專(zhuān)利名稱(chēng)：一種夜光藻活細(xì)胞的定量濃縮方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藻類(lèi)濃縮技術(shù)，具體涉及一種夜光藻活細(xì)胞的定量濃縮方法。
背景技術(shù)：
WiMQtoctiluca scintillans iN.組Viaris)又名夜光蟲(chóng)，是一種異養(yǎng)的單細(xì)胞浮游甲藻種類(lèi)，營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞通常成球形，直徑在200Mm至2000Mffl。夜光藻是一種常發(fā)赤潮的有害浮游甲藻種類(lèi)，在世界范圍內(nèi)的海域和養(yǎng)殖環(huán)境中，都有赤潮發(fā)生報(bào)道，但是，夜光藻赤潮的關(guān)鍵問(wèn)題研究進(jìn)展一直相對(duì)緩慢，一個(gè)重要的原因是有關(guān)夜光藻細(xì)胞分裂、細(xì)胞生活史及其意義、種群增殖過(guò)程中關(guān)鍵信息物質(zhì)作用機(jī)制等研究相當(dāng)缺乏。由于夜光藻屬于完全異養(yǎng)的甲藻，種群動(dòng)態(tài)以及赤潮的形成與外界的食物條件、水體營(yíng)養(yǎng)條件、細(xì)胞微環(huán)境變化、離子變化、信息物質(zhì)等的大范圍持續(xù)作用，都可能影響夜光藻的生理代謝活動(dòng)以及觸手的捕食活動(dòng)。可見(jiàn)，僅依賴于常規(guī)監(jiān)測(cè)中的固定細(xì)胞數(shù)量變化進(jìn)行夜光藻赤潮的預(yù)報(bào)和防治遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。在夜光藻赤潮發(fā)生機(jī)理研究和野外監(jiān)測(cè)中，聚集之前大量細(xì)胞樣品的獲取至關(guān)重要；在室內(nèi)研究中也發(fā)現(xiàn)，由于夜光藻嚴(yán)重的隨波漂浮特征，夜光藻培養(yǎng)水體不能形成均勻密度的懸液，要分析培養(yǎng)水體中的夜光藻活細(xì)胞數(shù)量往往只能取全部水體計(jì)數(shù)， 工作量很大，耗時(shí)長(zhǎng)；而且，夜光藻細(xì)胞比較柔弱，過(guò)分?jǐn)_動(dòng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞皺縮衰敗，造成對(duì)研究結(jié)果的影響，不利于有關(guān)夜光藻細(xì)胞分裂、細(xì)胞生活史及其意義、種群增殖過(guò)程中關(guān)鍵信息物質(zhì)作用機(jī)制等研究。因此，需要一個(gè)能在夜光藻活細(xì)胞還相對(duì)密度低的情況下就能獲取大量樣品的方法，達(dá)到在夜光藻數(shù)量很低的情況下，就可能預(yù)示著夜光藻的細(xì)胞行為和種群發(fā)展方向信息。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種細(xì)胞皺縮衰敗少，維持夜光藻活體細(xì)胞懸浮態(tài)的濃縮和定量的定量濃縮方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為一種夜光藻活細(xì)胞的定量濃縮方法，包括下述步驟
a、取一玻璃器皿，在該玻璃器皿內(nèi)放置一個(gè)直徑不大于1/3玻璃器皿直徑、設(shè)有支腳的定位套，該定位套的高度不高于該玻璃器皿高度的1/2 ；
b、在定位套上覆蓋上直徑大于1倍定位套直徑的篩絹，該篩絹的網(wǎng)目孔徑為80-180 微米；
c、拉緊篩絹，將一無(wú)底的收集筒從篩絹上插入所述定位套內(nèi)，讓篩絹的邊緣從所述定位套的上緣翻出，所述收集筒的筒口高于所述玻璃器皿的器皿口 ；
d、取定量夜光藻活細(xì)胞水樣，緩慢勻速倒入收集筒中，倒畢，至所述玻璃器皿的器皿口無(wú)水流溢出，用滴管輕柔混勻，定量吸取所述收集筒內(nèi)的水樣，也可以先用滴管吸出收集筒內(nèi)的水樣，全部轉(zhuǎn)移至量筒或新的容器中，再定量吸取單位體積細(xì)胞懸液，在顯微鏡下計(jì)數(shù)和觀察。
這樣可以開(kāi)展夜光藻細(xì)胞分裂、細(xì)胞生活史及其意義、種群增殖過(guò)程中關(guān)鍵信息物質(zhì)作用機(jī)制等研究。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于一種夜光藻活細(xì)胞的定量濃縮的方法，通過(guò)玻璃器皿內(nèi)放置設(shè)有支腳的定位套，定位套的高度低于該玻璃器皿高度，定位套上覆蓋篩絹，無(wú)底的收集筒插入定位套內(nèi)，收集筒的筒口高于玻璃器皿的器皿口，組成一個(gè)對(duì)夜光藻活細(xì)胞水樣始終維持懸浮態(tài)濃縮的簡(jiǎn)易裝置；將定量夜光藻培養(yǎng)水樣或野外水樣，緩慢勻速倒入收集筒內(nèi)，就讓夜光藻活細(xì)胞水樣的大部份水流入玻璃器皿并溢出，玻璃器皿的高度所維持的液面高度，而夜光藻活細(xì)胞被篩絹截留在收集筒的水體中，能使夜光藻始終處于懸浮狀態(tài)而不干出，這樣夜光藻活細(xì)胞就在收集筒濃縮，且不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞皺縮衰敗，待璃器皿的液面穩(wěn)定，所得濃縮后的夜光藻水體含活細(xì)胞密度較高，均勻好，利于計(jì)數(shù)和對(duì)大量細(xì)胞的觀察研究；就可以定量吸取活細(xì)胞，在顯微鏡下計(jì)數(shù)和觀察；有利于開(kāi)展夜光藻細(xì)胞分裂、細(xì)胞生活史及其意義、種群增殖過(guò)程中關(guān)鍵信息物質(zhì)作用機(jī)制等研究。因此本發(fā)明是一種細(xì)胞皺縮衰敗少，維持夜光藻活體細(xì)胞懸浮態(tài)的濃縮和定量的定量濃縮方法。


圖1為為本發(fā)明中裝配后簡(jiǎn)易濃縮裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。 實(shí)施例一種夜光藻活細(xì)胞的定量濃縮方法，取一玻璃器皿1，在該玻璃器皿1內(nèi)放置一個(gè)直徑不大于1/3玻璃器皿直徑(具體直徑差依濃縮要求配置)、設(shè)有支腳4的定位套3，該定位套3的高度不高于該玻璃器皿1高度的1/2，具體高度差依濃縮要求配置，在定位套3上覆蓋上直徑大于1倍定位套直徑的篩絹5，該篩絹5的網(wǎng)目孔徑為80 -180微米；拉緊篩絹 5，將一無(wú)底的收集筒2從篩絹5上插入定位套3內(nèi)，收集筒2直徑略少于定位套3直徑，即方便插入，又對(duì)篩絹5固定較牢，讓篩絹5的邊緣從定位套3的上緣翻出，收集筒2的筒口高于玻璃器皿1的器皿口，具體高度差依濃縮要求配置，就組成如圖1所示的簡(jiǎn)易濃縮裝置， 定量取夜光藻活細(xì)胞水樣，緩慢勻速倒入收集筒2中，倒畢至玻璃器皿1的器皿口無(wú)水流溢出，用滴管輕柔混勻，定量吸取收集筒2內(nèi)的水樣，在顯微鏡下計(jì)數(shù)和觀察研究。本發(fā)明在濃縮中對(duì)夜光藻活細(xì)胞擾動(dòng)少，始終維持懸浮態(tài)，很少損傷細(xì)胞，簡(jiǎn)單方便，濃縮效果較好， 所用篩絹的網(wǎng)目孔徑依夜光藻細(xì)胞大小可以選用網(wǎng)目孔徑為80、100、120、130、150或180 微米等的篩絹。
權(quán)利要求
1. 一種夜光藻活細(xì)胞的定量濃縮方法，其特征在于包括下述步驟a、取一玻璃器皿，在該玻璃器皿內(nèi)放置一個(gè)直徑不大于1/3玻璃器皿直徑、設(shè)有支腳的定位套，該定位套的高度不高于該玻璃器皿高度的1/2 ；b、在定位套上覆蓋上直徑大于1倍定位套直徑的篩絹，該篩絹的網(wǎng)目孔徑為80-180 微米；c、拉緊篩絹，將一無(wú)底的收集筒從篩絹上插入所述定位套內(nèi)，讓篩絹的邊緣從所述定位套的上緣翻出，所述收集筒的筒口高于所述玻璃器皿的器皿口 ；d、取定量夜光藻活細(xì)胞水樣，緩慢勻速倒入收集筒中，倒畢，至所述玻璃器皿的器皿口無(wú)水流溢出，用滴管輕柔混勻，定量吸取所述收集筒內(nèi)的水樣，在顯微鏡下計(jì)數(shù)和觀察。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種夜光藻活細(xì)胞的定量濃縮方法，通過(guò)玻璃器皿內(nèi)放置設(shè)有支腳的定位套，定位套的高度低于該玻璃器皿高度，定位套上覆蓋篩絹，無(wú)底的收集筒插入定位套內(nèi)，收集筒的筒口高于玻璃器皿的器皿口，組成一個(gè)對(duì)夜光藻活細(xì)胞水樣始終維持懸浮態(tài)濃縮的簡(jiǎn)易裝置，再將定量夜光藻活細(xì)胞水樣，緩慢勻速倒入收集筒內(nèi)，這樣夜光藻活細(xì)胞就在收集筒濃縮，且不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞皺縮衰敗，待璃器皿的液面穩(wěn)定，就可以定吸取收集筒內(nèi)的水樣，在顯微鏡下計(jì)數(shù)和觀察。因此本發(fā)明是一種細(xì)胞皺縮衰敗少，維持夜光藻活體細(xì)胞懸浮態(tài)的濃縮和定量的定量濃縮方法。
文檔編號(hào)C12N1/12GK102367469SQ20111032604
公開(kāi)日2012年3月7日 申請(qǐng)日期2011年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月24日
發(fā)明者嚴(yán)小軍, 劉寶寧, 周成旭, 蔣瑩, 駱其君 申請(qǐng)人:寧波大學(xué)