專利名稱：磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種用于提取核酸的試劑盒，具體涉及了一種磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒。
背景技術(shù)：
核酸是一類生物信息高分子化合物，自它首次被從細(xì)胞中分離出來，經(jīng)歷了一百多年的歷史，直至上個(gè)世紀(jì)中期以后科學(xué)家對(duì)核酸結(jié)構(gòu)和功能才取得了飛躍的發(fā)展。核酸分為脫氧核糖核酸和核糖核酸，核苷酸是核酸的基本單位。DNA和RNA在動(dòng)植物種都有存在，但一種病毒只含有一種核酸，DNA或RNA。核酸在整個(gè)分子生物學(xué)中的所具有的無可替代的作用，自分子生物學(xué)創(chuàng)立以來，一直是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象。因此，核酸的提取和分離純化也是分子生物學(xué)各類實(shí)驗(yàn)不可缺少的一個(gè)環(huán)節(jié)。在臨床診斷中，常從人體組織， 如血清或血漿、組織切片中分離純化核酸，然后用于疾病的診斷和組織配型。傳統(tǒng)的酚-氯仿法等化學(xué)方法提取核酸，該方法雖然提取的核酸得率高，純度好， 但要使用到酚和氯仿等有毒有害物質(zhì)，操作過程要反復(fù)開管加液、離心、棄液，頻繁更換離心管和吸咀，工作步驟冗長(zhǎng)繁雜，致使提取工作效率低下。隨著納米技術(shù)的發(fā)展，利用SiA (二氧化硅)包裹的納米磁珠在一定條件下特異吸附核酸的特性，開發(fā)出了磁珠提取純化核酸技術(shù)，該技術(shù)得到了廣泛的應(yīng)用。操作基本過程是樣品中的核酸與磁珠充分混合使核酸吸附到磁珠后，與磁珠一起在磁場(chǎng)的作用下與溶液分離，經(jīng)過幾次洗滌后，用洗脫液使核酸與磁珠分離，磁珠再由磁場(chǎng)中從液相中分離出來，液相即為純化的核酸溶液。所以磁珠法提取核酸該技術(shù)利用磁珠的物理特性提取純化核酸，不使用有毒有害化學(xué)試劑，操作過程簡(jiǎn)單，不用頻繁更換離心管和吸咀，不用離心，磁吸瞬間可以完成，核酸得率和純度優(yōu)于酚-氯仿法等化學(xué)方法。磁珠法較傳統(tǒng)的酚-氯仿法等化學(xué)方法是革命性的技術(shù)革新。如公開號(hào)CN101684138A公開一種應(yīng)用納米磁珠純化核酸的試劑盒，該試劑盒由裂解液、磁珠緩沖液、洗滌緩沖液1、洗滌緩沖液2、洗滌緩沖液 3、洗脫緩沖液和平衡液組成；該發(fā)明提取核酸速度快、靈敏度高，并且比傳統(tǒng)核酸純化方法具有自動(dòng)化升級(jí)的潛力，使得核酸提取的大規(guī)模集成化，均一性成為可行。但是現(xiàn)有的磁珠法提取核酸也存在以下缺點(diǎn)1.由于在離心管中進(jìn)行提取，需要反復(fù)開蓋加液、蓋蓋混勻， 再開蓋棄液過程，當(dāng)檢測(cè)量為幾十上百份樣時(shí)，反復(fù)開蓋極不方便。2.分子生物學(xué)檢測(cè)樣品用量一般為1 5微升，而常規(guī)一次提取量為50 100微升，與磁珠昂貴的成本比較，無疑存在較大的浪費(fèi)。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種操作簡(jiǎn)單、節(jié)約成本的磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采取以下技術(shù)解決法案一種磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒，包括盒體和試劑，盒體包括磁力板和可拆卸微孔板，可拆卸微孔板由孔架和微孔兩部分組成，微孔分單孔或多聯(lián)孔安置在孔架上；試劑包括磁珠、裂解-結(jié)合液、洗滌液A、洗滌液B和洗脫液。上述微孔的制作材料為聚苯乙烯、聚乙烯或聚丙烯。所述微孔的孔底為“U”形或“V”形，微孔的容積為400微升以上。所述磁力板為長(zhǎng)方形釹鐵綳強(qiáng)磁片，形狀、尺寸與可拆卸微孔板底部適配。所述磁珠為S^2包裹的氧化鐵納米顆粒，所述裂解-結(jié)合液為異硫氰酸胍消化液，所述洗滌液A為75%無水乙醇水溶液，所述洗滌液B為無水乙醇，所述洗脫液為電導(dǎo)率 ^ 18微西門子的純水，即超純水或雙蒸水。所述試劑盒提取核酸的樣品為固體、液體或固-液混和物。上述試劑盒中所有試劑均為工作液，可直接使用，磁珠液和裂解-結(jié)合液使用前充分搖勻；試劑盒在常溫條件下儲(chǔ)存和運(yùn)輸，磁珠液與磁板存放距離至少IOcm以上，有效期一年；本發(fā)明試劑與器械配合使用，不建議與其它試劑或器械混用。使用本實(shí)用新型試劑盒提取核酸的方法如下1.將樣品與裂解-結(jié)合液放入離心管內(nèi)充分作用后，在4000 10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心5 15分鐘；2.取上清液50 200微升/孔放入微孔板的微孔中，記錄樣品對(duì)應(yīng)的孔號(hào)，并用 8通道微量移液器向微孔加入磁珠5 10微升/孔；3.將微孔板放在微量漩渦振蕩器中充分混勻，靜置5 10分鐘，中間和最后各混勻1 2次，然后將微孔板板底扣入磁力板上，磁吸10 30秒后將磁力板和微孔板一起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；4.先分離微孔板和磁力板，然后用8通道微量移液器向微孔加入洗滌液A，50 200微升/孔，將微孔板放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮，再將微孔板板底扣入磁力板上，磁吸10 30秒后將磁力板和微孔板一起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，然后管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；重復(fù)操作此步驟3 5遍；5.再次分離微孔板和磁力板，然后用8通道微量移液器向微孔加入洗滌液B，50 200微升/孔，將微孔板放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮，再將微孔板板底扣入磁力板上，磁吸10 30秒后將磁力板和微孔板一起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，然后管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；6.將微孔板移入干燥箱中45 65°C干燥10 20分鐘后，用8通道微量移液器向微孔加入洗脫液，30 200微升/孔，將微孔板放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸?。?.將微孔板移入恒溫箱中60 65°C作用10 20分鐘，期間振蕩混勻2 3次， 最后將微孔板板底扣入磁力板上，磁吸10 30秒，上清液即為提取純化的核酸。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)1.微孔固定于板架中，便于使用多道移液器加、取液和棄液，克服了原技術(shù)逐管反復(fù)開蓋加液和棄液等繁瑣的操作，可一次性大批量提取樣品的核酸，工作效率是原技術(shù)的10倍以上。本試劑盒在提供提取試劑的同時(shí)還提供一套核酸提取器械---盒體，由一塊類似于酶標(biāo)板的可拆卸微孔板和一塊與微孔板適配的磁力板組成；磁珠與核酸吸附、洗滌、 洗脫、磁吸等均在孔中進(jìn)行，類似于ELISA操作過程，不需要逐管反復(fù)開蓋加液、棄液等繁瑣的操作，試劑用量較離心管方式節(jié)省一半以上。2.耗材便宜經(jīng)濟(jì)，其核酸提取成本是機(jī)器用深孔板法的1/10。3.試劑消耗少，磁珠加樣量?jī)H為5ul等試劑是傳統(tǒng)方法和深孔板法用量的1/2。磁力板的作用是提供磁吸作用，在甩棄孔內(nèi)液體時(shí)，磁力板與微孔板緊貼，吸住磁珠，防止磁珠隨液體甩出。

圖1是本實(shí)用新型一實(shí)施例試劑盒的示意圖。圖2是本實(shí)用新型的磁力板示意圖。圖3是本實(shí)用新型的可拆卸8聯(lián)孔微孔的示意圖。圖4是本實(shí)用新型的微孔板孔架的示意圖。圖5是本實(shí)用新型的8X 12規(guī)格微孔板的示意圖。附圖標(biāo)記磁力板1、微孔板2、孔架3、微孔4。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)一步說明。實(shí)施例1 如附圖所示，用聚苯乙烯制作容積為400微升、孔底呈U形的8聯(lián)孔的微孔4，然后將微孔4放入相應(yīng)的孔架3中，組成可拆卸微孔板2 ；將組裝好的可拆卸微孔板2叩在形狀、尺寸與可拆卸微孔板2底部適配的磁力板1上，使微孔4底部與磁力板1緊貼在一起， 即可得到本實(shí)用新型的磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒。實(shí)施例2 如附圖所示，用聚丙烯制作容積為500微升、孔底呈U形的8聯(lián)孔的微孔4，然后將微孔4放入相應(yīng)的孔架3中，組成可拆卸微孔板2 ；將組裝好的可拆卸微孔板2叩在形狀、 尺寸與可拆卸微孔板2底部適配的磁力板1上，使微孔4底部與磁力板1緊貼在一起，即可得到本實(shí)用新型的磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒。實(shí)施例3 用聚乙烯制作容積為550微升、孔底為V形的單孔微孔4，然后將多個(gè)單孔微孔4 放入相應(yīng)數(shù)目的孔架3中，組成可拆卸微孔板2 ；將組裝好的可拆卸微孔板2叩在形狀、尺寸與可拆卸微孔板2底部適配的磁力板1上，使微孔4底部與磁力板1緊貼在一起，即可得到本實(shí)用新型的磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒。實(shí)施例4 用上述實(shí)施例1的磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒提取血清/全血樣品中的DNA 的步驟如下1.在離心管內(nèi)加入血清/全血和3 5倍量的異硫氰酸胍消化液(V/V)，充分混勻作用后，在4000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘；2.取上清液50微升/孔放入微孔板2小孔中，記錄樣品對(duì)應(yīng)的孔號(hào)，并用8通道微量移液器加入磁珠5微升/孔；3.將微孔板2在微量漩渦振蕩器中充分混勻，靜置5分鐘，中間和最后各混勻1次，然后將微孔板2板底扣入磁力板1上，磁吸10秒后將磁力板1和微孔板2 —起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；4.先分離微孔板2和磁力板1，然后用8通道微量移液器向微孔板加入75%無水乙醇水溶液，50微升/孔，將微孔板2放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮，再將微孔板2板底扣入磁力板1上，磁吸10秒后將磁力板1和微孔板2 —起拿起，甩凈孔內(nèi)液體， 然后管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；重復(fù)操作此步驟3遍；5.再次分離微孔板2和磁力板1，然后用8通道微量移液器向微孔板2加入無水乙醇，50微升/孔，將微孔板2放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮，再將微孔板2 板底扣入磁力板1上，磁吸10秒后將磁力板1和微孔板2 —起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，然后管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；6.將微孔板2移入干燥箱中45°C干燥10分鐘后，用8通道微量移液器向微孔板 2加入電導(dǎo)率3 18微西門子的超純水，30微升/孔，將微孔板2放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸??；7.將微孔板2移入恒溫箱中60°C作用10分鐘，期間振蕩混勻2次，最后將微孔板 2板底扣入磁力板1上，磁吸10秒，上清液即為提取純化的DNA酸。實(shí)施例4的結(jié)果獲得DNA水溶液的純度1. 8 < 0D260/ 0D280 < 2. 0，體積 ^ 30ul。實(shí)施例5 用上述實(shí)施例2的磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒提取組織勻漿樣品中的DNA的步驟如下1.在離心管內(nèi)加入組織勻漿和3 5倍量的異硫氰酸胍消化液(V/V)，充分混勻作用后，在7500轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下離心10分鐘；2.取上清液100微升/孔放入微孔板2小孔中，記錄樣品對(duì)應(yīng)的孔號(hào)，并用8通道微量移液器加入磁珠8微升/孔；3.將微孔板2在微量漩渦振蕩器中充分混勻，靜置7分鐘，中間和最后各混勻2 次，然后將微孔板2板底扣入磁力板1上，磁吸20秒后將磁力板1和微孔板2 —起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；4.先分離微孔板2和磁力板1，然后用8通道微量移液器向微孔板2加入75%無水乙醇水溶液，120微升/孔，將微孔板2放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮，再將微孔板2板底扣入磁力板1上，磁吸20秒后將磁力板1和微孔板2 —起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，然后管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；重復(fù)操作此步驟4遍；5.再次分離微孔板2和磁力板1，然后用8通道微量移液器向微孔板2加入無水乙醇，150微升/孔，將微孔板2放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮，再將微孔板2 板底扣入磁力板1上，磁吸20秒后將磁力板1和微孔板2 —起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，然后管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；6.將微孔板2移入干燥箱中55°C干燥15分鐘后，用8通道微量移液器向微孔板 2加入電導(dǎo)率3 18微西門子的雙蒸水，100微升/孔，將微孔板放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮；7.將微孔板2移入恒溫箱中62°C作用15分鐘，期間振蕩混勻2次，最后將微孔板2板底扣入磁力板1上，磁吸20秒，上清液即為提取純化的DNA。實(shí)施例5的結(jié)果獲得DNA水溶液的純度1. 8 < 0D260/ 0D280 < 2. 0，體積 ^ 30ul。實(shí)施例6 用上述實(shí)施例3的磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒提取糞便樣品中的DNA的步驟如下1.在離心管內(nèi)加入糞便樣品和3 5倍量的異硫氰酸胍消化液(V/V)，充分混勻作用后，在10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下離心15分鐘；2.取上清液200微升/孔放入微孔板2小孔中，記錄樣品對(duì)應(yīng)的孔號(hào)，并用8通道微量移液器加入磁珠10微升/孔；3.將微孔板2在微量漩渦振蕩器中充分混勻，靜置10分鐘，中間和最后各混勻2 次，然后將微孔板2板底扣入磁力板1上，磁吸30秒后將磁力板1和微孔板2 —起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；4.先分離微孔板2和磁力板1，然后用8通道微量移液器向微孔板2加入75%無水乙醇水溶液，200微升/孔，將微孔板2放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮，再將微孔板2板底扣入磁力板1上，磁吸30秒后將磁力板1和微孔板2 —起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，然后管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；重復(fù)操作此步驟5遍；5.再次分離微孔板2和磁力板1，然后用8通道微量移液器向微孔板2加入無水乙醇，200微升/孔，將微孔板2放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮，再將微孔板 2板底扣入磁力板1上，磁吸30秒后將磁力板1和微孔板2 —起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，然后管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；6.將微孔板2移入干燥箱中65°C干燥20分鐘后，用8通道微量移液器向微孔板 2加入電導(dǎo)率3 18微西門子的超純水，200微升/孔，將微孔板2放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸?。?.將微孔板2移入恒溫箱中65°C作用20分鐘，期間振蕩混勻3次，最后將微孔板 2板底扣入磁力板1上，磁吸30秒，上清液即為提取純化的DNA。實(shí)施例6的結(jié)果獲得DNA水溶液的純度1. 8 < 0D260/ 0D280 < 2. 0，體積 ^ 30ul。
權(quán)利要求1.一種磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒，包括盒體，其特征在于盒體包括磁力板(1) 和可拆卸微孔板O)，可拆卸微孔板O)由孔架( 和微孔(4)兩部分組成，微孔(1)分單孔或多聯(lián)孔安置在孔架( 上。
2.根據(jù)權(quán)利要求2所述磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒，其特征在于所述微孔(4)的孔底為“U”形或“V”形，微孔(4)的容積為400微升以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒，其特征在于所述磁力板(1) 為長(zhǎng)方形釹鐵綳強(qiáng)磁片，形狀、尺寸與可拆卸微孔板( 底部適配。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒，包括盒體和試劑，盒體由類似于酶標(biāo)板的可拆卸微孔板(2)和磁力板(1)組成；試劑包括磁珠、裂解-結(jié)合液、洗滌液A、洗滌液B和洗脫液；可拆卸微孔板(2)由微孔(4)和孔架(3)兩部分組成，微孔(4)的制作材料為聚苯乙烯、聚乙烯或聚丙烯，孔底為“U”形或“V”形，微孔(4)分單孔和多聯(lián)孔兩種形式；磁力板(1)的形狀、尺寸與可拆卸微孔板(2)底部適配。本試劑盒可一次性大批量提取樣品的核酸，而且操作簡(jiǎn)單、成本低、工作效率高。
文檔編號(hào)C12N15/10GK202246705SQ20112034829
公開日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2011年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月16日
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