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一種黑曲霉及其應(yīng)用及發(fā)酵制備檸檬酸的方法

文檔序號:532192閱讀:457來源:國知局
專利名稱:一種黑曲霉及其應(yīng)用及發(fā)酵制備檸檬酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種黑曲霉(Aspergillus niger)(該菌株于2011年10月14日被保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號,中國科學(xué)院微生物研究所,郵政編碼100101)(保藏單位的縮寫為CGMCC),保藏編號為CGMCC534!3)及其應(yīng)用,以及采用該黑曲霉作為發(fā)酵菌種發(fā)酵制備檸檬酸的方法。
背景技術(shù)
檸檬酸是有機酸中的第一大酸,由于物理、化學(xué)等方面的優(yōu)異性能,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化學(xué)、電子、紡織、石油、皮革、建筑、攝影、塑料、鑄造和陶瓷等工業(yè)領(lǐng)域。檸檬酸的生產(chǎn)方法主要有兩種一種是從天然含檸檬酸的果汁中提??;另一種是用發(fā)酵法進行生產(chǎn),目前工業(yè)上主要以黑曲霉發(fā)酵法生產(chǎn)檸檬酸為主。具體的做法是將黑曲霉接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中,發(fā)酵培養(yǎng)基中含有淀粉質(zhì)原料酶解產(chǎn)物和氮源,經(jīng)過發(fā)酵和固液分離得到檸檬酸的溶液。為了提高檸檬酸的生產(chǎn)能力,進行菌株改良,開發(fā)具有高產(chǎn)率的菌株是重點的研究方向。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了提高黑曲霉發(fā)酵法生產(chǎn)檸檬酸的生產(chǎn)能力,提供一種新的黑曲霉菌株及采用該黑曲霉作為發(fā)酵菌種發(fā)酵制備檸檬酸的方法。為了實現(xiàn)上述目的,一方面,本發(fā)明提供了一種黑曲霉,其特征在于,所述黑曲霉的保藏編號為CGMCC5343。另一方面,本發(fā)明提供了一種如上所述的黑曲霉在發(fā)酵制備檸檬酸中的應(yīng)用。第三方面,本發(fā)明提供了一種發(fā)酵制備檸檬酸的方法,其特征在于,所述方法包括在生成檸檬酸的條件下,將如上所述的黑曲霉接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵,得到發(fā)酵液。本發(fā)明提供的黑曲霉,保藏編號為CGMCC5343,采用該黑曲霉作為發(fā)酵菌種發(fā)酵制備檸檬酸,可提高終點檸檬酸含量和糖酸轉(zhuǎn)化率。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將在隨后的具體實施方式
部分予以詳細說明。生物保藏本發(fā)明的菌株被命名為黑曲霉(Aspergillus niger),并于2011年10月14日被保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1 號院3號,中國科學(xué)院微生物研究所,郵政編碼100101)(保藏單位的縮寫為CGMCC),保藏編號為 CGMCC5;343。
具體實施例方式以下對本發(fā)明的具體實施方式
進行詳細說明。應(yīng)當(dāng)理解的是,此處所描述的具體實施方式
僅用于說明和解釋本發(fā)明,并不用于限制本發(fā)明。一方面,本發(fā)明提供了一種黑曲霉,黑曲霉的保藏編號為CGMCC5343。將該黑曲霉菌株分別接種在察氏瓊脂培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),并定期在顯微鏡下觀察,發(fā)現(xiàn)
在察氏瓊脂培養(yǎng)基上生長緩慢,35°C培養(yǎng)7d,菌落直徑25-30mm,分生孢子梗較長,分生孢子著生稀疏。在PDA培養(yǎng)基上生長較快,35°C培養(yǎng)7d,菌落直徑60-70mm,平坦,具放射狀皺紋, 質(zhì)地絲絨狀,顏色炭黑色,有少量無色滲出液產(chǎn)生,反面淡黃褐色。分生孢子頭球型,直徑 50-80 μ m ;孢梗莖直徑10-15 μ m,壁平滑;頂囊球型,直徑30-40 μ m,表面全面可育;產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)雙層,?;?0-12 X 2-3 μ m ;瓶梗6_8 X 2_3 μ m ;分生孢子球型,直徑3_4 μ m,壁粗糙。本發(fā)明中的黑曲霉菌株是通過將黑曲霉Co827作為出發(fā)菌株,經(jīng)等離子體誘變技術(shù)得到的。該等離子體誘變技術(shù)是將出發(fā)菌株用0.85%生理鹽水從培養(yǎng)基上洗脫下來,用生理鹽水調(diào)節(jié)孢子懸液濃度至IO5-IO6個/mL。取孢子懸液IOul,將其滴加在滅菌冷卻后的載玻片上。將制得的樣品載片置于離子注入機載臺上進行氦離子注入誘變;射頻電壓為 200v、13. 56MHz,射流溫度 30士3°C ;輻照時間為 60s_210s。將處理后的載片用0. 5mL生理鹽水洗脫,涂布于篩選的固體培養(yǎng)基(普通PDA培養(yǎng)基瓊脂加量4%,另加檸檬酸30% )上,35°C培養(yǎng)2天,在致死率90%以上的平板上挑取單菌落,在無菌條件下將其轉(zhuǎn)接入固體培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng),35°C培養(yǎng)7-8天。對獲得的菌株進行搖瓶篩選,最后獲得一株黑曲霉菌株,即本發(fā)明的黑曲霉,保藏編號為 CGMCC5;343。另一方面,本發(fā)明提供了如上所述的黑曲霉在發(fā)酵制備檸檬酸中的應(yīng)用。第三方面,本發(fā)明提供了一種發(fā)酵制備檸檬酸的方法,所述方法包括在生成檸檬酸的條件下,將如上所述的黑曲霉接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵,得到發(fā)酵液。由于本發(fā)明提供的制備檸檬酸的方法相對于現(xiàn)有技術(shù)的改進主要在于使用本發(fā)明的黑曲霉作為發(fā)酵菌種,因此對于本發(fā)明方法的其他條件和操作沒有特別的要求,例如, 發(fā)酵條件可以為本領(lǐng)域常規(guī)的發(fā)酵條件,例如,發(fā)酵的條件可以包括溫度為30-40°C,優(yōu)選為35-37°C ;起始pH值為4-5 ;通氣量為0. 1-1體積(體積·分鐘),優(yōu)選為0. 3-0. 8體積(體積·分鐘);時間為50-75小時,優(yōu)選為55-65小時。發(fā)酵過程就其本質(zhì)來說是由微生物參與的生物化學(xué)反應(yīng)過程,因此微生物細胞的數(shù)量、狀態(tài)、代謝情況對產(chǎn)物的生物合成有著重要的影響。菌體濃度的大小對發(fā)酵產(chǎn)物的產(chǎn)率有著重要的影響。理論上菌體濃度越大,產(chǎn)物的產(chǎn)量也越大,但是菌體濃度過高會產(chǎn)生其他影響,如營養(yǎng)物質(zhì)消耗過快,發(fā)酵液中的營養(yǎng)成分發(fā)生明顯的改變,如有毒物質(zhì)的積累等,這些可能改變菌體的代謝途徑。因此,本發(fā)明中,以每升發(fā)酵培養(yǎng)基為基準,黑曲霉的接種量優(yōu)選為1. 8 X 107-3. 5 X IO7個孢子,進一步優(yōu)選為2. 2 X 107-2. 6 X IO7個孢子。孢子的數(shù)量可以通過本領(lǐng)域公知的方法測定,例如,通過血球計數(shù)板計數(shù)。本發(fā)明中,發(fā)酵培養(yǎng)基為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的概念,指微生物發(fā)酵所需的供微生物生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。發(fā)酵液也為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的概念,指接入微生物菌株的液體培養(yǎng)基(該液體培養(yǎng)基也即本發(fā)明中所稱發(fā)酵培養(yǎng)基),經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)后所得產(chǎn)物。根據(jù)本發(fā)明,對發(fā)酵培養(yǎng)基的成分沒有特別的要求,只要可以用于檸檬酸發(fā)酵的發(fā)酵培養(yǎng)基即可。優(yōu)選地,發(fā)酵培養(yǎng)基含有由淀粉質(zhì)原料酶解得到的酶解產(chǎn)物,且優(yōu)選由淀粉質(zhì)原料酶解得到的酶解產(chǎn)物的量占發(fā)酵培養(yǎng)基總量的80-100重量%。一般地,淀粉質(zhì)原料酶解得到的產(chǎn)物稱為液化液,液化液經(jīng)固液分離得到酶解殘渣和液化清液,通常可以將液化清液用于制備發(fā)酵培養(yǎng)基,也可以將液化清液與液化液混合后用于制備發(fā)酵培養(yǎng)基。 因此,本發(fā)明中,所述由淀粉質(zhì)原料酶解得到的酶解產(chǎn)物包括上述經(jīng)固液分離得到的液化清液,也包括未經(jīng)固液分離的液化液,還包括上述二者的混合物。發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)選由液化液和液化清液與水混合或不與水混合得到,且進一步優(yōu)選以發(fā)酵培養(yǎng)基的總重量為100重量份為基準,液化清液的用量為80-85重量份,液化液的用量為15-20重量份。根據(jù)本發(fā)明,液化清液可以通過多種方法制備得到,例如,可以通過如下方法制備得到將淀粉質(zhì)原料粉碎,將粉碎后的產(chǎn)物進行酶解,酶解得到的產(chǎn)物再經(jīng)固液分離,得到液化清液和酶解殘渣,固液分離的條件使酶解殘渣的固含量為45-55重量%,優(yōu)選為49-51 重量%。根據(jù)本發(fā)明,淀粉質(zhì)原料可以為本領(lǐng)域公知的各種可以用于酶解、發(fā)酵制備檸檬酸的含有淀粉的原料,例如,可以選自玉米、薯類(如木薯)和小麥中的一種或幾種,優(yōu)選情況下,所述淀粉質(zhì)原料為玉米。所述酶解步驟可以通過本領(lǐng)域常用的方法完成,比如向粉碎產(chǎn)物中添加產(chǎn)酶微生物和/或酶,在產(chǎn)酶微生物的生長溫度和/或酶有活力的溫度下保溫完成。所述產(chǎn)酶微生物為能夠分泌淀粉酶的產(chǎn)酶微生物。所述酶包括淀粉酶。由于微生物生長會產(chǎn)生副產(chǎn)物,因此優(yōu)選直接加入酶。所述酶的用量越多越好,出于成本考慮,優(yōu)選以每克粉碎后的粉碎產(chǎn)物的干重計,淀粉酶的用量為15-50個酶活力單位。本發(fā)明中,酶活力單位的定義為在pH值為6. 0、溫度為70°C的條件下,1分鐘將1 毫克淀粉轉(zhuǎn)化為還原糖所需的酶量為一個酶活力單位。酶解的溫度可以在很大范圍內(nèi)改變,優(yōu)選為70_105°C,更優(yōu)選為90-95°C。酶解的時間理論上越長越好,考慮到設(shè)備利用率,優(yōu)選酶解的時間為90-150分鐘,更優(yōu)選為 100-120分鐘。酶解的pH值可以在很大范圍內(nèi)改變,優(yōu)選為5. 0-7. 0,更優(yōu)選為5. 4-6. 2,進一步優(yōu)選為5. 8-6. 0。淀粉酶是指能夠分解淀粉糖苷鍵的一類酶的總稱,淀粉酶一般包括α -淀粉酶、 β -淀粉酶、糖化酶和異淀粉酶。根據(jù)本發(fā)明,優(yōu)選使用α -淀粉酶和/或異淀粉酶。根據(jù)本發(fā)明,固液分離的方法與裝置為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知,例如,壓濾機或離心機。黑曲霉可以采用常規(guī)的方法接種,例如,在被接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中之前,將黑曲霉經(jīng)過種子培養(yǎng),之后將得到的種子液加入到發(fā)酵培養(yǎng)基中。黑曲霉種子培養(yǎng)的程度可以通過取樣顯微鏡鏡檢、酸度測定和PH測定來確定,當(dāng)ρΗ< 2. 0、酸度> lg/100mL、菌球大小均勻、菌絲粗壯伸出時停止培養(yǎng)。優(yōu)選情況下,種子培養(yǎng)的方法包括將黑曲霉接種在黑曲霉培養(yǎng)液中進行培養(yǎng), 黑曲霉培養(yǎng)液中含有10-17重量%的玉米粉,以每升培養(yǎng)液為基準,黑曲霉的接種量為 2X 108-3X 108 個孢子。將經(jīng)過種子培養(yǎng)得到的種子液加入到發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵,通常用接入發(fā)酵培養(yǎng)基的種子液的體積占接入種子液后發(fā)酵培養(yǎng)基的體積的百分比來表示黑曲霉的接種量, 當(dāng)接入發(fā)酵培養(yǎng)基的種子液的體積占接入種子液后發(fā)酵培養(yǎng)基的體積的8-11 %時,能夠滿足以每升發(fā)酵培養(yǎng)基為基準,黑曲霉的接種量在2. 2X 107-2.6X 107個孢子范圍內(nèi),因此, 接入發(fā)酵培養(yǎng)基的黑曲霉的優(yōu)選的接種量可以表示為接種量為8-11%。根據(jù)本發(fā)明,黑曲霉培養(yǎng)液的制備方法沒有特別的限制,只要得到的培養(yǎng)液能夠適用于黑曲霉菌種的生長即可。根據(jù)本發(fā)明,黑曲霉的培養(yǎng)條件可以在很大范圍內(nèi)改變,例如培養(yǎng)的條件可以包括培養(yǎng)的溫度為30-38°C,優(yōu)選為35-37°C ;起始pH值為5_6 ;通氣量為0. 1-1體積(體積·分鐘),優(yōu)選為0. 3-0. 8體積(體積·分鐘)。術(shù)語“通氣量”一般以通氣比來表示,通常以每分鐘內(nèi)通過單位體積培養(yǎng)液的空氣體積比來表示(ν/ν ·π η),例如通氣比為1 0. 1-1,簡稱通氣量為0. 1-1體積(體積 分鐘)。培養(yǎng)的設(shè)備為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知,例如,可以使用發(fā)酵罐進行培養(yǎng)。按照本發(fā)明的方法制備得到的發(fā)酵產(chǎn)物檸檬酸可以用常規(guī)的方法,根據(jù)不同工業(yè)產(chǎn)品的要求分離并精制,比如中和、酸解、脫色、濃縮、結(jié)晶、包裝。以上詳細描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方式,但是,本發(fā)明并不限于上述實施方式中的具體細節(jié),在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi),可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行多種簡單變型,這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護范圍。另外需要說明的是,在上述具體實施方式
中所描述的各個具體技術(shù)特征,在不矛盾的情況下,可以通過任何合適的方式進行組合,為了避免不必要的重復(fù),本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。此外,本發(fā)明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合,只要其不違背本發(fā)明的思想,其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。實施例以下的實施例將對本發(fā)明作進一步的說明,但并不因此限制本發(fā)明。在以下實施例中根據(jù)GB 1987-2007標(biāo)準檢測所得檸檬酸溶液的濃度(即終點檸檬酸含量)。單罐供酸量=檸檬酸溶液的濃度X檸檬酸溶液的體積。轉(zhuǎn)化率(% )=單罐供酸量/總糖的重量Χ100%,其中總糖的重量包括種子罐用糖重量和發(fā)酵罐用糖重量。以下實施例使用的黑曲霉菌株A均為本發(fā)明的上述黑曲霉菌株(該菌株于2011 年10月14日被保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號,中國科學(xué)院微生物研究所,郵政編碼100101)(保藏單位的縮寫為CGMCC),保藏編號為CGMCC5343)。實施例1本實施例用于說明本發(fā)明提供的發(fā)酵制備檸檬酸的方法。(1)將收獲的56千克玉米進行粉碎,得到平均粒子直徑為400微米的粉碎后產(chǎn)物。(2)將粉碎后產(chǎn)物按M重量%的濃度調(diào)漿,相對于每克粉碎后產(chǎn)物,加入20個酶活力單位的淀粉酶(諾維信公司,α-淀粉酶,本發(fā)明實施例中均為此淀粉酶),進入噴射器,在93°C、pH為5. 9的條件下酶解100分鐘得到產(chǎn)物。(3)將酶解得到的產(chǎn)物通過用液壓式板框壓濾機進行壓濾,分離出液化清液和酶解殘渣,其中,酶解殘渣的固含量為51重量%。(4)配制發(fā)酵培養(yǎng)基,將180. 5千克的上述液化清液、35. 5千克的酶解得到的產(chǎn)物滅菌后加入到300L的發(fā)酵罐中,得到發(fā)酵培養(yǎng)基。(5)將步驟O)中的部分酶解得到的產(chǎn)物,加水稀釋至總糖為10重量%,得到培養(yǎng)液,將培養(yǎng)液投入種子罐,加熱到121°C消毒,維持30分鐘后快速降溫至36°C,接入黑曲霉菌株A,每升培養(yǎng)液中黑曲霉的接種量為2 X IO8個孢子。在35°C、起始pH值為5、0. 3體積(體積 分鐘)的通氣條件下進行菌種培養(yǎng);通過取樣顯微鏡鏡檢、酸度測定和PH測定對黑曲霉的生長進行觀察,當(dāng)PH <2.0、酸度> lg/100mL、菌球大小均勻、菌絲粗壯伸出時, 停止培養(yǎng)。(6)將步驟( 培養(yǎng)的黑曲霉菌種加入到步驟的發(fā)酵罐中開始發(fā)酵,接種量為10%,發(fā)酵條件包括溫度為35°C,起始PH值為5,通氣量為0. 3體積(體積·分鐘),發(fā)酵55小時后進行固液分離,得到檸檬酸溶液。測定檸檬酸溶液的濃度,計算單罐供酸量和轉(zhuǎn)化率見表1。實施例2本實施例用于說明本發(fā)明提供的發(fā)酵制備檸檬酸的方法。(1)將收獲的56千克進行粉碎,得到平均粒子直徑為380微米的粉碎后產(chǎn)物。(2)將粉碎后的產(chǎn)物按27重量%的濃度調(diào)漿,相對于每克粉碎后的產(chǎn)物,加入50 個酶活力單位的淀粉酶,進入噴射器,在95°C、pH為5. 8的條件下酶解110分鐘得到產(chǎn)物。(3)將酶解得到的產(chǎn)物通過用液壓式板框壓濾機進行壓濾,分離出液化清液和酶解殘渣,其中,酶解殘渣的固含量為50重量%。(4)配制發(fā)酵培養(yǎng)基,將177. 1千克的上述液化清液、38. 9千克的酶解得到的產(chǎn)物滅菌后加入到300L的發(fā)酵罐中,得到發(fā)酵培養(yǎng)基。(5)將步驟( 中的部分酶解得到的產(chǎn)物,加水稀釋至總糖為10重量%,得到培養(yǎng)液,將培養(yǎng)液投入種子罐,加熱到121°C消毒,維持30分鐘后快速降溫至36°C,接入黑曲霉菌株A,每升培養(yǎng)液中黑曲霉的接種量為3 X IO8個孢子。在36°C、起始pH值為5. 5、0. 6體積(體積 分鐘)的通氣條件下進行菌種培養(yǎng);通過取樣顯微鏡鏡檢、酸度測定和PH測定對黑曲霉的生長進行觀察,當(dāng)PH <2.0、酸度> lg/100mL、菌球大小均勻、菌絲粗壯伸出時, 停止培養(yǎng)。(6)將步驟( 培養(yǎng)的黑曲霉菌種加入到步驟的發(fā)酵罐中開始發(fā)酵,接種量為8 %,發(fā)酵條件包括溫度為36°C,起始pH值為4. 5,通氣量為0. 8體積(體積·分鐘), 發(fā)酵65小時后進行固液分離,得到檸檬酸溶液。測定檸檬酸溶液的濃度,計算單罐供酸量和轉(zhuǎn)化率見表1。實施例3本實施例用于說明本發(fā)明提供的發(fā)酵制備檸檬酸的方法。(1)將收獲的56千克玉米進行粉碎,得到平均粒子直徑為370微米的粉碎后產(chǎn)物。(2)將粉碎后的產(chǎn)物按沈重量%的濃度調(diào)漿,相對于每克粉碎后的產(chǎn)物,加入15 個酶活力單位的淀粉酶,進入噴射器,在90°C、pH為6. 0的條件下酶解120分鐘,得到酶解
7產(chǎn)物。(3)將酶解產(chǎn)物通過用液壓式板框壓濾機進行壓濾,分離出酶解液化清液和酶解殘渣,其中,酶解殘渣的固含量為49重量%。(4)配制發(fā)酵培養(yǎng)基,將169千克的上述酶解液化清液和42. 2千克的酶解得到的產(chǎn)物滅菌后加入到300L的發(fā)酵罐中,得到發(fā)酵培養(yǎng)基。(5)將步驟( 中的部分酶解得到的產(chǎn)物,加水稀釋至總糖為10重量%,得到培養(yǎng)液,將培養(yǎng)液投入種子罐,加熱到121°C消毒,維持30分鐘后快速降溫至36°C,接入黑曲霉菌株A,每升培養(yǎng)液中黑曲霉的接種量為2. 5 X IO8個孢子。在37°C、起始pH值為6、0. 8體積(體積 分鐘)的通氣條件下進行菌種培養(yǎng);通過取樣顯微鏡鏡檢、酸度測定和PH測定對黑曲霉的生長進行觀察,當(dāng)PH <2.0、酸度> lg/100mL、菌球大小均勻、菌絲粗壯伸出時, 停止培養(yǎng)。(6)將步驟( 培養(yǎng)的黑曲霉菌種加入到步驟的發(fā)酵罐中開始發(fā)酵,接種量為11 %,發(fā)酵條件包括溫度為37°C,起始pH值為4,通氣量為0. 6體積(體積·分鐘),發(fā)酵60小時后進行固液分離,得到檸檬酸溶液。測定檸檬酸溶液的濃度,計算單罐供酸量和轉(zhuǎn)化率見表1。對比例1按照實施例1的方法發(fā)酵制備檸檬酸,不同的是,接入的黑曲霉菌株為現(xiàn)有技術(shù)常用的黑曲霉Co827,測定所得檸檬酸溶液的濃度,計算單罐供酸量和轉(zhuǎn)化率見表1。表 權(quán)利要求
1.一種黑曲霉(Aspergillus niger),其特征在于,所述黑曲霉的保藏編號為 CGMCC5343。
2.一種如權(quán)利要求1所述的黑曲霉在發(fā)酵制備檸檬酸中的應(yīng)用。
3.一種發(fā)酵制備檸檬酸的方法,其特征在于,所述方法包括在生成檸檬酸的條件下,將如權(quán)利要求1所述的黑曲霉接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵,得到發(fā)酵液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其中,以每升發(fā)酵培養(yǎng)基為基準,黑曲霉的接種量為1.8X107-3. 5 X IO7 個孢子。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其中,以每升發(fā)酵培養(yǎng)基為基準,黑曲霉的接種量為2.2X 107-2. 6X 107 個孢子。
6.根據(jù)權(quán)利要求3-5中任意一項所述的方法,其中,所述發(fā)酵的條件包括溫度為 30-400C,起始pH值為4-5,通氣量為0. 1-1體積(體積·分鐘),發(fā)酵的時間為50-75小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求3-6中任意一項所述的方法,其中,所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有由淀粉質(zhì)原料酶解得到的酶解產(chǎn)物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種黑曲霉(Aspergillus niger),其特征在于,所述黑曲霉的保藏編號為CGMCC5343。另一方面,本發(fā)明提供了一種上述黑曲霉在發(fā)酵制備檸檬酸中的應(yīng)用。第三方面,本發(fā)明提供了一種發(fā)酵制備檸檬酸的方法,其特征在于,所述方法包括在生成檸檬酸的條件下,將上述黑曲霉接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵,得到發(fā)酵液。本發(fā)明提供的黑曲霉作為發(fā)酵菌種發(fā)酵制備檸檬酸,可提高終點檸檬酸含量、單罐供酸量和轉(zhuǎn)化率。
文檔編號C12R1/685GK102399702SQ20111036743
公開日2012年4月4日 申請日期2011年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月18日
發(fā)明者馮志菲, 盧宗梅, 周勇, 張軍華, 鐘華 申請人:中糧生物化學(xué)(安徽)股份有限公司
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