專利名稱：一種產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶菌種的優(yōu)化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于產(chǎn)酶菌種領(lǐng)域，具體涉及一種產(chǎn)耐高溫α -淀粉酶-地衣芽孢桿菌 10181的優(yōu)化方法。
背景技術(shù)：
耐高溫α -淀粉酶廣泛存在于動植物和微生物中，是一種內(nèi)切葡萄糖苷酶，是目前最重要的工業(yè)酶制劑之一。目前生產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶使用最為廣泛的是細(xì)菌，尤其是桿菌(如解淀粉芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌)。耐高溫α-淀粉酶以其優(yōu)良的特性的特性廣泛應(yīng)用于造紙、紡織、印染、檸檬酸、乳酸發(fā)酵、啤酒、酒精、味精、糖等工業(yè)領(lǐng)域，用量大，市場占有率高，應(yīng)用前景非常廣泛。耐高溫α -淀粉酶能在較高的溫度下迅速水解淀粉分子中的α _1，4葡萄糖苷鍵， 任意切割凝膠淀粉成長短不一的短鏈糊精和少量的低聚糖、葡萄糖和麥芽糖，從而使淀粉糊的粘度迅速下降。地衣芽孢桿菌10181為芽孢桿菌科細(xì)菌，革蘭氏陽性桿菌，細(xì)胞大小為0. SumX (1. 5 3. 5) μπι，細(xì)胞形態(tài)和排列呈桿狀、單生，產(chǎn)生近中生的橢圓狀芽孢，孢囊稍膨大， 在淀粉平板培養(yǎng)基上的菌落為扁平、邊緣不整齊、白色、表面粗糙皺褶，24h后菌落直徑為 3mm，周圍有明顯的淀粉水解圈，有動力。地衣芽孢桿菌CICC 10181是由中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心保藏，中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心負(fù)責(zé)全國工業(yè)生產(chǎn)與研究應(yīng)用微生物菌種的收集、保藏與供應(yīng)，微生物菌種保藏技術(shù)的研究與培訓(xùn)等，也是國際菌種保藏聯(lián)合會(WFCC)和中國微生物菌種保藏管理委員會成員之一。隨著社會的發(fā)展，越來越要求酶活力高，添加量少的酶制劑產(chǎn)品，而現(xiàn)在一般的生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的耐高溫α-淀粉酶制劑的發(fā)酵液酶活力低，后處理工序復(fù)雜、生產(chǎn)成本相對較高。為了降低生產(chǎn)成本并滿足市場的要求，需要開發(fā)或者優(yōu)化出一株產(chǎn)酶活力高的菌株。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種產(chǎn)耐高溫α -淀粉酶-地衣芽孢桿菌10181的優(yōu)化方法。本發(fā)明是通過下述的技術(shù)方案來實現(xiàn)的
一種產(chǎn)耐高溫α -淀粉酶菌種的優(yōu)化方法，包括下述的步驟 a.菌種的活化培養(yǎng)將冷凍管保存的地衣芽孢桿菌10181菌種拿出活化，活化培養(yǎng)基牛肉膏0. 5 0. 7%、蛋白胨1. 0 1. 2%、氯化鈉0. 3 0. 5%、瓊脂1. 5 2. 0%、余量為水， 加熱以上的組份至其溶解，調(diào)PH在6. 8 7. 2之間，裝瓶包扎，在0. IMpa下加熱到120°C 122°C滅菌20 30min，冷卻到15 50°C在無菌條件下倒平板或擺斜面，備用；由冷凍管菌種劃線接種于平板培養(yǎng)基，27°C 30°C，培養(yǎng)1 2天；挑取單菌落36 40°C，培養(yǎng)1 2 天，保存?zhèn)溆茫籦.菌種的優(yōu)化將保存的菌種劃線于淀粉平板培養(yǎng)基上蛋白胨1 2%，酵母粉 0. 1 0. 5%、牛肉粉0. 3 0. 7%、玉米淀粉0. 5 1. 8%、葡萄糖0. 2 0. 4%、瓊脂1. 5 2. 0%、余量為水，調(diào)pH6. 5 7. 0，在121°C下滅菌20 30min，36°C 42°C培養(yǎng)1 1. 5天， 選出淀粉水解圈大的單菌落，來進(jìn)行種子擴(kuò)培；
c.菌種的擴(kuò)培玉米淀粉5 10%，豆餅粉1 4%，硫酸銨0.5 1%，氯化鈣0. 02 0. 05%，磷酸氫二鉀1. 3 2%，磷酸二氫鉀1. 3 2%，消泡劑0. 02 0. 05%、余量為水，調(diào) PH6.5 7.0，在121°C下滅菌40 min，將液體搖瓶種子液接入種子罐培養(yǎng)基中，接種量為 1 3%，36°C 42°C培養(yǎng)1 1. 5天；
d.發(fā)酵后提取發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液脫色、經(jīng)過板框過濾后，再經(jīng)過超濾循環(huán)，制得液體酶制劑；脫色投料比為發(fā)酵液活性炭=90 100 :1，攪拌轉(zhuǎn)速60 SOrpm，脫色時間 1 1.證；板框進(jìn)料待出濾液后，先啟動濾液上料泵打回流，濾液澄清后，打開袋式過濾器前的進(jìn)料閥門，關(guān)閉回流閥，將濾液打往超濾循環(huán)罐；超濾濃縮工序清洗3 4bar條件下內(nèi)循環(huán)10分鐘，超濾壓力穩(wěn)定4 ^ar。優(yōu)選的，一種產(chǎn)耐高溫α -淀粉酶菌種的優(yōu)化方法，包括下述的步驟
a.菌種的活化培養(yǎng)
平板培養(yǎng)基的配方牛肉膏0. 7%，蛋白胨1. 2%，氯化鈉0. 5%，瓊脂1. 8 %，余量為水，加熱以上的組份使其溶解，調(diào)PH在7. 2，裝瓶包扎，在0. IMpa下加熱到121°C滅菌30min，冷卻到45°C在無菌條件下倒平板或擺斜面，備用；
接種與培養(yǎng)由冷凍管菌種劃線接種于平板培養(yǎng)基，38°C，培養(yǎng)30h ；挑取單菌落接種于斜面培養(yǎng)基上，38°C，培養(yǎng)30h，保存?zhèn)溆茫?br> b.菌種的優(yōu)化
淀粉平板培養(yǎng)基的配方蛋白胨2%、酵母粉0. 5%、牛肉粉0. 7%、玉米淀粉1. 8%、葡萄糖 0. 4% (單滅)、瓊脂1. 8%、余量為水，調(diào)pH為7. 0，121°C下滅菌30分鐘，無菌室中倒平板， 冷卻備用；
優(yōu)化與培養(yǎng)將保存的菌種劃線于淀粉平板培養(yǎng)基上，38°C培養(yǎng)30h，選出淀粉水解圈大的單菌落，來進(jìn)行種子擴(kuò)培；
c.菌種的擴(kuò)培
種子培養(yǎng)基配方玉米淀粉10%、豆餅粉4%、硫酸銨1%、氯化鈣0. 05%、磷酸氫二鉀2%、 磷酸二氫鉀2%、消泡劑0. 05%、余量為水，調(diào)pH7. 0，在121 °C下滅菌時間40min，降溫到 36 0C -42°C，備用；
種子的擴(kuò)培將液體搖瓶種子液接入種子罐培養(yǎng)基中，接種量2. 5%, 38°C通風(fēng)攪拌培養(yǎng)40h，接入發(fā)酵罐中；
d.發(fā)酵后提取
發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液脫色、經(jīng)過板框過濾后，再經(jīng)過超濾循環(huán)，制得液體酶制劑；脫色投料比發(fā)酵液活性炭=90:1，攪拌轉(zhuǎn)速80 rpm，脫色時間1. 5小時；板框進(jìn)料待出液后， 先啟動濾液上料泵打回流，濾液澄清后，打開袋式過濾器前的進(jìn)料閥門，關(guān)閉回流閥，將濾液打往超濾循環(huán)罐；
超濾濃縮工序清洗4bar條件下內(nèi)循環(huán)10分鐘，超濾壓力穩(wěn)定恥虹。本發(fā)明的有益效果在于，采用本發(fā)明的優(yōu)化方法對產(chǎn)耐高溫α -淀粉酶-地衣芽孢桿菌10181的進(jìn)行優(yōu)化，該菌種所產(chǎn)的耐高溫α -淀粉酶其酶活達(dá)到llOOOu/ml，耐受溫度高達(dá)110°C，而采用現(xiàn)有方法生產(chǎn)的耐高溫α-淀粉酶其酶活一般在2500u/ml，耐受溫度為95°C，無論是從酶活還是從對溫度的耐受能力上看，都要優(yōu)于現(xiàn)有方法生產(chǎn)的α-淀粉酶，因此，本發(fā)明的優(yōu)化方法對產(chǎn)耐高溫α -淀粉酶-地衣芽孢桿菌10181進(jìn)行優(yōu)化，生產(chǎn)的酶其酶活力高，而且耐受高溫，大大的降低了酶的生產(chǎn)成本。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作更進(jìn)一步的說明，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人員更了解本發(fā)明，但并不因此限制本發(fā)明。實施例1
a.地衣芽孢桿菌10181的活化培養(yǎng)
平板培養(yǎng)基的配方牛肉膏0. 5%，蛋白胨1. 0%，氯化鈉0. 3%，瓊脂1. 8 %、余量為水，加熱溶解，調(diào)PH 6. 8，裝瓶包扎，在0. IMI^a加熱到121°C滅菌20min，冷卻到45_50°C無菌條件下倒平板或擺斜面，備用；
接種與培養(yǎng)由冷凍管菌種劃線接種于平板培養(yǎng)基，36°C，培養(yǎng)40h ；挑取單菌落接種于斜面培養(yǎng)基上，36°C，培養(yǎng)40h，保存?zhèn)溆茫?br> b.地衣芽孢桿菌10181的優(yōu)化
淀粉平板培養(yǎng)基的配方蛋白胨1%、酵母粉0. 1%、牛肉粉0. 3%、玉米淀粉0. 8%、葡萄糖 0. 2% (單滅)、瓊脂1. 5%、余量為水，調(diào)ρΗ6· 7，在121°C滅菌20分鐘，無菌室中倒平板，冷卻
優(yōu)化與培養(yǎng)將保存的菌種劃線于淀粉平板培養(yǎng)基上，36°C培養(yǎng)40h，選出淀粉水解圈大的單菌落，來進(jìn)行種子擴(kuò)培；
c.地衣芽孢桿菌10181的擴(kuò)培
種子培養(yǎng)基配方玉米淀粉5%，豆餅粉2%，硫酸銨0. 5%，氯化鈣0. 02%,磷酸氫二鉀 1. 3%，磷酸二氫鉀1. 3%，消泡劑0. 02%、余量為水，調(diào)ρΗ6· 5，在121°C滅菌40分鐘，降溫到 38°C，備用；
種子的擴(kuò)培將液體搖瓶種子液接入種子罐培養(yǎng)基中，接種量1%，36°C通風(fēng)攪拌培養(yǎng) 45h，接入發(fā)酵罐中；
d.發(fā)酵后提取發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液脫色、經(jīng)過板框過濾后，再經(jīng)過超濾循環(huán)，制得液體酶制劑；脫色投料比發(fā)酵液活性炭=100 :1，攪拌轉(zhuǎn)速60rpm，脫色時間1小時；板框進(jìn)料待出液后，先啟動濾液上料泵打回流，濾液澄清后，打開袋式過濾器前的進(jìn)料閥門，關(guān)閉回流閥，將濾液打往超濾循環(huán)罐；
超濾濃縮工序清洗Jbar條件下內(nèi)循環(huán)10分鐘，超濾壓力穩(wěn)定4bar。耐高溫α -淀粉酶酶活力檢測根據(jù)GB 8275-2009《食品添加劑α -淀粉酶制劑》， 酶活力達(dá)到11200u/ml，耐受溫度高達(dá)110°C。實施例2
a.地衣芽孢桿菌10181的活化培養(yǎng)
平板培養(yǎng)基的配方牛肉膏0. 7%，蛋白胨1. 2%，氯化鈉0. 5%，瓊脂1. 8%、余量為水，加熱溶解，調(diào)PH在7. 2，裝瓶包扎，在0. IMpa下加熱到121°C滅菌30min，冷卻到48°C無菌條件下倒平板或擺斜面，備用；
接種與培養(yǎng)由冷凍管菌種劃線接種于平板培養(yǎng)基，38°C，培養(yǎng)30h ；挑取單菌落接種于斜面培養(yǎng)基上，38°C，培養(yǎng)30h，保存?zhèn)溆茫?br> b.地衣芽孢桿菌10181的優(yōu)化
淀粉平板培養(yǎng)基的配方蛋白胨2%，酵母粉0. 5%、牛肉粉0. 7%、玉米淀粉1. 8%、葡萄糖 0. 4% (單滅)、瓊脂1. 8%、余量為水，調(diào)pH 7. 0，在121°C下滅菌30分鐘，無菌室中倒平板，冷卻備用；
優(yōu)化與培養(yǎng)將保存的菌種劃線于淀粉平板培養(yǎng)基上，38°C培養(yǎng)30h，選出淀粉水解圈大的單菌落，來進(jìn)行種子擴(kuò)培；
c.地衣芽孢桿菌10181的擴(kuò)培
種子培養(yǎng)基配方玉米淀粉10%，豆餅粉4%，硫酸銨1%，氯化鈣0. 05%,磷酸氫二鉀2%， 磷酸二氫鉀2%，消泡劑0. 05%、余量為水，調(diào)pH7. 0，在121°C下滅菌40分鐘，降溫到38°C，備用；
種子的擴(kuò)培將液體搖瓶種子液接入種子罐培養(yǎng)基中，接種量2. 5%，42°C通風(fēng)攪拌培養(yǎng)40h，接入發(fā)酵罐中；
d.發(fā)酵后提取
發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液脫色、經(jīng)過板框過濾后，再經(jīng)過超濾循環(huán)，制得液體酶制劑；脫色投料比發(fā)酵液活性炭=90:1，攪拌轉(zhuǎn)速80 rpm，脫色時間1. 5小時；板框進(jìn)料待出液后， 先啟動濾液上料泵打回流，濾液澄清后，打開袋式過濾器前的進(jìn)料閥門，關(guān)閉回流閥，將濾液打往超濾循環(huán)罐；
超濾濃縮工序清洗4bar條件下內(nèi)循環(huán)10分鐘，超濾壓力穩(wěn)定恥虹。耐高溫α -淀粉酶酶活力檢測根據(jù)GB 8275-2009《食品添加劑α -淀粉酶制劑》， 酶活力達(dá)到11400u/ml，耐受溫度高達(dá)110°C。實施例3
a.地衣芽孢桿菌10181的活化培養(yǎng)
平板培養(yǎng)基的配方牛肉膏0. 7%，蛋白胨1. 2%，氯化鈉0. 5%，瓊脂1. 8%、余量為水，加熱溶解，調(diào)PH在8. 0，裝瓶包扎，在0. IMpa下加熱到121°C滅菌30min，冷卻到48°C無菌條件下倒平板或擺斜面，備用；
接種與培養(yǎng)由冷凍管菌種劃線接種于平板培養(yǎng)基，38°C，培養(yǎng)30h ；挑取單菌落接種于斜面培養(yǎng)基上，38°C，培養(yǎng)30h，保存?zhèn)溆茫?br> b.地衣芽孢桿菌10181的優(yōu)化
淀粉平板培養(yǎng)基的配方蛋白胨2%，酵母粉0. 5%、牛肉粉0. 7%、玉米淀粉1. 8%、葡萄糖 0. 4% (單滅)、瓊脂1. 8%、余量為水，調(diào)pH 8. 0，在121°C下滅菌30分鐘，無菌室中倒平板，冷卻備用；
優(yōu)化與培養(yǎng)將保存的菌種劃線于淀粉平板培養(yǎng)基上，38°C培養(yǎng)30h，選出淀粉水解圈大的單菌落，來進(jìn)行種子擴(kuò)培；
c.地衣芽孢桿菌10181的擴(kuò)培
種子培養(yǎng)基配方玉米淀粉10%，豆餅粉4%，硫酸銨1%，氯化鈣0. 05%，磷酸氫二鉀2%， 磷酸二氫鉀2%，消泡劑0. 05%、余量為水，調(diào)pH8. 0，在121°C下滅菌40分鐘，降溫到38°C，備用；
種子的擴(kuò)培將液體搖瓶種子液接入種子罐培養(yǎng)基中，接種量2. 5%，38°C通風(fēng)攪拌培養(yǎng)40h，接入發(fā)酵罐中； d.發(fā)酵后提取
發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液脫色、經(jīng)過板框過濾后，再經(jīng)過超濾循環(huán)，制得液體酶制劑；脫色投料比發(fā)酵液活性炭=90:1，攪拌轉(zhuǎn)速80 rpm，脫色時間1. 5小時；板框進(jìn)料待出液后， 先啟動濾液上料泵打回流，濾液澄清后，打開袋式過濾器前的進(jìn)料閥門，關(guān)閉回流閥，將濾液打往超濾循環(huán)罐；
超濾濃縮工序清洗4bar條件下內(nèi)循環(huán)10分鐘，超濾壓力穩(wěn)定恥虹。耐高溫α -淀粉酶酶活力檢測根據(jù)GB 8275-2009《食品添加劑α -淀粉酶制劑》， 酶活力達(dá)到5000u/ml，耐受溫度高達(dá)90°C。實施例4
a.地衣芽孢桿菌10181的活化培養(yǎng)
平板培養(yǎng)基的配方牛肉膏0. 2%、蛋白胨0. 5%、氯化鈉0. 1%、瓊脂1. 5%、余量為水，加熱以上的組份至其溶解，調(diào)PH在6. 5之間，裝瓶包扎，在0. IMpa下加熱到120°C 122°C滅菌 20 30min，冷卻到15 50°C在無菌條件下倒平板，備用；
優(yōu)化與培養(yǎng)由冷凍管菌種劃線接種于平板培養(yǎng)基，27°C 30°C，培養(yǎng)1 2天；挑取單菌落36 40°C，培養(yǎng)1 2天，保存?zhèn)溆茫?b.地衣芽孢桿菌10181的優(yōu)化
淀粉平板培養(yǎng)基的配方蛋白胨0. 5%，酵母粉0. 1%、牛肉粉0. 1%、玉米淀粉0. 4 %、瓊脂 1. 5%、余量為水，調(diào)pH6. 5，在121°C下滅菌20 30min,
優(yōu)化與培養(yǎng)將保存的菌種劃線于淀粉平板培養(yǎng)基上，36°C 42°C°C培養(yǎng)30h，選出淀粉水解圈大的單菌落，來進(jìn)行種子擴(kuò)培；
c.地衣芽孢桿菌10181的擴(kuò)培
種子培養(yǎng)基配方玉米淀粉4%，豆餅粉1%，硫酸銨0. 1%，磷酸氫二鉀0. 5%，磷酸二氫鉀 0. 5%，消泡劑0.05%、余量為水，調(diào)pH6. 5，在121°C下滅菌40 min ；
種子的擴(kuò)培將液體搖瓶種子液接入種子罐培養(yǎng)基中，接種量2. 5%，38°C通風(fēng)攪拌培養(yǎng)40h，接入發(fā)酵罐中；
d.發(fā)酵后提取發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液脫色、經(jīng)過板框過濾后，再經(jīng)過超濾循環(huán)，制得液體酶制劑；脫色投料比為發(fā)酵液活性炭=100 :1，攪拌轉(zhuǎn)速40rpm，脫色時間0. 5h ；板框進(jìn)料待出濾液后，先啟動濾液上料泵打回流，濾液澄清后，打開袋式過濾器前的進(jìn)料閥門， 關(guān)閉回流閥，將濾液打往超濾循環(huán)罐；
超濾濃縮工序清洗Jbar條件下內(nèi)循環(huán)10分鐘，超濾壓力穩(wěn)定2bar。耐高溫α -淀粉酶酶活力檢測根據(jù)GB 8275-2009《食品添加劑α -淀粉酶制劑》， 酶活力達(dá)到2500u/ml，耐受溫度高達(dá)90°C。但是酶液后提取時間長，超濾較慢，顏色較深。
權(quán)利要求
1.一種產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶菌種的優(yōu)化方法，包括下述的步驟a.菌種的活化培養(yǎng)將冷凍管保存的地衣芽孢桿菌10181菌種拿出活化，活化培養(yǎng)基牛肉膏0. 3 1. 0%、蛋白胨0. 7 1. 5%、氯化鈉0. 1 0. 8%、瓊脂1. 5 2. 0%、余量為水， 加熱以上的組份至其溶解，調(diào)PH在6. 5 7. 5之間，裝瓶包扎，在0. IMpa下加熱到120°C 122°C滅菌20 30min，冷卻到15 50°C在無菌條件下倒平板或擺斜面，備用；由冷凍管菌種劃線接種于平板培養(yǎng)基，27°C 30°C，培養(yǎng)1 2天；挑取單菌落36 40°C，培養(yǎng)1 2 天，保存?zhèn)溆?；b.菌種的優(yōu)化將保存的菌種劃線于淀粉平板培養(yǎng)基上蛋白胨1 洲，酵母粉0.1 0. 8%、牛肉粉0. 1 0. 8%、玉米淀粉0. 5 1. 8%、葡萄糖0. 1 0. 5%、瓊月旨1. 5 2. 0%、余量為水，調(diào)PH6. 5 7. 5，在121°C下滅菌20 30min，36°C 42°C培養(yǎng)1 1. 5天，選出淀粉水解圈大的單菌落，來進(jìn)行種子擴(kuò)培；c.菌種的擴(kuò)培玉米淀粉5 10%，豆餅粉1 4%，硫酸銨0.1 1%，氯化鈣0. 02 0. 08%，磷酸氫二鉀1 2%，磷酸二氫鉀1 2%，消泡劑0. 02 0. 08%、余量為水，調(diào)pH6. 5 7.5，在1211下滅菌40 min，將液體搖瓶種子液接入種子罐培養(yǎng)基中，接種量為1 5%， 36°C 42°C培養(yǎng)1 2天；d.發(fā)酵后提取發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液脫色、經(jīng)過板框過濾后，再經(jīng)過超濾循環(huán)，制得液體酶制劑；脫色投料比為發(fā)酵液活性炭=90 100 :1，攪拌轉(zhuǎn)速60 SOrpm，脫色時間 1 1.證；板框進(jìn)料待出濾液后，先啟動濾液上料泵打回流，濾液澄清后，打開袋式過濾器前的進(jìn)料閥門，關(guān)閉回流閥，將濾液打往超濾循環(huán)罐；超濾濃縮工序清洗3 4bar條件下內(nèi)循環(huán)10分鐘，超濾壓力穩(wěn)定4 ^ar。
2.如權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶菌種的優(yōu)化方法，包括下述的步驟a.菌種的活化培養(yǎng)平板培養(yǎng)基的配方牛肉膏0. 7%，蛋白胨1. 2%，氯化鈉0. 5%，瓊脂1. 8 %、余量為水，加熱以上的組份使其溶解，調(diào)PH在7. 2，裝瓶包扎，在0. IMpa下加熱到121°C滅菌30min，冷卻到45°C在無菌條件下倒平板或擺斜面，備用；接種與培養(yǎng)由冷凍管菌種劃線接種于平板培養(yǎng)基，38°C，培養(yǎng)30h ；挑取單菌落接種于斜面培養(yǎng)基上，38°C，培養(yǎng)30h，保存?zhèn)溆?；b.菌種的優(yōu)化淀粉平板培養(yǎng)基的配方蛋白胨2%、酵母粉0. 5%、牛肉粉0. 7%、玉米淀粉1. 8%、葡萄糖 0.4% (單滅)、瓊脂1.8%、余量為水，調(diào)pH為7.0，121°C下滅菌30分鐘，無菌室中倒平板， 冷卻備用；優(yōu)化與培養(yǎng)將保存的菌種劃線于淀粉平板培養(yǎng)基上，38°C培養(yǎng)30h，選出淀粉水解圈大的單菌落，來進(jìn)行種子擴(kuò)培；c.菌種的擴(kuò)培種子培養(yǎng)基配方玉米淀粉10%、豆餅粉4%、硫酸銨1%、氯化鈣0. 05%、磷酸氫二鉀2%、 磷酸二氫鉀2%、消泡劑0. 05%、余量為水，調(diào)pH7. 0，在121 °C下滅菌時間40min，降溫到 36 0C -42°C，備用；種子的擴(kuò)培將液體搖瓶種子液接入種子罐培養(yǎng)基中，接種量2. 5%, 38°C通風(fēng)攪拌培養(yǎng)40h，接入發(fā)酵罐中；d.發(fā)酵后提取發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液脫色、經(jīng)過板框過濾后，再經(jīng)過超濾循環(huán)，制得液體酶制劑；脫色投料比發(fā)酵液活性炭=90:1，攪拌轉(zhuǎn)速80 rpm，脫色時間1. 5小時；板框進(jìn)料待出液后， 先啟動濾液上料泵打回流，濾液澄清后，打開袋式過濾器前的進(jìn)料閥門，關(guān)閉回流閥，將濾液打往超濾循環(huán)罐；超濾濃縮工序清洗4bar條件下內(nèi)循環(huán)10分鐘，超濾壓力穩(wěn)定恥虹。
全文摘要
本發(fā)明屬于產(chǎn)酶菌種領(lǐng)域，具體涉及一種產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶-地衣芽孢桿菌10181的優(yōu)化方法。一種產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶菌種的優(yōu)化方法，包括下述的步驟a.菌種的活化培養(yǎng)；b.菌種的優(yōu)化；c.菌種的擴(kuò)培；d.發(fā)酵后提取。采用本發(fā)明的優(yōu)化方法對產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶-地衣芽孢桿菌10181的進(jìn)行優(yōu)化，該菌種所產(chǎn)的耐高溫α-淀粉酶其酶活達(dá)到11000u/ml，耐受溫度高達(dá)110℃，而采用現(xiàn)有方法生產(chǎn)的耐高溫α-淀粉酶其酶活一般在2500u/ml，耐受溫度為95℃，因此，無論是從酶活還是從對溫度的耐受能力上看，都要優(yōu)于現(xiàn)有方法生產(chǎn)的α-淀粉酶，而且采用本發(fā)明的優(yōu)化方法大大的降低了酶的生產(chǎn)成本。
文檔編號C12N1/20GK102363761SQ20111036586
公開日2012年2月29日 申請日期2011年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月18日
發(fā)明者周穎, 尹彬彬, 陳建慧, 黃家英 申請人:山東安克生物工程有限公司