專利名稱：一種高通量篩選細(xì)胞在三維基質(zhì)中生長遷移行為的裝置及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及ー種高通量篩選細(xì)胞在三維基質(zhì)中生長遷移行為的裝置及方法。
背景技術(shù)：
細(xì)胞的生長及遷移是眾多重要細(xì)胞生物學(xué)過程如個體發(fā)育、組織修復(fù)、器官再生、 癌癥惡性轉(zhuǎn)移的重要步驟，細(xì)胞在ニ維的生長及遷移等行為與三維狀態(tài)有很大差異。目前， 研究細(xì)胞的生長及遷移的裝置多是在ニ維平面裝置上進(jìn)行，研究表明，在三維狀態(tài)培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生極化，且形成葡萄狀克隆，但是在ニ維狀態(tài)培養(yǎng)的細(xì)胞卻無此特征。此外，細(xì)胞在體內(nèi)狀態(tài)都是以三維形式存在，細(xì)胞外的各種基質(zhì)及環(huán)境都會影響細(xì)胞的生長及遷移等行為。因此細(xì)胞在三維狀態(tài)的生長及遷移等更接近于細(xì)胞在體內(nèi)的狀態(tài)。目前尚無ー種高通量篩選三維狀態(tài)下細(xì)胞生長及遷移等行為的裝置。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高通量篩選細(xì)胞在三維基質(zhì)中生長遷移行為的裝置及方法，它克服了現(xiàn)有ニ維研究無法提供細(xì)胞在三維狀態(tài)生長及遷移等重要行為信息的不足，提供一種高通量三維篩選新裝置及方法，該裝置不僅實時監(jiān)測細(xì)胞在三維狀態(tài)的各種行為，而且能高通量篩選不同基質(zhì)、不同因子對細(xì)胞在三維狀態(tài)的生長及遷移等重要行為的同吋，方便、高效、高通量的篩選各類基質(zhì)對細(xì)胞行為的影響，并且該裝置價格低廉、結(jié)構(gòu)簡單。為了解決背景技術(shù)所存在的問題，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案它的篩選裝置包含載玻片1、聚ニ甲基硅氧烷薄層2、蓋玻片3、膠條4、物鏡5、電動載物臺6和培養(yǎng)室平皿7， 電動載物臺6的下方設(shè)置有物鏡5，電動載物臺6的上方設(shè)置有培養(yǎng)室平皿7，培養(yǎng)室平皿 7內(nèi)底部設(shè)置有載玻片1，載玻片1上覆蓋有聚ニ甲基硅氧烷薄層2，聚ニ甲基硅氧烷薄層2 上涂有細(xì)胞懸浮液層，細(xì)胞懸浮液層兩側(cè)設(shè)置有膠條4，膠條4上覆蓋有蓋玻片3。它的篩選方法為(1)先用聚ニ甲基硅氧烷覆蓋載玻片表面并在通風(fēng)櫥中靜置形成疏水界面，取50 μ 1細(xì)胞懸液(濃度為IO5 cell mlり與等體積基質(zhì)混勻；
(2)用微量移液器取10-20μ1混合液，將細(xì)胞混合液依次均勻點至載玻片樣品觀察區(qū)域形成矩陣，以5X5矩陣為例，觀察區(qū)域為1. 5cm，樣品直徑1. 2mm，樣品間距約為3mm，單個樣品高度約為0. 5mm，也可根據(jù)研究所需量身定制樣品觀察區(qū)從而形成數(shù)量不等的樣品矩陣；
(3)將矩陣靜置凝結(jié)，蓋上蓋玻片，然后置于配備電動載物臺的顯微鏡下，通過電動載物臺及物鏡定義每個矩陣點所在位置，通過自動照相系統(tǒng)每隔一定時間間隔獲取圖像，從而獲得細(xì)胞在各種三維基質(zhì)中的生長、遷移等狀態(tài)，并高通量篩選各種細(xì)胞外基質(zhì)對細(xì)胞生長、遷移等行為的影響。
本發(fā)明具有以下有益效果它克服了現(xiàn)有ニ維研究無法提供細(xì)胞在三維狀態(tài)生長及遷移等重要行為信息的不足，提供一種高通量三維篩選新裝置及方法，該裝置不僅實時監(jiān)測細(xì)胞在三維狀態(tài)的各種行為，而且能高通量篩選不同基質(zhì)、不同因子對細(xì)胞在三維狀態(tài)的生長及遷移等重要行為的同吋，方便、高效、高通量的篩選各類基質(zhì)對細(xì)胞行為的影響，并且該裝置價格低廉、結(jié)構(gòu)簡単。


圖1為本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖； 圖2為本發(fā)明中載玻片的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施例方式
參照圖1-2，本具體實施方式
采取以下技術(shù)方案它的篩選裝置包含載玻片1、聚ニ甲基硅氧烷薄層2、蓋玻片3、膠條4、物鏡5、電動載物臺6和培養(yǎng)室平皿7，電動載物臺6的下方設(shè)置有物鏡5，電動載物臺6的上方設(shè)置有培養(yǎng)室平皿7，培養(yǎng)室平皿7內(nèi)底部設(shè)置有載玻片1，載玻片1上覆蓋有聚ニ甲基硅氧烷薄層2，聚ニ甲基硅氧烷薄層2上涂有細(xì)胞懸浮液層，細(xì)胞懸浮液層兩側(cè)設(shè)置有膠條4，膠條4上覆蓋有蓋玻片3。它的篩選方法為(1)先用聚ニ甲基硅氧烷覆蓋載玻片表面并在通風(fēng)櫥中靜置形成疏水界面，取50 μ 1細(xì)胞懸液(濃度約IO5 cell mlり與等體積基質(zhì)混勻；
(2)用微量移液器取10-20μ1混合液，將細(xì)胞混合液依次均勻點至載玻片樣品觀察區(qū)域形成矩陣，以5X5矩陣為例，觀察區(qū)域為1. 5cm，樣品直徑1. 2mm，樣品間距約為3mm，單個樣品高度約為0. 5mm，也可根據(jù)研究所需量身定制樣品觀察區(qū)從而形成數(shù)量不等的樣品矩陣；
(3)將矩陣靜置凝結(jié)，蓋上蓋玻片，然后置于配備電動載物臺的顯微鏡下，通過電動載物臺及物鏡定義每個矩陣點所在位置，通過自動照相系統(tǒng)每隔一定時間間隔獲取圖像，從而獲得細(xì)胞在各種三維基質(zhì)中的生長、遷移等狀態(tài)，并高通量篩選各種細(xì)胞外基質(zhì)對細(xì)胞生長、遷移等行為的影響。本具體實施方式
克服了現(xiàn)有ニ維研究無法提供細(xì)胞在三維狀態(tài)生長及遷移等重要行為信息的不足，提供一種高通量三維篩選新裝置及方法，該裝置不僅實時監(jiān)測細(xì)胞在三維狀態(tài)的各種行為，而且能高通量篩選不同基質(zhì)、不同因子對細(xì)胞在三維狀態(tài)的生長及遷移等重要行為的同吋，方便、高效、高通量的篩選各類基質(zhì)對細(xì)胞行為的影響，并且該裝置價格低廉、結(jié)構(gòu)簡単。
權(quán)利要求
1.一種高通量篩選細(xì)胞在三維基質(zhì)中生長遷移行為的裝置及方法，其特征在于它的篩選裝置包含載玻片(1)、聚ニ甲基硅氧烷薄層O)、蓋玻片(3)、膠條G)、物鏡(5)、電動載物臺(6)和培養(yǎng)室平皿(7)，電動載物臺(6)的下方設(shè)置有物鏡(5)，電動載物臺(6)的上方設(shè)置有培養(yǎng)室平皿(7)，培養(yǎng)室平皿(7)內(nèi)底部設(shè)置有載玻片(1)，載玻片(1)上覆蓋有聚 ニ甲基硅氧烷薄層O)，聚ニ甲基硅氧烷薄層( 上涂有細(xì)胞懸浮液層，細(xì)胞懸浮液層兩側(cè)設(shè)置有膠條G)，膠條G上覆蓋有蓋玻片(3)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種高通量篩選細(xì)胞在三維基質(zhì)中生長遷移行為的裝置及方法，其特征在于它的篩選方法為(1)先用聚ニ甲基硅氧烷覆蓋載玻片表面并在通風(fēng)櫥中靜置形成疏水界面，取濃度為IO5 cell ml 1^Oyl的細(xì)胞懸液與等體積基質(zhì)混勻；(3)將矩陣靜置凝結(jié)，蓋上蓋玻片，然后置于配備電動載物臺的顯微鏡下，通過電動載物臺及物鏡定義每個矩陣點所在位置，通過自動照相系統(tǒng)每隔一定時間間隔獲取圖像，從而獲得細(xì)胞在各種三維基質(zhì)中的生長、遷移狀態(tài)，并高通量篩選各種細(xì)胞外基質(zhì)對細(xì)胞生長、遷移等行為的影響。
全文摘要
一種高通量篩選細(xì)胞在三維基質(zhì)中生長遷移行為的裝置及方法，它涉及生物學(xué)領(lǐng)域，電動載物臺的下方設(shè)置有物鏡，電動載物臺的上方設(shè)置有培養(yǎng)室平皿，培養(yǎng)室平皿內(nèi)底部設(shè)置有載玻片，載玻片上覆蓋有聚二甲基硅氧烷薄層，聚二甲基硅氧烷薄層上涂有細(xì)胞懸浮液層，細(xì)胞懸浮液層兩側(cè)設(shè)置有膠條，膠條上覆蓋有蓋玻片。它克服了現(xiàn)有二維研究無法提供細(xì)胞在三維狀態(tài)生長及遷移等重要行為信息的不足，提供一種高通量三維篩選新裝置及方法，不僅實時監(jiān)測細(xì)胞在三維狀態(tài)的各種行為，而且能高通量篩選不同基質(zhì)、不同因子對細(xì)胞在三維狀態(tài)的生長及遷移等重要行為的同時，方便、高效、高通量的篩選各類基質(zhì)對細(xì)胞行為的影響，并且該裝置價格低廉、結(jié)構(gòu)簡單。
文檔編號C12Q1/02GK102533537SQ20111044904
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月29日
發(fā)明者趙三軍, 趙敏 申請人:云南師范大學(xué)