專利名稱：一種用于pcr反應(yīng)的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種用于PCR反應(yīng)的試劑盒技術(shù)領(lǐng)域[0001]本實(shí)用新型涉及生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及PCR實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域一種用于PCR反應(yīng)的試劑盒。
背景技術(shù)：
[0002]PCR (polymerase chain reaction，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))因其靈敏度高，特異性強(qiáng)， 已作為一種成熟技術(shù)成為分子生物學(xué)研究的關(guān)鍵技術(shù)，廣泛應(yīng)用于生物科學(xué)的各領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)中。其基本原理是依據(jù)體內(nèi)細(xì)胞分裂中的DNA半保留機(jī)制，通過制造一個(gè)體外合成系統(tǒng)的溫度，促使雙鏈DNA解開為單鏈，再由單鏈DNA與人工設(shè)計(jì)的引物復(fù)性，由DNA聚合酶根據(jù)引物的位置沿單鏈模板復(fù)制為雙鏈DNA。整個(gè)PCR過程由高溫變性、低溫復(fù)性和一定溫度下延伸三個(gè)步驟循環(huán)構(gòu)成。所以在PCR實(shí)驗(yàn)中，對(duì)溫度的控制非常重要。[0003]在常規(guī)的PCR實(shí)驗(yàn)中，通常是將DNA樣本、引物等試劑根據(jù)要求放置于普通384孔或96孔塑料基板內(nèi)，在基板的表層附上一層透明的塑料膜，以封閉溶液體系。在PCR實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的往復(fù)溫度變化后，通過普通光源或激光透過塑料膜進(jìn)行分析。[0004]在PCR實(shí)驗(yàn)中一般要求DNA樣本溫度隨著PCR的溫度同時(shí)變化，PCR反應(yīng)中，從高溫到低溫或從低溫到高溫的溫度變化靈敏性越高越好。在普通塑料基板上，由于塑料本身在溫度傳遞上有一定的延遲，而且也會(huì)吸收一定的熱能，導(dǎo)致溶液體系的溫度與理想溫度有一定誤差。另外在通過光源分析時(shí)，由于基板的變形及塑料膜本身透光率的問題，導(dǎo)致反應(yīng)結(jié)果出現(xiàn)一定的系統(tǒng)誤差。并且當(dāng)實(shí)驗(yàn)的樣本量不是很大的情況下，在普通的384孔或 96孔板的基板上，一旦附上塑料膜，對(duì)區(qū)別已加樣的孔和沒加樣的孔需要仔細(xì)辨認(rèn)，加大了實(shí)驗(yàn)者的工作量和工作強(qiáng)度。實(shí)用新型內(nèi)容[0005]本實(shí)用新型的目的是提供一種應(yīng)用于PCR實(shí)驗(yàn)的試劑盒，具有結(jié)構(gòu)簡單，溫度適應(yīng)性強(qiáng)，透光率好，成本低廉等特點(diǎn)。[0006]為達(dá)到上述目的，本實(shí)用新型的技術(shù)方案是一種用于PCR反應(yīng)的試劑盒，包括基板和設(shè)于所述基板上面的表面覆膜，所述表面覆膜上設(shè)有穴坑。[0007]優(yōu)選的，所述穴坑設(shè)有凸沿。[0008]優(yōu)選的，所述凸沿與所述表面覆膜是一體成型的。[0009]優(yōu)選的，所述穴坑內(nèi)設(shè)有反應(yīng)體系和用于封閉所述反應(yīng)體系的封閉層。[0010]優(yōu)選的，所述基板采用親水性、耐腐蝕、高溫下不易變形的透明材料。[0011]優(yōu)選的，所述基板采用硼硅酸鹽超薄玻璃材料。[0012]優(yōu)選的，所述表面覆膜采用耐高溫、變形率小的材料。[0013]優(yōu)選的，所述表面覆膜采用有機(jī)硅塑料為材料。[0014]優(yōu)選的，所述表面覆膜與所述基板接觸的一面設(shè)有熱熔粘合劑。[0015]優(yōu)選的，所述穴坑的數(shù)量及形狀與采用的PCR儀器的反應(yīng)孔匹配。[0016]優(yōu)選的，所述封閉層為石蠟。[0017]基板采用親水性、耐腐蝕、高溫下不易變形的透明材料，優(yōu)選為硼硅酸鹽玻璃所制，該基板由于其材質(zhì)及超薄的特性不會(huì)隨著溫度的變化而出現(xiàn)變形，并且耐腐蝕，親水性好。[0018]表面覆膜的材質(zhì)為采用耐高溫、變形率小的材料，優(yōu)選有機(jī)硅塑料，表面覆膜的反面涂有熱熔粘合劑，將覆膜放置與基板上，在加熱模塊加熱片刻，輕微壓制便可粘貼在一起。[0019]表面覆膜的穴坑有凸沿，凸沿與表面覆膜是一體成型的。[0020]由于本試劑盒的結(jié)構(gòu)簡單，可以在PCR儀器中保持溶液體系溫度和儀器溫度一致性。試劑盒本身不易變形，不會(huì)吸收能量導(dǎo)致溶液溫度不夠。[0021]對(duì)于單個(gè)細(xì)胞的PCR實(shí)驗(yàn)，在本試劑盒中，能夠?qū)蝹€(gè)細(xì)胞很好地束縛在一個(gè)封閉的體系內(nèi)，避免單個(gè)細(xì)胞的布朗運(yùn)動(dòng)，且細(xì)胞溶解物的濃度有所提高，便于數(shù)據(jù)的探查。[0022]還可用封閉層來封住反應(yīng)體系，封閉層采用低熔點(diǎn)的多脂石蠟溶液，在加樣完畢后，將石蠟溶液加熱至57°C -60°C，呈溶液狀后，加到每個(gè)加樣孔上，以封閉反應(yīng)體系。過去的試劑盒是使用塑料膜，厚度大約為10-20 μ m，且塑料膜與反應(yīng)體系之間有間隙存在， 增加了光透率。本試劑盒的封閉層采用液體石蠟，每個(gè)加樣孔加入l_5ul石蠟，厚度約為 5-10 μ m。且石蠟溶液表面張力較強(qiáng)，會(huì)在反應(yīng)體系上面形成隔離層，完全貼合地封閉反應(yīng)體系，不會(huì)像傳統(tǒng)384孔板等試劑盒那樣在光學(xué)膜和反應(yīng)液體間形成空腔，加之厚度也比塑料膜薄，因此光透性較固態(tài)的塑料膜好。[0023]本技術(shù)方案的有益效果是本裝置結(jié)構(gòu)簡單，使用方便，對(duì)于小樣本量的實(shí)驗(yàn)，本裝置更易于分辨加樣孔和無加樣孔，并且成本低廉，制備快速。


[0024]圖1是試劑盒單個(gè)穴坑工作時(shí)示意圖；[0025]圖2是試劑盒384孔布置圖。[0026]圖中[0027]1.基板2.表面覆膜3.凸沿4.反應(yīng)體系5.封閉層6.穴坑。
具體實(shí)施方式
[0028]
以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。[0029]實(shí)施例1，如圖1和圖2所示，試劑盒單個(gè)穴坑及384孔布置[0030]基板1為一個(gè)厚度為0. 03mm的硼硅酸鹽玻璃，該基板1由于其材質(zhì)及超薄的特性不會(huì)隨著溫度的變化而出現(xiàn)變形，并且耐腐蝕，親水性好。[0031]表面覆膜2的材質(zhì)為有機(jī)硅塑料，為384孔(384個(gè)穴坑4)，厚度為0.8mm。表面覆膜2的反面涂有熱熔粘合劑，將表面覆膜2放置于基板1上，在加熱模塊加熱片刻，輕微壓制便可粘貼在一起。每個(gè)穴坑6 口沿上設(shè)有凸沿3，該凸沿3與表面覆膜一體成型，穴坑 6內(nèi)放置所述反應(yīng)體系4，在反應(yīng)體系4上再加設(shè)封閉層5，對(duì)反應(yīng)體系4進(jìn)行封閉。[0032]實(shí)驗(yàn)時(shí)，往穴坑6內(nèi)加裝反應(yīng)體系4完畢后，將石蠟加熱至57°C，呈溶液狀后，加到每個(gè)加樣孔(穴坑6)內(nèi)，在反應(yīng)體系4表面形成一層封閉層5，以封閉反應(yīng)體系。[0033]實(shí)施例2其余與實(shí)施例1相同，不同之處在于，基板1為一個(gè)厚度為0. 5mm的硼硅酸鹽玻璃，該基板1由于其材質(zhì)及超薄的特性不會(huì)隨著溫度的變化而出現(xiàn)變形，并且耐腐蝕，親水性好。表面覆膜2的材質(zhì)為有機(jī)硅塑料，穴坑6數(shù)量為96孔，厚度為1. 4mm。表面覆膜2 的反面涂有熱熔粘合劑，將表面覆膜2放置于基板1上，在加熱模塊加熱片刻，輕微壓制便可粘貼在一起。實(shí)驗(yàn)時(shí)，往穴坑6內(nèi)加裝反應(yīng)體系4完畢后，將石蠟加熱至60°C，呈溶液狀后，加到每個(gè)加樣孔(穴坑6)內(nèi)，在反應(yīng)體系4表面形成一層封閉層5，以封閉反應(yīng)體系。實(shí)施例3基板1為一個(gè)厚度為0. 03mm的硼硅酸鹽玻璃，該基板1由于其材質(zhì)及超薄的特性不會(huì)隨著溫度的變化而出現(xiàn)變形，并且耐腐蝕，親水性好。表面覆膜2的材質(zhì)為有機(jī)硅塑料，穴坑6的數(shù)量為96孔，厚度為0. 8mm。表面覆膜2的反面涂有熱熔粘合劑，將表面覆膜2放置于基板1上，在加熱模塊加熱片刻，輕微壓制便可粘貼在一起。實(shí)驗(yàn)時(shí)，往穴坑6內(nèi)加裝反應(yīng)體系4完畢后，將石蠟加熱至57°C，呈溶液狀后，加到每個(gè)加樣孔(穴坑6)內(nèi)，在反應(yīng)體系4表面形成一層封閉層5，以封閉反應(yīng)體系。實(shí)施例4其余與實(shí)施例1相同，不同之處在于，基板1為一個(gè)厚度為0. 5mm的硼硅酸鹽玻璃，該基板1由于其材質(zhì)及超薄的特性不會(huì)隨著溫度的變化而出現(xiàn)變形，并且耐腐蝕，親水性好。表面覆膜2的材質(zhì)為有機(jī)硅塑料，穴坑6的數(shù)量為384孔，厚度為1. 4mm。表面覆膜2的反面涂有熱熔粘合劑，將表面覆膜2放置于基板1上，在加熱模塊加熱片刻，輕微壓制便可粘貼在一起。實(shí)驗(yàn)時(shí)，往穴坑6內(nèi)加裝反應(yīng)體系4完畢后，將石蠟加熱至60°C，呈溶液狀后，加到每個(gè)加樣孔(穴坑6)內(nèi)，在反應(yīng)體系4表面形成一層封閉層5，以封閉反應(yīng)體系。上述實(shí)施例中，基板1的材質(zhì)還可以是CR39(雙烯丙基二甘醇碳酸酯聚合物)熱固塑料或聚丙烯塑料。所述表面覆膜2的材質(zhì)還可以是含有聚丙烯酰胺的聚丙烯塑料、含聚乙烯醇的聚乙烯或聚己內(nèi)酯。所述封閉層5的材料還可以使用甲基硅油等。上述實(shí)施例中，如果表面覆膜2足夠厚，即上面的穴坑6可以足夠深，則不需要設(shè)置凸沿3，但是這使得表面覆膜2的生產(chǎn)成本增加，因此，凸沿3的設(shè)置減少了原料的用量， 降低了成本，也減輕了產(chǎn)品重量。本技術(shù)方案的有益效果是本試劑盒在實(shí)驗(yàn)過程中，很好地增加了溶液體系的溫度敏感性和光透率，實(shí)現(xiàn)溶液體系的溫度隨PCR儀器的溫度變化同步迅速變化。由于本試劑盒的結(jié)構(gòu)簡單，可以在PCR儀器中保持溶液體系溫度和儀器溫度一致性。試劑盒本身不易變形，不會(huì)吸收能量導(dǎo)致溶液溫度不夠。對(duì)于單個(gè)細(xì)胞的PCR實(shí)驗(yàn)，在本試劑盒中，能夠?qū)蝹€(gè)細(xì)胞很好地束縛在一個(gè)封閉的體系內(nèi)，避免單個(gè)細(xì)胞的布朗運(yùn)動(dòng)，且細(xì)胞溶解物的濃度有所提高，便于數(shù)據(jù)的探查。[0051]還可用封閉層來封住反應(yīng)體系，封閉層采用低熔點(diǎn)的多脂石蠟溶液，在加樣完畢后，將石蠟溶液加熱至57°C -60°C，呈溶液狀后，加到每個(gè)加樣孔上，以封閉反應(yīng)體系。過去的試劑盒是使用塑料膜，厚度大約為10-20 μ m，且塑料膜與反應(yīng)體系之間有間隙存在， 增加了光透率。本試劑盒的封閉層采用液體石蠟，每個(gè)加樣孔加入l_5ul石蠟，厚度約為 5-10 μ m。且石蠟溶液表面張力較強(qiáng)，會(huì)在反應(yīng)體系上面形成隔離層，完全貼合地封閉反應(yīng)體系，不會(huì)像傳統(tǒng)384孔板等試劑盒那樣在光學(xué)膜和反應(yīng)液體間形成空腔，加之厚度也比塑料膜薄，因此光透性較固態(tài)的塑料膜好。本裝置結(jié)構(gòu)簡單，使用方便，對(duì)于小樣本量的實(shí)驗(yàn)，本裝置更易于分辨加樣孔和無加樣孔，并且成本低廉，制備快速。以上所述的僅是本實(shí)用新型的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本實(shí)用新型創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本實(shí)用新型的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求1.一種用于PCR反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，包括基板和設(shè)于所述基板上面的表面覆膜，所述表面覆膜上設(shè)有穴坑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于PCR反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，所述穴坑設(shè)有凸沿。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于PCR反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，所述凸沿與所述表面覆膜一體成型。
4.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一所述的用于PCR反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，所述穴坑內(nèi)設(shè)有反應(yīng)體系和用于封閉所述反應(yīng)體系的封閉層。
5.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一所述的用于PCR反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，所述基板采用親水性、耐腐蝕、高溫下不易變形的透明材料。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于PCR反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，所述基板采用硼硅酸鹽超薄玻璃材料。
7.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一所述的用于PCR反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，所述表面覆膜采用耐高溫、變形率小的材料。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用于PCR反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，所述表面覆膜采用有機(jī)硅塑料為材料。
9.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一所述的用于PCR反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，所述表面覆膜與所述基板接觸的一面設(shè)有熱熔粘合劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一所述的用于PCR反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，所述穴坑的數(shù)量及形狀與采用的PCR儀器的反應(yīng)孔匹配。
11.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于PCR反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，所述封閉層為石蠟。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種用于PCR反應(yīng)的試劑盒，包括基板、表面覆膜，主要用于PCR檢測。該試劑盒能增加溶液體系的溫度敏感性和光透率，實(shí)現(xiàn)溶液體系的溫度隨PCR儀器的溫度變化同步迅速變化。本裝置結(jié)構(gòu)簡單，使用方便，對(duì)于小樣本量的實(shí)驗(yàn)，本裝置更易于分辨加樣孔和無加樣孔，并且成本低廉，制備快速。
文檔編號(hào)C12M1/38GK202246700SQ20112036017
公開日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2011年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月23日
發(fā)明者徐夢曄 申請(qǐng)人:上海熙洛生物技術(shù)有限公司