專利名稱：雙歧桿菌轉人內(nèi)皮抑素基因技術的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種雙歧桿菌轉人內(nèi)皮抑素基因技術。包括將人內(nèi)皮抑基因轉移到雙歧桿菌當中，構建具有抗腫瘤作用的工程菌株。屬于生物技術領域。
背景技術：
據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)報告，2010年，癌癥將超越心臟病成為全球頭號殺手。預計在全球范圍內(nèi)，新增癌癥病例和癌癥患者死亡率也將會以每年I %的速度遞增，而在中國、俄羅斯和印度這些國家增長速度會更快。隨著全球人口的不斷增長，罹患癌癥的人數(shù)將會更多。到2030年，全世界可能將有7500萬人遭受癌癥的折磨，這一數(shù)字對許多國家的健康護理體系來說是難以承受的。而我國每年因癌癥死亡的人數(shù)已達130萬人，并且癌癥患者每年以3%的速度遞增。中國正在步入老齡化社會，老年人口的驟增與中青年體質的下降都 昭示著營養(yǎng)保健與預防醫(yī)療市場的復興與發(fā)展，腫瘤治療藥物和預防保健產(chǎn)品的市場也日益巨大。經(jīng)過100多年的研究，科學家們發(fā)現(xiàn)，雙歧桿菌本身具有優(yōu)異的抗腫瘤功能。雙歧桿菌具有免疫激活作用，可增強巨噬細胞、淋巴細胞的吞噬活性，直接殺傷腫瘤細胞。雙歧桿菌及其表面分子活性結構WPG (完整肽聚糖)可直接或間接地清除致腫瘤物質，從而保護機體免受致腫瘤物質損害。人體內(nèi)的有害細菌會產(chǎn)生大量致腫瘤物質及可活化致腫瘤物質，而雙歧桿菌可抵抗這些有害菌的生長并將其排出體外，減少內(nèi)源性致腫瘤物質的產(chǎn)生。雙歧桿菌的WPG可通過調控腫瘤細胞凋亡相關基因的表達，誘導腫瘤細胞自然凋亡。雙歧桿菌可以酸化腸道環(huán)境，加速致腫瘤物質排泄，縮短致腫瘤物質與腸黏膜的接觸時間，以降低腫瘤的發(fā)生率。雙歧桿菌還能預防多種化學致癌劑誘發(fā)的結腸癌、乳腺癌及肝癌的發(fā)生與發(fā)展。另有分析提示，人大腸腺瘤與癌的發(fā)生與演進與腸中雙歧桿菌數(shù)量的減少具有一定的關聯(lián)，而陰道內(nèi)雙歧桿菌的正常數(shù)量對預防和治療宮頸癌具有重要意義?！叭梭w內(nèi)皮抑素基因”是一種具有控制腫瘤生長和使腫瘤細胞凋亡雙重作用的抗癌基因。該基因定位于腫瘤血管基底膜，能有效抑制腫瘤血管內(nèi)皮細胞的增殖生長，阻止腫瘤血管生成，切斷腫瘤的血液供應,使腫瘤細胞萎縮、退化,使瘤體停止生長,并逐步萎縮直至死亡，從而達到治療癌癥的目的。雙歧桿菌作為一種具有腫瘤定位特異性，并且對宿主無毒性的生理性細菌，為腫瘤的基因治療提供了一個十分理想的導向載體。理論上，凡對實體瘤有治療作用的基因，諸如血管生長抑制因子的基因、腫瘤自殺基因、校正和修復突變的癌基因的基因片段、具有殺傷腫瘤細胞的淋巴因子的編碼基因等，均可用雙歧桿菌作為導向載體。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了一種雙歧桿菌轉人內(nèi)皮抑素基因技術，具體內(nèi)容包括以下幾個方面
其一，利用大腸桿菌做載體，將人內(nèi)皮抑素基因導入質粒當中，構建融合人內(nèi)皮抑素基因質粒pBES ；
其二，采用電融合方法，在細菌菌落生長到D600nm值約為0. 5cm時制備感受態(tài)細胞，以電容25 u F、電阻150 Q -300 Q、電壓10. 5 -15kV/cm的電擊條件，進行完整質粒轉化，將人內(nèi)皮抑素基因轉移到雙歧桿菌當中。其三，該技術擬利用雙歧桿菌的非特異抗腫瘤作用以及作為腫瘤基因治療和導向治療的載體開發(fā)轉基因雙歧桿菌抗腫瘤制劑。
具體實施例方式實施例一
利用大腸桿菌做載體，將人內(nèi)皮抑素基因導入質粒當中，構建融合人內(nèi)皮抑素基因質粒pBES，以電容25 ii F、電阻105 Q、電壓10. 5 kV/cm的電擊條件下進行完整質粒轉化，將人內(nèi)皮抑基因轉移到兩歧雙歧桿菌及長雙歧桿菌中，轉移效率84%。 實施例二
利用大腸桿菌做載體，將人內(nèi)皮抑素基因導入質粒當中，構建融合人內(nèi)皮抑素基因質粒pBES，以電容25 i! F、電阻200 Q、電壓12. 5 kV/cm的電擊條件下進行完整質粒轉化，將人內(nèi)皮抑基因轉移到兩歧雙歧桿菌及長雙歧桿菌中，轉移效率78%。實施例三
利用大腸桿菌做載體，將人內(nèi)皮抑素基因導入質粒當中，構建融合人內(nèi)皮抑素基因質粒pBES，以電容25 i! F、電阻300 Q、電壓15 kV/cm的電擊條件下進行完整質粒轉化，將人內(nèi)皮抑基因轉移到兩歧雙歧桿菌及長雙歧桿菌中，轉移效率86%。
權利要求
1.一種雙歧桿菌轉人內(nèi)皮抑素基因技術，其特征在于將人內(nèi)皮抑基因轉移到雙歧桿菌當中，構建具有抗腫瘤作用的工程菌株。
2.利用大腸桿菌做載體，構建人內(nèi)皮抑素基因質粒pBES，利用電融合技術進行完整質粒轉化，將人內(nèi)皮抑基因轉移到雙歧桿菌當中。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雙歧桿菌轉人內(nèi)皮抑素基因技術。利用大腸桿菌做載體，構建人內(nèi)皮抑素基因質粒pBES，采用電融合方法，在細菌菌落生長到D600nm值約為0.5cm時制備感受態(tài)細胞，以電容25μF、電阻150Ω-300Ω、電壓10.5-15kV/cm的電擊條件，進行完整質粒轉化，將人內(nèi)皮抑素基因轉移到雙歧桿菌當中。該技術擬利用雙歧桿菌的非特異抗腫瘤作用以及作為腫瘤基因治療和導向治療的載體開發(fā)轉基因雙歧桿菌抗腫瘤制劑。
文檔編號C12N15/63GK102766646SQ20111011612
公開日2012年11月7日 申請日期2011年5月6日 優(yōu)先權日2011年5月6日
發(fā)明者肖宏, 蘇小平 申請人:湖南科爾生物技術有限公司