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一種乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法

文檔序號(hào):513721閱讀:2308來源:國知局
專利名稱:一種乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法,屬于微生物發(fā)酵工程領(lǐng)域。
背景技術(shù)
乳酸菌作為人和動(dòng)物的有益菌(或稱為益生菌)廣泛用于發(fā)酵乳制品(如益生菌酸奶、益生菌發(fā)酵乳飲料、益生菌奶酪)、發(fā)酵豆乳制品、功能性食品配料和食品添加劑(如在嬰兒配方乳粉、中老年乳粉、果蔬汁等中的添加等)、膳食補(bǔ)充劑(片劑、膠囊等)以及飼料微生態(tài)制劑中。發(fā)酵乳制品(主要是酸奶和發(fā)酵乳飲料)的產(chǎn)銷量增長速度很快,在今后相當(dāng)長的時(shí)間內(nèi)仍然會(huì)保持這一增長趨勢(shì),有一定生理功能的益生菌發(fā)酵乳制品將是發(fā)酵乳制品一個(gè)非常重要的發(fā)展方向。益生菌發(fā)酵乳和發(fā)酵乳飲料不僅成為推動(dòng)我國乳酸菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主導(dǎo)產(chǎn)品,而且已成為我國行業(yè)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)調(diào)整的重要方向和今后的重要發(fā)展趨勢(shì)。消費(fèi)者對(duì)益生菌概念的加強(qiáng),乳酸菌制品的市場(chǎng)日漸擴(kuò)大,產(chǎn)品中乳酸菌的活菌數(shù)日益成為焦點(diǎn),2003年歐洲食品與飼料菌種協(xié)會(huì)(EFFCA)對(duì)益生菌進(jìn)行了如下定義指當(dāng)攝入充足的數(shù)量后,能對(duì)宿主產(chǎn)生一種或多種有功能性健康益處的微生物,實(shí)驗(yàn)表明,益生菌攝入量達(dá)IO9IO11Cfu/天的水平,可起到降低某些腸道疾病的發(fā)病率、持續(xù)時(shí)間和病情嚴(yán)重性的效果。所以,無論是乳酸菌飲料,益生菌酸奶等發(fā)酵食品,還是微生態(tài)制劑,實(shí)現(xiàn)益生菌體的高密度是首要條件。目前國內(nèi)外乳酸菌的培養(yǎng)方法主要有培養(yǎng)基緩沖鹽法、中和劑法、補(bǔ)料分批培養(yǎng)法、萃取發(fā)酵法、透析培養(yǎng)法、細(xì)胞循環(huán)連續(xù)培養(yǎng)技術(shù)和固定化法。但這些方法通常主要是針對(duì)乳酸菌菌粉的生產(chǎn),所采用的設(shè)備儀器復(fù)雜繁瑣,具有一定的局限性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種簡單易行、適于應(yīng)用在食品中且能獲得高密度乳酸菌的乳酸菌高密度培養(yǎng)方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題提出的技術(shù)方案為
一種乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法,其特征在于所述方法包括如下步驟 將乳酸菌在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中活化兩代,然后以1%的接種量接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中,在 35^38 °C下發(fā)酵2(T24 h,得到高密度的乳酸菌發(fā)酵液;所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為大豆肽 0. 59Γ1. 5%,復(fù)合果蔬汁39Γ5%,余量為原料乳。所述乳酸菌為植物乳桿菌或干酪乳桿菌。所述大豆肽分子量為180 Da^SOO Da,含有氨基酸的個(gè)數(shù)為2 6個(gè)。所述復(fù)合果蔬汁的組成為桂圓汁10 9Γ60 %,芒果汁10 °Γ60 %,蘋果汁5 % 30 %,菠蘿汁5 % 30 %,香蕉汁5 % 35 %,牛蒡汁5% 35%,胡蘿卜汁5% 30%。所述原料乳包括以下形式
(1)按照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB19301-2010《生乳》檢驗(yàn)合格的原料牛奶;
(2)采用全脂奶粉與水1:10的比例還原制備的復(fù)原乳;(3)采用脫脂奶粉與水1:10的比例還原制備的復(fù)原脫脂乳。所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各組分及其重量份數(shù)為牛肉膏5份,酵母粉4份,蛋白胨10 份,葡萄糖20份,磷酸氫二鉀2份,乙酸鈉5份,檸檬酸三銨2份,硫酸鎂0. 2份,硫酸錳0. 05 份,水1000份。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明培養(yǎng)方法中發(fā)酵培養(yǎng)基的原料易得,培養(yǎng)過程中不用再添加其他物質(zhì),簡單易行,得到的發(fā)酵液中乳酸菌活菌數(shù)可達(dá)到8. 9X 10’2. 7X IO11 cfu/mL,可以作為益生菌發(fā)酵乳和發(fā)酵乳飲料的底料,也可直接用于其它發(fā)酵乳制品的生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明中對(duì)培養(yǎng)基的要求及說明
1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基即MRS培養(yǎng)基,其所含試劑為生化試劑,分析純。2、本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法如下
(1)原料乳在115°C下高壓滅菌15min ;
(2)大豆肽和復(fù)合果蔬汁混合后在121°C下高壓滅菌15min ;各種果蔬汁均為市售。 (果汁和胡蘿卜汁為格瑞果汁工業(yè)(天津)有限公司生產(chǎn),牛蒡汁為徐州天利工貿(mào)有限公司生產(chǎn))
(3)降溫后,將滅菌后的原料乳、大豆肽和復(fù)合果蔬汁按比例混合即制成發(fā)酵培養(yǎng)基。以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明方法的進(jìn)一步說明,而不是限定其范圍。實(shí)施例1
挑取植物乳桿菌(CICC23506)在MRS培養(yǎng)基中活化兩代后,劃線于MRSA培養(yǎng)基(即固體MRS培養(yǎng)基)平板上,37°C培養(yǎng)M h,再在MRS培養(yǎng)基中37°C培養(yǎng)M h,得到濃度為IO6 cfu/mL的菌懸液。用移液槍吸取上述菌懸液1 mL,即以1%的接種量分別接種到100 mL發(fā)酵培養(yǎng)基和100 mL MRS培養(yǎng)基中,37 °C培養(yǎng)M h。上述活化兩代的過程為挑取植物乳桿菌(JMCC0002)在MRS培養(yǎng)基中37°C下培養(yǎng) 24 h,再將菌懸液以1%的接種量接種到MRS培養(yǎng)基中,37°C下培養(yǎng)M h。上述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方如下大豆肽0.5 %,復(fù)合果蔬汁4%,余量為脫脂奶粉與水 1:10的比例還原的復(fù)原脫脂乳,PH 6.8。其中大豆肽分子量為180 Da^SOO Da,含有氨基酸的個(gè)數(shù)為2飛個(gè)。復(fù)合果蔬汁的組成為桂圓汁10 %,芒果汁55 %,蘋果汁5 %,菠蘿汁 10 %,香蕉汁10 %,牛蒡汁5%,胡蘿卜汁5%。上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方如下牛肉膏5份,酵母粉4份,蛋白胨10份,葡萄糖20份, 磷酸氫二鉀2份,乙酸鈉5份,檸檬酸三銨2份,硫酸鎂0. 2份,硫酸錳0. 05份,水1000份。用基礎(chǔ)培養(yǎng)基即MRS培養(yǎng)基獲得的發(fā)酵液中活菌數(shù)目為4. 5 X IO8 cfu/mL,而通過本發(fā)明的培養(yǎng)方法獲得的發(fā)酵液中的活菌數(shù)目為9. 6X 101° cfu/mL,比基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)結(jié)果高兩個(gè)數(shù)量級(jí)。實(shí)施例2:
挑取植物乳桿菌(CICC2^56)在MRS培養(yǎng)基中活化兩代后,用移液槍吸取菌懸液1 mL, 即以1%的接種量分別接種到100 mL發(fā)酵培養(yǎng)基和100 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基即MRS培養(yǎng)基中,35 °C培養(yǎng)24 h。
上述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方如下大豆肽1 %,復(fù)合果蔬汁3 %,余量為原料牛奶,pH 6.8。其中大豆肽分子量為180 DiTSOO Da,含有氨基酸的個(gè)數(shù)為2飛個(gè)。復(fù)合果蔬汁的組成為桂圓汁55 %,芒果汁10 %,蘋果汁5 %,菠蘿汁5 %,香蕉汁5 %,牛蒡汁10%,胡蘿
卜汁10%。基礎(chǔ)培養(yǎng)基同實(shí)施例1。用本發(fā)明的培養(yǎng)方法和用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得的發(fā)酵液中的活菌數(shù)目分別為
1.3 X IO11 cfu/mL 和 4. 0 X IO8 cfu/mL。實(shí)施例3
挑取干酪乳桿菌(CICC2^52)在MRS培養(yǎng)基中活化兩代后,用移液槍吸取菌懸液1 mL, 即以1%的接種量分別接種到100 mL發(fā)酵培養(yǎng)基和100 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基即MRS培養(yǎng)基中,38 °C培養(yǎng)2 ι。上述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方如下大豆肽1 %,復(fù)合果蔬汁3 %,余量為原料牛奶,pH 6.8。其中大豆肽分子量為180 Da^SOO Da,含有氨基酸的個(gè)數(shù)為2飛個(gè)。復(fù)合果蔬汁的組成為桂圓汁10 %,芒果汁15 %,蘋果汁30%,菠蘿汁30%,香蕉汁5 %,牛蒡汁5%,胡蘿卜汁5%?;A(chǔ)培養(yǎng)基同實(shí)施例1。用本發(fā)明的培養(yǎng)方法和用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得的發(fā)酵液中的活菌數(shù)目分別為 8. 9 X IOici cfu/mL 和 4. 4 X IO8 cfu/mL。實(shí)施例4
挑取干酪乳桿菌(CGMCC4691)在MRS培養(yǎng)基中活化兩代后,用移液槍吸取菌懸液1 mL, 即以1%的接種量分別接種到100 mL發(fā)酵培養(yǎng)基和100 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基即MRS培養(yǎng)基中,37
°C培養(yǎng)Mh。上述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方如下大豆肽1.5 %,復(fù)合果蔬汁5 %,余量為奶粉與水 1:10的比例還原的復(fù)原乳,pH 6.8。其中大豆肽分子量為180 Da^800 Da,含有氨基酸的個(gè)數(shù)為2飛個(gè)。復(fù)合果蔬汁的組成為桂圓汁15 %,芒果汁10 %,蘋果汁5 %,菠蘿汁5 %, 香蕉汁5 %,牛蒡汁30%,胡蘿卜汁30%?;A(chǔ)培養(yǎng)基同實(shí)施例1。用本發(fā)明的培養(yǎng)方法和用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得的發(fā)酵液中的活菌數(shù)目分別為
2.7 X IO11 cfu/mL 和 4. 8 X IO8 cfu/mL。實(shí)施例5
挑取干酪乳桿菌(CICC21010)在MRS培養(yǎng)基中活化兩代后,用移液槍吸取菌懸液1 mL, 即以1%的接種量分別接種到100 mL發(fā)酵培養(yǎng)基和100 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基即MRS培養(yǎng)基中,38 °C培養(yǎng)20h。上述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方如下大豆肽1.5 %,復(fù)合果蔬汁5 %,余量為奶粉與水 1:10的比例還原的復(fù)原乳,pH 6.8。其中大豆肽分子量為180 Da^800 Da,含有氨基酸的個(gè)數(shù)為2飛個(gè)。復(fù)合果蔬汁的組成為桂圓汁10 %,芒果汁10 %,蘋果汁10 %,菠蘿汁15 %,香蕉汁30 %,牛蒡汁10%,胡蘿卜汁15%。基礎(chǔ)培養(yǎng)基同實(shí)施例1。用本發(fā)明的培養(yǎng)方法和用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得的發(fā)酵液中的活菌數(shù)目分別為
59. OX IOici cfu/mL 和 4. 5 X IO8 cfu/mL。
權(quán)利要求
1.一種乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法,其特征在于所述方法包括如下步驟將乳酸菌在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中活化兩代,活化后的菌懸液以1%的接種量接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中,在35 38 °C下發(fā)酵2(T24 h,得到高密度的乳酸菌發(fā)酵液;所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為大豆肽0. 59Γ1. 5%,復(fù)合果蔬汁39Γ5%,余量為原料乳。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法,其特征在于所述乳酸菌為植物乳桿菌或干酪乳桿菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法,其特征在于所述大豆肽分子量為180 Da^SOO Da,含有氨基酸的個(gè)數(shù)為2飛個(gè)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法,其特征在于所述復(fù)合果蔬汁的組成為桂圓汁10 % 60 %,芒果汁10 % 60 %,蘋果汁5 % 30 %,菠蘿汁5 % 30 %,香蕉汁5 % 35 %,牛蒡汁5% 35%,胡蘿卜汁5% 30%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法,其特征在于所述原料乳包括以下形式(1)按照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB19301-2010《生乳》檢驗(yàn)合格的原料牛奶;(2)采用全脂奶粉與水1:10的比例還原制備的復(fù)原乳;(3)采用脫脂奶粉與水1:10的比例還原制備的復(fù)原脫脂乳。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法,其特征在于所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各組分及其重量份數(shù)為牛肉膏5份,酵母粉4份,蛋白胨10份,葡萄糖20份,磷酸氫二鉀2份,乙酸鈉5份,檸檬酸三銨2份,硫酸鎂0. 2份,硫酸錳0. 05份,水1000份。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法,所述方法包括如下步驟將乳酸菌在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中活化兩代,然后以1%的接種量接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中,在35~38℃下發(fā)酵20~24h,得到高密度的乳酸菌發(fā)酵液;所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為大豆肽0.5%~1.5%,復(fù)合果蔬汁3%~5%,余量為原料乳。本發(fā)明培養(yǎng)方法中發(fā)酵培養(yǎng)基的原料易得,培養(yǎng)過程中不用再添加其他物質(zhì),簡單易行,得到的發(fā)酵液中乳酸菌活菌數(shù)可達(dá)到8.9×1010~2.7×1011cfu/mL,可以作為益生菌發(fā)酵乳和發(fā)酵乳飲料的底料,也可直接用于其它發(fā)酵乳制品的生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12R1/25GK102191202SQ20111008708
公開日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2011年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月8日
發(fā)明者馮麗莉, 盧曉莉, 崔樹勇, 康志遠(yuǎn), 朱宏, 李秋琴, 王世杰, 陸淳, 魏立華 申請(qǐng)人:石家莊君樂寶乳業(yè)有限公司
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