專利名稱：一種桑樹抗青枯病能力鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種桑樹抗青枯病能力鑒定方法。
背景技術(shù)：
桑樹細(xì)菌性青枯病是威脅我國蠶桑生產(chǎn)的主要桑樹病害之一，在華南蠶區(qū)發(fā)病尤為嚴(yán)重，目前種植抗青枯病的桑樹品種是防治該病的最根本方法，但桑樹種質(zhì)資源中已經(jīng)鑒定篩選出的用于抗青枯病育種的抗性材料較少，且由于桑樹作為一種多年生木本植物， 其抗青枯病能力的評(píng)價(jià)篩選方法與蔬菜和其它作物有很大不同，這些都嚴(yán)重制約著桑樹抗青枯病新品種的選育。目前對(duì)桑樹抗青枯病材料的鑒定篩選主要是通過田間自然接種鑒定和室內(nèi)人工接種鑒定等方法進(jìn)行。田間自然接種鑒定，需在發(fā)生病害比較嚴(yán)重，土壤質(zhì)地、肥力和發(fā)病程度均勻一致的地塊進(jìn)行，鑒定周期較長，且易受外界環(huán)境等因素影響，結(jié)果不穩(wěn)定。室內(nèi)人工接種主要是采用無土栽培大樹懸浮液接種和離體桑枝注射接種等方法，前者由于桑樹是多年生木本植物，接種費(fèi)工、費(fèi)時(shí)、成本高；后者雖然操作簡單，但不足之處是必須依賴于成熟的離體培養(yǎng)體系，而目前桑樹桑枝離體培養(yǎng)受品種類型等條件的制約，有些品種桑枝離體后即萎蔫，較難成活，因而難以進(jìn)行抗青枯病材料的離體篩選。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種桑樹抗青枯病能力鑒定方法，該方法具有操作簡單、 結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好特點(diǎn)。本發(fā)明通過在室內(nèi)將具有一定苗齡的待鑒定不同抗性品種或品系及抗、感病對(duì)照桑苗，水培一定時(shí)間后傷根接種于一定濃度的青枯病原菌菌液中，控制發(fā)病條件，一定時(shí)間后調(diào)查發(fā)病情況并按照一定抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。本發(fā)明的上述目的是通過如下技術(shù)手段來實(shí)現(xiàn)的一種桑樹抗青枯病能力鑒定方法，含以下步驟(1)桑苗的培育培育待鑒定的不同品種或品系的桑樹苗、感病對(duì)照桑樹品種塘 IOX倫109的桑樹苗和抗病對(duì)照桑樹品種283X抗青10號(hào)的桑樹苗；(2)桑苗的處理前期為苗圃育苗，后期為水培，待桑苗生長到3-5片葉，苗齡3-5 個(gè)月時(shí)，將待鑒定及抗、感病對(duì)照桑苗小心移出植株，用水輕輕洗凈根部育苗基質(zhì)，移植于盛水容器中，水培成活一周后，用于抗病性鑒定；(3)接種將待鑒定的不同抗性品種或品系的桑樹苗、感病對(duì)照桑樹品種塘IOX 倫109桑樹苗和抗病對(duì)照桑樹品種283X抗10桑樹苗側(cè)根剪去，然后將傷根浸泡于桑樹青枯病菌液中進(jìn)行接種鑒定，獲得不同抗病能力的桑樹品種或品系。本發(fā)明步驟(1)中培育待鑒定抗青枯病能力的不同抗性品種或品系的桑樹苗、感病對(duì)照桑樹品種塘IOX倫109桑樹苗和抗病對(duì)照桑樹品種283 X抗10桑樹苗的過程是 將待鑒定抗青枯病能力的不同抗性品種或品系的桑種子、感病對(duì)照桑品種塘IOX倫109的桑種子和抗病對(duì)照桑樹品種觀3 X抗10的桑種子播種于無青枯病發(fā)病史的苗圃中，按常規(guī)水肥條件管理。本發(fā)明步驟(3)中桑樹青枯病菌液中青枯病致病菌的濃度為3X IO8 IX IO9CfU/
mLo本發(fā)明步驟(3)中將待鑒定的不同抗性品種或品系的桑樹苗、感病對(duì)照桑樹品種塘IOX倫109桑樹苗和抗病對(duì)照桑樹品種283 X抗10桑樹苗側(cè)根剪去0. 2 0. 5cm，然后將傷根接種于待接種菌液中調(diào)節(jié)溫度為^_35°C、空氣相對(duì)濕度大于75%下進(jìn)行接種鑒定。本發(fā)明步驟(3)中反應(yīng)不同抗病能力的桑樹品種或品系的具體參數(shù)的獲取過程為從菌液處理傷根后第3天開始記錄，前期每隔2天，11天后每隔3天調(diào)查記錄發(fā)病情況及死亡株數(shù)，連續(xù)調(diào)查20天，計(jì)算病情指數(shù)。選取感病對(duì)照桑樹品種塘IOX倫109桑苗病情指數(shù)達(dá)到80及以上時(shí)的數(shù)據(jù)，通過以下公式計(jì)算病情指數(shù)DI ；
痣科匕教=Σ各級(jí)病情指數(shù)χ各級(jí)代表值總評(píng)價(jià)桑樹株樹χ最高級(jí)代表值桑樹青枯病病害嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)葉片無萎蔫癥狀；1級(jí)整株的1/2或以下葉片出現(xiàn)萎蔫癥狀；2級(jí)整株的1/2以上葉片出現(xiàn)萎蔫癥狀；3級(jí)整株死亡；以病情指數(shù)DI評(píng)價(jià)各供試品種或品系的抗病程度，共分為5級(jí)，DI ( 15時(shí)為強(qiáng)抗 HR ；15 < DI ^ 30 為中抗 MR，30 < DI ^ 45 為弱抗 LR，45 < DI ^ 60 為感病 S，DI > 60 為易感HS。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明方法克服了傳統(tǒng)鑒定方法中由于桑樹是多年生木本植物，抗性鑒定費(fèi)工、費(fèi)時(shí)、成本高且環(huán)境條件無法控制導(dǎo)致抗性結(jié)果不理想等缺點(diǎn)，可以在室內(nèi)一年多次大批量進(jìn)行鑒定，具有操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好特點(diǎn)；(2)本發(fā)明在桑樹抗青枯病能力的鑒定、抗病資源的評(píng)價(jià)、抗病育種材料的篩選等方面應(yīng)用潛力較大。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本實(shí)施例提供的桑樹抗青枯病能力鑒定方法，含以下步驟(1)供試品種待鑒定的不同抗性桑樹雜交品系果選04-19X抗10、283XLK2、 LK3X果選04-10，共3個(gè)供試品種，其中采用塘IOX倫109作為感病對(duì)照，283 X抗10作為抗病對(duì)照；(2)桑苗的培育將待鑒定的不同抗性桑樹雜交品系果選04-19X抗10、 283XLK2、LK3X果選04-10及感病對(duì)照塘IOX倫109、抗病對(duì)照283X抗10桑品種的桑種子播種于無菌育苗圃中，按常規(guī)水肥條件管理，待桑苗生長到3-5片葉，苗齡3-5個(gè)月時(shí)， 將待鑒定及抗、感病對(duì)照桑苗小心移出植株，用水輕輕洗凈根部育苗基質(zhì)，移植于盛水容器中，水培成活一周后，用于抗病性鑒定；(3)接種將待鑒定及抗、感病對(duì)照桑樹苗側(cè)根剪去0. 2 0. 5cm,傷根接種于桑樹青枯病菌液中，其中桑樹青枯病致病菌選自廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，應(yīng)用前先將桑樹青枯病原菌劃線接種于TTC培養(yǎng)基上活化48h，挑取單菌落，接種于LB培養(yǎng)基中，32°C溫度下培養(yǎng)36小時(shí)后，5000rmp，離心時(shí)間lOmin，去除上清液，將菌體配制成大約1 X 109cfu/mL濃度的待接種菌液；然后用電爐調(diào)節(jié)溫度為^°C，補(bǔ)濕器調(diào)節(jié)空氣相對(duì)濕度大于75%條件下接種鑒定；(4)抗性評(píng)價(jià)從菌液處理傷根后第3天開始調(diào)查，前期每隔2天，11天后每隔3 天調(diào)查記錄發(fā)病情況及死亡株數(shù)，連續(xù)調(diào)查20天，計(jì)算病情指數(shù)。當(dāng)感病對(duì)照桑樹品種塘 IOX倫109桑苗病情指數(shù)達(dá)到80及以上時(shí)，本次試驗(yàn)為有效統(tǒng)計(jì)。
權(quán)利要求
1.一種桑樹抗青枯病能力鑒定方法，其特征是含以下步驟(1)桑苗的培育培育待鑒定的不同品種或品系的桑樹苗、感病對(duì)照桑樹品種塘IOX 倫109的桑樹苗和抗病對(duì)照桑樹品種283 X抗青10號(hào)的桑樹苗；(2)桑苗的處理前期為苗圃育苗，后期為水培，待桑苗生長到3-5片葉，苗齡3-5個(gè)月時(shí)，將待鑒定及抗、感病對(duì)照桑苗小心移出植株，用水輕輕洗凈根部育苗基質(zhì)，移植于盛水容器中，水培成活一周后，用于抗病性鑒定；(3)接種將待鑒定的不同抗性品種或品系的桑樹苗、感病對(duì)照桑樹品種塘IOX倫109 桑樹苗和抗病對(duì)照桑樹品種283 X抗10桑樹苗側(cè)根剪去，然后將傷根浸泡于桑樹青枯病菌液中進(jìn)行接種鑒定，獲得不同抗病能力的桑樹品種或品系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑樹抗青枯病能力鑒定方法，其特征是步驟(1)中培育待鑒定抗青枯病能力的不同抗性品種或品系的桑樹苗、感病對(duì)照桑樹品種塘IOX倫109桑樹苗和抗病對(duì)照桑樹品種觀3 X抗10桑樹苗的過程是將待鑒定抗青枯病能力的不同抗性品種或品系的桑種子、感病對(duì)照桑品種塘IOX倫109的桑種子和抗病對(duì)照桑樹品種283X抗 10的桑種子播種于無青枯病發(fā)病史的苗圃中，按常規(guī)水肥條件管理。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑樹抗青枯病能力鑒定方法，其特征是步驟(3)中桑樹青枯病菌液中青枯病致病菌的濃度為3 X IO8 IX 109cfu/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑樹抗青枯病能力鑒定方法，其特征是步驟(3)中將待鑒定的不同抗性品種或品系的桑樹苗、感病對(duì)照桑樹品種塘IOX倫109桑樹苗和抗病對(duì)照桑樹品種283 X抗10桑樹苗側(cè)根剪去0. 2 0. 5cm，然后將傷根接種于待接種菌液中調(diào)節(jié)溫度為^_35°C、空氣相對(duì)濕度大于75%下進(jìn)行接種鑒定。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑樹抗青枯病能力鑒定方法，其特征是步驟(3)中反應(yīng)不同抗病能力的桑樹品種或品系的具體參數(shù)的獲取過程為從菌液處理傷根后第3天開始記錄，前期每隔2天，11天后每隔3天調(diào)查記錄發(fā)病情況及死亡株數(shù)，連續(xù)調(diào)查20天，計(jì)算病情指數(shù)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的桑樹抗青枯病能力鑒定方法，其特征是選取感病對(duì)照桑樹品種塘IOX倫109桑苗病情指數(shù)達(dá)到80及以上時(shí)的數(shù)據(jù)，通過以下公式計(jì)算病情指數(shù)DI ；痣科匕教 Σ各級(jí)病情指數(shù)χ各級(jí)代表值總評(píng)價(jià)桑樹株樹χ最高級(jí)代表值桑樹青枯病病害嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)葉片無萎蔫癥狀；1級(jí)整株的1/2或以下葉片出現(xiàn)萎蔫癥狀；2級(jí)整株的1/2以上葉片出現(xiàn)萎蔫癥狀；3級(jí)整株死亡；以病情指數(shù)DI評(píng)價(jià)各供試品種或品系的抗病程度，共分為5級(jí)，DI ( 15時(shí)為強(qiáng)抗HR ； 15 < DI ^ 30 為中抗 MR，30 < DI ^ 45 為弱抗 LR，45 < DI ^ 60 為感病 S，DI > 60 為易感HS。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種桑樹抗青枯病能力鑒定方法，通過在室內(nèi)將具有一定苗齡的待鑒定不同抗性品種或品系及抗、感病對(duì)照桑苗，水培后將傷根接種于青枯病原菌菌液中，控制發(fā)病條件，然后調(diào)查發(fā)病情況并按照抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，獲得不同抗病能力的桑樹品種或品系。該方法操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好。在桑樹抗青枯病能力的鑒定、抗病資源的評(píng)價(jià)、抗病育種材料的篩選等方面應(yīng)用潛力較大。
文檔編號(hào)C12R1/645GK102517376SQ20111041705
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月13日
發(fā)明者吳劍安, 吳福泉, 唐翠明, 戴凡煒, 李麗, 王振江, 羅國慶, 肖更生 申請(qǐng)人:廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所