專利名稱：一種從蛋黃粉提取燕窩酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物產(chǎn)品提取及其應(yīng)用
背景技術(shù)：
燕窩酸也稱唾液酸(sialic acid)，是一種神經(jīng)氨酸，是細(xì)胞蛋白質(zhì)的重要組成物，廣泛存在于動物腦組織細(xì)胞中，最近的研究認(rèn)為燕窩酸是預(yù)防老年人癡呆癥，提高免疫力的一種神經(jīng)營養(yǎng)品，燕窩酸聯(lián)接于細(xì)胞蛋白糖脂末端組織，提高腦細(xì)胞識別能力，促進(jìn)腸道吸收礦物質(zhì)和維生素，對早期癌變及轉(zhuǎn)移有顯著的抑制作用。燕窩酸的藥用前景非常廣泛，也是近年來生物制藥領(lǐng)域中的重點項目。燕窩酸的提取工藝，有文獻(xiàn)報道，從乳清及蛋黃粉中提取，如US 5233033，US5270462，CN 02110607X。這些方法中，生產(chǎn)中有許多的困難不能解決，如脫脂困難，有些工藝需要大量有機(jī)溶媒，會污染產(chǎn)品并對生產(chǎn)環(huán)境有破壞影響，不適宜工業(yè)化生產(chǎn)。在專利CN02110607X中是用酸水解蛋黃粉的方法，該法有工藝步驟繁雜，水解溫度高，產(chǎn)品收率低等缺陷
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)特征，是有效，快速的，高質(zhì)量，高收率的從蛋黃粉中提取燕窩酸的生產(chǎn)方法。使用全脂蛋黃粉，先用特定的菠蘿蛋白酶水解蛋黃粉，與先有的方法比較，去除了酸水解污染的問題。酶水解蛋黃粉的困難是脫脂和過濾問題，本發(fā)明使用樹酯脫脂和去蛋白方法，克服了上述工藝不足。本發(fā)明技術(shù)關(guān)鍵是，將蛋黃粉先用去離子水浸泡30min，然后加入菠蘿蛋白酶，攪拌10-15min，控制溫度25-30°C，放置時間12_18hr，在加入去離子水和藻酸鈉，攪拌lOmin，離心過濾，取上清液。用酸調(diào)PH值到4_5，過大孔樹脂柱D105，收集洗脫液，過離子交換樹脂，氫陽離子交換110型，在過銨型陽離子125型，水洗，PH3-4值梯度洗脫，收集PH4洗脫液，調(diào)PH值6-8，靜置，過濾，母液冷凍，濃縮結(jié)晶，烘干得到成品。上述工藝步驟中，其特征是所述去離子水與蛋黃粉的重量比例1 5-8，優(yōu)選
I 7。蛋黃粉與菠蘿蛋白酶的重量比例為10-14 1-5，優(yōu)選12 I。樹脂用量是蛋黃粉重量的2-5倍，優(yōu)選3倍，氫陽離子交換用量是蛋黃粉的1-3倍，優(yōu)選2倍，銨型陽離子用量是蛋黃粉的2-4倍，優(yōu)選3倍。本發(fā)明中使用的微量酸是醋酸，也可用鹽酸或硫酸或磷酸或碳酸，優(yōu)選是碳酸。濃度為，5-10%，優(yōu)選7%，調(diào)節(jié)PH6-8使用碳酸氫鈉或碳酸鈉，優(yōu)選是碳酸鈉，濃度10-20%。工藝中使用的海藻酸鈉分子量為10-15萬。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的技術(shù)特征，使用菠蘿蛋白酶解蛋黃粉，是本發(fā)明人篩選的特有技術(shù)，使用這種酶解工藝，配合上大孔樹酯脫脂工藝，克服了酶解蛋黃粉脫脂難的問題，本發(fā)明的工藝簡單，無環(huán)境污染，提取燕窩酸收率高，產(chǎn)品含量高，是一種適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的方法。實施方法例1、取蛋黃粉100kg，用去離子水650kg浸泡，溫度25度，攪拌30min，加入菠蘿蛋白酶1kg，攪拌lOmin，控制溫度27°C，放置時間15hr，攪拌后加入分子量IO萬15%海藻酸鈉100kg，攪拌均勻，靜置30min，用離心機(jī)過濾處沉淀物，取過濾液，加入6%醋酸調(diào)PH4，過大孔樹酯柱(250kg)，收集洗脫液，在過氫陽型離子交換柱(IOOkg)，收集酸性洗脫液，過銨型陽離子交換柱(200kg)，梯度洗脫，收集PH3洗脫液，用10%碳酸鈉調(diào)PH7。離心過濾，放入-5V ’ 12hr,去沉淀后，濃縮結(jié)晶，干燥得燕窩酸產(chǎn)品，收率22. 5 %。如果產(chǎn)品顏色深，可用5%活性碳脫色處理。例2、取蛋黃粉200kg，用去離子水1500kg浸泡，溫度25度，攪拌30min，加入菠蘿蛋白酶0. 7kg，攪拌15min，控制溫度25°C，放置時間18hr，攪拌后加入分子量15萬15%海藻酸鈉200kg，攪拌均勻，靜置30min，用離心機(jī)過濾處沉淀物，取過濾液，加入8 %醋酸調(diào)PH4，過大孔樹酯柱(300kg)，收集洗脫液，在過氫陽型離子交換柱(200kg)，收集酸性洗脫液，過銨型陽離子交換柱(300kg)，梯度洗脫，收集PH4洗脫液，用15%碳酸鈉調(diào)PH7。離心過濾，放入_5°C，15hr，去沉淀后，濃縮結(jié)晶，干燥得燕窩酸產(chǎn)品。收率27%。例3、質(zhì)量檢測1.2 方法1.2.1 色譜條件色譜柱Symmetry C18 柱(4. 6mmX 250mm, 5 ii ml);柱溫35°C ;流動相:1. 0%四氫呋喃水溶液(含0. 2%磷酸)-乙腈(92 8);檢測波長230nm ;流速1. Oml/min ;進(jìn)樣體積10 U I1. 2. 2樣品溶液的制備精確稱量燕窩酸產(chǎn)品1. Omg，用注射水IOOml溶解，然后加入10mg/ml鄰苯二氨鹽酸鹽溶液Iml,置于80°C水浴中加熱40min,備用。

1. 2. 3對照品溶液的制備取N-乙酰神經(jīng)氨酸(唾液酸)對照品溶液2ml，再加入10mg/ml鄰苯二氨鹽酸鹽溶液1ml，置于80°C水浴中加熱40min，取出后冷卻，經(jīng)0. 45 y m膜過濾后精密吸取上述溶液與對照品溶液各IOul注入液相色譜儀，記錄峰面積。結(jié)果見表
IoHPLC檢測燕窩酸含量(外標(biāo)法)
樣品批號收率%含量(唾液酸)
20100801239573
201008052792 權(quán)利要求
1.一種從蛋黃粉提取燕窩素的方法，其特征，將蛋黃粉先用去離子水浸泡30min，然后加入菠蘿蛋白酶(bromelain)，攪拌10_15min，控制溫度25_30°C，放置時間12_18hr，在加入去離子水和藻酸鈉，攪拌lOmin，離心過濾，取上清液。用酸調(diào)PH值到4-5，過大孔樹脂柱D105，收集洗脫液，過離子交換樹脂，氫陽離子交換110型，在過銨型陽離子125型，水洗，PH3-4值梯度洗脫，收集PH4洗脫液，調(diào)PH值6-8，靜置，過濾，母液冷凍，濃縮結(jié)晶，烘干得到成品。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是去離子水與蛋黃粉的比例1 5-8。所述蛋黃粉與菠蘿蛋白酶的重量比例為10-14 I。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征酸是使用樹脂用量是蛋黃粉重量的2-5倍，氫陽離子交換用量是蛋黃粉的1-3倍，銨型陽離子用量是蛋黃粉的2-4倍。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是使用酸為醋酸或鹽酸或硫酸或磷酸或碳酸，濃度為5-10%，調(diào)節(jié)PH6-8使用碳酸氫鈉或碳酸鈉，濃度為1-20%。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征海藻酸鈉分子量為10-15萬。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從蛋黃粉提取燕窩素的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征，是使用特定的菠蘿蛋白酶水解蛋黃粉，然后使用D型樹酯脫去蛋白脂，純化提取燕窩酸。本發(fā)明與先有的方法比較，去除了酸水解污染的問題，克服了酶水解蛋黃粉脫脂困難和過濾問題。使用本方法提取的燕窩素(唾液酸sialic acid)，工藝簡單，使用方便，提取成本低，有工業(yè)化生產(chǎn)的實用價值。
文檔編號C12P19/26GK103060403SQ201110315518
公開日2013年4月24日 申請日期2011年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月18日
發(fā)明者鄒如 申請人:鄒如