥中是否存在PhmiR172的方法，包括用 PhmiR172的引物
PhmiRl72-F :5’ GCC MG CTT GTG TTT GCG GGC GTG GCA TCA TCA AGA TTC 3’ (SEQ ID N0. 2)
PhmiR172-R :5’GCG AGC TCT TGT CTG CGG ATG CAG CAT CAT CAA GAT 3’ (SEQ ID NO. 3)
對樣品進(jìn)行PCR反應(yīng)，然后檢測是否擴(kuò)增出目的片段，若有則該樣品來自轉(zhuǎn)基因擬南芥。本發(fā)明還包括具有以上兩種蝴蝶蘭組7 似77^ 基因的擬南芥純系植株，該轉(zhuǎn)基因植株具有明顯的表型主要為開花提前，以及頂端分生組織在營養(yǎng)生殖早期的活躍，表現(xiàn)為多個頂端同時存在。


圖 1 用軟件 ClustalX 對 J i7 Zfe, J tl 72b, A tl 72c, A tl 72e, Osl 72a, Osl 72b, Os 172c, 0sl72d以及新發(fā)現(xiàn)的PhmiR172序列進(jìn)行比對(B)，并構(gòu)建進(jìn)化樹(A)。在進(jìn)化樹中，PhmiR172與已知的擬南芥皿TtV7敘miR172d聚在一起，另外兩個平行分支分別為來自 7YMS]miR172 Ul、AtmiR172c \)XBiAtmiR172a 和力。發(fā)現(xiàn)新的序列含有上述已知同源基因的共同保守序列，如軟件截圖(B)中長度20bp左右，*號標(biāo)記位點(diǎn)所在區(qū)域。圖2軟件預(yù)測PhmiRl72成熟序列，具有典型的頸環(huán)結(jié)構(gòu)。圖3根據(jù)PhmiRl72的同源靶基因PhTOEl設(shè)計引物，對PhmiRl72和靶基因 PhTOEl-LIKE的mRNA水平進(jìn)行半定量PCR。在部分組織中，的表達(dá)與靶基因的表達(dá)有互補(bǔ)效應(yīng)。如在根、莖中有/^uTtVD的轉(zhuǎn)錄本，則沒有-Z/股的表達(dá)。在葉、萼片中沒有檢測到/ 皿TfVD，則檢測到了靶基因的表達(dá)。此外/ 皿TtV72在花梗和花苞表達(dá)較高，說明其可能參與了開花調(diào)控。圖4將蝴蝶蘭和靶基因構(gòu)建在pSPT19載體，進(jìn)行原位雜交。如圖所示信號在外側(cè)苞片等早期花器官中十分明顯(A、B、C、D)。TOEl則在花粉粒中有高表達(dá)，外輪器官中也有表達(dá)(E、F、G、H)。圖中po表示花粉粒(pollen) ；b為苞片 (bracteole) ； c是合蕊柱(column) ；s代表萼片(s印al) ； ρ為花瓣(petal) ；1代表唇瓣 (Iip) ；st 柱頭(stigma) ；Ipj 為唇瓣突出處(lip pre)。圖5檢測T2代轉(zhuǎn)基因植物中潮霉素抗性基因(如 )，選取陽性株系(A)種子種下， 獲得純合體Τ3代。抽提/%^7 似772轉(zhuǎn)基因Τ3代植株RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA以引物SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 3進(jìn)行PCR特異擴(kuò)增檢測其轉(zhuǎn)錄本(B)，以2株野生型植物為對照，圖中 4個轉(zhuǎn)基因株系檢測均呈陽性，并且具有兩個不同大小的轉(zhuǎn)錄本。圖6以蝴蝶蘭皿7 似772的轉(zhuǎn)基因擬南芥為實(shí)驗(yàn)組，不含該基因的空表達(dá)載體和野生型為對照組，比較轉(zhuǎn)基因T3代在生長發(fā)育同一時期頂端分生組織的生長情況。發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株提前開花，并且頂端分生組織活躍，較早出現(xiàn)多個頂端。圖中A野生型植株第23d 未有開花跡象；B轉(zhuǎn)基因植株23d開花；C轉(zhuǎn)基因植株第23d出現(xiàn)花芽的放大圖；D轉(zhuǎn)基因植株第26d花芽的放大圖；E轉(zhuǎn)基因植株第已經(jīng)抽苔；F轉(zhuǎn)基因植株四山抽苔開花更加旺盛；G野生型第沈山剛剛出現(xiàn)開花現(xiàn)象。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如 Sambrook 等分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(New York Co Id Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所敘述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例1 蝴蝶蘭組7 似772的克隆
1、根據(jù)已知組7 似772基因序列的保守區(qū)域，設(shè)計蝴蝶蘭引物如SEQID N0. 2和SEQ ID N0. 3。對由組織抽提的蝴蝶蘭全基因組進(jìn)行特異性PCR擴(kuò)增；
2、常溫13V凝膠電泳分離產(chǎn)物，檢測到大小約250bp的條帶；
3、回收條帶純化，再次用同一引物擴(kuò)增后測序，結(jié)果如SEQID N0. 1。實(shí)施例2 蝴蝶蘭皿7 似77J 的基因序列信息與同源性分析1、將實(shí)施例1中所得序列與擬南芥、水稻已知皿TfVD基因進(jìn)行了同源性分析和保守區(qū)域比對，發(fā)現(xiàn)其與兩個來自擬南芥的MTtVZ^家族序列聚在一起(圖1 A)，并且具有上述皿TtV7J 共有的長度約20bp的同源保守區(qū)域序列(圖1 B)，初步確定為皿7 似772基因；
2、利用獲得的序列以RNA-fold軟件進(jìn)行miRNA二級結(jié)構(gòu)預(yù)測，結(jié)果如圖2，該RNA能形成有典型的頸環(huán)結(jié)構(gòu)。實(shí)施例3 蝴蝶蘭不同組織中和靶基因7 57的表達(dá)情況(mRNA半定量 PCR)
1、根據(jù)組VtVD的同源靶基因TOEl(序列如SEQ ID NO. 6)設(shè)計引物(SEQ ID NO. 4和 SEQ ID NO. 5)；
2、用上述引物，以及72引物SEQID NO. 2和SEQ ID NO. 3分別在蝴蝶蘭各組織cDNA中擴(kuò)增PhmiR172和靶基因PhTOEl-LIKE ；
結(jié)果如圖3所示。部分組織中，/^wTtV72的表達(dá)與靶基因的表達(dá)有互補(bǔ)效應(yīng)。如在根、 執(zhí)有PhmiR172的轉(zhuǎn)錄本，則沒有TOEl的表達(dá)。在葉、萼片中沒有檢測到/^wTtV7么則檢測到了靶基因的表達(dá)。此外/ 皿TtVD在花梗和花苞表達(dá)較高，說明其可能參與了開花調(diào)控。實(shí)施例4 蝴蝶蘭花器官中/^wTtV7J 基因和靶基因的表達(dá)模式分析和比較(原位雜交)
1、將Z^wTtVZ^基因和靶基因分別構(gòu)建在pSPT19載體，制備原位雜交探針；
2、將蝴蝶蘭花苞進(jìn)行脫水包埋取樣和石蠟切片脫水與包埋，以4%PFA固定15min(預(yù)先4 °C保溫)，洗去殘留石蠟，50 °C預(yù)雜交池(圈阻液中加魚精雜交液)；
3、將制備好的探針對目的基因進(jìn)行雜交。山羊血清封閉后加抗體，抗體37°C處理 2h，避光顯色NBT/BCIP+左旋咪唑* L/mL) 1常溫l_4h，消除內(nèi)源性堿性磷酸酶；
4、TSM35min'2 (IMTris ρΗ8· 0 10mL+0. 5M EDTA 2mL+ddH20 88mL)終止反應(yīng)；
5、封片后用藍(lán)色濾光鏡進(jìn)行顯微觀察，結(jié)果如圖4所示。實(shí)施例5 蝴蝶蘭組7 似77^ 轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行驗(yàn)證功能 1、含目的基因PhmiR172表達(dá)載體的構(gòu)建
Y、烙PhmiRNA172序列的5’端和3’端分別加上歷id III限制酶切位點(diǎn)和Sac I酶切位點(diǎn)。然后以正義連入植物表達(dá)載體PHB ；
2)、將重組載體以凍融法轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EH105，于利福平G0mg/L)+鏈霉素(50mg/L) + 卡那霉素(50mg/L)平板上篩選陽性菌落，擴(kuò)大培養(yǎng)；
3)、挑取陽性單菌落擴(kuò)大，煮菌后取裂解液以目的基因引物(序列如SEQID N0.2和SEQ ID NO. 3) PCR，含有200bp左右一直的條帶則為轉(zhuǎn)基因克隆。、花序浸染法轉(zhuǎn)化擬南芥
1)挑取農(nóng)桿菌陽性單菌落在:3mlLB+利福平G0mg/L) +鏈霉素(50mg/L) +卡那霉素 (50mg/L)培養(yǎng)基中，28°C、250rpm搖菌培養(yǎng)過夜；
2)取50μ 1菌液接種到50ml同樣抗性的LB培養(yǎng)基中，相同條件下擴(kuò)大培養(yǎng)過夜，至 0D600 為 1. 2 ；
3)室溫下4500rmp離心5min，去上清，轉(zhuǎn)化緩沖液重懸菌體至0D600在0.8之間； 擬南芥轉(zhuǎn)化緩沖液配制1/2MS+6-BA(0. 01mg/L) +5% 蔗糖 +0. 03% silwet ；
4)農(nóng)桿菌噴霧法轉(zhuǎn)化擬南芥侵染前過夜保濕培養(yǎng)野生型擬南芥材料，并將已開放的花和果莢剪去。將用轉(zhuǎn)化緩沖液重懸的菌液倒入50ml的小噴壺中，對野生型擬南芥(Col.) 尚未開放的花蕾進(jìn)行充分霧噴，保濕暗培養(yǎng)過夜后轉(zhuǎn)為正常培養(yǎng)，5d后重復(fù)轉(zhuǎn)化1次。、對轉(zhuǎn)基因植株的篩選
1)分批采摘成熟果夾，50°C烘箱脫水干燥數(shù)天，取出種子，清理干凈后放回干燥器中室溫保存?zhèn)溆茫?br> 2)將轉(zhuǎn)基因種子消毒，在擬南芥篩選培養(yǎng)基上(MS+25mg/Lhyg)無菌培養(yǎng)，4°C暗培養(yǎng) 2d后轉(zhuǎn)至人工氣候室正常培養(yǎng)。IOd后將有4片真葉并生根的抗性小苗轉(zhuǎn)移到盆土，蓋上薄膜保濕，在溫室中培養(yǎng)，3d取下薄膜轉(zhuǎn)為正常培養(yǎng)，生長良好的植株即為轉(zhuǎn)基因株系。連續(xù)按上述步驟篩選出Tl代、T2代轉(zhuǎn)基因株系，驗(yàn)證T2代植株中潮霉素抗性基因(如 )，若為陽性則收其種子種植獲得T3代純合株系。、轉(zhuǎn)基因植株目的基因表達(dá)鑒定
1)以SDS法小量抽提Τ2擬南芥單株的的基因組DNA，以野生型擬南芥作空白對照，根據(jù)潮霉素抗性基因特異序列設(shè)計引物，進(jìn)行PCR檢測，結(jié)果見圖5Α ；
2)提取含有潮霉素抗性單株子代(Τ3代純合)的輪生葉RNA，RT-PCR得到cDNA樣本， 在cDNA樣本中檢測外源基因/ 組7P77J 的表達(dá)，結(jié)果如圖5B。三個轉(zhuǎn)基因株系的外源基因都較野生型擬南芥有明顯的表達(dá)。、轉(zhuǎn)基因株系表型鑒定
以轉(zhuǎn)空載體的野生型(3個重復(fù))作為對照，比較轉(zhuǎn)基因純合株系(3個重復(fù))和野生型的開花時間，輪生葉數(shù)目發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因/ 皿TtVD的擬南芥出現(xiàn)了提前開花的表型。輪生葉數(shù)目與野生型相差不大(圖6A，B)。同時，頂端分生組織十分活躍，較早就出現(xiàn)了多個頂端同時生長的情況(圖6 C，D，E)，并且在生長沈天時進(jìn)行抽薹(圖6 F)，而野生型此時才開始開花(圖6 G)。說明/ 皿TtV72在轉(zhuǎn)基因擬南芥中促進(jìn)提前開花，并促使頂端分生組織活躍。參考文獻(xiàn)David P. Bartel et al. , MicroRNAs Genomics, Review Biogenesis, Mechanism, and Function W]-Cell, 2004, 116: 281 - 297.Jae-Hoon Jung et al.，The GIGANTEA-Regu 1 ated MicroRNA 172 Mediates Photoperiodic Flowering Independent of CONSTANS in Arabidopsis [J]· The Plant Cell, 2007, 19: 2736 - 2748.Milo J. Aukerman et al. , Regulation of flowering time and floral organ identity by a microRNA and itsAPETALA2-Like target genes [J]. The Plant Cell, 2004，15: 2730 - 2741.Qian-Hao Zhu et al. , Over-expression of miRl72 causes loss of spikelet determinacy and floral organ abnormalities in rice {Oryza sativa) [J]. BMC Plant Biology, 2009， 9:149.Qian-Hao Zhu et al. , Regulation of flowering time and floral patterning by miR 172 [J]· Journal of Experimental Botany, 2011, 62 (2) :487-495.Xuemei Chen et al., Novel Genetic Mechanisms in Development 9,miR 172 modulates the output of the AGAMOUS/APETALA2 antagonistic pair in floral patterning [J]· Developmental Biology, 2006, 295: 324 - 326. Nick Lauter et al. , MicroRNA 172 down-regulates glossylS to promote vegetative phase change in maize W]·PNAS, 2005，102(26) : 9412—9417.
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權(quán)利要求
1.一種從蝴蝶蘭全基因組序列中克隆獲得的基因序列，其特征在于為蝴蝶蘭 miRNA172基因，其DNA序列如SEQ ID NO. 1所示，全長250bp，含有miRNA172保守區(qū)域。
2.一種用于獲取蝴蝶蘭miRNA172基因的引物序列，其特征在于根據(jù)權(quán)利要求1所述 miRNA172基因兩端非保守區(qū)域設(shè)計，序列如SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 3所示。
3.一種含如權(quán)利要求1所述基因的編碼序列的植物表達(dá)載體，含有如SEQ ID NO. 1所示的目的基因序列和潮霉素抗性標(biāo)記基因。
4.如權(quán)利要求3所述的載體在轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用，該載體所含如權(quán)利要求1所述基因在擬南芥開花和頂端分生組織調(diào)控中發(fā)生作用，具體轉(zhuǎn)基因操作步驟如下(1)將編碼序列可操作的連接于植物表達(dá)載體，形成含有SEQ ID NO. 1序列的表達(dá)載體；(2 )將步驟(1)中的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化擬南芥；(3)通過抗生素篩選，RT-PCR鑒定，獲得轉(zhuǎn)基因陽性單株，自交獲得轉(zhuǎn)基因純合體，該純合體開花提前，頂端分生組織活躍。
5.一種用于檢測蝴蝶蘭花苞內(nèi)miR172表達(dá)量的方法，其特征在于它包括用SEQ ID NO. 1所示序列制備RNA探針與蝴蝶蘭花苞石蠟切片樣本雜交，檢測探針是否發(fā)生結(jié)合。
6.一對用于擴(kuò)增PhmiR172在蝴蝶蘭中的靶基因TOEl的引物序列，其特征在于如SEQ ID NO. 4 和 SEQ ID NO. 5 所示。
7.一種用于鑒定蝴蝶蘭中PhmiR172表達(dá)量的方法，其特征在于，它包括用SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 3,SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 5所述引物分別對樣品進(jìn)行半定量PCR反應(yīng)，然后比較蝴蝶蘭不同器官中miR172和TOEl表達(dá)情況。
8.一種用于檢測轉(zhuǎn)基因擬南芥中是否存在PhmiR172的方法，其特征在于它包括用SEQ ID N0.2和SEQ ID NO. 3所述引物對樣品進(jìn)行PCR反應(yīng)，然后檢測是否擴(kuò)增出目的片段，若有則該樣品來自轉(zhuǎn)基因擬南芥。
全文摘要
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)、基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體為蝴蝶蘭miRNA172序列及其應(yīng)用。本發(fā)明包含蝴蝶蘭全基因組中克隆出的miR172基因的編碼序列，基因表達(dá)模式分析，在擬南芥中的轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體構(gòu)建，引物序列，轉(zhuǎn)基因純系植株，以及相應(yīng)表型。蝴蝶蘭miRNA172在擬南芥中表達(dá)，能促使頂端分生組織活躍，表現(xiàn)為提前開花。
文檔編號C12N15/11GK102168086SQ20111006005
公開日2011年8月31日 申請日期2011年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月14日
發(fā)明者嚴(yán)欽驊, 明鳳, 韓穎穎 申請人:復(fù)旦大學(xué)