專利名稱：蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法、及蛋白質(zhì)陣列或勝肽陣列、以及功能性蛋白質(zhì)或功能性勝肽的 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是有關(guān)于一種蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法、及通過該等方法所制造的陣列、以及使用該陣列的功能性蛋白質(zhì)或功能性勝肽的鑒定方法。本申請(qǐng)基于2010年8月27日在日本提出申請(qǐng)的日本特愿2010-191060號(hào)、及2010年11月18日在日本提出申請(qǐng)的日本特愿2010-258302號(hào)而要求優(yōu)先權(quán)，并將其內(nèi)容引用至本文中。
背景技術(shù)：
近年來，向基板上的分子圖案化方法被應(yīng)用于生物芯片或生物傳感器等各種生物學(xué)用途。尤其是可實(shí)現(xiàn)次微米級(jí)的大面積圖案化的微接觸印刷法(以下，稱為μ CP法)受到矚目。P CP法由于無需光刻圖案化(photolithographic patterning)所必需的強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，所以適用于蛋白質(zhì)或其它生物體分子的圖案化。然而，蛋白質(zhì)或其它生物體分子容易發(fā)生變性或分解，因而對(duì)于所述μ CP法正進(jìn)行各種改良(例如非專利文獻(xiàn)I)。非專利文獻(xiàn)I中所提出的方法是對(duì)用于印刷的硅橡膠進(jìn)行低溫等離子處理，而增加硅橡膠表面的親水性。由此，蛋白質(zhì)等生物體分子的變性等得以被抑制。[現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)][非專利文獻(xiàn)] [非專利文獻(xiàn)I]James等人、Langmuir、第14卷、第741 744頁、1998年

發(fā)明內(nèi)容
[發(fā)明所要解決的問題]然而，非專利文獻(xiàn)I中所提出的方法是利用凸版印刷技術(shù)的方法，是直接印刷蛋白質(zhì)等生物體分子的方法，因而用作墨水的該蛋白質(zhì)容易干燥，例如對(duì)將保存穩(wěn)定性低的蛋白質(zhì)進(jìn)行印刷的方法而言，尚有改良的余地。本發(fā)明是鑒于所述情況研究而成的，其目的在于提供一種可降低對(duì)保存穩(wěn)定性低的蛋白質(zhì)或勝肽的損害且將所述蛋白質(zhì)或勝肽印刷為任意形狀的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法、及通過該等方法所制造的陣列、以及使用該陣列的功能性蛋白質(zhì)或功能性勝肽的鑒定方法。[解決問題的技術(shù)手段]本發(fā)明者等人為了解決所述問題而進(jìn)行了努力研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn):通過應(yīng)用凹版印刷(intaglio printing)技術(shù),可解決所述問題。S卩，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是提供下述(I)至(12)。(I)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法的特征在于包括具有步驟:(a)于由具有特定開口形狀的微小凹部構(gòu)成的微凹版中，于所述微小凹部內(nèi)準(zhǔn)備核酸與無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)的步驟；(b)以與在所述微小凹部中合成的下述蛋白質(zhì)或勝肽相接觸的方式將基板與所述微凹版重迭的步驟；(C)于所述微小凹部內(nèi)，使用所述無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)，由所述核酸來合成蛋白質(zhì)或勝肽，并將所述蛋白質(zhì)或勝肽沿著所述微小凹部所具有的特定的開口形狀固定在所述基板上的步驟。(2)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法優(yōu)選為所述蛋白質(zhì)或所述勝肽含有作為固相結(jié)合部位的氨基酸序列，所述基板具有對(duì)所述氨基酸序列具有親和性的固相結(jié)合部位識(shí)別部位。(3)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法優(yōu)選為所述固相結(jié)合部位識(shí)別部位為鎳離子或鈷離子。(4)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法優(yōu)選為所述氨基酸序列為
聚組胺酸。(5)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法的特征在于具有如下步驟:(a)于由具有特定開 口形狀的微小凹部構(gòu)成的微凹版中，于所述微小凹部內(nèi)準(zhǔn)備核酸、生物素化嘌呤霉素衍生物及無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)的步驟；(b)以與在所述微小凹部中合成的下述蛋白質(zhì)或勝肽相接觸的方式將經(jīng)抗生物素蛋白修飾的基板與所述微凹版重迭的步驟；(C)于所述微小凹部內(nèi)，使用所述無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)，由所述核酸來合成蛋白質(zhì)或勝肽，并將所述蛋白質(zhì)或勝肽沿著所述微小凹部所具有的特定開口形狀固定在所述基板上的步驟。(6)本發(fā)明的實(shí)施方式的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法優(yōu)選為所述生物素化嘌呤霉素衍生物為以下述通式(I)表示的化合物，
權(quán)利要求
1.一種蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法，其特征在于具有如下步驟: (a)于由具有特定開口形狀的微小凹部構(gòu)成的微凹版中，于所述微小凹部內(nèi)準(zhǔn)備核酸與無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)的步驟； (b)以與在所述微小凹部中合成的下述蛋白質(zhì)或勝肽相接觸的方式將基板與所述微凹版重迭的步驟； (C)于所述微小凹部內(nèi)，使用所述無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)，由所述核酸來合成蛋白質(zhì)或勝肽，并將所述蛋白質(zhì)或勝肽沿著所述微小凹部所具有的特定開口形狀固定在所述基板上的步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法，其中，所述蛋白質(zhì)或勝肽含有作為固相結(jié)合部位的氨基酸序列，所述基板具有對(duì)所述氨基酸序列具有親和性的固相結(jié)合部位識(shí)別部位。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法，其中，所述固相結(jié)合部位識(shí)別部位為鎳離子或鈷離子。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法，其中，所述氨基酸序列為聚組胺酸。
5.一種蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法，其特征在于具有如下步驟: (a)于由具有特定開口形狀的微小凹部構(gòu)成的微凹版中，于所述微小凹部內(nèi)準(zhǔn)備核酸、生物素化嘌呤霉素衍生物及無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)的步驟； (b)以與在所述微小凹部中合成的下述蛋白質(zhì)或勝肽相接觸的方式將經(jīng)抗生物素蛋白修飾的基板與所述微凹版重迭的步驟； (C)于所述微小凹部內(nèi)，使用所述無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)，由所述核酸來合成蛋白質(zhì)或勝肽，并將所述蛋白質(zhì)或勝肽沿著所述微小凹部所具有的特定開口形狀固定在所述基板上的步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法，其中，所述生物素化嘌呤霉素衍生物為以下述通式(1)表示的化合物，
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法，其中，所述Z為以所述式(2)表示的基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法，其中，所述無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)僅由經(jīng)獨(dú)立純化的蛋白質(zhì)合成中的必要因子構(gòu)成。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法，其中，于所述步驟(a)中，所述核酸為經(jīng)固相結(jié)合部位修飾的DNA，并且是利用經(jīng)固相結(jié)合部位識(shí)別部位修飾的磁珠進(jìn)行固定化的核酸。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法，其中，于所述步驟(a)中，所述核酸是經(jīng)生物素修飾的DNA,并且是利用經(jīng)鏈霉親和素(Streptavidin)修飾的磁珠進(jìn)行固定化的核酸。
11.一種蛋白質(zhì)陣列或勝肽陣列，其特征在于:其是使用根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)或勝肽的印刷方法而制造。
12.—種功能性蛋白質(zhì)或功能性勝肽的鑒定方法，其特征在于:其是使用根據(jù)權(quán)利要求11所述的蛋白質(zhì)陣列或勝肽陣列進(jìn)行功能性篩選，并使用所述步驟(a)中所對(duì)應(yīng)的微小凹部內(nèi)的核酸來鑒定通過所述功能性篩選而確定的所述步驟(c)中經(jīng)固定化的蛋白質(zhì)或勝肽。
全文摘要
本發(fā)明具有如下步驟(a)于由具有特定開口形狀的微小凹部構(gòu)成的微凹版中，于所述微小凹部內(nèi)準(zhǔn)備核酸與無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)的步驟；(b)以與在所述微小凹部中合成的下述蛋白質(zhì)或勝肽相接觸的方式將基板與所述微凹版重迭的步驟；(c)于所述微小凹部內(nèi)，使用所述無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)，由所述核酸來合成蛋白質(zhì)或勝肽，并將所述蛋白質(zhì)或勝肽沿著所述微小凹部所具有的特定開口形狀固定在所述基板上的步驟。
文檔編號(hào)C12N15/00GK103221539SQ201180041500
公開日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2011年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月27日
發(fā)明者一木隆范, 馬尼許.畢亞尼, 塩野博文 申請(qǐng)人:國立大學(xué)法人東京大學(xué), 株式會(huì)社尼康