專利名稱：香菇多肽的制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及食品技術領域，尤其是香菇多肽的制備方法和用途。
背景技術：
香菇是世界第二大食用菌，在我國民間素有“山珍”之稱。據(jù)分析，干香菇食用部分占72%，每IOOg食用部分中含蛋白13g、脂肪1. Sg、碳水化合物Mg、粗纖維7. Sg、灰分 4. 9g、鈣 124mg、磷 415mg、鐵 25. 3mg、維生素 BIO. 07mg、維生素 B21. i:3mg、尼克酸 18. 9mg。香菇含有香菇多糖、香菇多肽等活性成分，具有很高的藥用價值，國內外許多專家學者很注重對香菇多糖研究，為了追求高純度的香菇多糖，香菇多肽在制備香菇多糖的過程中往往被丟棄浪費。香菇多肽(Lentinan簡稱LNT)系從真菌香菇子實體中提取分離純化獲得的的蛋白多糖。肽鏈由天冬氨酸、組氨酸等18種氨基酸組成，多糖以甘露糖為主，含少量的葡萄糖、木糖等，平均分子量約為50萬道爾頓。香菇多肽是香菇中的主要生物活性物質，是理想的免疫促進劑，具有提高人體免疫力、抑制腫瘤、降低轉氨酶、護肝以及降低膽固醇等作用。 目前對于香菇多肽的報道比較少，CN101709320A中報道利用纖維素酶及蛋白酶對香菇多肽進行提取，此方法比較簡單，所得的香菇多肽無論從純度還是分子量都無法控制。

發(fā)明內容
本發(fā)明針對不足，提出一種香菇多肽的制備方法，得到純度高、分子量小的香菇多肽。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術方案一種香菇多肽的制備方法，包括以下步驟①、將干香菇子實體粉碎，加入8 16倍重量的水，攪拌均勻，加熱至80°C 100°C，維持30min 120min，降溫至室溫；②、步驟①水溶液進行超聲波處理，調pH值至8. 0 9. 0,按每kg干香菇加入 1. 0 6. 0萬國際單位比活力的胰酶或蛋白酶，于40°C 50°C水解120 MOmin ；③、調節(jié)步驟②水解液pH值至4. 0 6. 0，按每kg干香菇加入1. 0 6. 0萬國際單位比活力的木瓜酶或蛋白酶，40°C 50°C水解300 500min ；酶滅活，降至室溫；④、調步驟③滅活后的水解液PH值至6. 0 7. 5，加熱至90°C 100°C，保持 60min MOmin，降至室溫，離心過濾，收集濾液；⑤、向步驟④濾液中按碳重量與濾液體積比為0. 5% 2. 0%加入活性碳脫色，過濾，濾液為淡黃色澄清液體；濾液經(jīng)5000道爾頓的超濾膜進行超濾，收集超濾液；干燥，得到香菇多肽。優(yōu)選的，步驟②超聲波處理的條件為IOOOW 4000W、30min 120min。優(yōu)選的，步驟③酶滅活條件為100°C，5 15min。優(yōu)選的，步驟⑤脫色條件為80 100°C，攪拌20min 60min ；脫色和過濾為重復多次操作。優(yōu)選的，步驟⑤超濾液過葡聚糖凝膠柱、離子交換樹脂或大孔吸附樹脂除雜后再干燥。優(yōu)選的，所述干燥為冷凍干燥或噴霧干燥。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明通過超聲波、酶解、超濾及過柱純化等方法提純香菇多肽，產(chǎn)品純度高達60%以上，香菇多肽分子量控制在5000道爾頓以下，產(chǎn)品功能效果明顯， 具有調節(jié)血脂及抗疲勞作用。本發(fā)明通過對香菇進行雙酶水解，將大分子蛋白質水解成小分子多肽，然后用分子截留為5000道爾頓的超濾膜進行超濾，濾過液再過柱純化，可得純度高、分子量小的香菇多肽。這種方法具有如下優(yōu)點1、不加入試劑發(fā)酵，香菇直接經(jīng)雙酶酶解等生產(chǎn)工藝提取香菇多肽等活性物質， 具安全無污染、少投入生產(chǎn)設備、減少生產(chǎn)環(huán)節(jié)等優(yōu)點。2、香菇直接經(jīng)雙酶酶解、超濾、純化等生產(chǎn)工藝提取香菇多肽，最大限度地將香菇蛋白質水解成各種小分子多肽。所得的香菇多肽分子量小、純度高，產(chǎn)品功能更明顯。3、此制備工藝簡單易行，反應條件溫和，收率高，穩(wěn)定性好，而且周期短，對制備設備及場所要求也很低，適合于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明還提供了上述制備方法得到的香菇多肽，分子量小于5000道爾頓；以及該香菇多肽在制備抗疲勞的藥物、食品或保健品中的應用。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細描述，本部分的描述僅是示范性和解釋性，不應對本發(fā)明的保護范圍有任何的限制作用。實施例1取干香菇子實體2000. 0kg，粉碎，加入32. OL的水，攪拌均勻，加熱至100°C，加熱時間為120min，降溫至室溫。超聲波處理，處理條件為4000W、120min。用IOmo 1/L的NaOH 溶液調節(jié)PH值至9. 0，加入12. 0萬國際單位(比活力)的胰酶，攪勻后，維持pH至9. 0， 500C的條件水解，水解MOmin。用6. Omo 1/L的HCl溶液調pH至6. 0，加入12. O萬國際單位(比活力)的木瓜酶，攪勻后，維持pH至6. 0，500C的條件水解，水解500min。酶解結束后加熱升溫至100°C，保溫15分鐘進行酶滅活，降溫至室溫。用10mol/L的NaOH溶液調pH至7. 5，加熱至100°C，保持MOmin，降至室溫，離心過濾，收集濾液26. 0L。在濾液加入活性碳520. Og，在溫度為100°C條件下攪拌脫色60min， 過濾，重復以上操作，離心過濾，得淡黃色澄清液體25. 4L。澄清液體用5000道爾頓的超濾膜進行超濾，收集濾過液22. 0L。將葡聚糖凝膠顆粒加入10倍量的水，置于沸水浴中，使葡聚糖凝膠顆粒充分溶漲 3小時，裝入凝膠柱中，用水平衡；濾過液過葡聚糖凝膠柱(或離子交換樹脂、大孔吸附樹脂等)，用水洗脫，收集洗脫液12. 0L。冷凍干燥或噴霧干燥，得香菇多肽粉68. 32g。檢驗結果多肽91.36% (參照標準:GB18186-2000)；
平均分子量小于3000道爾頓(參照標準JY/T024-1996)實施例2取干香菇子實體2000. Okg,粉碎，加入16. OL的水，攪拌均勻，加熱至80°C，加熱時間為30min，降溫至室溫。超聲波處理，處理條件為1000W、30min。用lOmol/L的KOH溶液調節(jié)PH值至8.0，加入2.0萬國際單位(比活力)的胰酶，攪勻后，維持pH至8.0，40°C的條件水解，水解120min。用6. Omol/L的H2SO4溶液調pH至4. 0，加入2. 0萬國際單位(比活力)的木瓜酶，攪勻后，維持PH至4.0，40°C的條件水解，水解300min。酶解結束后加熱升溫至100°C，保溫15分鐘進行酶滅活，降溫至室溫。用10mol/L的KOH溶液調pH至6. 0，加熱至90°C，保持60min，降至室溫，離心過濾，收集濾液12. 0L。在濾液加入活性碳60. Og,在溫度為80°C條件下攪拌脫色20min，過濾，重復以上操作，離心過濾，得淡黃色澄清液體11. 0L。澄清液體用5000道爾頓的超濾膜進行超濾，收集濾過液10. 0L。將葡聚糖凝膠顆粒加入10倍量的水，置于沸水浴中，使葡聚糖凝膠顆粒充分溶漲 3小時，裝入凝膠柱中，用水平衡；濾過液過葡聚糖凝膠柱(或離子交換樹脂、大孔吸附樹脂等)，用水洗脫，收集洗脫液8. 0L。冷凍干燥或噴霧干燥，得香菇多肽粉61. 08go檢驗結果多肽90.82% (參照標準:GB18186-2000)；平均分子量小于3000道爾頓(參照標準JY/T024-1996)實施例3取干香菇子實體2000. Okg,粉碎，加入24. OL的水，攪拌均勻，加熱至85°C，加熱時間為80min，降溫至室溫。超聲波處理，處理條件為1000W、30min。用lOmol/L的KOH溶液調節(jié)PH值至8.5，加入4.0萬國際單位(比活力)的蛋白酶，攪勻后，維持pH至8.5，45°C的條件水解，水解170min。用4. Omol/L的H2SO4溶液調pH至5. 0，加入5. 0萬國際單位(比活力)的蛋白酶，攪勻后，維持PH至5.0，45°C的條件水解，水解350min。酶解結束后加熱升溫至95 °C，保溫20分鐘進行酶滅活，降溫至室溫。用8mol/L的KOH溶液調pH至6. 8，加熱至92°C，保持160min，降至室溫，離心過濾，收集濾液14. 0L。在濾液加入活性碳70. Og,在溫度為80°C條件下攪拌脫色20min，過濾，重復以上操作，離心過濾，得淡黃色澄清液體12. 0L。澄清液體用5000道爾頓的超濾膜進行超濾，收集濾過液11. 2L。將葡聚糖凝膠顆粒加入11倍量的水，置于沸水浴中，使葡聚糖凝膠顆粒充分溶漲 3小時，裝入凝膠柱中，用水平衡；濾過液過葡聚糖凝膠柱(或離子交換樹脂、大孔吸附樹脂等)，用水洗脫，收集洗脫液8. 0L。冷凍干燥或噴霧干燥，得香菇多肽粉61. ISgo檢驗結果多肽91.32% (參照標準:GB18186-2000)；平均分子量小于3500道爾頓(參照標準JY/T024-1996)試驗實施例香菇多肽抗疲勞作用1.試驗動物昆明雄性小鼠，2. 5 3. 0月齡，體重(20士2)g。
2.供試樣品上述實施例1、2和3的樣品。3.試驗方法將40只小鼠隨機分為4組，每組10只，每天灌胃給藥1次，以蒸餾水為空白組，實施例1、2和3的樣品分別以40，80，160mg/kg的劑量，連續(xù)灌胃給藥30d。然后測定小鼠的負重游泳試驗時間、血乳酸值、肝糖原及血清尿素氮，實驗結果如下表1和表2 :表1香菇多肽對小鼠負重游泳時間的影響
權利要求
1.一種香菇多肽的制備方法，包括以下步驟①、將干香菇子實體粉碎，加入8 16倍重量的水，攪拌均勻，加熱至80°C 100°C，維持30min 120min，降溫至室溫；②、步驟①水溶液進行超聲波處理，調pH值至8.0 9. 0，按每kg干香菇加入1. 0 6. 0萬國際單位比活力的胰酶或蛋白酶，于40°C 50°C水解120 MOmin ；③、調節(jié)步驟②水解液PH值至4.0 6. 0，按每kg干香菇加入1. 0 6. 0萬國際單位比活力的木瓜酶或蛋白酶，40°C 50°C水解300 500min ；酶滅活，降至室溫；④、調步驟③滅活后的水解液PH值至6.0 7. 5，加熱至90°C 100°C，保持60min 240min,降至室溫，離心過濾，收集濾液；⑤、向步驟④濾液中按碳重量與濾液體積比為0.5% 2. 0%加入活性碳脫色，過濾， 濾液為淡黃色澄清液體；濾液經(jīng)5000道爾頓的超濾膜進行超濾，收集超濾液；干燥，得到香菇多肽。
2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟②超聲波處理的條件為1000W 4000W、30min 120min。
3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟③酶滅活條件為100°C，5 15min。
4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟⑤脫色條件為80 100°C，攪拌 20min 60min ；脫色和過濾為重復多次操作。
5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟⑤超濾液過葡聚糖凝膠柱、離子交換樹脂或大孔吸附樹脂除雜后再干燥。
6.如權利要求1或5所述的制備方法，其特征在于所述干燥為冷凍干燥或噴霧干燥。
7.—種如權利要求1所述制備方法制得的香菇多肽，其特征在于該香菇多肽的分子量小于5000道爾頓。
8.如權利要求7所述香菇多肽在制備抗疲勞的藥物、食品或保健品中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種香菇多肽的制備方法，包括以下步驟①將干香菇子實體粉碎，加入8～16倍重量的水，加熱至80℃～100℃，維持30min～120min，降至室溫；②超聲波處理，按每kg干香菇加入1.0～6.0萬國際單位比活力的胰酶或蛋白酶，水解120～240min；③調水解液pH值至4.0～6.0，按每kg干香菇加入1.0～6.0萬國際單位比活力的木瓜酶或蛋白酶，水解300～500min；酶滅活，降至室溫；④水解液pH值至6.0～7.5，加熱至90℃～100℃，保持60min～240min，降至室溫，離心過濾，收集濾液；⑤按碳重量與濾液體積比為0.5％～2.0％加入活性碳脫色，過濾，濾液為淡黃色澄清液體；經(jīng)5000道爾頓的超濾膜進行超濾，收集超濾液；干燥，得到香菇多肽。本發(fā)明制得的香菇多肽粉純度為50％以上，具有抗疲勞作用。
文檔編號A23J3/14GK102224879SQ20111015520
公開日2011年10月26日 申請日期2011年6月9日 優(yōu)先權日2011年6月9日
發(fā)明者申健 申請人:申健