專利名稱：用于分離小鼠脂肪干細(xì)胞的消化液的制作方法
用于分離小鼠脂肪干細(xì)胞的消化液本發(fā)明涉及動(dòng)物干細(xì)胞的分離技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于分離小鼠脂肪干細(xì)胞的消化液。脂肪干細(xì)胞具有多向分化的潛能，在體外可定向分化為脂肪、成骨、軟骨、肝臟、心肌細(xì)胞等，在人源方面，相比于骨髓干細(xì)胞，其具有取材容易、獲取量大、減少取材時(shí)供體痛苦的優(yōu)點(diǎn)，因此在再生醫(yī)學(xué)上具有重要的意義。小鼠作為一個(gè)重要的模式動(dòng)物，在基礎(chǔ)研究方面有著廣泛的應(yīng)用，但是小鼠脂肪干細(xì)胞的體外培養(yǎng)卻一直是個(gè)難題，體現(xiàn)在從分離到培養(yǎng)的各個(gè)方面，小鼠脂肪干細(xì)胞的分離一般采用酶消化法，作為分離培養(yǎng)的初始階段，若沒(méi)有采用合適的消化體系，往往導(dǎo)致細(xì)胞后期培養(yǎng)的諸多問(wèn)題。目前也有一些已報(bào)道的消化液，較簡(jiǎn)單有用含牛血清白蛋白(BSA)的杜氏磷酸鹽緩沖液(DPBS)溶解，膠原酶終濃度為0. 075%或0. 1%，較復(fù)雜的配方有0. 膠原酶， 1-2% BSA、200nM 腺苷酸、50mg/ml 的葡萄糖。上述消化液的不足之處在于前者經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在相同條件下，前者原代后傳代4 天即已充分老化無(wú)法維持。后者消化液對(duì)其可實(shí)踐性沒(méi)有做詳細(xì)探究，但其成分相對(duì)復(fù)雜， 并且其中腺苷酸的價(jià)格高昂，提高了消化液的成本。本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種成分簡(jiǎn)單，效果明顯的消化液，能夠高效的分離出小鼠的脂肪干細(xì)胞，使有利于其后期的長(zhǎng)期培養(yǎng)。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是，一種用于分離小鼠脂肪干細(xì)胞的消化液，所述消化液的組成成分為10%的胎牛血清(FBQ，0.09%的膠原酶I，余量為 DMEM/F12。通過(guò)針對(duì)現(xiàn)有方案中含1 % BSA的DPBS消化液存在的問(wèn)題以及添加葡萄糖和腺苷酸進(jìn)入消化液必要性的綜合考慮，我們認(rèn)為，前者的主要問(wèn)題在于將近一個(gè)小時(shí)的消化過(guò)程中，僅僅添加BSA不能很好的維持細(xì)胞在此過(guò)程中的營(yíng)養(yǎng)需求以及維持其活性。因此后期的培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞在第一代便出現(xiàn)老化，很可能與前期的損傷有關(guān)。為此選用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，同時(shí)添加一定量的FBS來(lái)溶解膠原酶以提供細(xì)胞在長(zhǎng)時(shí)間消化過(guò)程中的營(yíng)養(yǎng)消耗，并維持細(xì)胞的活性。在此體系中膠原酶以及FBS的濃度對(duì)細(xì)胞的分離率以及細(xì)胞的活性有著重要的影響，F(xiàn)BS的濃度過(guò)高或膠原酶濃度過(guò)低會(huì)影響細(xì)胞的分離率，反之則會(huì)影響細(xì)胞的活性，在代數(shù)低的時(shí)候也許體現(xiàn)不是很明顯，隨著代數(shù)的增加則會(huì)明顯的體現(xiàn)出來(lái)。本發(fā)明的有益效果是1.消化液成分簡(jiǎn)單，來(lái)源方便、成本低；
2.能夠有效的從小鼠的脂肪組織中分離出脂肪干細(xì)胞；3.能夠很好的維持細(xì)胞的活性，為細(xì)胞的后期培養(yǎng)和進(jìn)一步的科學(xué)研究奠定了基石出。本實(shí)施例按各組成成分的不同配比設(shè)計(jì)了下述三個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組取同樣量的脂肪組織，分別用以下三種不同配比的消化液進(jìn)行消化。三種消化液的具體成分如下(IOml體系)；⑴消化液一
成分比例添加量胎牛血清00膠原酶I0. 1%o.oigDMEM/F12IOml(2)消化液
成分比例添加量胎牛血清10%Iml膠原酶I0. 09%0. 009gDMEM/F129ml(3)消化液三
權(quán)利要求
1. 一種用于分離小鼠脂肪干細(xì)胞的消化液，其特征在于，所述消化液的組成成分為 10%的胎牛血清，0. 09%的膠原酶I，余量為DMEM/F12。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于分離小鼠脂肪干細(xì)胞的消化液。所述消化液的組成成分為10％的胎牛血清，0.09％的膠原酶I，余量為DMEM/F12。本發(fā)明的成分簡(jiǎn)單，來(lái)源方便，成本低；能夠有效的從小鼠的脂肪組織中分離出脂肪干細(xì)胞；能夠很好的維持細(xì)胞的活性，為細(xì)胞的后期培養(yǎng)和進(jìn)一步的科學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C12N5/0775GK102391987SQ20111036611
公開(kāi)日2012年3月28日 申請(qǐng)日期2011年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月17日
發(fā)明者劉星, 吳蓉花, 周娜汝, 張宇, 張運(yùn)海, 李運(yùn)生, 桂濤, 章孝榮, 陳建文, 陶佳, 魏超 申請(qǐng)人:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)