專利名稱：一種生產(chǎn)α-酮戊二酸的方法及其專用菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)α-酮戊二酸的方法及其專用菌株，特別涉及一種利用蔗糖和丙酮酸生產(chǎn)α-酮戊二酸的方法。
背景技術(shù)：
α -酮戍二酸(a-ketoglutarate, a-KG),又稱 α -膠酮酸，分子式為 C5H605。α-酮戊二酸為白色或類白色結(jié)晶粉末，易溶于水。α-酮戊二酸主要存在于各種類型的干酪、啤酒和咖啡中，屬天然等同香料。α -酮戊二酸在微生物細胞的代謝中起著重要的作用，是合成氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素的重要前體物質(zhì)。α-酮戊二酸作為一種營養(yǎng)強化劑廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、有機合成、化妝品及飼料等工業(yè)中。隨著應(yīng)用范圍的不斷擴大以及市場需求的不斷增長，工業(yè)化生產(chǎn)α-酮戊二酸已經(jīng)成為各個行業(yè)的需求。目前工業(yè)上生產(chǎn)α-酮戊二酸通常采用化學(xué)合成法，很少使用發(fā)酵法，由于有機化學(xué)合成存在著過程復(fù)雜以及存在安全隱患等缺點，因此利用微生物有效發(fā)酵生產(chǎn)α-酮戊二酸的工藝過程和技術(shù)路線具有重要的學(xué)術(shù)價值和廣闊的市場前景。關(guān)于α -酮戍二酸的研究最初起源于1946年，Lockwood和Stodola對利用細菌生物合成α-酮戊二酸進行了初步的研究，他們率先發(fā)現(xiàn)熒光極毛桿菌(Pseudomonasfluorescens)具有少量合成α-酮戍二酸的能力。隨后1955年Asai等人發(fā)現(xiàn)假單胞菌種(Pseudomonas genus)、產(chǎn)氣桿菌(Aerobacter aerogenes)和粘質(zhì)沙雷氏菌(Serraitamarcescens)具有過量合成α-酮戍二酸的能力。之后關(guān)于發(fā)酵法生產(chǎn)α -酮戍二酸的研究和報道逐年增加。以葡萄糖為底物發(fā)酵生產(chǎn)α-酮戊二酸的研究主要集中在以下幾種菌株中:Bacillus natto、Bacterium Succinicum 和 Serraita marcescens 等細菌。然而真菌發(fā)酵生產(chǎn)α -酮戊二酸的報道則非常少，直到20世紀(jì)60年代末才出現(xiàn)關(guān)于酵母菌生產(chǎn)α -酮戍二酸的報道。1967年Tsugawa等人首次發(fā)現(xiàn)解脂亞洛酵母(Yarrowia Iipolytica)具有過量合成α -酮戊二酸的能力，并且對解脂亞洛酵母的營養(yǎng)需求與環(huán)境條件進行全面系統(tǒng)的研究。在21世紀(jì)初，國外學(xué)者圍繞Yarrowia Iipolytica利用乙醇為碳源過量合成α -酮戊二酸做了大量的研究工作，其中以ΙΓ Chenko等人為代表，他們系統(tǒng)研究了 ΝΗ4+、O2和關(guān)鍵代謝酶以及氮源代謝酶對Yarrowia Iipolytica利用乙醇生產(chǎn)α -酮戍二酸的影響。在國內(nèi)，關(guān)于發(fā)酵法生產(chǎn)α-酮戊二酸的研究報道較少，其發(fā)酵生產(chǎn)菌株主要是光滑球擬酵母(Torulopsis glabrata)。如劉立明等通過誘變得到菌株T.glabrata CCTCCM202019，研究發(fā)現(xiàn)CaCO3的添加促進了 α -酮戊二酸的積累，其中Ca2+可顯著提高丙酮酸羧化酶的活性對α -酮戊二酸的積累起主要作用，而CO/—則有可能作為丙酮酸羧化反應(yīng)的底物起輔助作用，兩者對α-酮戊二酸的積累具有協(xié)同效應(yīng)。黃慧娟通過提高輔因子水平從而提高合成α-酮戊二酸的前體物質(zhì)乙酰CoA和草酰乙酸的濃度，達到了提高α-酮戊二酸產(chǎn)量的目的，并進一步研究了碳 氮源濃度和丙酮酸濃度對α -酮戊二酸產(chǎn)量的影響。目前國內(nèi)外關(guān)于酵母菌之外的真菌發(fā)酵生產(chǎn)α-酮戊二酸的報道很少，尚未見到傘枝犁頭霉(Lichtheimia corymb if era)產(chǎn)α-酮戍二酸的研究。因此傘枝犁頭霉發(fā)酵生產(chǎn)α-酮戊二酸的研究具有較好的科研價值和應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種生產(chǎn)α -酮戊二酸的方法及其專用菌株。本發(fā)明提供的傘枝犁頭霉(Lichtheimia corymbifera),命名為Dl,是從酒曲中篩選得到的，已于2011年6月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號)，菌種保藏號為CGMCCN0.4974。傘枝犁頭霉(Lichtheimia corymbifera) Dl CGMCC N0.4974 簡稱傘枝犁頭霉 Dl。本發(fā)明還保護所述傘枝犁頭霉Dl在生產(chǎn)α-酮戊二酸中的應(yīng)用。所述應(yīng)用中，具體可以以蔗糖和/或丙酮酸為底物，通過發(fā)酵所述傘枝犁頭霉Dl生產(chǎn)α-酮戊二酸。所述發(fā)酵的溫度可為 30°C _45°C，優(yōu)選為 30°C、34°C、37°C、40°C*45°C。本發(fā)明還保護一種用于發(fā)酵所述傘枝犁頭霉Dl的培養(yǎng)基，包括碳源、氮源、無機鹽和水；所述碳源為如下物質(zhì)中的至少一種:葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、棉籽糖、糯米淀粉、玉米淀粉和可溶性淀粉；所述氮源為如下物質(zhì)中的至少一種:蛋白胨、酵母膏、硫酸銨、氯化銨和硝酸鈉；所述無機鹽為如下物質(zhì)中的至少一種:KH2P04、MgS04、FeS04、CaCO3和NaCl。所述培養(yǎng)基具體可為將如下物質(zhì)定容至IL得到的培養(yǎng)基(自然pH):所述碳源10g-80g(如 10g、20g、30g、40g、50g、60g、70g 或 80g)、所述氮源 0.5g_3g(如 0.5g、l.0g、1.5g、2.0g,2.5g 或 3.0g) 'KH2PO41.36g、MgS04.7Η200.2g、FeS04.7H20 0.01g、NaCl 2g、玉米漿 0.5g、CaCO3 20g-60g (如 20g、30g、40g、50g 或 60g)。所述培養(yǎng)基還可包括生長因子；所述生長因子為如下物質(zhì)中的至少一種:吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80、曲拉通100、L-鹽酸噻胺、L-精氨酸單鹽、L-鹽酸吡哆辛、L-煙酸、核黃素、葉酸、L-胱氨酸、L-組氨酸、L-酪氨酸、L-天冬氨酸、甲硫氨酸、L-谷氨酸、脯氨酸、賴氨酸、DL-白氨酸、半胱氨酸和精氨酸。所述培養(yǎng)基具體可為將如下物質(zhì)定容至IL得到的培養(yǎng)基(自然pH):所述碳源10g-80g(如 10g、20g、30g、40g、50g、60g、70g 或 80g)、所述氮源 0.5g_3g(如 0.5g、l.0g、1.5g、2.0g,2.5g 或 3.0g)、KH2PO41.36g、MgSO4.7Η200.2g、FeSO4.7H20 0.0lg、NaCl 2g、玉米漿 0.5g、CaCO3 20g-6 0g(如 20g、30g、40g、50g 或 60g)、所述生長因子 0.5g-3.0g(如
0.5g、1.0g、1.5g、2.0g、2.5g 或 3.0g)。本發(fā)明還保護另一種用于發(fā)酵所述傘枝犁頭霉Dl的培養(yǎng)基，包括丙酮酸、氮源、無機鹽和水；所述氮源為如下物質(zhì)中的至少一種:氯化銨、硫酸銨、硝酸鈉、豆柏粉、酵母膏、大豆蛋白胨、牛肉蛋白胨和胰蛋白胨；所述無機鹽為如下物質(zhì)中的至少一種:kh2po4、MgSO4, FeSO4, CaCO3 和 NaCl。所述培養(yǎng)基具體可為將如下物質(zhì)定容至IL得到的培養(yǎng)基(自然pH):丙酮酸10g-80g(如 10g、20g、30g、40g、50g、60g、70g 或 80g)、所述氮源 0.25g-3.0g (如 0.25g、
0.5g、1.0g、1.5g、2.0g、2.5g*3.0g)、KH2P041.36g、MgS04.7Η20 0.2g、FeS04.7Η20 0.0lg、NaCl 2g、玉米漿 0.5g、CaC03 40g_80g (如 40g、50g、60g、70g 或 80g)。所述培養(yǎng)基還可包括生長因子；所述生長因子為如下物質(zhì)中的至少一種:吐溫
20、吐溫40、吐溫60、吐溫80、曲拉通100、L-鹽酸噻胺、L-精氨酸單鹽、L-鹽酸吡哆辛、L-抗壞血酸、L-精氨酸單鹽酸鹽、L-色氨酸、DL-白氨酸、L-天冬氨酸、L-胱氨酸、L-酪氨酸和L-組氨酸。所述培養(yǎng)基具體可為將如下物質(zhì)定容至IL得到的培養(yǎng)基(自然pH):丙酮酸10g-80g(如 10g、20g、30g、40g、50g、60g、70g 或 80g)、所述氮源 0.25g-3.0g (如 0.25g、
0.5g、l.0g、l.5g、2.0g,2.5g 或 3.0g)、KH2PO41.36g、MgSO4.7H20 0.2g、FeSO4.7H20
0.0lg、NaCl 2g、玉米漿 0.5g、CaCO3 40g_80g (如 40g、50g、60g、70g 或 80g)、所述生長因子
0.5g-3.0g (如 0.5g、l.0g、l.5g、2.0g、2.5g 或 3.0g)。本發(fā)明還保護一種生產(chǎn)α-酮戊二酸的方法，是采用以上任一所述的培養(yǎng)基作為發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵所述傘枝犁頭霉Dl，得到α -酮戊二酸。所述發(fā)酵的溫度可為30°C _45°C，優(yōu)選為30°C、34°C、37°C、40°C或45°C。所述發(fā)酵中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的裝液量(即發(fā)酵初始時刻，發(fā)酵培養(yǎng)基占發(fā)酵 容器容量的體積百分含量)可為10 % -30 % (如10 %、15 %、20 %、25%或 30% )。所述發(fā)酵的時間可為 24h-120h(如 24h、36h、48h、60h、72h、84h、96h、108h或 120h)。本發(fā)明所提供的傘枝犁頭霉D1，菌種穩(wěn)定性好、具有較好的產(chǎn)α-酮戊二酸能力、發(fā)酵成本較低(底物來源廣泛，價格便宜)。本發(fā)明還對傘枝犁頭霉Dl的發(fā)酵條件進行了優(yōu)化。因此，采用本發(fā)明菌株和方法生產(chǎn)α-酮戊二酸，產(chǎn)量高、成本低，具有較好的科研價值和工業(yè)化應(yīng)用前景。


圖1不同(NH4)2SO4添加量對傘枝犁頭霉Dl發(fā)酵蔗糖產(chǎn)α -酮戊二酸的影響。圖2葉酸濃度對傘枝犁頭霉Dl發(fā)酵蔗糖產(chǎn)α -酮戊二酸的影響。圖3裝液量對傘枝犁頭霉Dl發(fā)酵蔗糖產(chǎn)α _酮戊二酸的影響。圖4傘枝犁頭霉利用蔗糖發(fā)酵產(chǎn)α -酮戊二酸歷程。圖5豆柏粉濃度對傘枝犁頭霉Dl發(fā)酵丙酮酸產(chǎn)α _酮戊二酸影響。圖6不同吐溫40濃度對傘枝犁頭霉Dl發(fā)酵丙酮酸產(chǎn)α -酮戊二酸的影響。圖7裝液量對傘枝犁頭霉Dl發(fā)酵丙酮酸產(chǎn)α -酮戊二酸影響。圖8傘枝犁頭霉利用丙酮酸產(chǎn)α -酮戊二酸歷程。
具體實施例方式以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。實施例中的培養(yǎng)基均經(jīng)115°C滅菌30min(或121°C滅菌20min)。α-酮戊二酸、丙酮酸購自SIGMA公司。葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、棉籽糖、糯米淀粉、玉米淀粉、可溶性淀粉，蛋白胨、酵母膏、硫酸銨、氯化銨、硝酸鈉、豆柏粉，吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80、曲拉通100、L-鹽酸噻胺、L-精氨酸單鹽、L-鹽酸吡哆辛、L-抗壞血酸、L-煙酸、核黃素、葉酸、L-胱氨酸、L-組氨酸、L-酪氨酸、L-天冬氨酸、甲硫氨酸、L-谷氨酸、L-色氨酸、脯氨酸、賴氨酸、DL-白氨酸、半胱氨酸、精氨酸、L-精氨酸單鹽酸鹽，KH2PO4,MgSO4.7Η20, FeSO4.7H20、CaC03、NaCl、脫氧膽酸鈉、溴甲酚綠和瓊脂粉均為分析純，購自北京化工廠。馬鈴薯購自市場。
丙酮酸和α -酮戊二酸的含量均采用高效液相色譜分析法檢測。色譜柱為迪馬公司的C18反相柱，250 X 4.6(5 μ m)。流動相為0.01mol/L的磷酸氫二銨溶液，用磷酸調(diào)pH至2.6，經(jīng)0.45 μ m孔徑合成纖維素酯膜過濾后，超聲脫氣lh。洗脫過程中，流動相的流速為0.8mL/min,檢測波長為210nm,進樣量為20 μ L,柱溫為室溫。反應(yīng)終止時,每升發(fā)酵液中α-酮戊二酸的含量即為α-酮戊二酸產(chǎn)量。反應(yīng)初始時，每升發(fā)酵液中的底物含量即為底物初始量。反應(yīng)終止時，每升發(fā)酵液中的底物的含量即為底物殘留量。實施例2中的轉(zhuǎn)化率=α-酮戊二酸產(chǎn)量+底物初始含量X 100 %。實施例3中的轉(zhuǎn)化率=α-酮戊二酸產(chǎn)量+ (丙酮酸初始含量-丙酮酸殘留量)X 100%。丙酮酸的出峰位置為4.57min，用丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線為I = (2*107) x+220863, x為峰面積，y為丙酮酸濃度(g/L)。α-酮戊二酸的出峰位置為6.15min，用α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y= (2*107)x-74809, X為峰面積，y為α -酮戊二酸濃度(g/L)。蔗糖殘留量的檢測方法為領(lǐng)域內(nèi)的通用方法，參考文獻:楊挺.低分子糖的高效液相色譜分析[J].華南師范學(xué)報，1997，3:26-30。實施例1、傘枝犁頭霉Dl的分離和鑒定一、傘枝犁頭霉Dl的分離傘枝犁頭霉Dl是從酒曲樣本中篩選得到的。初篩培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基中添加1.0g/L脫氧膽酸鈉和0.lg/L溴甲酚綠，自然pH。斜面培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基):馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂20g/L，自然pH。發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖80g/L，(NH4)2SO4 lg/L, KH2PO41.36g/L，MgSO4.7H20 0.2g/L，F(xiàn)eSO4.7H20 0.0lg/L, NaCl 2g/L，玉米漿 0.5g/L，CaCO3 30g/L(單獨滅菌)，自然 pH。酒曲樣本稀釋后涂布于分離培養(yǎng)基中，在37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待分離培養(yǎng)基中有菌落長出，將菌株接種到初篩培養(yǎng)基，將所有在菌落周圍能使指示劑培養(yǎng)基變黃的菌株分別接種到發(fā)酵培養(yǎng)基，37°C、200r/min培養(yǎng)48h。發(fā)酵結(jié)束后取ImL發(fā)酵液于1.5mL離心管中，離心(12000r/min，IOmin)，取上清，稀釋適當(dāng)倍數(shù)后經(jīng)0.45 μ m孔徑水相過濾膜過濾，采用HPLC檢測上述樣品中產(chǎn)酸的種類及產(chǎn)量。二、傘枝犁頭霉Dl的鑒定傘枝犁頭霉Dl的形態(tài)特征:在葡萄糖營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長良好，最適生長溫度為35-37°C ;在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中菌落疏松，菌絲匍匐爬行，呈白色；孢囊梗自菌絲上發(fā)生，簡單不分枝至分枝多次，單生或成束；在孢囊?；蚱浞种Φ捻敹诵纬涉咦幽遥繛榇笮玩咦幽?，孢子囊內(nèi)有發(fā)達的囊軸，孢囊梗不與假根對著生長，孢子囊梨形，近無色至淡灰色；孢子囊下面還有孢囊下泡或楔形的囊托；孢子囊成熟時消解或破裂，釋放出孢囊孢子。傘枝犁頭霉Dl的18S rDNA測序結(jié)果見序列表的序列I (1696bp)。綜合形態(tài)特征和測序結(jié)果，菌株Dl屬于犁頭霉屬(Absidia)，傘枝犁頭霉種(Lichtheimia corymbifera)。2011年6月21日將傘枝犁頭霉(Lichtheimia corymbifera)Dl保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號為CGMCC N0.4974。傘枝犁頭霉(Lichtheimia corymbifera ) Dl CGMCC N0.4974 簡稱傘枝犁頭霉 Dl。實施例2、以蔗糖為底物搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)α -酮戊二酸的條件優(yōu)化—、發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源的篩選
1、碳源的篩選發(fā)酵培養(yǎng)基是將如下物質(zhì)定容至IL得到的(自然pH):碳源60g、(NH4)2SO4 lg、KH2PO41.36g、MgS04.7H20 0.2g、FeS04.7H20 0.0lg,NaCl 2g、玉米漿 0.5g、CaCO3 30g。分別采用如下7種碳源:葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、棉籽糖、糯米淀粉、玉米淀粉、可溶性淀粉。實驗方法:在250mL三角瓶中裝入50mL發(fā)酵培養(yǎng)基，接種200 μ L傘枝犁頭霉Dl的孢子液(孢子液中的孢子濃度為I X IO8個孢子/mL)，在37°C恒溫空氣浴往復(fù)式搖床上以200r/min振蕩培養(yǎng)72h ;取發(fā)酵液，12000r/min離心IOmin,吸取上清液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后經(jīng)0.45 μ m孔徑水相過濾膜過濾，檢測α -產(chǎn)酮戊二酸的產(chǎn)量并計算轉(zhuǎn)化率。采用不同碳源的發(fā)酵培養(yǎng)基，α -產(chǎn)酮戊二酸的產(chǎn)量和轉(zhuǎn)化率見表I。將蔗糖作為底物時，生產(chǎn)α-產(chǎn)酮戊二酸的能力最強，蔗糖初始量為60g/L時，發(fā)酵液中的α-產(chǎn)酮戊二酸含量為11.87g/L。表I不同碳源對傘枝犁頭霉Dl產(chǎn)α-產(chǎn)酮戊二酸的影響
權(quán)利要求
1.傘枝犁頭霉(Lichtheimiacorymb if era) Dl,它的保藏編號為 CGMCC N0.4974。
2.權(quán)利要求1所述傘枝犁頭霉Dl在生產(chǎn)α-酮戊二酸中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于:所述應(yīng)用中，以蔗糖和/或丙酮酸為底物，通過發(fā)酵所述傘枝犁頭霉Dl生產(chǎn)α -酮戊二酸。
4.如權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于:所述發(fā)酵的溫度為30°C-45°C。
5.用于發(fā)酵權(quán)利要求1所述傘枝犁頭霉Dl的培養(yǎng)基，包括碳源、氮源、無機鹽和水；所述碳源為如下物質(zhì)中的至少一種:葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、棉籽糖、糯米淀粉、玉米淀粉和可溶性淀粉；所述氮源為如下物質(zhì)中的至少一種:蛋白胨、酵母膏、硫酸銨、氯化銨和硝酸鈉；所述無機鹽為如下物質(zhì)中的至少一種:KH2P04、MgSO4, FeSO4, CaCO3和NaCl。
6.如權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)基，其特征在于:所述培養(yǎng)基還包括生長因子；所述生長因子為如下物質(zhì)中的至少一種:吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80、曲拉通100、L-鹽酸噻胺、L-精氨酸單鹽、L-鹽酸吡哆辛、L-煙酸、核黃素、葉酸、L-胱氨酸、L-組氨酸、L-酪氨酸、L-天冬氨酸、甲硫氨酸、L-谷氨酸、脯氨酸、賴氨酸、DL-白氨酸、半胱氨酸和精氨酸。
7.用于發(fā)酵權(quán)利要求1所述傘枝犁頭霉Dl的培養(yǎng)基，包括丙酮酸、氮源、無機鹽和水；所述氮源為如下物質(zhì)中的至少一種:氯化銨、硫酸銨、硝酸鈉、豆柏粉、酵母膏、大豆蛋白胨、牛肉蛋白胨和胰蛋白胨；所述·無機鹽為如下物質(zhì)中的至少一種:KH2P04、MgSO4, FeSO4, CaCO3和 NaCl。
8.如權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)基，其特征在于:所述培養(yǎng)基還包括生長因子；所述生長因子為如下物質(zhì)中的至少一種:吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80、曲拉通100、L-鹽酸噻胺、L-精氨酸單鹽、L-鹽酸吡哆辛、L-抗壞血酸、L-精氨酸單鹽酸鹽、L-色氨酸、DL-白氨酸、L-天冬氨酸、L-胱氨酸、L-酪氨酸和L-組氨酸。
9.一種生產(chǎn)α -酮戊二酸的方法，是采用權(quán)利要求5至8中任一所述的培養(yǎng)基作為發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵權(quán)利要求1所述傘枝犁頭霉D1，得到α -酮戊二酸。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于:所述發(fā)酵的溫度為30°C-45°c。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)α-酮戊二酸的方法及其專用菌株。本發(fā)明提供的傘枝犁頭霉(Lichtheimia corymbifera)D1，它的保藏編號為CGMCC No.4974。本發(fā)明所提供的傘枝犁頭霉D1，菌種穩(wěn)定性好、具有較好的產(chǎn)α-酮戊二酸能力、發(fā)酵成本較低(底物來源廣泛，價格便宜)，具有較好的工業(yè)化應(yīng)用前景。本發(fā)明還對傘枝犁頭霉D1的發(fā)酵條件進行了優(yōu)化。本發(fā)明方法生產(chǎn)α-酮戊二酸，具有較好的科研價值和工業(yè)化應(yīng)用前景。
文檔編號C12R1/645GK103074232SQ20111032927
公開日2013年5月1日 申請日期2011年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月26日
發(fā)明者閆巧娟, 徐忠義, 江正強, 蔡威 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)