專利名稱：一種普洱茶熟茶中微生物的快速分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種普洱茶熟茶中微生物的快速分離方法，具體為普洱茶熟茶中黃色子囊果一閉囊殼(俗稱“金花”)微生物的快速分離方法，屬普洱茶發(fā)酵有益微生物分離培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
云南是普洱茶的故鄉(xiāng)，作為歷史傳統(tǒng)名茶——普洱茶之所以成為當今國內(nèi)外消費者廣為青睞的獨具魅力的健康飲品，近年來，大量研究證實普洱茶具有抑菌、減肥、降脂的功效。普洱茶特有的保健功能得到國內(nèi)外人士的共識。普洱茶熟茶獨特的加工工藝和技術(shù)，使用多種有益微生物參與其中，并起到了關(guān)鍵的作用，從而最終影響了普洱茶品質(zhì)及功效。其種類及作用現(xiàn)今人們還未完全認識。針對市場上有些普洱熟茶在貯藏過程中其內(nèi)部會出現(xiàn)“金花”——黃色顆粒，經(jīng)分離、純化和培養(yǎng)，觀察為真菌有性子實體中的子囊果——閉囊殼(俗稱“金花”)，“金花”的出現(xiàn)對普洱茶的品質(zhì)有改善作用，這樣如需要深入研究和揭示其作用，首先就要對其進行快速定位分離純化培養(yǎng)，這將涉及“金花”菌的營養(yǎng)要求、生長環(huán)境條件等幾方面。經(jīng)文獻檢索，未見與本發(fā)明相同的公開報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于利用微生物分離培養(yǎng)技術(shù)，提供一種普洱茶熟茶中微生物的快速分離方法。本發(fā)明結(jié)合普洱熟茶在貯藏過程中所產(chǎn)生黃色顆粒的子囊果——閉囊殼(俗稱 “金花”)的微生物，針對形成的環(huán)境條件分析，對其分離用培養(yǎng)基利用正交優(yōu)化試驗方法確定后，進一步比較完善后，并對培養(yǎng)條件進行比較研究后確定基本培養(yǎng)條件，從而使“產(chǎn)閉囊殼菌”在平板上菌落擴展快，菌落大，氣生菌絲發(fā)育良好，縮短無性階段，促進有性繁殖結(jié)構(gòu)——黃色閉囊殼(俗稱“金花”)的產(chǎn)生，達到快速分離、培養(yǎng)增殖的目的要求。本發(fā)明的目的通過如下方案實現(xiàn)1、培養(yǎng)基的制備a分離純化培養(yǎng)基20%馬鈴薯浸汁IOOOmL ；IOg酵母浸出物；葡萄糖140g ；瓊脂 20g ；121. 3°C，15分鐘滅菌后，制備分離用培養(yǎng)平板。b閉囊殼產(chǎn)生培養(yǎng)基茶葉50g，加入30mL的水，裝入500mL三角瓶包扎，121. 3°C， 15分鐘滅菌后備用。2、平板分離培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度25°C ；培養(yǎng)時間7天(菌落由灰綠色變?yōu)辄S色)；濕度控制在70%以上，通過對平板進行包裹制造相對缺氧環(huán)境。3、茶樣分離a、將普洱緊壓熟茶用無菌工具以常規(guī)的無菌操作方式剝離，露出中心部位，用無菌工具將子囊果——閉囊殼挑于無菌水中制備成懸液，然后按十倍梯度稀釋，在分離純化培養(yǎng)基上以常規(guī)方法進行平板涂布分離，在25°C的溫度下培養(yǎng)7天，挑取黃色顆粒明顯的單菌落保存?zhèn)溆?；b、將普洱緊壓熟茶用無菌工具以無菌操作方式剝離，露出中心部位，用無菌工具挑取子囊果——閉囊殼后輕磕器皿邊，使之播撒于分離純化培養(yǎng)基分離平板上，在25V的溫度下培養(yǎng)7天，挑取黃色顆粒明顯的單菌落保存?zhèn)溆茫?、產(chǎn)閉囊殼微生物的確認將分離得到的黃色顆粒明顯的單菌落微生物接種于閉囊殼產(chǎn)生培養(yǎng)基上，25°C下培養(yǎng)10天，出現(xiàn)明顯“金花”顆粒，經(jīng)顯微觀察后和普洱茶分離樣品中的“金花”顆粒形態(tài)結(jié)構(gòu)相同。本發(fā)明具有快捷、簡便、針對性強、分離成功率高的特點。
具體實施例方式本方法實施中的儀器設備及器材為微生物研究中常用的儀器設備及器材。本方法包括培養(yǎng)基選擇、培養(yǎng)條件確定、產(chǎn)閉囊殼(俗稱“金花”)微生物的確認幾方面。具體如下1、培養(yǎng)基的制備a分離純化培養(yǎng)基20%馬鈴薯浸汁IOOOmL ；IOg酵母浸出物；葡萄糖140g ；瓊脂 20g ；121. 3°C，15分鐘滅菌后，制備分離用培養(yǎng)平板。b閉囊殼產(chǎn)生培養(yǎng)基茶葉50g，加入30mL的水，裝入500mL三角瓶包扎，121.3°C， 15分鐘滅菌后備用。2、平板分離培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度25°C ；培養(yǎng)時間7天(菌落由灰綠色變?yōu)辄S色)；濕度控制在70%以上，通過對平板進行包裹制造相對缺氧環(huán)境。3、茶樣分離a、將普洱緊壓熟茶用無菌工具以常規(guī)的無菌操作方式剝離露出中心部位，用無菌工具將子囊果——閉囊殼挑于無菌水中制備成懸液，然后按十倍梯度稀釋，在分離純化培養(yǎng)基上以常規(guī)方法進行平板涂布分離，在25°C的溫度下培養(yǎng)7天，挑取黃色顆粒明顯的單菌落保存?zhèn)溆?；b、將普洱緊壓熟茶用無菌工具以常規(guī)的無菌操作方式剝離露出中心部位，用無菌工具挑取子囊果——閉囊殼后輕磕器皿邊，使之播撒于分離純化培養(yǎng)基分離平板上，在 25°C的溫度下培養(yǎng)7天，挑取黃色顆粒明顯的單菌落保存?zhèn)溆茫?、產(chǎn)閉囊殼微生物的確認將分離得到的黃色顆粒明顯的單菌落微生物接種于囊果閉囊殼(俗稱“金花”)培養(yǎng)基上，25°C下培養(yǎng)10天，出現(xiàn)明顯“金花”顆粒，經(jīng)顯微觀察后和普洱茶分離樣品中的“金花”顆粒形態(tài)結(jié)構(gòu)相同。
權(quán)利要求
1. 一種普洱茶熟茶中微生物的快速分離方法，其特征在于該分離培養(yǎng)方法包括如下步驟1.1培養(yǎng)基的制備分離純化培養(yǎng)基20%馬鈴薯浸汁IOOOmL ；IOg酵母浸出物；葡萄糖140g ；瓊脂20g ； 121. 3°C，15分鐘滅菌后，制備分離用培養(yǎng)平板；閉囊殼產(chǎn)生培養(yǎng)基茶葉50g，加入30mL的水，裝入500mL三角瓶包扎，121. 3°C，15分鐘滅菌后備用；1.2平板分離培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度25°C;培養(yǎng)時間7天；濕度控制在70%以上，通過對平板進行包裹制造相對缺氧環(huán)境；1.3茶樣分離a、將普洱緊壓熟茶用無菌工具以常規(guī)的無菌操作方式剝離，露出中心部位，用無菌工具將子囊果——閉囊殼挑于無菌水中制備成懸液，然后按十倍梯度稀釋，在分離純化培養(yǎng)基上以常規(guī)方法進行平板涂布分離，在25°C的溫度下培養(yǎng)7天，挑取黃色顆粒明顯的單菌落保存?zhèn)溆?；b、將普洱緊壓熟茶用無菌工具以常規(guī)的無菌操作方式剝離，露出中心部位，用無菌工具挑取子囊果——閉囊殼后輕磕器皿邊，使之播撒于分離純化培養(yǎng)基分離平板上，在25°C 的溫度下培養(yǎng)7天，挑取黃色顆粒明顯的單菌落保存?zhèn)溆茫?.4產(chǎn)閉囊殼微生物的確認將分離得到的黃色顆粒明顯的單菌落微生物接種于閉囊殼產(chǎn)生培養(yǎng)基上，25°C的溫度下培養(yǎng)10天，出現(xiàn)明顯黃色顆粒，經(jīng)顯微觀察后和普洱茶分離樣品中黃色顆粒形態(tài)結(jié)構(gòu)相同。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種普洱茶熟茶中微生物的快速分離方法，具體為普洱茶熟茶中產(chǎn)閉囊殼(俗稱“金花”)微生物的快速分離方法，屬普洱茶發(fā)酵有益微生物分離培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。根據(jù)“金花”出現(xiàn)的環(huán)境條件分析，對其分離用培養(yǎng)基利用正交優(yōu)化試驗方法確定后，進一步比較完善后，并對培養(yǎng)條件進行比較研究后確定基本培養(yǎng)條件，從而使“產(chǎn)閉囊殼菌”在平板上菌落擴展快，菌落大，氣生菌絲發(fā)育良好，縮短無性階段，促進有性繁殖結(jié)構(gòu)——黃色子囊果閉囊殼(俗稱“金花”)的產(chǎn)生，達到快速分離、培養(yǎng)增殖的目的要求。方法包括培養(yǎng)基的制備、平板分離培養(yǎng)條件確定、茶樣分離及微生物的確認。本發(fā)明具有快捷、簡便、針對性強、分離成功率高的特點。
文檔編號C12N1/00GK102424798SQ20111036955
公開日2012年4月25日 申請日期2011年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月19日
發(fā)明者張理珉, 程立忠 申請人:云南大學