專(zhuān)利名稱(chēng)：利用競(jìng)爭(zhēng)性微生物提高埃博霉素發(fā)酵產(chǎn)量的方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用競(jìng)爭(zhēng)性微生物及其代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)纖維堆囊菌(Sorangium cellulosum)提高埃博霉素(印othilone)發(fā)酵產(chǎn)量的方法及其在抗生素發(fā)酵生產(chǎn)中的應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
埃博霉素是一類(lèi)由粘細(xì)菌纖維堆囊菌合成的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)化合物，具有促微管聚合活性，其作用機(jī)制類(lèi)似于紫杉醇(Taxol )。紫杉醇及其類(lèi)似物是目前臨床上最為成功的抗腫瘤化療藥物，被用于卵巢癌、胸腺癌、肺癌和肝癌等實(shí)體癌的治療，是美國(guó)FDA認(rèn)定的實(shí)體瘤化療首選藥物。紫杉醇雖然廣為采用，但仍然有一些缺點(diǎn)，如水溶性低，毒副作用明顯，易產(chǎn)生耐藥性等等，在一定程度上限制了其應(yīng)用。而埃博霉素與紫杉醇相比則具有如下明顯的優(yōu)勢(shì)①分子結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，水溶性更好；②其噻唑環(huán)結(jié)構(gòu)與微管作用更加緊密；③不會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)期使用紫杉醇類(lèi)藥物帶來(lái)的白細(xì)胞減少，脫發(fā)等癥狀；④具有比紫杉醇更廣泛的抗腫瘤譜，一般比紫杉醇的抗腫瘤活性高5-25倍；⑤具有對(duì)多重耐藥性及耐紫杉醇腫瘤細(xì)胞的很高的細(xì)胞毒活性，比紫杉醇強(qiáng)2000-5000倍；⑥是目前發(fā)現(xiàn)的唯一一種由微生物產(chǎn)生的促微管聚合活性化合物，可以通過(guò)發(fā)酵進(jìn)行大規(guī)模制備，不必像紫杉醇那樣必須通過(guò)對(duì)杉樹(shù)的采伐或者復(fù)雜的化學(xué)合成途徑來(lái)獲取。因此埃博霉素被認(rèn)為是紫杉醇類(lèi)抗腫瘤化合物的更新?lián)Q代產(chǎn)品。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種埃博霉素結(jié)構(gòu)類(lèi)似物，而且目前已經(jīng)有多種埃博霉素類(lèi)化合物進(jìn)入不同階段的臨床評(píng)估，如BMS-M7550、BMS310705、K0S-862以及HPO等，它們均為纖維堆囊菌的發(fā)酵產(chǎn)物或者發(fā)酵產(chǎn)物的化學(xué)衍生物。埃博霉素已經(jīng)成為目前生物醫(yī)藥方面令人興奮地研究熱點(diǎn)之一，目前其發(fā)酵產(chǎn)量的較低是制約埃博霉素應(yīng)用的瓶頸。目前針對(duì)微生物藥物發(fā)酵產(chǎn)量提高主要有兩種策略，即傳統(tǒng)手段育種和發(fā)酵條件優(yōu)化，對(duì)工業(yè)菌株進(jìn)一步采用傳統(tǒng)育種方法讓產(chǎn)量大幅提高的潛力不大，而另外一些遺傳背景不清晰或操作手段不完善的菌株如纖維堆囊菌，菌種改良方法效率也不高；發(fā)酵條件優(yōu)化作為提高產(chǎn)量的另一關(guān)鍵技術(shù)也已經(jīng)在幾乎所有發(fā)酵生產(chǎn)過(guò)程中被引入，但是菌株對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝能力有限，我們不可能通過(guò)發(fā)酵條件優(yōu)化方法無(wú)限制的提高產(chǎn)量。當(dāng)某些菌株經(jīng)過(guò)不斷地育種或發(fā)酵條件優(yōu)化試驗(yàn)后，產(chǎn)量達(dá)到某一瓶頸，采用這兩種手段很難再有突破。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)傳統(tǒng)育種手段和發(fā)酵條件優(yōu)化提高抗生素產(chǎn)量方法上的一些不足，以纖維堆囊菌發(fā)酵生產(chǎn)埃博霉素為材料，提供了一種使用競(jìng)爭(zhēng)性微生物及其代謝產(chǎn)物有效刺激提高抗生素產(chǎn)量的方法，以及該方法在一些抗生素發(fā)酵工藝中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下埃博霉素生產(chǎn)菌株為纖維堆囊菌So0157-2，該菌種由山東大學(xué)微生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室李越中教授提供，目前保藏于中國(guó)典型微生物保藏中心(CCTCC)，編號(hào)NO. M208078。競(jìng)爭(zhēng)性微生物為本課題組自行篩選得到的與纖維堆囊菌So0157-2存在競(jìng)爭(zhēng)性生存關(guān)系的少根根霉(Rhizopus arrhizus)ATCC56015菌株和斜臥青霉(Penicillium deCumbens)UC086(中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號(hào)CGMCC 4075)。少根根霉菌株在馬鈴薯瓊脂平板培養(yǎng)基(PDA)上生長(zhǎng)，菌落圓形，擴(kuò)展，最初2天菌絲體為白色生長(zhǎng)密集。菌落表面平坦，孢子成粉狀覆蓋菌落表面，菌落與培養(yǎng)基結(jié)合緊密。顯微鏡下觀察菌絲體透明，菌絲無(wú)隔、多核、分枝狀，在假根的上方長(zhǎng)出一至數(shù)根孢囊梗，頂端長(zhǎng)球形孢子囊。 囊的基部有囊托，中間有球形或近球形囊軸。囊內(nèi)產(chǎn)大量孢囊孢子，成熟后孢囊壁消解或破裂，釋放球形或卵形等孢囊孢子。斜臥青霉菌株在馬鈴薯瓊脂(PDA)平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)， 菌落圓形，擴(kuò)展，最初2天菌絲體為白色生長(zhǎng)密集。菌落表面平坦，孢子呈粉狀覆蓋在菌落表面，整個(gè)菌落與培養(yǎng)基結(jié)合很緊密，菌落背面呈暗黃色。顯微鏡下觀察菌絲體透明，分枝多且有橫隔，頂端的分生孢子梗不對(duì)稱(chēng)分布，分生孢子梗呈掃帚狀，分生孢子呈圓形或橢圓形，表面光滑呈灰綠色(圖3)。1.上述競(jìng)爭(zhēng)性微生物菌株的發(fā)酵產(chǎn)物制備方法步驟如下(1)將菌株接種于活化培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件溫度27 ^TC，培養(yǎng)3 4天，得活化后的菌株。(2)取活化后的菌株接種于營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中，于25 35°C、100 300r/min的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)2 4天。(3)向發(fā)酵液中按體積比1 1加入乙酸乙酯，200r/min攪拌抽提3小時(shí)，重復(fù)2
次后將乙酸乙酯相合并，真空干燥。(4)采用1/200 1/100發(fā)酵液體積的有機(jī)溶劑溶解步驟(3)所得干燥產(chǎn)物，離心或微濾后清液即為競(jìng)爭(zhēng)性菌株的代謝產(chǎn)物。所述步驟(1)中的菌株為纖維堆囊菌的競(jìng)爭(zhēng)性少根根霉ATCC56015菌株和斜臥青霉 UC086。所述步驟(1)中的活化培養(yǎng)基組分如下馬鈴薯(去皮)200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水:1000mL，pH 值自然。所述步驟O)中的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分如下碳源1 5g/L，氮源1 5g/L，無(wú)機(jī)鹽 0. 01 2g/L，碳源選自葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉中的一種或其組合；氮源選自酵母浸粉、蛋白胨、胰蛋白胨、牛肉膏、玉米漿、硝酸鈉、硫酸銨中的一種或其組合；無(wú)機(jī)鹽選自硫酸鎂、硫酸亞鐵、磷酸氫二鉀、氯化鈣、硫酸鋅、硫酸銅、硫酸錳中的一種或其組合；PH 5. 0 9. O0上述營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分如下葡萄糖3 5g/L，酵母浸粉3_5g/L，硫酸鎂為0. 1 lg/L。所述步驟O)中營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基的接種量為5X IO6 IX IO8個(gè)/mL。所述步驟(3)中采用的乙酸乙酯為分析純度以上試劑，真空干燥溫度在45°C以下。所述步驟中使用的有機(jī)溶劑為分析純度以上丙酮、甲醇、乙醇或異丙醇試劑， 離心時(shí)使用滅菌處理的離心管，轉(zhuǎn)速為lOOOOr/min，時(shí)間lOmin，離心后清液轉(zhuǎn)入滅菌處理的容器中，微濾條件為滅菌處理的0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾。
所述步驟中所得的競(jìng)爭(zhēng)性菌株發(fā)酵產(chǎn)物制備后保存溫度為4°C。2.上述競(jìng)爭(zhēng)性微生物發(fā)酵產(chǎn)物誘導(dǎo)提高埃博霉素產(chǎn)量方面的應(yīng)用，應(yīng)用步驟如下(1)取纖維堆囊菌So0157-2接種至種子培養(yǎng)基，30°C培養(yǎng)3 4天。(2)配制纖維堆囊菌產(chǎn)埃博霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌處理后在無(wú)菌條件下向其中加入1/50 1/100體積的競(jìng)爭(zhēng)性微生物發(fā)酵產(chǎn)物丙酮溶液。(3)將纖維堆囊菌種子液中的菌團(tuán)使用滅菌處理的帶有玻璃珠的轉(zhuǎn)瓶打碎，接種至添加了競(jìng)爭(zhēng)性微生物發(fā)酵產(chǎn)物的發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)一周。(4)收集發(fā)酵液中的樹(shù)脂，蒸餾水洗去菌體和發(fā)酵液后用甲醇萃取過(guò)夜后HPLC進(jìn)行埃博霉素定量分析。所述步驟(1)中種子培養(yǎng)基為碳源選自葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、乳糖、 檸檬酸中的一種或其組合，添加量為1 5g/L;氮源選自蛋白胨、胰蛋白胨、酵母膏、玉米漿、硫酸銨、硝酸鈉中的一種或其組合，添加量為1 5g/L ；無(wú)機(jī)鹽選自硫酸亞鐵、硫酸鋅、 硫酸銅、氯化鉀、硫酸鎂、氯化鈣、硫酸錳中的一種或其組合，添加量為0. 0001 2g/L，pH 5. 0 9. O0所述步驟O)中發(fā)酵培養(yǎng)基為碳源選自葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、乳糖、 檸檬酸中的一種或其組合，添加量為1 5g/L;氮源選自蛋白胨、胰蛋白胨、酵母膏、玉米漿、硫酸銨、硝酸鈉中的一種或其組合，添加量為1 5g/L ；無(wú)機(jī)鹽選自硫酸亞鐵、硫酸鋅、 硫酸銅、氯化鉀、硫酸鎂、氯化鈣、硫酸錳中的一種或其組合，添加量為0. 0001 2g/L，pH 5. 0 9. O0上述發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖為3 5g/L，馬鈴薯淀粉3 5g/L，酵母膏為3 5g/ L，蛋白胨為0. 1 lg/L，氯化鈣0. 1 lg/L，硫酸鎂為0. 0001 0. 01g/L,硫酸亞鐵為 0.0001 0. 01g/Lo所述步驟(4)中使用的甲醇為色譜純度以上溶劑，色譜條件為=Shimadzu ODS-C18色譜柱6 X 250mm)，流動(dòng)相甲醇水(13 7)，流速0. 8mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng) M9nm，進(jìn)樣量 10 μ L。經(jīng)檢測(cè)，與不添加競(jìng)爭(zhēng)性微生物發(fā)酵產(chǎn)物相比，添加后纖維堆囊菌的埃博霉素發(fā)酵產(chǎn)量提高46. 3 58. 7%，菌體量也有明顯提高。


圖1競(jìng)爭(zhēng)性菌株ATCC56015和CGMCC4075的菌落及菌絲體照片；圖2埃博霉素的HPLC色譜結(jié)果；圖3改進(jìn)后的培養(yǎng)方法與初始方法產(chǎn)量比較。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明所保護(hù)范圍不限于此。實(shí)施例11.少根根霉ATCC56015發(fā)酵產(chǎn)物制備方法，步驟如下(1)取保藏菌株接種于活化培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件溫度^TC,培養(yǎng)3天活化。
(2)取活化后的根霉菌株接種于營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中，于3(TC、150r/min的培養(yǎng)條件下
培養(yǎng)4天。(3)向發(fā)酵液中按體積比1 1加入乙酸乙酯，200r/min攪拌抽提3小時(shí)，重復(fù)2
次后將乙酸乙酯相合并，真空干燥。(4)采用1/200發(fā)酵液體積的丙酮溶解步驟( 所得干燥產(chǎn)物，微濾后清液即為競(jìng)爭(zhēng)性菌株代謝產(chǎn)物。所述步驟1中的活化培養(yǎng)基為馬鈴薯(去皮)200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水 1000mL，pH 值自然。所述步驟2中的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基為葡萄糖5g/L，酵母浸粉3g/L，硫酸鎂為0. 5g/L。2.競(jìng)爭(zhēng)性微生物根霉菌株代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)提高埃博霉素產(chǎn)量方面的應(yīng)用(1)取纖維堆囊菌So0157-2接種至種子培養(yǎng)基，30°C培養(yǎng)3天。(2)配制纖維堆囊菌產(chǎn)埃博霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌處理后在無(wú)菌條件下向其中加入1/100體積的根霉產(chǎn)物丙酮溶液。以不添加該根霉產(chǎn)物的發(fā)酵培養(yǎng)基做為對(duì)照。(3)將纖維堆囊菌種子接種至添加了根霉產(chǎn)物的發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)一周。(4)收集發(fā)酵液中的樹(shù)脂，蒸餾水洗去菌體和發(fā)酵液，用甲醇萃取后進(jìn)行埃博霉素 HPLC定量分析。經(jīng)檢測(cè)，添加少根根霉ATCC56015代謝產(chǎn)物后，埃博霉素產(chǎn)量由50. 26mg/L提高至 73. 56mg/L，提高 46. ；35%。實(shí)施例21.少根根霉ATCC56015代謝產(chǎn)物制備方法，步驟如下(1)取根霉菌株接種于活化培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件溫度30°C，培養(yǎng)3天活化。(2)取活化后的根霉菌株接種于種子培養(yǎng)基中，于30°C、150r/min的培養(yǎng)條件下
培養(yǎng)4天。(3)向發(fā)酵液中按體積比1 1加入乙酸乙酯，200r/min攪拌抽提3小時(shí)，重復(fù)2
次后將乙酸乙酯相合并，真空干燥。(4)采用1/200發(fā)酵液體積的甲醇溶解步驟(3)所得干燥產(chǎn)物，10000r/min離心 IOmin后清液即為競(jìng)爭(zhēng)性菌株的代謝產(chǎn)物。所述步驟1中的活化培養(yǎng)基為馬鈴薯(去皮)200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水 1000mL，pH 值自然。所述步驟2中的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基為葡萄糖5g/L，酵母浸粉5g/L，硫酸鎂為0. 5g/L。2.競(jìng)爭(zhēng)性微生物根霉菌株產(chǎn)物誘導(dǎo)提高埃博霉素產(chǎn)量方面的應(yīng)用(1)取纖維堆囊菌So0157-2接種至種子培養(yǎng)基，30°C培養(yǎng)3天。(2)配制纖維堆囊菌產(chǎn)埃博霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌處理后在無(wú)菌條件下向其中加入1/50體積的根霉產(chǎn)物丙酮溶液。以不添加該產(chǎn)物的發(fā)酵培養(yǎng)基做為對(duì)照。(3)將纖維堆囊菌種子接種至添加了根霉菌株RZ2161發(fā)酵產(chǎn)物的發(fā)酵培養(yǎng)基中， 30°C培養(yǎng)一周。(4)收集發(fā)酵液中的樹(shù)脂，蒸餾水洗去菌體和發(fā)酵液后用甲醇萃取過(guò)夜后HPLC進(jìn)行埃博霉素定量分析。經(jīng)檢測(cè)，添加少根根霉ATCC56015代謝產(chǎn)物使埃博霉素產(chǎn)量由52. 14mg/L提高至77. 83mg/L，提高 49. 27%。實(shí)施例31.菌株斜臥青霉CGMCC 4075代謝產(chǎn)物制備方法，步驟如下(1)取青霉菌株接種于活化培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件溫度30°C，培養(yǎng)3天活化。(2)取活化后的青霉菌株接種于營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中，于3(TC、150r/min的培養(yǎng)條件下
培養(yǎng)4天。(3)向發(fā)酵液中按體積比1 1加入乙酸乙酯，200r/min攪拌抽提3小時(shí)，重復(fù)2
次后將乙酸乙酯相合并，真空干燥。(4)采用1/200發(fā)酵液體積的乙醇溶解步驟(3)所得干燥產(chǎn)物，10000r/min離心 IOmin后清液即為競(jìng)爭(zhēng)性微生物的代謝產(chǎn)物。所述步驟1中的活化培養(yǎng)基為馬鈴薯(去皮)200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水 1000mL，pH 值自然。所述步驟2中的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基為葡萄糖4g/L，酵母浸粉4g/L，硫酸鎂為0. 5g/L。2.競(jìng)爭(zhēng)性微生物青霉菌株代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)提高埃博霉素產(chǎn)量方面的應(yīng)用(1)取纖維堆囊菌So0157-2接種至種子培養(yǎng)基，30°C培養(yǎng)3天。(2)配制纖維堆囊菌產(chǎn)埃博霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌處理后在無(wú)菌條件下向其中加入1/50體積的青霉產(chǎn)物丙酮溶液。以不添加該產(chǎn)物的發(fā)酵培養(yǎng)基做為對(duì)照。(3)將纖維堆囊菌種子接種至添加了青霉菌株P(guān)Z2161發(fā)酵產(chǎn)物的發(fā)酵培養(yǎng)基中， 30°C培養(yǎng)一周。(4)收集發(fā)酵液中的樹(shù)脂，蒸餾水洗去菌體和發(fā)酵液后用甲醇萃取過(guò)夜后HPLC進(jìn)行埃博霉素定量分析。經(jīng)檢測(cè)，添加PZ2161發(fā)酵產(chǎn)物后埃博霉素產(chǎn)量由47. 98mg/L提高至76. 16mg/L，提高 58. 75%。當(dāng)理解的是，上述具體實(shí)施方式
僅僅是舉例性說(shuō)明，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)， 可以根據(jù)上述說(shuō)明加以改進(jìn)或變換，而所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.利用競(jìng)爭(zhēng)性微生物提高埃博霉素發(fā)酵產(chǎn)量的方法，其特征在于包括如下步驟(1)將少根根霉(Miizopusarrhizus)ATCC56015菌株和/或中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心保藏號(hào)為CGMCC 4075的斜臥青霉(Penicillium decumbens)UC086菌株接種于活化培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件溫度27 ，培養(yǎng)3 4天，得活化后的菌株；(2)取活化后的菌株接種于營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中，于25 35°C、100 300r/min的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)2 4天；(3)向發(fā)酵液中加入非極性溶劑提取并真空干燥；(4)采用有機(jī)溶劑溶解步驟C3)所得干燥產(chǎn)物，離心或微濾后清液即為競(jìng)爭(zhēng)性菌株的發(fā)酵產(chǎn)物溶液；所述步驟(4)使用的有機(jī)溶劑為丙酮、甲醇、乙醇或異丙醇或其組合；(5)取纖維堆囊菌接種至種子培養(yǎng)基；配制纖維堆囊菌產(chǎn)埃博霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌處理后在無(wú)菌條件下向其中加入競(jìng)爭(zhēng)性微生物發(fā)酵產(chǎn)物溶液；(6)將纖維堆囊菌種子接種至添加了競(jìng)爭(zhēng)性微生物發(fā)酵產(chǎn)物的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)；(7)收集發(fā)酵液中的樹(shù)脂，洗去菌體和發(fā)酵液后用測(cè)定埃博霉素的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)中培養(yǎng)基的碳源選自葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、乳糖、檸檬酸中的一種或其組合，添加量為1 5g/L;氮源選自蛋白胨、胰蛋白胨、酵母膏、玉米漿、硫酸銨、硝酸鈉中的一種或其組合，添加量為1 5g/L;無(wú)機(jī)鹽選自硫酸亞鐵、硫酸鋅、硫酸銅、氯化鉀、硫酸鎂、氯化鈣、硫酸錳中的一種或其組合，添加量為0. 0001 2g/L，培養(yǎng)基的pH 5. 0 9. 0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)中的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分如下碳源 1 5g/L，氮源1 5g/L，無(wú)機(jī)鹽0. 01 2g/L，碳源選自葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉中的一種或其組合；氮源選自酵母浸粉、蛋白胨、胰蛋白胨、牛肉膏、玉米漿、硝酸鈉、 硫酸銨中的一種或其組合；無(wú)機(jī)鹽選自硫酸鎂、硫酸亞鐵、磷酸氫二鉀、氯化鈣、硫酸鋅、硫酸銅、硫酸錳中的一種或其組合；PH 5. 0 9. 0，優(yōu)選的，營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分如下葡萄糖3 5g/L，酵母浸粉3-5g/L，硫酸鎂為0. 1 lg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)中的非極性溶劑是乙酸乙酯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于生產(chǎn)菌株為纖維堆囊菌So0157-2，在中國(guó)典型微生物保藏中心的保藏編號(hào)NO. M208078
6.少根根霉(lihizopusarrhizus)ATCC56015菌株和/或中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心保藏號(hào)為CGMCC 4075的斜臥青霉(Penicillium decumbens)UC086菌株在誘導(dǎo)提高埃博霉素等抗生素發(fā)酵產(chǎn)量方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種利用纖維堆囊菌的競(jìng)爭(zhēng)性微生物少根根霉或斜臥青霉代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)提高埃博霉素發(fā)酵產(chǎn)量的方法。本發(fā)明所述方法是培養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)性微生物并提取其代謝產(chǎn)物，將該代謝產(chǎn)物添加到纖維堆囊菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，利用該外界添加物的刺激來(lái)激活埃博霉素生產(chǎn)菌株內(nèi)部的相關(guān)調(diào)控基因，進(jìn)一步激發(fā)埃博霉素的合成。經(jīng)檢測(cè)，采用此法后埃博霉素發(fā)酵產(chǎn)量與原始條件相比可以提高46.3～58.7％，該方法具有重要的理論意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
文檔編號(hào)C12P39/00GK102399848SQ20111036041
公開(kāi)日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日
發(fā)明者劉新利, 李亞偉, 趙林 申請(qǐng)人:山東輕工業(yè)學(xué)院