專利名稱：鼠李糖乳桿菌grx19及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及食品生物技術領域，特別是一種新穎的長貨架期活菌型乳酸菌飲料及發(fā)酵乳的制備方法。
背景技術：
乳酸菌飲料是以乳或乳制品為原料，經(jīng)乳酸菌發(fā)酵后加入水，以及白砂糖和(或) 甜味劑、酸味劑、果汁、茶、咖啡、植物提取液等一種或幾種調(diào)制而成的飲料。發(fā)酵乳是以生牛(羊)乳或乳粉為原料，經(jīng)殺菌、發(fā)酵后制成的PH值降低的產(chǎn)品。近年來我國乳酸菌飲料及發(fā)酵乳消費量快速增長，但目前我國市售乳酸菌飲料及發(fā)酵乳品質(zhì)差異較大，由于活菌型乳酸菌飲料及發(fā)酵乳需冷藏銷售、貨架期短，影響運輸銷售并造成浪費。因此開發(fā)不需要冷鏈貯藏的活菌型乳酸菌飲料和發(fā)酵乳產(chǎn)品不僅具有重要意義， 且具有廣闊的市場需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于為了克服前述和其它缺點，篩選獲得一種可用于發(fā)酵乳(飲料)制品發(fā)酵的鼠李糖乳桿菌grxl9分離株，發(fā)明活菌型并具有長貨架期的乳酸菌飲料及發(fā)酵乳產(chǎn)品的制備技術。本發(fā)明鼠李糖乳桿菌grxl9 {Lactobacillus rhamnosusgr^)于 2Oll 年 I2 月 02日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區(qū)大屯路 (中國科學院微生物研究所)。保藏號為CGMCC No :5519.本發(fā)明的另一目的在于建立延長貨架期(即貯藏時間延長)乳酸菌飲料及發(fā)酵乳的制備方法。所述方法是將鼠李糖乳桿菌grxl9單獨或與其它乳酸菌混合作為發(fā)酵劑菌種，按照常規(guī)方法制備活菌型乳酸菌飲料后，在70-75°C /15-20s條件下熱處理，采用無菌灌裝或衛(wèi)生灌裝得到在常溫下銷售的活菌型乳酸菌飲料。所述方法還可以是將鼠李糖乳桿菌grxl9單獨或與其它乳酸菌混合作為發(fā)酵劑菌種，利用常規(guī)方法制備發(fā)酵乳后，添加或不添加穩(wěn)定劑，在70-75°C /15-20s條件下熱處理，采用無菌灌裝或衛(wèi)生灌裝，生產(chǎn)在常溫下銷售的活菌型發(fā)酵乳制品或使發(fā)酵乳貨架期得到延長。經(jīng)試驗利用本發(fā)明獲得的乳酸菌制備的發(fā)酵乳及乳酸菌飲料，經(jīng)常規(guī)巴氏殺菌后，產(chǎn)品符合GB 19302—2010和GB 21732—2008中相關活菌型產(chǎn)品的規(guī)定。


圖1是本發(fā)明鼠李糖乳桿菌grxl9革蘭氏染色顯微觀察圖。圖2是本發(fā)明鼠李糖乳桿菌grxl9的基因組DNA電泳圖。圖3是本發(fā)明鼠李糖乳桿菌grxl9的PCR擴增條帶。
圖4是本發(fā)明所述的長貨架期活菌型乳酸菌飲料在30天內(nèi)活菌數(shù)的變化。圖5是本發(fā)明所述的長貨架期活菌型乳酸菌飲料在30天內(nèi)酸度以及pH的變化。圖6是本發(fā)明所述的長貨架期活菌型發(fā)酵乳產(chǎn)品在15天內(nèi)活菌數(shù)的變化。圖7是本發(fā)明所述的長貨架期活菌型發(fā)酵乳產(chǎn)品在15天內(nèi)酸度以及pH的變化。
具體實施例方式本發(fā)明者篩選獲得了新的鼠李糖乳桿菌菌株，并建立了長貨架期活菌型乳酸菌飲料及發(fā)酵乳的制備方法。1.鼠李糖乳桿菌grxl9的分離與鑒定
發(fā)明者通過從我國傳統(tǒng)發(fā)酵制品一乳扇中分離獲得的大量乳酸菌，通過比較它們的加工以及耐熱特性，獲得一株加工及耐熱綜合性能最佳的乳酸菌菌株。并通過鑒定證實了本發(fā)明的菌株是鼠李糖乳桿菌grxl9 {Lactobacillus rhamnosus訝nW)。1.1樣品來源與采集
本發(fā)明乳酸菌來源于云南大理民族乳制品——乳扇。乳扇是我國云南極富特色的傳統(tǒng)乳制品之一，是一種用牛乳加入采用乳酸菌天然發(fā)酵酸漿制作的酸凝拉伸型干酪。乳扇樣品分別采集于中國云南大理白族自治州洱源地區(qū)。樣品存放于滅菌采樣瓶中，置于4°C條件下保存。1. 2從乳扇中分離出乳酸菌
取1. Og乳扇樣品將其在MRS培養(yǎng)基42°C培養(yǎng)M小時富集。將該培養(yǎng)物涂布在MRS平板上，然后在42°C培養(yǎng)48小時。培養(yǎng)后，收集在瓊脂培養(yǎng)基上出現(xiàn)的菌落，并進一步純化， 淘汰非乳酸菌菌株。將分離獲得的菌株用含11% (W/W)脫脂乳的肉湯培養(yǎng)物，培養(yǎng)、凍干、保存在-18°C，然后用于各種檢測細菌特征的試驗。1. 3耐熱乳酸菌的篩選
將從云南篩選獲得的213株乳酸菌的耐熱特性進行了比較。將不同乳酸菌分別按 4%(ff/ff)的接種量接種于脫脂乳培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至凝乳，分別測定凝乳時和經(jīng)60°C /5min, 60°C /10min,65°C /5min,65°C /IOmin和72°C /15s熱處理后的活菌數(shù)量，比較不同菌株的耐熱特性，選擇耐熱能力最好的菌株。通過對篩選菌株耐熱能力的比較，可以看出，不同菌株耐熱特性存在很大差異。在 213株菌株中，有101株菌不耐受60°C /5min的熱處理強度，占試驗菌株數(shù)量的47%以上， 其中本發(fā)明菌株grxl9在60°C /5min的熱處理強度后活菌數(shù)量能達到106CFU/mL ；但有47 株菌株仍能夠耐受60°C /IOmin的熱處理強度，占試驗菌株數(shù)量的2 左右，其中本發(fā)明菌株在60°C /IOmin的熱處理強度后活菌數(shù)量能達到104CFU/mL，為最高；有1 株菌不耐受 65 0C /5min的熱處理強度，占試驗菌株數(shù)量的60%，其中本發(fā)明菌株在65 °C /5min的熱處理強度后活菌數(shù)量能達到103CFU/mL，為最高；所有菌株在65°C /IOmin的熱處理強度下都不能存活；有106株菌不耐受72°C /15s的熱處理強度，占試驗菌株數(shù)量的50%，其中本發(fā)明菌株在72°C /15s的熱處理強度后活菌數(shù)量能達到107CFU/mL，為最高。綜合比較菌株在相對低溫度長時間處理和相對高溫度短時處理條件下均具有較高存活菌株數(shù)的乳酸菌，篩選出耐熱特性最好的菌株，即為本發(fā)明菌株，命名為grxl9。
1. 4菌株的鑒定
(1)乳酸菌菌株革蘭氏染色
采用革蘭氏染色法檢測菌株的特征。本發(fā)明菌株呈革蘭氏陽性，為無芽孢，桿狀，大小為1. 0-1. 5um (如圖1所示)。然后，研究該乳酸菌，以闡明其培養(yǎng)特征。結(jié)果是，該菌種在MRS瓊脂平板上長成直徑為2-3mm的白色菌落，最佳培養(yǎng)溫度為37°C。(2)生理生化鑒定
從純化好的本發(fā)明菌株固體培養(yǎng)基上挑單菌落接種到糖發(fā)酵微量鑒定管中用無菌石蠟油封口。放入37°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。分別于24h和4 后觀察各管中液體顏色變化情況，若變色為陽性，反之陰性，對照《伯杰氏細菌鑒定手冊》初步確定分離菌株的屬種，初步鑒定該菌株為鼠李糖乳桿菌。表1本發(fā)明菌株生理生化鑒定結(jié)果
權(quán)利要求
1.鼠李糖乳桿菌grxl9(Zacio 力 aci/^As rAa膽 ο·5 ·5 grxl9)，它的保藏號為 CGMCC No: 5519。
2.鼠李糖乳桿菌grxl9在制備長貨架期活菌型乳酸菌飲料和發(fā)酵乳產(chǎn)品中的應用。
3.如權(quán)利要求2所述的應用，其特征在于鼠李糖乳桿菌grxl9單獨或與其它乳酸菌混合作為發(fā)酵劑菌種，按照常規(guī)方法制備活菌型乳酸菌飲料后，在70-75°C /15-20s條件下熱處理，采用無菌灌裝或衛(wèi)生灌裝得到產(chǎn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述應用，其特征在于鼠李糖乳桿菌grxl9單獨或與其它乳酸菌混合作為發(fā)酵劑菌種，利用常規(guī)方法制備發(fā)酵乳后，添加或不添加穩(wěn)定劑，在 70-750C /15-20s條件下熱處理，采用無菌灌裝或衛(wèi)生灌裝得到產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌grx19(Lactobacillusrhamnosusgrx19)及其應用，所述鼠李糖乳桿菌grx19的保藏號為CGMCC No.5519。該菌株可用于生產(chǎn)長貨架期的活菌型乳酸菌飲料及發(fā)酵乳制品。將鼠李糖乳桿菌grx19單獨或與其它乳酸菌混合作為發(fā)酵劑菌種，按照常規(guī)方法制備活菌型乳酸菌飲料及發(fā)酵乳產(chǎn)品后，在70-75℃/15-20s條件下熱處理，采用無菌灌裝或衛(wèi)生灌裝，可生產(chǎn)出在常溫下銷售的活菌型乳酸菌飲料及發(fā)酵乳制品。
文檔編號C12N1/20GK102492643SQ20111044166
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月26日
發(fā)明者丁繆華, 陳旭嬌, 陳霞, 顧瑞霞, 黃玉軍 申請人:揚州大學