專利名稱：使用具有過(guò)水解酶活性的酶處理角質(zhì)纖維的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的組合物和方法涉及在含水條件下使用酶法生成的過(guò)酸處理角質(zhì)纖維和含此類(lèi)纖維的織物。所述處理減輕了氈化并提高上染率。
背景技術(shù)：
當(dāng)由角質(zhì)纖維制成的紡織物(諸如羊毛)在濕潤(rùn)狀態(tài)下經(jīng)受機(jī)械操縱吋，它們具有收縮的趨勢(shì)(有時(shí)很顯著)。此類(lèi)收縮被稱為“氈化”。氈化通常是不期望且不可逆的，并且使得織物或衣服無(wú)法使用?？赏ㄟ^(guò)對(duì)紡織物的表面進(jìn)行化學(xué)改性而減輕氈化趨勢(shì)，所述改性通過(guò)減少或掩蓋鱗片結(jié)構(gòu)而改變紡織物的摩擦性質(zhì)。氯化法是用于減輕氈化并提高上染率的最古老、最廣為人知的方法。然而，含氯的化合物以及它們的分解產(chǎn)物對(duì)環(huán)境和紡織工人有害。類(lèi)似的環(huán)境和安全問(wèn)題與樹(shù)脂整理相關(guān)，因?yàn)闃?shù)脂通常與環(huán)氧氯丙烷交聯(lián)。 使用過(guò)酸對(duì)羊毛纖維的表面進(jìn)行改性已被描述(如，美國(guó)專利No. 3, 634, 020);然而，此類(lèi)方法在無(wú)水有機(jī)溶液中進(jìn)行。與使用和儲(chǔ)存濃縮的過(guò)酸溶液和有機(jī)溶劑相關(guān)的環(huán)境和安全問(wèn)題妨礙此類(lèi)方法在商業(yè)上的可行性。需要用于減輕羊毛和其他由角質(zhì)纖維制成的織物的氈化并提高它們的上染率的更安全、更環(huán)保以及更有效的組合物和方法。

發(fā)明內(nèi)容
描述了用于對(duì)角質(zhì)纖維進(jìn)行化學(xué)改性以便(如)減輕包含此類(lèi)纖維的紡織物的氈化、提高其上染率和/或降低其針扎感的組合物和方法。在ー些方面，描述了用于減輕由角質(zhì)纖維制成的羊毛或另外的紡織物的氈化的方法，該方法包括使紡織物接觸包含具有過(guò)水解酶活性的酶、酶的酯底物和過(guò)氧化氫源的含水組合物，其中酶在含水介質(zhì)中就地生成過(guò)酸，并且其中過(guò)酸對(duì)紡織物進(jìn)行改性，從而降低紡織物氈化的傾向。在一些實(shí)施例中，酶在紡織物與含水組合物接觸之前就地生成過(guò)酸。在一些實(shí)施例中，在紡織物與含水組合物接觸之后，酶就地生成過(guò)酸。在一些實(shí)施例中，紡織物與含水組合物接觸和酶就地生成過(guò)酸同時(shí)發(fā)生。在具體的方面，提供了用于減輕羊毛或其它由角質(zhì)纖維形成的紡織物氈化的方法，該方法包括使紡織物與包含具有過(guò)水解酶活性的酶、酶的酯底物和過(guò)氧化氫源的含水組合物接觸一段足以生成過(guò)酸的時(shí)間，其中過(guò)酸對(duì)紡織物進(jìn)行改性，從而降低紡織物氈化的傾向。在另ー個(gè)具體的方面，提供了用于減輕羊毛或其它由角質(zhì)纖維形成的紡織物氈化的方法，該方法包括(i)提供包含下述物質(zhì)的含水組合物具有過(guò)水解酶活性的酶、酶的酷底物和過(guò)氧化氫源，(ii)在含水組合物中就地生成過(guò)酸，以及(iii)使包含角質(zhì)纖維的紡織物與含有過(guò)酸的含水組合物接觸，從而對(duì)紡織物進(jìn)行改性，以便降低紡織物氈化的趨勢(shì)。
在又ー個(gè)具體的方面，提供了用于減輕羊毛或其它由角質(zhì)纖維形成的紡織物氈化的方法，該方法包括(i)提供包含下述物質(zhì)的含水組合物具有過(guò)水解酶活性的酶、酶的酷底物和過(guò)氧化氫源，(ii)在含水組合物中就地生成過(guò)酸，以及(iii)使角質(zhì)纖維與含有過(guò)酸的含水組合物接觸，從而對(duì)纖維進(jìn)行改性，以便降低包含所述纖維的紡織物氈化的趨勢(shì)。在再ー個(gè)方面，在用于制造包含角質(zhì)纖維的紡織物的方法中，提供了用于對(duì)所述纖維進(jìn)行改性以減輕紡織物氈化的方法，包括(i)提供包含下述物質(zhì)的含水組合物具有過(guò)水解酶活性的酶、酶的酯底物和過(guò)氧化氫源，(ii)在含水組合物中就地生成過(guò)酸，以及
(iii)使角質(zhì)纖維與含有過(guò)酸的含水組合物接觸，以對(duì)纖維進(jìn)行改性，從而降低包 含所述纖維的紡織物氈化的趨勢(shì)。在任何上述方法的一些實(shí)施例中，所述角質(zhì)纖維得自綿羊。在一些實(shí)施例中，所述紡織物為羊毛。在任何上述方法的一些實(shí)施例中，具有過(guò)水解酶活性的酶為這樣的多肽，其具有的氨基酸序列與序列標(biāo)識(shí)號(hào)I或序列標(biāo)識(shí)號(hào)2示出的氨基酸序列具有至少70%的同一性。在一些實(shí)施例中，具有過(guò)水解酶活性的酶為這樣的多肽，其具有的氨基酸序列與序列標(biāo)識(shí)號(hào)I或序列標(biāo)識(shí)號(hào)2不出的氨基酸序列具有至少80%的同一'注。在一些實(shí)施例中，具有過(guò)水解酶活性的酶為這樣的多肽，其具有的氨基酸序列與序列標(biāo)識(shí)號(hào)I或序列標(biāo)識(shí)號(hào)2示出的氨基酸序列具有至少90%的同一性。在任何上述方法的一些實(shí)施例中，具有過(guò)水解酶活性的酶源自恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis)過(guò)水解酶。在一些實(shí)施例中，具有過(guò)水解酶活性的酶為具有置換S54V的恥垢分枝桿菌過(guò)水解酶的變體。在任何上述方法的一些實(shí)施例中，具有過(guò)水解酶活性的酶不是會(huì)被技術(shù)人員認(rèn)為是蛋白酶、過(guò)氧化物酶或齒代過(guò)氧化物酶的酶。在任何上述方法的一些實(shí)施例中，酷底物為丙ニ醇ニ醋酸酷(PGDA)、甘油三こ酸酷、こ酸こ酷、三丁酸甘油酯和/或こニ醇ニ醋酸酷(EGDA)。在一些實(shí)施例中，過(guò)氧化氫源為過(guò)氧化氫、過(guò)硼酸鹽或過(guò)碳酸鹽。任何上述方法的ー些實(shí)施例還包括用亞硫酸鈉處理角質(zhì)纖維或包含角質(zhì)纖維的紡織物以進(jìn)ー步減輕紡織物的氈化的步驟。這些方法的ー些實(shí)施例還包括用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶處理角質(zhì)纖維或包含角質(zhì)纖維的紡織物以改善紡織物強(qiáng)度的步驟。在另一方面，提供了用于進(jìn)行任何上述方法的試劑套裝，該套裝包括具有過(guò)水解酶活性的酶、酶的酯底物、過(guò)氧化氫源以及使用說(shuō)明。在另ー個(gè)方面，提供了通過(guò)任何上述方法制備的紡織物。在說(shuō)明書(shū)(包括附圖)中，本發(fā)明的組合物和方法的這些和其他方面以及實(shí)施例將顯而易見(jiàn)。


圖I為顯示用緩沖液處理過(guò)的羊毛纖維的形態(tài)的掃描電子顯微圖(放大倍率^ 2，000X )。圖2為顯示用緩沖液+PGDA+H202處理過(guò)的羊毛纖維的形態(tài)的掃描電子顯微圖(放大倍率^ 2，OOOX )。圖3為顯示用緩沖液+PGDA+H202+芳基酯酶處理過(guò)的羊毛纖維的形態(tài)的掃描電子顯微圖(放大倍率^ 2，000X )。圖4顯示用⑴緩沖液、⑵緩沖液+PGDA+H202以及(3)緩沖液+PGDA+H202+芳基酯酶處理過(guò)的羊毛纖維的FTIR/ATR光譜。圖5示出用鑒別織物纖維染色劑A對(duì)經(jīng)不同處理的羊毛纖維進(jìn)行染色的結(jié)果。左側(cè)的纖維未經(jīng)染色(對(duì)照物)。右側(cè)的纖維使用鑒別織物纖維染色劑A進(jìn)行了染色(經(jīng)染色)。圖6顯示用緩沖液(左側(cè))、緩沖液+PGDA+H202 (中間)和緩沖液+PGDA+H202+芳基酯酶(右側(cè))處理過(guò)的羊毛平針織物樣本的收縮量。圖7示出放置在處理前的羊毛針織樣本上的參考標(biāo)記(即，棉/聚酯線；以十字形 示出)的位置。圖8示出用PGDA+H202 (左側(cè))和PGDA+H202+芳基酯酶(右側(cè))處理過(guò)、且如所述進(jìn)行了洗滌的羊毛雙羅紋樣本的尺寸。圖9和10為顯示來(lái)自用緩沖液+PGDA+H202 (圖9)和緩沖液+PGDA+H202+芳基酯酶(圖10)處理過(guò)的樣本的羊毛纖維形態(tài)的掃描電子顯微圖(放大倍率 2，000X )。圖11顯示對(duì)照羊毛纖維和用酶法生成的過(guò)酸處理過(guò)的那些羊毛纖維的FTIR/ATR光譜。圖12顯示用⑴非酶、⑵芳基酯酶、(3)亞硫酸鈉、⑷非酶隨后是亞硫酸鈉以及(4)芳基酯酶隨后是亞硫酸鈉處理過(guò)的羊毛平針織物的FTIR/ATR光譜。
具體實(shí)施例方式定義在詳細(xì)描述本發(fā)明組合物和方法之前，為清楚起見(jiàn)定義了以下術(shù)語(yǔ)。未定義的術(shù)語(yǔ)應(yīng)當(dāng)與相關(guān)領(lǐng)域中使用的它們的通常含義相一致。如本文所用，“角質(zhì)纖維”是包含角蛋白的纖維，角蛋白是天然存在于動(dòng)物細(xì)胞中的纖維性結(jié)構(gòu)蛋白家族。角質(zhì)纖維主要存在于羊毛(參見(jiàn)下文)、毛發(fā)、毛皮、指/趾甲和其他動(dòng)物組織中。如本文所用，角質(zhì)纖維不僅包括天然存在的纖維，還包括合成的纖維。如本文所用，“羊毛”是指由羊亞科中的動(dòng)物(主要是綿羊)的角質(zhì)纖維制成的紡織物。然而，羊毛還涵蓋得自山羊的山羊絨和馬海毛、得自駱駝科中動(dòng)物的羊駝毛(vicufm)、羊駝毛和駱駝毛，以及得自兔子的安哥拉毛。用于形成羊毛的角質(zhì)纖維與毛發(fā)或毛皮類(lèi)似但又與之不同。如本文所用，“氈化”是指包含角質(zhì)纖維的紡織物沿一個(gè)或多個(gè)維度收縮。氈化易于(如)在潮濕狀態(tài)下揉搓此類(lèi)紡織物而引起，此時(shí)角質(zhì)纖維表面上的鱗片相互作用，從而將纖維拉到一起，并使紡織物收縮。如本文所用，“收縮”是指如沿ー個(gè)或多個(gè)維度測(cè)量的織物的表面積減小。收縮可與密度增大和紋理的改變相關(guān)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“紡織物”是指纖維、紗線、織物、衣服和非織物。紡織物可為天然的紡織物、合成的(如，制造的)紡織物、或它們的共混物。術(shù)語(yǔ)“紡織物”是指未經(jīng)加工和經(jīng)加工的纖維、紗線、梭織或針織織物、非織物和衣物。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)“織物”是指制造的纖維和/或紗線的集合，其具有與其厚度相關(guān)的大量表面積，以及用于賦予所述集合有用的機(jī)械強(qiáng)度的足夠的內(nèi)聚力。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“染料”是指對(duì)其施加的基底(諸如紡織物)具有親和カ的有色物質(zhì)(即，發(fā)色團(tuán))。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“染色”是指將發(fā)色團(tuán)施加到基底(諸如紡織物)上，尤其是通過(guò)浸泡在染色溶液中。如本文所用，“含水介質(zhì)”是其中溶劑主要為水的溶液或混合溶液/懸浮液。含水介質(zhì)基本上不含無(wú)機(jī)溶劑。如本文所用，“過(guò)水解酶”是能夠催化導(dǎo)致過(guò)酸生成的過(guò)氧化氫解反應(yīng)的酶。優(yōu)選地，過(guò)水解酶顯示具有高的過(guò)氧化氫解水解比率。過(guò)水解酶可具有?；D(zhuǎn)移酶和/或芳基 酯酶活性，并可因此而得名。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“過(guò)氧化氫解”是指其中酯底物和過(guò)氧化氫被用于產(chǎn)生過(guò)酸的反應(yīng)。如本文所用，“有效量的過(guò)水解酶”是指對(duì)角質(zhì)纖維進(jìn)行改性以減輕由角質(zhì)纖維制成的織物氈化所必需的過(guò)水解酶的量。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“過(guò)酸”是指具有通式RC( = O) OOH的分子，該分子是羧酸酯與過(guò)氧化氫反應(yīng)而形成的高反應(yīng)性產(chǎn)物。此類(lèi)過(guò)酸產(chǎn)物能夠?qū)⑺鼈兊钠渲些`個(gè)氧原子轉(zhuǎn)移至另ー個(gè)分子(諸如角質(zhì)纖維)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“酯底物”是指包含至少ー個(gè)酯鍵的過(guò)水解酶底物。包含脂族和/或芳族羧酸和醇類(lèi)的酯可用作使用過(guò)水解酶的底物。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“酰基”是指具有通式RCO-的有機(jī)基團(tuán)，其可通過(guò)移除-OH基團(tuán)衍生自有機(jī)酸。?；拿Q通常具有后綴“氧基”，如，甲酰氧基氯(CH3CO-Cl),其為由甲酸(CH3CO-OH)形成的酰氯。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“酰化”是指其中分子的一個(gè)取代基被?；〈幕瘜W(xué)轉(zhuǎn)化、或?qū)Ⅴ；敕肿觾?nèi)的過(guò)程。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“過(guò)氧化氫源”是指能夠(如)就地生成過(guò)氧化氫的分子。過(guò)氧化氫源包括過(guò)氧化氫自身、以及自發(fā)地或經(jīng)酶法生成作為反應(yīng)產(chǎn)物的過(guò)氧化氫的分子。如本文所用，短語(yǔ)“過(guò)氧化氫解水解比率”是指經(jīng)酶法制備的過(guò)酸與經(jīng)酶法制備的酸(如，以摩爾為單位)的比率，其中所述過(guò)酸和所述酸在限定的條件下和限定的時(shí)間內(nèi)通過(guò)過(guò)水解酶由酯底物生成?？墒褂肳005/056782中提供的分析法確定通過(guò)酶制備的過(guò)酸和酸的量。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“生成過(guò)氧化氫的氧化酶”是指催化涉及分子氧(O2)作為電子受體的氧化/還原反應(yīng)的酶。在此類(lèi)反應(yīng)中，氧氣被還原為水(H2O)或過(guò)氧化氫(H2O2)15本文中適用的氧化酶是作用于其底物生成過(guò)氧化氫(與水形成對(duì)照)的氧化酶。本文中適用的生成過(guò)氧化氫的氧化酶和其底物的例子為葡萄糖氧化酶和葡萄糖?？捎糜谏蛇^(guò)氧化氫的其他氧化酶包括醇氧化酶、こニ醇氧化酶、甘油氧化酶、氨基酸氧化酶等。生成過(guò)氧化氫的氧化酶可為碳水化合物氧化酶。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“多肽”和“蛋白質(zhì)”可互換使用，是指通過(guò)肽鍵連接的包含氨基酸殘基的任意長(zhǎng)度的聚合物。本文使用氨基酸殘基的常規(guī)單字母密碼或三字母密碼。聚合物可為直鏈或支鏈的，其可包含經(jīng)修飾的氨基酸，并且其可被非氨基酸隔斷。所述術(shù)語(yǔ)還涵蓋天然修飾或通過(guò)干預(yù)修飾的氨基酸，所述干預(yù)為例如形成ニ硫鍵、糖基化、脂化、こ?；?、磷酸化或任何其他操作或修飾(諸如與標(biāo)記組分結(jié)合)。在所述定義中還包括(例如)包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸(包括，例如非天然氨基酸等)類(lèi)似物的多肽，以及本領(lǐng)域中已知的其他修改形式。如本文所用，將功能上和/或結(jié)構(gòu)上類(lèi)似的蛋白質(zhì)視為“相關(guān)蛋白質(zhì)”。此類(lèi)蛋白質(zhì)可源自不同屬和/或種的生物體、或甚至不同綱的生物體(如，細(xì)菌和真菌)。相關(guān)蛋白質(zhì)還涵蓋通過(guò)基本序列分析確定的、通過(guò)三級(jí)結(jié)構(gòu)分析確定的或通過(guò)免疫交叉反應(yīng)性確定的同源物。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“衍生的多肽/蛋白質(zhì)”是指這樣的蛋白質(zhì)，其通過(guò)將ー個(gè)或多個(gè)氨基酸添加到N端和/或C端、在氨基酸序列中的ー個(gè)或多個(gè)不同位點(diǎn)處置換一個(gè)或多個(gè)氨基酸、和/或在該蛋白質(zhì)的一端或兩端或氨基酸序列中的ー個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)處缺失ー個(gè)或多個(gè)氨基酸、和/或在該氨基酸序列中的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)處插入一個(gè)或多個(gè)氨基酸而衍生自另ー蛋白質(zhì)。制備蛋白質(zhì)衍生物可通過(guò)修飾編碼天然蛋白的DNA序列、將DNA序列轉(zhuǎn) 到合適的宿主中以及表達(dá)經(jīng)修飾的DNA序列以形成衍生的蛋白質(zhì)而實(shí)現(xiàn)。相關(guān)(以及衍生的)蛋白質(zhì)包括“變體蛋白質(zhì)”。變體蛋白質(zhì)由于置換、缺失和/或插入少量的氨基酸殘基而不同于參考蛋白質(zhì)/親本蛋白質(zhì)，如野生型蛋白質(zhì)。不同的氨基酸殘基的數(shù)量可以為ー個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50或更多個(gè)氨基酸殘基。變體蛋白質(zhì)與參考蛋白質(zhì)享有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、或甚至至少約99%或更高的氨基酸序列同一性。變體蛋白質(zhì)還可在所選的基序、結(jié)構(gòu)域、表位、保守性區(qū)域等中不同于參考蛋白質(zhì)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“類(lèi)似序列”是指在蛋白質(zhì)內(nèi)提供與所關(guān)注蛋白質(zhì)(即，通常是所關(guān)注的原始蛋白質(zhì))相似的功能、三級(jí)結(jié)構(gòu)和/或保守性殘基的序列。例如，在包含α-螺旋或β_片層結(jié)構(gòu)的表位區(qū)域中，類(lèi)似序列中的置換氨基酸優(yōu)選地保持相同的特定結(jié)構(gòu)。所述術(shù)語(yǔ)還指核苷酸序列以及氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，開(kāi)發(fā)了類(lèi)似序列，使得置換氨基酸導(dǎo)致變體酶顯示相似或改進(jìn)的功能。在一些實(shí)施例中，所關(guān)注蛋白質(zhì)中氨基酸的三級(jí)結(jié)構(gòu)和/或保守性殘基位于所關(guān)注區(qū)段或片段處或其附近。因此，在所關(guān)注區(qū)段或片段包含(例如)α -螺旋或β -片層結(jié)構(gòu)的情況下，置換氨基酸優(yōu)選地保持該特定結(jié)構(gòu)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“同源蛋白質(zhì)”是指與參考蛋白質(zhì)具有相似活性和/或結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)。這并不意味著各同源物一定在進(jìn)化上相關(guān)因此，該術(shù)語(yǔ)的意圖是涵蓋得自不同生物體的相同、相似或相應(yīng)的酶(即，在結(jié)構(gòu)和功能方面)。在一些實(shí)施例中，很希望識(shí)別與參考蛋白質(zhì)具有相似的四級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)和/或一級(jí)結(jié)構(gòu)的同源物。在一些實(shí)施例中，同源蛋白質(zhì)引起與參考蛋白質(zhì)相似的免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，同源蛋白質(zhì)被工程化以制備具有所需活性的酶。序列之間同源性的程度可使用本領(lǐng)域中已知的任何合適的方法確定(參見(jiàn)如Smith and Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2:482 (Smith 和 Waterman, 1981 年，《應(yīng)用數(shù)學(xué)進(jìn)展》，第 2 卷第 482 頁(yè));Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. , 48:443(Needleman和ffunsch, 1970年，《分子生物學(xué)雜志》，第48卷第443頁(yè))；Pearson and Lipman(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (Pearson 和 Lipman, 1988 年，《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》，第85卷第2444頁(yè))；程序，諸如在威斯康星遺傳學(xué)軟件包(Wisconsin GeneticsSoftware Package,得自威斯康星州麥迪遜市遺傳學(xué)計(jì)算機(jī)小組(Genetics ComputerGroup, Madison, WI))中的 GAP、BESTFIT、FASTA 和 TFASTA ;以及 Devereux et al. (1984)Nucleic Acids Res. 12:387_395(Devereux 等人，1984 年，《核酸研究》,第 12 卷第 387-395頁(yè)))。例如，PILEUP是可用于測(cè)定序列同源程度的程序。PILEUP使用漸進(jìn)式逐對(duì)比對(duì)從ー組相關(guān)序列產(chǎn)生多個(gè)序列対比。其還能夠繪制顯示聚類(lèi)關(guān)系(用于產(chǎn)生比對(duì))的樹(shù)形圖。PILEUP使用Feng和Doolittle的簡(jiǎn)化漸進(jìn)式比對(duì)方法(Feng and Doolittle(1987) J. Mol. EvoI. 35:35ト360 (Feng 和 Doolittle, 1987 年，《分子進(jìn)化雜志》，第 35 卷第351-360 頁(yè)))。所述方法與 Higgins 和 Sharp 描述的方法類(lèi)似(Higgins and Sharp (1989)CABI0S5:151-153 (Higgins和Sharp, 1989年，《計(jì)算機(jī)在生物科學(xué)中的應(yīng)用》，第5卷第151-153頁(yè)))?？捎玫腜ILEUP參數(shù)包括默認(rèn)間隙權(quán)重3. 00、默認(rèn)間隙長(zhǎng)度權(quán)重0. 10，以及加權(quán)末端間隙?？捎玫乃惴ǖ牧愆`個(gè)例子為Altschul等人描述的BLAST算法(Altschulet al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 (Altschul 等人，1990 年，《分子生物學(xué)雜志》，第215 卷第 403-410 頁(yè))；以及 Karlin et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787(Karlin等人，1993年，《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》，第90卷第5873-5787頁(yè)))。一種特別有用的BLAST 程序?yàn)?WU-BLAST-2 程序(參見(jiàn) Altschul et al. (1996) Meth. Enzymol. 266:460-480(Altschul等人，1996年，《酶學(xué)方法》，第266卷第460-480頁(yè)))。參數(shù)“W”、“T”和“X”確定比對(duì)的靈敏度和速度。BLAST程序使用默認(rèn)值字長(zhǎng)(W) 11、BL0SUM62記分矩陣(參見(jiàn)HenikofT and Henikoff (1989)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (Henikoff 和 Henikoff，1989年，《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》，第89卷第10915頁(yè)))比對(duì)(B) 50次、預(yù)期(E) 10、M，5、N，-4，對(duì)兩條鏈進(jìn)行比較。如本文所用，在至少兩條核酸或多肽的情況下，短語(yǔ)“基本上類(lèi)似”和“基本上相同”通常意味著多核苷酸或多肽包含的序列與參考(即，野生型)序列相比具有至少約70%的同一性、至少約75%的同一性、至少約80%的同一性、至少約85%的同一性、至少約90%的同一性、至少約91%的同一性、至少約92%的同一』注、至少約93%的同一』注、至少約94%的同一性、至少約95%的同一性、至少約96%的同一性、至少約97%的同一性、至少約98%的同一性、或甚至至少約99%的同一性或更高的同一性。序列同一性可使用諸如BLAST、ALIGN和CLUSTAL之類(lèi)的已知程序，使用標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)測(cè)定。(參見(jiàn)如Altschul，et al. (1990) J. Mol.Biol. 215:403-410 (Altschul等人，1990年，《分子生物學(xué)雜志》，第215卷第403-410頁(yè))；Henikoff et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (Henikoff 等人，1989 年，《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》，第 89 卷第 10915 頁(yè))；Karin et al. (1993)Proc. Natl. Acad Sci USA90:5873 (Karin等人，1993年，《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》，第90卷第5873頁(yè))；以及Higginset al. (1988)Gene73:237-244(Higgins 等人，1988 年，《基因》，第 73 卷第 237-244 頁(yè)))。執(zhí)行BLAST分析的軟件可通過(guò)美國(guó)生物技術(shù)信息中心(National Center for BiotechnologyInformation)公開(kāi)可用。另外，可使用FASTA對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行搜索(Pearson et al. (1988)Proc. Natl. Acad Sci. USA 85:2444-2448 (Pearson 等人，1988 年，《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》，第85卷第2444-2448頁(yè)))。兩種多肽實(shí)質(zhì)上一致的ー個(gè)指示是第一多肽與第二多肽在免疫上交叉反應(yīng)。通常，因保守氨基酸置換而不同的多肽具有免疫交叉反應(yīng)性。因此，ー種多肽與第二多肽實(shí)質(zhì)上一致，例如，在此情況下兩種多肽僅因保守置換而不同。兩種核酸序列實(shí)質(zhì)上一致的另ー個(gè)指示是兩種分子在嚴(yán)格的條件(如，在中至高嚴(yán)格度的范圍內(nèi))下彼此雜父。如本文所用，“野生型”和“天然”蛋白質(zhì)是存在于自然界中的那些蛋白質(zhì)。術(shù)語(yǔ)“野生型序列”和“野生型基因”在本文中互換使用，是指天然的或天然存在于宿主細(xì)胞內(nèi)的序列。在一些實(shí)施例中，野生型序列是指為蛋白質(zhì)工程項(xiàng)目的起始點(diǎn)的所關(guān)注序列。編碼天然形成的蛋白質(zhì)的基因可依據(jù)本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員已知的一般方法獲得。所述方法通常包括合成具有編碼所關(guān)注蛋白質(zhì)的區(qū)域的推定序列的標(biāo)記探針、由表達(dá)所述蛋白質(zhì)的生物體制備基因組文庫(kù)，以及通過(guò)雜交至探針對(duì)所述文庫(kù)進(jìn)行篩選以獲得所關(guān)注基因。然后對(duì)正向雜交克隆進(jìn)行映射和測(cè)序。如本文所用，“包裝”是指能夠以易于操作和運(yùn)輸?shù)男问教峁┻^(guò)水解酶、過(guò)水解酶的底物和/或過(guò)氧化氫源的容器。示例性的包裝包括盒子、桶、罐、圓筒、圓桶、袋子或甚至 是油罐卡車(chē)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“接觸”意味著在存在水溶液的情況下(通常在水溶液中)進(jìn)行溫育。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“對(duì)角質(zhì)纖維進(jìn)行改性”是指對(duì)角質(zhì)纖維的任何化學(xué)改變，其導(dǎo)致包含改性纖維的織物的氈化減輕?；瘜W(xué)改性包括但不限于氧化、形成磺基丙氨酸、以及形成Bunte鹽。如本文所用，単數(shù)冠詞“ー個(gè)”、“ー種”和“該”涵蓋多個(gè)指代物，除非上下文明確地另有所指。本文引用的全部參考文獻(xiàn)均據(jù)此全文以引用方式并入本文。除非另外指明，否則以下縮寫(xiě)/首字母縮略詞具有下列含義
EC酶學(xué)委員會(huì)
kDa千道爾頓
MW分子量
w/v重量/體積
w/w重量/重量
v/v體積/體積
wt%重量百分比
Γ攝氏度
權(quán)利要求
1.一種用于減輕羊毛或另外的由角質(zhì)纖維形成的紡織物氈化的方法，所述方法包括 使所述紡織物與包含具有過(guò)水解酶活性的酶、所述酶的酯底物和過(guò)氧化氫源的含水組合物接觸， 其中所述酶在含水介質(zhì)中就地生成過(guò)酸，并且 其中所述過(guò)酸對(duì)所述紡織物進(jìn)行改性，從而減輕所述紡織物的氈化傾向。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中所述酶在所述紡織物與所述含水組合物接觸之前就地生成過(guò)酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中在所述紡織物與所述含水組合物接觸之后，所述酶就地生成過(guò)酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中所述紡織物與所述含水組合物接觸和所述酶就地生成過(guò)酸同時(shí)發(fā)生。
5.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述紡織物為羊毛。
6.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述角質(zhì)纖維得自綿羊。
7.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述具有過(guò)水解酶活性的酶為這樣的多肽，其具有的氨基酸序列與序列標(biāo)識(shí)號(hào)I或序列標(biāo)識(shí)號(hào)2示出的所述氨基酸序列具有至少70%的同一性。
8.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述具有過(guò)水解酶活性的酶為這樣的多肽，其具有的氨基酸序列與序列標(biāo)識(shí)號(hào)I或序列標(biāo)識(shí)號(hào)2示出的所述氨基酸序列具有至少80%的同一性。
9.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述具有過(guò)水解酶活性的酶為這樣的多肽，其具有的氨基酸序列與序列標(biāo)識(shí)號(hào)I或序列標(biāo)識(shí)號(hào)2示出的所述氨基酸序列具有至少90%的同一性。
10.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述具有過(guò)水解酶活性的酶源自恥垢分枝桿菌過(guò)水解酶。
11.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述具有過(guò)水解酶活性的酶為具有置換S54V的恥垢分枝桿菌過(guò)水解酶的變體。
12.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中酯底物為丙二醇二醋酸酯(PGDA)、甘油三乙酸酯、乙酸乙酯、三丁酸甘油酯和/或乙二醇二醋酸酯(EGDA)。
13.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中所述過(guò)氧化氫源為過(guò)氧化氫、過(guò)硼酸鹽或過(guò)碳酸鹽。
14.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，還包括下述步驟 用亞硫酸鈉處理所述角質(zhì)纖維或包含所述角質(zhì)纖維的紡織物以進(jìn)一步減輕所述紡織物的氈化。
15.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，還包括下述步驟 用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶處理所述角質(zhì)纖維或包含所述角質(zhì)纖維的紡織物以改善紡織物強(qiáng)度。
16.用于執(zhí)行根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法的試劑套裝，包括 具有過(guò)水解酶活性的酶， 所述酶的酯底物， 過(guò)氧化氫源，以及使用說(shuō)明。
17.通過(guò)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法制備的紡織物。
全文摘要
本發(fā)明描述了與在含水介質(zhì)中用酶法生成的過(guò)酸處理角質(zhì)纖維和包含此類(lèi)纖維的紡織物相關(guān)的組合物和方法。所述處理具有有利的效果，包括減輕氈化、提高上染率以及降低針扎感。
文檔編號(hào)C12N9/10GK102844491SQ201180016237
公開(kāi)日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2011年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月26日
發(fā)明者M-Y·允 申請(qǐng)人:丹尼斯科美國(guó)公司