專利名稱：微生物保藏方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物保藏方法。
背景技術(shù)：
微生物菌種是一種重要的生物資源，菌種保藏是重要的微生物基礎(chǔ)工作。菌種保藏就是利用一切條件使菌種不死、不衰、不變，以便于研究與應(yīng)用。菌種保藏的方法很多，原理卻大同小異，不外乎為優(yōu)良菌株創(chuàng)造一個適合長期休眠的環(huán)境，即干燥、低溫、缺乏氧氣和養(yǎng)料等。使微生物的代謝活動處于最低的狀態(tài)，但又不至于死亡，從而達到保藏的目的。 依據(jù)不同的菌種或不同的需求，應(yīng)該選用不同的保藏方法。一般情況下，冷凍保藏、斜面保藏、液體石蠟保藏較為常用。冷凍保藏是將微生物置于-20°C、-6(T-8(TC或液氮中冷凍， 變異頻率低，但設(shè)備投入高、運行成本高，比較適合專業(yè)保藏單位使用。斜面保藏通常是采用在帶棉塞的玻璃試管內(nèi)，用少于1/3管的無菌的固體培養(yǎng)基擺成斜面，中央劃線接種，在
培養(yǎng)2-3天后，置于冰箱內(nèi)4°C保藏，操作簡單，但斜面培養(yǎng)基與空氣接觸面大，脫水較快，一般在半年內(nèi)就會干縮；保藏溫度較高，菌種仍有一定的代謝活動，可進行繁殖，為了防止菌種死亡，通常3-4個月就應(yīng)該傳代轉(zhuǎn)管，加大了菌種保藏的工作量，且由于菌種傳代頻繁，菌種變異頻率較高。液體石蠟保藏法是把液體石蠟注入已長好菌的斜面上并高出斜面頂端1cm，使菌種與空氣隔絕。此法保藏時間長，一般2-10年，但菌種保藏時必須用試管架豎直擺放，占用空間大，且只適應(yīng)于對液體石蠟不敏感的微生物菌種的保藏。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于為克服上述保藏方法存在的缺陷，提供一種微生物保藏方法， 操作簡單、成本低、保藏時間長且菌種質(zhì)量穩(wěn)定。本發(fā)明的微生物保藏方法，包括
(a)、將纊12ml培養(yǎng)基裝入試管，經(jīng)滅菌后于無菌條件下接入0. Γθ. 2ml菌種，與培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 3天；
(b )、放置在40 45 °C無菌干燥箱內(nèi)，干燥2 3天； (c)、包裝置于4士 1°C或-20士3°C保藏；
其中，所述培養(yǎng)基含有馬鈴薯粉15(T250g/L，葡萄糖2(T30g/L，黃豆餅粉2(T25g/L，甘油12 18g/L，其余為水。根據(jù)本發(fā)明，所述菌種為酵母菌，培養(yǎng)溫度為26 30°C。根據(jù)本發(fā)明，所述酵母菌為釀酒酵母(feccfero^cM cerwisiae)、產(chǎn)朊假絲酵母(Candida "iihi)或異常漢遜氏酵母anomala)。本發(fā)明的微生物保藏方法，操作簡單、成本低、保藏期長。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例來進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明方法的范圍并不局限于下述的實例。實施例 1 釀酒酵母(feccAarofflj^es cererisiae)的保藏按以下配方配制培養(yǎng)基
馬鈴薯粉150g/L，葡萄糖20g/L，黃豆餅粉20g/L，甘油12g/L，其余為水。將IOml培養(yǎng)基裝入25ml試管，塞棉塞，經(jīng)滅菌后于無菌條件下接入0. Iml釀酒酵母菌種，與培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 3天，培養(yǎng)溫度為^T30°C ；放置在4(T45°C無菌干燥箱內(nèi)，干燥 2^3天后用牛皮紙包裝，置于4 士 1 °C保藏。保藏1年后，存活率為85%士 5%，2年后存活率為 78%士 3%，3年后存活率降至20%士 5%。置于-20 士 3°C保藏。保藏1年后，存活率為擬％士 3%，2年后存活率為85%士 5%，3 年后存活率為80%士6%，4年后存活率為60%士4%，5年后存活率降至25%士 5%。實施例2產(chǎn)朊假絲酵母(&/7必山UtiliS)的保藏按以下配方配制培養(yǎng)基
馬鈴薯粉250g/L，葡萄糖30g/L，黃豆餅粉25g/L，甘油18g/L，其余為水。將8ml培養(yǎng)基裝入25ml試管，塞棉塞，經(jīng)滅菌后于無菌條件下接入0. Iml產(chǎn)朊假絲酵母菌種，與培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 3天，培養(yǎng)溫度為^T30°C ；放置在4(T45°C無菌干燥箱內(nèi)， 干燥2 3天后用牛皮紙包裝，置于4 士 1°C保藏。保藏1年后，存活率為87%士 5%，2年后存活率為80%士洲，3年后存活率降至2 士4%。置于-20 士 3°C保藏。保藏1年后，存活率為93%士洲，2年后存活率為86%士洲，3 年后存活率為擬％士4%，4年后存活率為65%士4%，5年后存活率降至27%士 5%。實施例3異常漢遜氏酵母Qbndenula anomala )的保藏按以下配方配制培養(yǎng)基
馬鈴薯粉200g/L，葡萄糖25g/L，黃豆餅粉22g/L，甘油15g/L，其余為水。將12ml培養(yǎng)基裝入50ml試管，塞棉塞，經(jīng)滅菌后于無菌條件下接入0. 2ml異常漢遜氏酵母菌種，與培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 3天，培養(yǎng)溫度為^T30°C ；放置在4(T45°C無菌干燥箱內(nèi)，干燥2 3天后用牛皮紙包裝，置于4士 1°C保藏。保藏1年后，存活率為83%士5%，2年后存活率為75%士洲，3年后存活率降至18%士5%。置于-20 士 3 °C保藏。保藏1年后，存活率為90%士 3%，2年后存活率為擬％士 3%，3 年后存活率為77%士4%，4年后存活率為56%士4%，5年后存活率降至22%±5%。本發(fā)明的微生物保藏方法，操作簡單、成本低、保藏期長，尤其適用于酵母菌的保藏。
權(quán)利要求
1.一種微生物保藏方法，其特征在于，包括(a)、將纊12ml培養(yǎng)基裝入試管，經(jīng)滅菌后于無菌條件下接入0. Γθ. 2ml菌種，與培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 3天；(b )、放置在40 45 °C無菌干燥箱內(nèi)，干燥2 3天； (c)、包裝置于4士 1°C或-20士3°C保藏；其中，所述培養(yǎng)基含有馬鈴薯粉15(T250g/L，葡萄糖2(T30g/L，黃豆餅粉2(T25g/L，甘油12 18g/L，其余為水。
2.如權(quán)利要求1所述的微生物保藏方法，其特征在于，所述菌種為酵母菌，培養(yǎng)溫度為 26 30 "C。
3.如權(quán)利要求1所述的微生物保藏方法，其特征在于，所述酵母菌為釀酒酵母 (.Saccharomyces cerevisiae )、產(chǎn)朊假絲酵母UJandida u til is )或異常漢遜氏酵母 {Handenula anomala、。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種微生物保藏方法，于無菌條件下將菌種接入裝有無菌培養(yǎng)基的試管內(nèi)，與培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3天后放置在40~45℃無菌干燥箱內(nèi)，干燥2~3天，包裝置于4±1℃或-20±3℃保藏。所用的培養(yǎng)基含有馬鈴薯粉150~250g/L，葡萄糖20~30g/L，黃豆餅粉20~25g/L，甘油12~18g/L，其余為水。本發(fā)明的微生物保藏方法，操作簡單、成本低、保藏期長。
文檔編號C12N1/04GK102181365SQ20111006773
公開日2011年9月14日 申請日期2011年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月21日
發(fā)明者肖弘 申請人:肖弘