專利名稱：犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的三重pcr試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種能同時檢測水貂犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的三重PCR試劑盒，屬于水貂烈性病毒的檢測領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
犬瘟熱病(Canine distemper,⑶)是由副粘病毒科麻疹病毒屬禽犬瘟熱病毒 (CDV)引起的犬科、鼬科及部分浣熊科動物的一種高度接觸性、致死性傳染病(文獻1)。特征表現(xiàn)為病毒粒子有囊膜，直徑大小約為150 nm，包括一個線性、負義單鏈RNA基因組，大小約為15.0 kb，病毒只有一個血清型。該病的傳染性極強，死亡率可高達80%以上，病程早期雙相體溫?zé)嵝停?、鼻、消化道等粘膜炎癥，隨后以支氣管炎、卡他性肺炎、胃腸炎為特征。 病后期可見有神經(jīng)癥狀出現(xiàn)如痙攣、抽搐，部分病例可出現(xiàn)鼻部和角墊高度角化，并可繼發(fā)肺炎、腸炎等癥狀(文獻2)。傳染源主要是病犬、病獸和帶毒動物，其中患犬瘟熱的病犬是最危險的傳染源。主要是通過患病動物的眼、鼻分泌物、唾液、尿和糞便排出病毒(文獻3)。 快速診斷該病對控制犬瘟熱病的大規(guī)模流行有著積極的意義。水貂腸炎細小病毒病(Mink enteritis)是由細小病毒科細小病毒屬水貂腸炎細小病毒(MEV)引起的以劇烈腹瀉為主要臨床特癥的急性、烈性和高度接觸性傳染病(文獻 4)。病毒顆粒無囊膜，直徑約25 nm，整個病毒粒子呈20面體對稱，基因組為單分子線狀 DNA,大小約為5. 0 kb (文獻5)，病毒只有一個血清型。病毒大量的存在于病貂的肝臟、脾臟及腸道，并從糞便大量排出。病貂、帶毒貂是主要傳染源，病毒主要通過病貂的糞便、尿液和各種分泌物散播。本病主要發(fā)生在夏季，近年來有推延到秋季的趨勢。貂群一旦感染，如不采取措施，會引起地方性、周期性流行，通常會在翌年分窩前后的幼貂群中再次發(fā)生?？焖僭\斷該病可有效地控制水貂細小病毒性腸炎的流行。水貂阿留申病(Mink aleutian disease)是由水貂阿留申病毒(MADV)引起的水貂接觸性、慢性、進行性傳染病。主要侵害網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞系統(tǒng)。以漿細胞增多，血丙種球蛋白增高，持續(xù)性病毒血癥，免疫復(fù)合物造成的腎小球腎炎和肝炎，貧血及進行性衰竭為特征 (文獻6)。水貂的遺傳類型與本病的易感性有密切關(guān)系，藍寶石彩貂發(fā)病率較高。本病傳入貂群，開始多呈隱形流行，隨著時間的延長和病貂的積累，表現(xiàn)出地方性流行，造成嚴重損失(文獻7)。建立定期檢疫制度是凈化貂群、消滅阿留申病的最好途徑，陽性(感染)貂嚴格淘汰，如此檢測數(shù)年，可達到基本凈化的目的。近年來隨著毛皮動物(水貂等)養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，以具備相當(dāng)數(shù)量的產(chǎn)業(yè)化規(guī)模。同時作為水貂養(yǎng)殖業(yè)的3大疫病犬瘟熱病、腸炎細小病毒病、阿留申病已在主要養(yǎng)殖區(qū)域大規(guī)模流行與傳播，嚴重影響毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展，對農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展、社會穩(wěn)定和人類健康也帶來不良影響。這3種疫病的常規(guī)診斷方法是病毒分離鑒定、血凝實驗、瓊脂擴散試驗、對流免疫電泳和動物感染實驗等(文獻8-10)，這些方法都存在敏感性低，特異性不足， 操作費時費力等局限性。因此，建立一種快速、敏感、特異、簡便的同時檢測這3種病毒的分子生物學(xué)方法有著重要的意義，并對病毒的復(fù)合感染診斷有著積極的幫助。參考文獻
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是提供一種能同時檢測包括水貂犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的三重PCR試劑盒；本發(fā)明的另一目的是提供這種檢測試劑的制備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的檢測犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和水貂阿留申病毒的三重PCR試劑盒包括3對特異性引物，⑶V，MEV, ADV各自的擴增目標長度為33^p、 553bp和45 Ibp，引物序列為
CDV引物
CDV-Pl 5' -GATAAAGCATGTCATTATAGTCCTAA-3‘ CDV-P2 5， -CTTGAGCTTTCGACCTTC-3， MEV引物
MEV-Pl 5’ -AACTGGGCGGAGCCTAAA-3’ MEV-P2 5’ -CAGAGCGAAGATAAGCAG-3’ ADV 引物
ADV-Pl 5’ -GAAACCACGGTGGAGACA-3’ ADV-P2 5’ -AAGAGTTGACCTGGAGGG-3‘
為了達到更好的檢測效果，本發(fā)明試劑盒還帶有3個陽性對照質(zhì)粒，包括CDV陽性對照質(zhì)粒；MEV陽性對照質(zhì)粒和ADV陽性對照質(zhì)粒。并另外包含1個陰性對照。其中，所述的3個陽性對照質(zhì)粒的制作方法為(1)以犬瘟熱⑶V3株的cDNA為模板，以⑶V-Pl和⑶V-P2為引物進行PCR擴增，得到33^p的擴增產(chǎn)物，回收并純化后克隆至pMD18-T載體，得到⑶V陽性對照質(zhì)粒；(2)以水貂腸炎細小病毒MEVB株的DNA為模板，以MEV-Pl和MEV-P2為引物進行PCR擴增，得到55;3bp的擴增產(chǎn)物，回收并純化后克隆至pMD18-T載體，得到MEV陽性對照質(zhì)粒；(3)以水貂阿留申病毒ADV-G株的DNA為模板， 以ADV-Pl和ADV-P2為引物進行PCR擴增，得到451bp的擴增產(chǎn)物，回收并純化后克隆至PMD18-T載體，得到ADV陽性對照質(zhì)粒。所述的陰性對照是蒸餾水。所述的DNA聚合酶為rTaq DNA聚合酶。本發(fā)明試劑盒在檢測犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒、水貂阿留申病毒中的應(yīng)用 25μ 反應(yīng)體系rTaq DNA 聚合酶 2. OU ；dNTPs (2. 5mmol/) 2. Ομ ；引物 CDV-Pl 以及
CDV-P2,MEV-Pl 以及 MEV-P2，ADV-P1 以及 ADV-P2 各 IOpmol ；10 倍 PCR Buffer2. 5μ ；待測模板2. Ομ ，其余的由蒸餾水補充至25PL。PCR 反應(yīng)程序為95°C 5min ；94°C 45s，55°C 30s, 72°C 30s，30 個循環(huán)；72°C IOmin0判定結(jié)果如果從待檢測的樣品中擴增到了 335bp片段，則該檢測樣品含有犬瘟熱病毒；如果從待檢測的樣品中擴增到了 553bp片段，則該檢測樣品含有腸炎細小病毒；從待檢測的樣品中擴增到了 451bp片段，則該檢測樣品含有水貂阿留申病毒。如果同時檢測到2個或者3個目標大小條帶，則該檢測樣品同時含有該目標代表的病毒。本發(fā)明的積極效果是
1根據(jù)病毒基因組的保守基因序列設(shè)計引物，得到了檢測包括犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和水貂阿留申病毒的三重PCR試劑盒。與常規(guī)的PCR方法相比采用本發(fā)明的試劑盒可以在同一反應(yīng)體系中檢測是否含有犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和水貂阿留申病毒核酸， 具有較高的特異性和敏感性，具有同時檢測和鑒別3種毛皮動物最常見的病毒性疾病等特點，可以對毛皮動物獸群中隱形感染或者持續(xù)帶毒宿主和發(fā)病動物進行準確檢測。2本項發(fā)明中的三重PCR試劑盒可對細胞培養(yǎng)物、組織、分泌液、血液等多種樣品的CDV、MEV和ADV進行快速檢測，樣品適用范圍廣，試劑盒提供的試劑中，無感染性、無生物安全隱患成分，使用安全性很高。3本項發(fā)明中的試劑所組成的試劑盒可在收到樣品6小時候進行定性診斷結(jié)果， 為診斷毛皮動物(水貂等)的犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和水貂阿留申病毒感染提供有效工具。


圖1本發(fā)明三重PCR試劑盒的特異性檢測；1-8 =ADV檢測結(jié)果；⑶V檢測結(jié)果；MEV 檢測結(jié)果；ADV與⑶V混合后的檢測結(jié)果；MEV和ADV混合后的檢測結(jié)果；MEV和⑶V混合后的檢測結(jié)果；MEV、ADV、CDV混合后的檢測結(jié)；陰性對照結(jié)果；M :DL2000 Marker
圖2本發(fā)明三重PCR試劑盒的敏感性檢測⑶V檢測濃度分別為lOng/μ廣1. OpgAi ； MEV 檢測濃度為 lOng/^L 100 pg/^L ;ADV 檢測濃度為 lOng/^L 10 pg/μ 。圖3本發(fā)明三重PCR試劑盒的病毒樣品檢測；1-3 :CDV病毒檢測結(jié)果；MEV病毒檢測結(jié)果；ADV病毒檢測結(jié)果；M :DL2000 Marker
圖4本發(fā)明三重PCR試劑盒的病毒樣品檢測；1 :CDV病毒檢測陽性結(jié)果；2 病毒臨床檢測CDV強陽性結(jié)果；3 病毒臨床檢測CDV弱陽性結(jié)果；4 病毒臨床檢測CDV陰性結(jié)果； M :DL2000 Marker
圖5本發(fā)明三重PCR試劑盒的病毒樣品檢測；1 :ADV病毒檢測陽性結(jié)果；2 :CDV病毒檢測陽性結(jié)果；3 ⑶V和ADV病毒混合的陽性結(jié)果；4，7 臨床樣品中⑶V和ADV混合感染的陽性結(jié)果；5，6 臨床樣品中的陰性結(jié)果；M :DL2000 Marker
具體實施例方式
下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。實施例1 1材料與方法
1.1病毒株⑶V3、MEVB和ADV-G均由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所提供；M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶、r^Taq DNA聚合酶、dNTPS、DNA Marker DL2000、pMD18_T載體等均購自寶生物工程(大連)有限公司，膠回收試劑盒均購自上海華舜生物技術(shù)有限公司，病毒RNA提取試劑購置 Invitrogen 公司。1.2陽性對照重組質(zhì)粒的構(gòu)建
根據(jù)CDV3病毒株N基因設(shè)計檢測CDV病毒特異性引物CDV-Pl 5，-GATAAAGCATGTCAT TATAGTCCTAA-3，；CDV-P2 5，-CTTGAGCTTTCGACCTTC-3，，擴增片段長度為 3!35bp。利用 Vero 細胞增殖⑶V3種毒，培養(yǎng)3天后參照病毒RNA提取試劑(Invitrogen公司)提取總RNA，以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板擴增CDV 335片段。PCR反應(yīng)條件為95°C 5min ；94°C 45s, 55°C 30s, 72°C 308，30個循環(huán)；721 IOmin0將目的片段回收純化后，利用pMD18_T載體構(gòu)建重組質(zhì)粒，命名為⑶V陽性對照質(zhì)粒。送hvitrogen公司進行測序。 MEV和ADV經(jīng)處理提取病毒DNA后，其陽性對照質(zhì)粒構(gòu)建方法同⑶V陽性對照質(zhì)粒。1. 3三重PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
25pL反應(yīng)體系中，以CDV、MEV和ADV陽性對照質(zhì)粒(濃度均為100ng/>L)混合物為模板，采用先固定引物對CDV-P1/CDV-P2的濃度，在lpmol/^L-lOpmol/^L之間調(diào)整引物對MEV-P1/MEV-P2的摩爾量，同時將退火溫度在48_62°C進行優(yōu)化，每2°C遞增。在此基礎(chǔ)上進一步優(yōu)化引物對ADV-P1/ADV-P2的摩爾量及退火溫度，最終確定三重PCR的最佳引物濃度比和退火溫度。1. 4三重PCR的特異性實驗
分別以CDV、MEV和ADV陽性對照質(zhì)粒以及陰性對照水為模板，進行三重PCR的特異性實驗；另外以CDV和MEV的陽性對照質(zhì)?；旌衔铩DV和ADV的陽性對照質(zhì)?；旌衔?、MEV和 ADV的陽性對照質(zhì)?；旌衔铮荲、MEV和ADV陽性對照質(zhì)?；旌衔餅槟０?，進行三重PCR的特異性實驗，對其混合模板進行三重PCR的特異性進行檢驗。1. 5三重PCR的敏感性實驗
以不同濃度的CDV、MEV和ADV陽性對照質(zhì)粒為模板(lOOng/^L-l. Opg/^L)，進行三重 PCR的敏感性實驗。2實驗結(jié)果
2.1重組質(zhì)粒的建立
⑶V、MEV和ADV重組質(zhì)粒經(jīng)過測序后，進行核酸比對發(fā)現(xiàn)，相關(guān)基因的核酸同源性達到 99%以上。表明所獲得的重組質(zhì)粒均為陽性質(zhì)粒。
2. 2三重PCR最佳反應(yīng)條件的確定
經(jīng)過對反應(yīng)濃度和退火溫度的條件的優(yōu)化，確定在25pL反應(yīng)體系中，rTaq DNA聚合酶 2. OU ；dNTPs (2. 5mmol/) 2. Ομ ；引物 CDV-P1 以及 CDV-P2，MEV-Pl 以及 MEV-P2，ADV-Pl 以及ADV-P2各IOpmol ；10倍PCR Buffer2. 5μ ；待測模板2. Ομ ,其余的由蒸餾水補充至 25PL。PCR 反應(yīng)程序為95°C 5min ；94°C 45s, 55°C 30s, 72°C 30s，30 個循環(huán)；72°C IOmin02. 3三重PCR特異性實驗
CDV、MEV和ADV陽性對照質(zhì)粒分別出現(xiàn)其對應(yīng)的335bp、553bp、451bp條帶，混合后的樣品也能出現(xiàn)相對應(yīng)的多個條帶，陰性對照蒸餾水未擴增出任何條帶。如圖1所示。2. 4三重PCR敏感性實驗
實驗結(jié)果如圖2所示，⑶V最低檢測濃度為1. OpgAi ;MEV最低檢測結(jié)果為100 pg/μ ； ADV檢測結(jié)果為10 pg/μ 。實施例2
利用犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和水貂阿留申病毒的三重PCR方法對病毒樣品檢測 1材料與方法
1. 1病毒株⑶V3、MEVB和ADV-G均由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所提供；M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶、rTaq DNA聚合酶、dNTPS、DNA Marker DL2000、等均購自寶生物工程(大連)有限公司，病毒RNA提取試劑購置Invitrogen公司。1. 2病毒核酸模板制備(RNA及DNA的提取)
參照病毒RNA提取試劑(Invitrogen公司)提取病毒株⑶V3的總RNA，并利用M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶進行反轉(zhuǎn)錄，提取其cDNA作為犬瘟熱病毒PCR模板使用。MEVB和ADV-G毒株的DNA 直接使用沸水裂解法，即將其放入水浴中5min，冷卻后可直接作為腸炎細小病毒和阿留申病毒模板。1.3三重PCR反應(yīng)
將⑶V、MEV和ADV病毒提取的核酸為模板，分別加入到包含混合引物的三重PCR體系中，使用三重PCR最佳反應(yīng)條件對病毒模板進行檢測。2試驗結(jié)果
2.1三重PCR對病毒模板的檢測結(jié)果
CDV、MEV和ADV病毒分別出現(xiàn)其對應(yīng)的335bp、553bp、451bp條帶，如圖3所示。實施例3
利用犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和水貂阿留申病毒的三重PCR方法對犬瘟熱病毒臨床樣品檢測
1材料與方法
1.1病毒株⑶V3由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所提供；M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶、rTaq DNA聚合酶、dNTPS、DNA Marker DL2000等購自寶生物工程(大連)有限公司，病毒RNA提取試劑購置Invitrogen公司。1. 2病毒核酸模板制備(RNA的提取)
參照病毒RNA提取試劑(Invitrogen公司)提取病毒株CDV3以及犬瘟熱臨床樣本的總 RNA,并利用M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶進行反轉(zhuǎn)錄，提取其cDNA作為犬瘟熱病毒PCR模板使用。
1.3三重PCR反應(yīng)
將病毒株CDV3和犬瘟熱臨床樣本提取的核酸為模板，分別加入到包含混合引物的三重PCR體系中，使用三重PCR最佳反應(yīng)條件對病毒模板進行檢測。2試驗結(jié)果
2.1三重PCR對病毒模板的檢測結(jié)果
病毒株CDV3和疑似犬瘟熱臨床樣本出現(xiàn)其對應(yīng)的335bp條帶，陰性則無任何條帶，。實施例4
利用犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和水貂阿留申病毒的三重PCR方法對包含犬瘟熱病毒和水貂阿留申病毒及其混合感染臨床樣本檢測 1材料與方法
1. 1病毒株MEVB和ADV-G均由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所提供；M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶、 rTaq DNA聚合酶、dNTPS、DNA Marker DL2000等均購自寶生物工程(大連)有限公司，病毒RNA提取試劑購置Invitrogen公司。1. 2病毒核酸模板制備(RNA或者DNA的提取)
參照病毒RNA提取試劑(Invitrogen公司)提取病毒株⑶V3的總RNA，并利用M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶進行反轉(zhuǎn)錄，提取其cDNA作為犬瘟熱病毒PCR模板使用。ADV-G毒株的DNA直接使用沸水裂解法，即將其放入水浴中5min，冷卻后可直接作為犬瘟熱病毒和水貂阿留申病毒模板。1.3三重PCR反應(yīng)
將⑶V和ADV病毒以及臨床樣本提取的核酸為模板，分別加入到包含混合引物的三重 PCR體系中，使用三重PCR最佳反應(yīng)條件對病毒模板進行檢測。2試驗結(jié)果
2.1三重PCR對病毒模板的檢測結(jié)果
MEV和ADV病毒分別出現(xiàn)其對應(yīng)的335bp、45 Ibp條帶，混和后的兩種病毒和混合感染的臨床樣本同時出現(xiàn)335bp和45Ibp兩條帶，陰性則無任何條帶，如圖5所示。
權(quán)利要求
1.檢測水貂犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的三重PCR試劑盒，由DNA聚合酶，dNTPs，引物，PCR緩沖液，雙蒸水組成；其特征在于由⑶V，MEV，ADV3對引物組成，引物序列為CDV引物CDV-Pl 5' -GATAAAGCATGTCATTATAGTCCTAA-3‘CDV-P2 5， -CTTGAGCTTTCGACCTTC-3，MEV引物MEV-Pl 5’ -AACTGGGCGGAGCCTAAA-3’MEV-P2 5’ -CAGAGCGAAGATAAGCAG-3’ADV 引物ADV-Pl 5’ -GAAACCACGGTGGAGACA-3’ADV-P2 5’ -AAGAGTTGACCTGGAGGG-3’，CDV，MEV, ADV各自的擴增目標長度為335bp、553bp和45Ibp。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測水貂犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的三重PCR 試劑盒，所述的引物CDV陽性對照質(zhì)粒、MEV陽性對照質(zhì)粒和ADV陽性對照質(zhì)粒，其特征在于還包括1個陰性對照。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述檢測水貂犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的三重 PCR試劑盒，其特征在于所述的CDV陽性對照質(zhì)粒的制備方法為(1) 以水貂犬瘟熱病毒的cDNA為模板，以5 ’ -GATAAAGCATGTCATTATAGTCCTAA-3，和 5’ -CTTGAGCTTTCGACCTTC-3’為引物進行PCR擴增，得到335bp的擴增產(chǎn)物，將擴增產(chǎn)物回收并純化后克隆至PMD18-T載體，得到⑶V陽性對照質(zhì)粒。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述檢測水貂犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的三重 PCR試劑盒，其特征在于所述的MEV陽性對照質(zhì)粒的制備方法為以水貂腸炎細小病毒的 DNA 為模板，以 5，-AACTGGGCGGAGCCTAAA-3，和 5，-CAGAGCGAAGATAAGCAG-3，為引物進行 PCR 擴增，得到555bp的擴增產(chǎn)物，將擴增產(chǎn)物回收并純化后克隆至PMD18-T載體，得到MEV陽性對照質(zhì)粒。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述檢測水貂犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的三重 PCR試劑盒，其特征在于所述的ADV陽性對照質(zhì)粒的制備方法為以水貂阿留申病毒DNA為模板，以 5，-GAAACCACGGTGGAGACA-3，和 5，-AAGAGTTGACCTGGAGGG-3，為引物進行 PCR 擴增， 得到451bp的擴增產(chǎn)物，將擴增產(chǎn)物回收并純化后克隆至pMDIS-T載體，得到ADV陽性對照質(zhì)粒。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測水貂犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的三重PCR 試劑盒，其特征在于所述的空白對照是蒸餾水。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測水貂犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的三重PCR 試劑盒，其特征在于所述的DNA聚合酶為rTaqDNA聚合酶。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種能同時檢測水貂犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的三重PCR試劑盒，其組成包括DNA聚合酶，dNTPs，引物，PCR緩沖液，雙蒸水；其特征在于所述的引物由3對引物組成，其中，第1對引物的序列為5′-GATAAAGCATGTCATTATAGTCCTAA-3′和5′-CTTGAGCTTTCGACCTTC-3′，第2對引物的序列為5′-AACTGGGCGGAGCCTAAA-3′和5′-CAGAGCGAAGATAAGCAG-3′，第3對引物的序列為 5′-GAAACCACGGTGGAGACA-3′和5′-AAGAGTTGACCTGGAGGG-3′。采用本發(fā)明多重PCR試劑盒可在同一反應(yīng)體系中同時檢測出是否有水貂犬瘟熱病毒、腸炎細小病毒和阿留申病毒的感染或多重感染，具有較高的特異性和敏感性，從而節(jié)省時間和試劑，可以為貂群的快速和早期診斷提供有效的工具。
文檔編號C12Q1/70GK102181581SQ201110100549
公開日2011年9月14日 申請日期2011年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月21日
發(fā)明者易立, 楊莘, 王建科, 程世鵬, 許紅麗 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所, 吉林特研生物技術(shù)有限責(zé)任公司