專利名稱：甲魚低聚肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甲魚的深加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以甲魚為原料，利用生物復(fù)合酶酶解制備甲魚低聚肽的方法。
背景技術(shù)：
甲魚又名鱉、團魚，有補血、強骨、抗疲勞、延年益壽之功效，是我國傳統(tǒng)食品，也是開發(fā)高級保健食品的良好原料；甲魚的主要營養(yǎng)成分為蛋白質(zhì)、脂肪、鐵、鈣、動物膠、角質(zhì)白及多種維生素等。甲魚含有很高的蛋白質(zhì)，大約每公斤有165克蛋白質(zhì)，而食物或藥物中的蛋白質(zhì)一般要被消化液酶解為低聚肽或氨基酸而被機體吸收和利用，因此吸收慢，利用率低，所以也達不到應(yīng)有的藥效。利用現(xiàn)代生物酶解技術(shù)，超濾和薄膜濃縮，噴霧干燥技術(shù)處理得到的小分子甲魚低聚肽，可以克服上述問題，使甲魚低聚肽口服能夠更完全和直接被消化道吸收，目前，提取甲魚低聚肽的方法主要有堿液提取法和生物酶解法，前者在提取過程中加入大量的堿處理，既破壞了蛋白質(zhì)的成分，造成成品苦咸等不良口感，而且對環(huán)境造成污染；申請?zhí)?201010103157. 9專利文獻中公開了甲魚小分子多肽的制備方法用胰酶在55-60° C酶解 l-4h，在90-95° C保溫10h，降溫至60° C，加入復(fù)合蛋白酶酶解l_4h，再經(jīng)過去油脂，活性炭脫色，真空濃縮，醇沉，高溫滅菌，噴霧干燥得到成品。該方法胰蛋白酶但是成本高，操作流程太長，步驟繁瑣，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的酶解液存在腥味，咸味和分子量大，分子量分布不集中，成本高的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供了一種甲魚低聚肽的提取方法，以甲魚為原料用堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶酶解，膜截留分子量為0. 5-30萬道爾頓的超濾膜進行超濾和薄膜濃縮精制技術(shù)和噴霧干燥得到甲魚低聚肽肽；本方法操作簡便，口感好，成本低，環(huán)保高效，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。為了實現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)措施 一種甲魚低聚肽的制備方法，其步驟如下
1.按原料甲魚的重量的0.2-5%的比率加入堿性蛋白酶，40-70 0C恒溫攪拌，酶解 I-IOh,再按原料甲魚重量的0. 1-2%的比率加入風(fēng)味蛋白酶，40-70°C恒溫酶解0. 2-4h，將得到的酶解液升溫至85-120°C，滅酶10-60min;
2.將酶解液離心后過濾，上清液經(jīng)過中空超濾膜，卷式膜或管式膜精制分離，膜截留分子量為0. 5-30萬道爾頓的超濾膜，進口壓力為1. 8-3bar,出口壓力l_2bar，酶解液溫度為 20-30 0C進行超濾分離，超濾液經(jīng)過薄膜濃縮，噴霧干燥即得到甲魚低聚肽。本發(fā)明也可以先把原料甲魚攪碎，煎煮l-10h，冷卻至45_65°C后再進行酶解。優(yōu)選的制備方法
1.按原料甲魚的重量的0. 5-3%的比率加入堿性蛋白酶，50-65°C恒溫酶解2_4h，再按原料甲魚重量的0. 25-1%的風(fēng)味蛋白酶，50-65°C恒溫酶解0. 5_2h，將得到的酶解液升溫至 90-110° C，滅酶 20-40min;
2.將酶解液離心后過濾，上清液經(jīng)過中空超濾膜，卷式膜或管式膜精制分離，膜截留分子量為5-15萬道爾頓的超濾膜，進口壓力為1.2-2. 5bar，出口壓力1_1. 8bar，酶解液溫度為20-30° C進行超濾分離，超濾液經(jīng)過薄膜濃縮，噴霧干燥即得到甲魚低聚肽成品。上述步驟中也可以先把原料甲魚攪碎，煎煮2_4h，冷卻至50-62° C后再進行酶解。更優(yōu)的方法
1.按原料甲魚的重量的2%的比率加入堿性蛋白酶，60°C恒溫酶解3h，再分別按原料甲魚重量的0. 5%的風(fēng)味蛋白酶，60°C恒溫酶解lh，將得到的酶解液升溫至100° C，滅酶 30min；
2.3.將酶解液離心后過濾，上清液經(jīng)過中空超濾膜，卷式膜或管式膜精制分離，膜截留分子量為10萬道爾頓的超濾膜，進口壓力為1. 5-2bar,出口壓力1. 5bar ；酶解液溫度為 25° C進行超濾分離，超濾液經(jīng)過薄膜濃縮，噴霧干燥即得到甲魚低聚肽成品。上述步驟中也可以先把原料甲魚攪碎，煎煮4h，冷卻至60° C后再進行酶解。本品為鱉科動物鱉Trionyx sinensis Wiegmann的全體。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法的優(yōu)點和有益效果如下
1.本發(fā)明方法提取的甲魚低聚肽純度高，分子量集中，分子量在1000-140道爾頓占 50%以上。2.本發(fā)明生產(chǎn)出來的甲魚低聚肽的人體容易吸收。3.本方法避免了調(diào)節(jié)PH，納濾脫鹽工序，減少了工業(yè)成本，改善了成品的風(fēng)味，提高了肽的得率。4.本發(fā)明的生產(chǎn)周期短，操作簡便，成本低，產(chǎn)品質(zhì)量可靠，安全無毒副作用，可廣泛用于保健品、藥品等領(lǐng)域。
具體實施例方式實施例1
一、制備方法，其步驟如下
1.以中華鱉為原料，選用鮮活甲魚100kg，去除內(nèi)臟和油脂，攪碎，加入1000L純水， 100° C 煎煮 2h;
2.冷卻至60°C，按原料甲魚的重量的2%的比率加入堿性蛋白酶2kg，60°C恒溫酶解 3h,加入0.5kg風(fēng)味蛋白酶，60° C恒溫酶解lh，然后升溫至100° C，滅酶30min;
3.冷卻至室溫，4000r/min離心20min，收集上清液，上清液經(jīng)分子量為10萬道爾頓的卷式膜超濾，進口壓力為1. 8-3bar,出口壓力l-2bar，收集超濾液；
4.超濾液經(jīng)薄膜濃縮到密度1.05-1.1之間，噴霧干燥即得到13. 55g粉末甲魚低聚肽。二、甲魚低聚肽含量測定 1.方法提要
低分子量的蛋白質(zhì)水解物(包含肽類及游離氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液；高分子量的蛋白質(zhì)在三氯乙酸溶液中易沉淀。樣品經(jīng)三氯乙酸溶液溶解后，離心分離出沉淀蛋白質(zhì)物質(zhì)，測定出離心清液中的酸溶蛋白質(zhì)含量，清液中的酸溶蛋白質(zhì)含量減去游離氨基酸含量即為低聚肽的含量。2.分析步驟
2.1酸溶蛋白質(zhì)含量的測定
稱取2g (精確至Img)樣品，加入至IOmL容量瓶中，用15%三氯乙酸溶液定容，混合均勻，靜置lOmin。將樣品溶液在4000rpm下離心IOmin后，取全部清液，按GB/T 5009. 5規(guī)定的方法測定清液中的酸溶蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)換算系數(shù)為6. 25。檢驗結(jié)果根據(jù)樣品的干燥失重，折算為干基。2.2游離氨基酸含量的測定
樣品前處理稱取20 30mg樣品，精確到0. OOOlg，用3%磺基水楊酸溶液溶解均勻。 將樣品溶液轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，定容。將樣品溶液在轉(zhuǎn)速為4000r/min離心機上離心 5min得清液，再用0. 45 μ m微孔濾膜過濾清液，將濾液轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，定容后作為儀器檢測用樣品。其余操作同GB 12292水果、蔬菜汁游離氨基酸含量的測定規(guī)定的方法。2. 3結(jié)果的表述
肽的含量馬按式(1)計算
巧=巧—j............................................................ (1)
式中
B1——樣品中肽含量(以干基計)，% ； P1——樣品中酸溶蛋白質(zhì)含量(以干基計)，% ；
』——樣品中游離氨基酸含量(以干基計)，％。2. 4測定結(jié)果
測定成品中肽的含量，結(jié)果見表1。表1肽粉中低聚肽的含量測定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種甲魚低聚肽的制備方法，包括原料甲魚酶解、濃縮、干燥，其特征在于用堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶酶解，酶解液進行超濾。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲魚低聚肽的制備方法，其特征在于堿性蛋白酶加入量為原料甲魚重量的0. 2-5%，恒溫酶解l-10h，再加入原料甲魚重量0. 1-2%的風(fēng)味蛋白酶，恒溫酶解0. 2-4h后，酶解液升溫至85-120° C，滅酶10_60min。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的甲魚低聚肽的制備方法，其特征在于堿性蛋白酶加入量為原料甲魚重量的0. 5-3%，恒溫酶解2-4h，再加入原料甲魚重量0. 25-1%的風(fēng)味蛋白酶，恒溫酶解0. 5-2h后，酶解液升溫至90-110° C，滅酶20-40min。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的甲魚低聚肽的制備方法，其特征在于堿性蛋白酶加入量為原料甲魚重量的2%，恒溫酶解3h，再加入原料甲魚重量0. 5%的風(fēng)味蛋白酶，酶解lh，酶解液升溫至100° C，滅酶30min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲魚低聚肽的制備方法，其特征在于超濾選用膜截留分子量為0. 5-30萬道爾頓的中空超濾膜或卷式膜或管式膜。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的甲魚低聚肽的制備方法，其特征在于超濾選用膜截留分子量為5-15萬道爾頓的中空超濾膜或卷式膜或管式膜。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的甲魚低聚肽的制備方法，其特征在于超濾選用膜截留分子量為10萬道爾頓的中空超濾膜或卷式膜或管式膜。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供一種甲魚低聚肽的提取方法，以甲魚為原料用堿性蛋白酶酶解后，再用風(fēng)味蛋白酶外切和調(diào)節(jié)風(fēng)味，酶解液進行超濾，堿性蛋白酶加入量為原料甲魚重量的0.2-5%，風(fēng)味蛋白酶加入量為原料甲魚重量的0.1-2%，膜截留分子量為0.5-30萬道爾頓的超濾膜進行超濾，薄膜濃縮噴霧干燥得到甲魚低聚肽；本方法操作簡便，口感好，成本低，環(huán)保高效，非常適合工業(yè)化大生產(chǎn)。
文檔編號C12P21/06GK102286589SQ201110236309
公開日2011年12月21日 申請日期2011年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月18日
發(fā)明者劉根云, 盧建中, 易敏之, 鐘虹光, 馬莉 申請人:江中藥業(yè)股份有限公司