專(zhuān)利名稱(chēng)：一種甘草多糖金銀花大棗蜂蜜顆粒劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種保健食品及其制備方法，特別涉及一種中藥配方顆粒保健食品。
技術(shù)背景
甘草作為一種傳統(tǒng)中藥，自古以來(lái)就有“十方九草”的美譽(yù)，甘草的主要活性成分有甘草酸、甘草黃銅和甘草多糖，前兩者已經(jīng)有比較深入的研究，而甘草多糖的功能研究主要集中在抗腫瘤，抗病毒，調(diào)節(jié)免疫活性和清除自由基方面，在甘草多糖應(yīng)用方面開(kāi)發(fā)很少。甘草懸浮細(xì)胞做為一種生產(chǎn)甘草多糖新的途徑，更具有發(fā)展?jié)撡|(zhì)，其生產(chǎn)出的甘草多糖含量高于野生甘草，具有明顯的抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)活性；金銀花為忍冬科植物(Lonicera japonica Thunb).忍冬的干燥花蕾或帶初開(kāi)的花。它是一種臨床常用中藥， 具有清熱解毒，涼散風(fēng)熱的功效。大棗中醫(yī)中藥理論認(rèn)為，大棗具有補(bǔ)虛益氣、養(yǎng)血安神、健脾和胃等作用，是脾胃虛弱、氣血不足、倦怠無(wú)力、失眠多夢(mèng)等患者良好的保健營(yíng)養(yǎng)品，大棗是藥食同源的保健食品，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。蜂蜜作為一種有很好的保健功能，不僅能保肝護(hù)肝，同時(shí)能調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)，對(duì)神經(jīng)衰弱、失眠等具有明顯的效果。在保健品開(kāi)發(fā)領(lǐng)域，應(yīng)用甘草多糖制備提高免疫力的品種還是一片空白。發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種甘草多糖金銀花大棗蜂蜜顆粒劑及其制備方法，解決了甘草多糖在保健品研發(fā)領(lǐng)域空白的問(wèn)題。
本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
一種甘草多糖金銀花大棗蜂蜜顆粒劑，主要原料是由組織培養(yǎng)方法生產(chǎn)的甘草多糖和藥食同源的金銀花、大棗和蜂蜜構(gòu)成，輔以其它材料，其中主要原料在其中的質(zhì)量比例如下
甘草多糖 8% 12%金銀花浸膏2% 6% 大棗浸膏 2% 6% 蜂蜜1% 3%輔料73% 87%
所述的糖類(lèi)輔料選自乳糖、糊精、蔗糖、木糖醇或甘露醇的一種，或它們的混合物。
一種甘草多糖金銀花大棗蜂蜜顆粒劑的制備方法，包括如下步驟
(1)甘草多糖的提取取甘草細(xì)胞粉末，加入15-25倍重量的蒸餾水，靜置5_12h， 蒸煮1-5次，每次l_3h。重復(fù)蒸煮2-5次，合并濾液，濃縮到一定體積，以無(wú)水乙醇調(diào)制終濃度為50-90%，0-6°C靜置過(guò)夜，去上清液，用sevage法去蛋白，得到甘草多糖粉末；
(2)金銀花浸膏的制備將金銀花水提取1 3次，每次加水量為藥材重量的10 20倍，提取時(shí)間為每次1 池，提取溫度為50 90°C，將提取液濃縮干燥成浸膏；
(3)大棗浸膏的制備將大棗去核，烘干，粉碎，加10 15倍體積水，回流提取2 3次，提取時(shí)間為每次1 池，提取溫度為80 95°C，合并提取液進(jìn)行低壓濃縮成浸膏；
(4)將以上步驟提取物和蜂蜜作為主料，按照上述比例添加主料與輔料，混合均勻，制粒，干燥，整粒，即得到甘草多糖金銀花大棗蜂蜜配方顆粒。
所述甘草多糖是由甘草懸浮細(xì)胞中提取得到，其制備方法為
(1)甘草無(wú)菌苗的獲得挑選顆粒飽滿(mǎn)，呈深綠色的甘草種子，用5% 15%的次氯酸鈉在磁力攪拌器上對(duì)種子進(jìn)行攪拌滅菌，轉(zhuǎn)速為200r/min 500r/min，溫度為20°C 30°C，滅菌時(shí)間20min 40min，MS培養(yǎng)中含2% 蔗糖，滅菌前pH 5 6，接種在含MS 固體培養(yǎng)基50ml的三角瓶?jī)?nèi)，放在20 光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)30 35天，得到甘草無(wú)菌苗。
(2)甘草愈傷組織的獲得甘草愈傷組織是從甘草無(wú)菌苗下胚軸誘導(dǎo)得來(lái)，經(jīng)多次篩選繼代后，生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定。愈傷組織繼代培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，附加2，4-D(0. 5 2mg · L-1)，NAA (0. 5 2mg · L-1)，6_BA(0. 1 0. 3mg · L-1)，2 5%蔗糖，滅菌前 pH 5 6， 繼代周期25 30天。
(3)甘草懸浮細(xì)胞的獲得選擇生長(zhǎng)速度快、質(zhì)地松散、淡黃色的甘草愈傷組織， 用鑷子夾碎后轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。培養(yǎng)及成分為3/4MS培養(yǎng)基，附加2， 4-D (0. 5 2mg · L-1)，NAA (0. 5 2mg · L-1), 6-BA (0. 1 0. 3mg · L-1)，2 5% 蔗糖，初次培養(yǎng)3 5天后，將懸浮的大塊愈傷組織過(guò)濾除去，懸浮細(xì)胞每隔15 20天繼代一次。搖床轉(zhuǎn)速110 120r ^irT1,培養(yǎng)溫度QO 28) °C。經(jīng)過(guò)數(shù)次傳代篩選，最終獲得性能優(yōu)異的細(xì)胞系。
(4)甘草懸浮細(xì)胞鼓泡式反應(yīng)器培養(yǎng)利用自行設(shè)計(jì)的5L鼓泡式反應(yīng)器(專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?01110255311. 9)，接種量為5 % 10 %的鮮重甘草細(xì)胞，發(fā)酵罐通氣量為200L/min 500L/min，培養(yǎng)及成分為 3/4MS 培養(yǎng)基，附加 2,4-D (0. 5 2mg .Γ1)，ΝΑΑ(0· 5 2mg .Γ1)， 6-BA (0. 1 0. 3mg · Γ1)，2 5%蔗糖，PH值為5 9，培養(yǎng)周期為15 20天。
本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于填補(bǔ)甘草多糖在保健品開(kāi)發(fā)方面的空白，提出一種以甘草多糖為主料，同時(shí)結(jié)合金銀花、大棗、蜂蜜等物質(zhì)，開(kāi)發(fā)出一種具有緩解失眠、提高免疫力、抗疲勞功效的保健顆粒沖劑。利用甘草懸浮細(xì)胞提取得到甘草多糖，這種方法不受季節(jié)及地域的限制，方便，易操作。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
甘草多糖的制備
(1)甘草無(wú)菌苗的獲得挑選顆粒飽滿(mǎn)，呈深綠色的甘草種子，用10%的次氯酸鈉在磁力攪拌器上對(duì)種子進(jìn)行攪拌滅菌，轉(zhuǎn)速為300r/min，溫度為25°C，滅菌時(shí)間30min，MS 培養(yǎng)中含3%蔗糖，滅菌前pH 5. 9，接種在含MS固體培養(yǎng)基50ml的三角瓶?jī)?nèi)，放在25°C光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)30天，得到甘草無(wú)菌苗。
(2)甘草愈傷組織的獲得甘草愈傷組織是從甘草無(wú)菌苗下胚軸誘導(dǎo)得來(lái)，經(jīng)多次篩選繼代后，生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定。愈傷組織繼代培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，附加2，4-D(lmg · Γ1)， NAAdmg · L—1)，6-ΒΑ(0· 2mg · L—1)，3%蔗糖，滅菌前 pH 5. 9，繼代周期 28 天。
(3)甘草懸浮細(xì)胞的獲得選擇生長(zhǎng)速度快、質(zhì)地松散、淡黃色的甘草愈傷組織， 用鑷子夾碎后轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。培養(yǎng)及成分為3/4MS培養(yǎng)基，附加2， 4-D(lmg · L-1)，NAAdmg · L—1)，6_BA(0. 2mg · L—1)，3%蔗糖，初次培養(yǎng) 3 天后，將懸浮的大塊愈傷組織過(guò)濾除去，懸浮細(xì)胞每隔18天繼代一次。搖床轉(zhuǎn)速110 120r ^mirT1,培養(yǎng)溫度 (20 28) °C。經(jīng)過(guò)數(shù)次傳代篩選，最終獲得性能優(yōu)異的細(xì)胞系。
(4)甘草懸浮細(xì)胞鼓泡式反應(yīng)器培養(yǎng)利用自行設(shè)計(jì)的5L鼓泡式反應(yīng)器，接種量為8%的鮮重甘草細(xì)胞，發(fā)酵罐通氣量為300L//min，培養(yǎng)及成分為3/4MS培養(yǎng)基，附加2， 4-D(lmg · L-1)，NAAdmg · L—1)，6_BA(0. 2mg · L—1)，3%蔗糖，PH 值為 5. 9，培養(yǎng)周期為 18 天。
實(shí)施例1
甘草多糖的提取取500g甘草細(xì)胞粉末，加入20倍重量的蒸餾水，靜置12h， 100°c水浴提取lh，重復(fù)提取3次，合并濾液，濃縮到一定體積，加入4倍體積量無(wú)水乙醇， 4°C靜置過(guò)夜，去上清液，用sevage法去蛋白，真空干燥得到甘草多糖粉末。
金銀花浸膏的制備將金銀花水提取3次，每次加水量為藥材重量的10倍，提取時(shí)間為每次lh，提取溫度為80°C，將提取液濃縮干燥成浸膏。
大棗浸膏的制備將大棗粉末水提3次，每次提取量為生藥材的15倍，提取時(shí)間為每次1.證，提取溫度為95°C，將提取液濃縮干燥成浸膏。
取棗浸膏金銀花浸膏蜂蜜質(zhì)量比為2 2 1的比例制成濃縮液，取50g甘草多糖，300g乳糖，IOOg蔗糖，混合均勻后，過(guò)100目篩，加入40ml上述濃縮液混合均勻，制成軟材，過(guò)20目篩網(wǎng)制備顆粒，50°C干燥，24目篩整粒，即得到甘草多糖金銀花大棗蜂蜜的顆粒制劑。
實(shí)施例2
甘草多糖的提取取500g甘草細(xì)胞粉末，加入15倍重量的蒸餾水，靜置8h，100°C 水浴提取池，重復(fù)提取2次，合并濾液，濃縮到一定體積，加入4倍體積量無(wú)水乙醇，4°C靜置過(guò)夜，去上清液，用sevage法去蛋白，真空干燥得到甘草多糖粉末。
金銀花浸膏的制備將金銀花水提取1次，每次加水量為藥材重量的15倍，提取時(shí)間為每次池，提取溫度為90°C，將提取液濃縮干燥成浸膏。
大棗浸膏的制備將大棗粉末水提2次，每次加水量為生藥材的10倍，提取時(shí)間為每次2.證，提取溫度為80°C，將提取液濃縮干燥成浸膏。
取棗浸膏金銀花浸膏蜂蜜質(zhì)量比為2 2 1的比例制成濃縮液，取50g甘草多糖，300g乙基纖維素，IOOg木糖醇，混合均勻后，過(guò)100目篩，加入40ml上述濃縮液混合均勻，制成軟材，放在20目篩網(wǎng)上手壓制備顆粒，50°C干燥，24目篩整粒，即得到甘草多糖金銀花大棗蜂蜜的顆粒制劑。
實(shí)施例3
甘草多糖的提取取500g甘草細(xì)胞粉末，加入25倍重量的蒸餾水，靜置5h，100°C 水浴提取池，重復(fù)提取2次，合并濾液，濃縮到一定體積，加入4倍體積量無(wú)水乙醇，4°C靜置過(guò)夜，去上清液，用sevage法去蛋白，真空干燥得到甘草多糖粉末。
金銀花浸膏的制備將金銀花水提取2次，每次加水量為藥材重量的20倍，提取時(shí)間為每次池，提取溫度為50°C，將提取液濃縮干燥成浸膏。
大棗浸膏的制備將大棗粉末水提3次，每次提取量為生藥材的12倍，提取時(shí)間為每次lh，提取溫度為90°C，將提取液濃縮干燥成浸膏。
取棗浸膏金銀花浸膏蜂蜜質(zhì)量比為2 2 1的比例制成濃縮液，取50g甘草多糖，300g糊精，IOOg甘露醇，混合均勻后，過(guò)100目篩，加入40ml上述濃縮液混合均勻，制成軟材，放在20目篩網(wǎng)上手壓制備顆粒，50°C干燥，24目篩整粒，即得到甘草多糖金銀花大棗蜂蜜的顆粒制劑。
實(shí)施例4
甘草多糖的提取取500g甘草細(xì)胞粉末，加入20倍重量的蒸餾水，靜置12h， 100°c水浴提取lh，重復(fù)提取3次，合并濾液，濃縮到一定體積，加入4倍體積量無(wú)水乙醇， 4°C靜置過(guò)夜，去上清液，用sevage法去蛋白，真空干燥得到甘草多糖粉末。
金銀花浸膏的制備將金銀花水提取3次，每次加水量為藥材重量的10倍，提取時(shí)間為每次lh，提取溫度為80°C，將提取液濃縮干燥成浸膏。
大棗浸膏的制備將大棗粉末水提3次，每次提取量為生藥材的15倍，提取時(shí)間為每次1.證，提取溫度為95°C，將提取液濃縮干燥成浸膏。
取棗浸膏金銀花浸膏蜂蜜質(zhì)量比為2 2 1的比例制成濃縮液，取50g甘草多糖，300g乳糖，50g甘露醇和50g木糖醇，混合均勻后，過(guò)100目篩，加入40ml上述濃縮液混合均勻，制成軟材，放在20目篩網(wǎng)上手壓制備顆粒，50°C干燥，24目篩整粒，即得到甘草多糖金銀花大棗蜂蜜的顆粒制劑。
試驗(yàn)例
按衛(wèi)生部發(fā)布的《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法規(guī)范》中增強(qiáng)免疫力功能檢驗(yàn)方法進(jìn)行。給予受試物的灌胃體積為20mL/kg，每天1次，連續(xù)30d。采用SAS統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和Durmett' st檢驗(yàn)MTT法(ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn))對(duì)各組加ConA孔與不加ConA孔吸光度差值的均值進(jìn)行單因素方差分析，組間差異顯著(F = 3. 38，P < 0. 05)經(jīng)Durmett ‘ st檢驗(yàn)，顆粒制劑高劑量組加ConA孔與不加 ConA孔吸光度的差值均值與陰性對(duì)照組比較差異顯著(P < 0. 05)結(jié)果見(jiàn)表1。
表1顆粒制劑對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)的影響(X SD)組別動(dòng)物數(shù)(只)加ConA孔與不加ConA孔吸光度差值陰性對(duì)照組80.052 ±0.014
低劑量80.053+ 0.012中劑量80.061 ±0.017高劑量80.075±0.02θ*
ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)結(jié)果表明，顆粒制劑具有增強(qiáng)小鼠細(xì)胞免疫功能的作用。
權(quán)利要求
1.一種甘草多糖金銀花大棗蜂蜜顆粒劑，其特征在于，主要原料是由組織培養(yǎng)方法生產(chǎn)的甘草多糖和藥食同源的金銀花、大棗和蜂蜜構(gòu)成，輔以其它材料，其中主要原料在其中的質(zhì)量比例如下甘草多糖 8% 12% 金銀花浸膏2% 6% 大棗浸膏 2% 6% 蜂蜜1% 3%輔料73% 87%
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述甘草多糖金銀花大棗蜂蜜顆粒劑，其特征在于所述的輔料選自乳糖、糊精、蔗糖、木糖醇或甘露醇的一種，或它們的混合物。
3.一種甘草多糖金銀花大棗蜂蜜顆粒劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)甘草多糖的提取取甘草細(xì)胞粉末，加入15-25倍重量的蒸餾水，靜置5-12h，蒸煮 1-5次，每次l_3h，重復(fù)蒸煮2-5次，合并濾液，濃縮到一定體積，以無(wú)水乙醇調(diào)制終濃度為 50-90%，0-6°C靜置過(guò)夜，去上清液，用sevage法去蛋白，得到甘草多糖粉末；(2)金銀花浸膏的制備將金銀花水提取1 3次，每次加水量為藥材重量的10 20 倍，提取時(shí)間為每次1 池，提取溫度為50 90°C，將提取液濃縮干燥成浸膏；(3)大棗浸膏的制備將大棗去核，烘干，粉碎，加10 15倍體積水，回流提取2 3 次，提取時(shí)間為每次1 池，提取溫度為80 95°C，合并提取液進(jìn)行低壓濃縮成浸膏；(4)將以上步驟提取物和蜂蜜作為主料，按照上述比例添加主料與輔料，混合均勻，制粒，干燥，整粒，即得到甘草多糖金銀花大棗蜂蜜配方顆粒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述甘草多糖金銀花大棗蜂蜜顆粒劑的制備方法，其特征在于所述甘草多糖是由甘草懸浮細(xì)胞中提取得到，其制備方法為(1)甘草無(wú)菌苗的獲得挑選顆粒飽滿(mǎn)，呈深綠色的甘草種子，用5% 15%的次氯酸鈉在磁力攪拌器上對(duì)種子進(jìn)行攪拌滅菌，轉(zhuǎn)速為200r/min 500r/min，溫度為20°C 30°C，滅菌時(shí)間20min 40min，MS培養(yǎng)中含2% 蔗糖，滅菌前pH 5 6，接種在含MS 固體培養(yǎng)基50ml的三角瓶?jī)?nèi)，放在20 光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)30 35天，得到甘草無(wú)菌苗；(2)甘草愈傷組織的獲得甘草愈傷組織是從甘草無(wú)菌苗下胚軸誘導(dǎo)得來(lái)，經(jīng)多次篩選繼代后，生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定，愈傷組織繼代培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，附加2，4-D (0. 5 aiig · L—1)， NAA (0. 5 2mg · L"1), 6-BA (0. 1 0. 3mg · L—1)，2 5%蔗糖，滅菌前 pH 5 6，繼代周期 25 30天；(3)甘草懸浮細(xì)胞的獲得選擇生長(zhǎng)速度快、質(zhì)地松散、淡黃色的甘草愈傷組織，用鑷子夾碎后轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行懸浮培養(yǎng)；培養(yǎng)及成分為3/4MS培養(yǎng)基，附加2， 4-D (0. 5 2mg · I/1)，NAA (0. 5 2mg · L-1), 6-BA (0. 1 0. 3mg · Γ1)，2 5% 蔗糖，初次培養(yǎng)3 5天后，將懸浮的大塊愈傷組織過(guò)濾除去，懸浮細(xì)胞每隔15 20天繼代一次，搖床轉(zhuǎn)速110 120r · mirT1，培養(yǎng)溫度(20 28) °C，經(jīng)過(guò)數(shù)次傳代篩選，最終獲得性能優(yōu)異的細(xì)胞系；(4)甘草懸浮細(xì)胞鼓泡式反應(yīng)器培養(yǎng)利用自行設(shè)計(jì)的5L鼓泡式反應(yīng)器，接種量為5% 10%的鮮重甘草細(xì)胞，發(fā)酵罐通氣量為200L/min 500L/min，培養(yǎng)及成分為3/4MS 培養(yǎng)基，附加 2，4-D (0. 5 2mg · L"1)，NAA (0. 5 2mg · Γ1)，6-BA (0. 1 0. 3mg · Γ1)，2 5%蔗糖，PH值為5 9，培養(yǎng)周期為15 2O天。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種甘草多糖金銀花大棗蜂蜜顆粒劑及其制備方法，其中主要原料在其中的質(zhì)量比例如下甘草多糖8％～12％，金銀花浸膏2％～6％，大棗浸膏2％～6％，蜂蜜1％～3％，輔料73％～87％。本發(fā)明填補(bǔ)了甘草多糖在保健品開(kāi)發(fā)方面的空白，提出一種以甘草多糖為主料，同時(shí)結(jié)合金銀花、大棗、蜂蜜等物質(zhì)，開(kāi)發(fā)出一種具有緩解失眠、提高免疫力、抗疲勞功效的保健顆粒沖劑。利用甘草懸浮細(xì)胞提取得到甘草多糖，這種方法不受季節(jié)及地域的限制，方便，易操作。
文檔編號(hào)A23L1/08GK102511708SQ20111045206
公開(kāi)日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月29日
發(fā)明者劉輝, 滿(mǎn)淑麗, 王仁芳, 王娟, 郭松波, 高文遠(yuǎn) 申請(qǐng)人:天津大學(xué)