專利名稱：用于治療動物疾病的全身的同種異體干細(xì)胞療法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本公開涉及使用同種異體間充質(zhì)干細(xì)胞治療動物疾病的療法，特別地強(qiáng)調(diào)用于犬科、貓科、馬科、人和兔類物種。
背景技術(shù)：
已知來自人起源的間充質(zhì)干細(xì)胞、多潛能間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞和/或間充質(zhì)類干細(xì)胞(在文中都稱為“MSC”)在體外和體內(nèi)具有多分化能力的潛能，盡管這些細(xì)胞的來源，例如從其收獲這些細(xì)胞的組織和物種，被證明顯著地影響這些細(xì)胞的多能性能力。因而，盡管MSC為醫(yī)療應(yīng)用的不同范圍提供了巨大的治療前景，分化的范圍以及因此的治療應(yīng)用似乎與MSC的組織和物種來源相關(guān)。例如，在人類中，已經(jīng)表明MSC表達(dá)對化學(xué)的、激素的(hormonal)或結(jié)構(gòu)性的刺激做出反應(yīng)的、從中胚層來源的細(xì)胞類型(如成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞)分化為外胚層(神經(jīng)元)和內(nèi)胚層(肝細(xì)胞)來源的廣譜分化潛能。但是，迄今為止，用于治療的最常見的MSC來源是骨髓，盡管從骨髓分離MSC導(dǎo)致以下結(jié)果的事實(shí):與其它來源相比，可利用的MSC數(shù)量較少，在分離期間患者有嚴(yán)重的不適，以及隨年齡變化可利用的MSC數(shù)量急劇降低。而且，盡管近年來獲得了一些使用干細(xì)胞進(jìn)行治療的見識，關(guān)于在治療特定疾病和疾病狀態(tài)中特定的MSC的效率和劑量方面仍存在很多需要了解的。而且，為了實(shí) 現(xiàn)使用MSC進(jìn)行治療，必需有在個體需要該療法時對治療而言所必需的MSC的可利用的供給。如上面所注意到的，來源于特定組織的MSC可能供不應(yīng)求于供體，或可能導(dǎo)致對供體嚴(yán)重的不適或負(fù)面的負(fù)作用。因此，完全可以理解，在例行程序中需要鑒別馬上就可以用于收獲的且其可以有效治療給定物種特別是人類與伴侶動物中的特定疾病或疾病狀態(tài)的MSC的來源。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)某些實(shí)施方式，用于治療遭受預(yù)選疾病或疾病狀態(tài)的患者的方法包括提供治療劑量的間充質(zhì)干細(xì)胞組合物以及通過靜脈注射向遭受預(yù)選疾病或疾病狀態(tài)的患者全身給藥間充質(zhì)干細(xì)胞組合物的步驟，所述間充質(zhì)干細(xì)胞組合物包括收獲自選自胎盤組織、骨髓、牙齒組織、睪丸組織、子宮組織、臍帶組織和皮膚組織的至少一個組織的間充質(zhì)干細(xì)胞。根據(jù)其他的實(shí)施方式，用于治療遭受預(yù)選疾病或疾病狀態(tài)的患者的組合物包括至少600萬個源自從與目標(biāo)患者同種的或自體的胎盤組織、骨髓、牙齒組織、睪丸組織、子宮組織、臍帶組織或皮膚組織收獲的祖細(xì)胞的間充質(zhì)干細(xì)胞；以及鹽溶液，其中組合物具有不多于每mL組合物500，000個細(xì)胞的濃度，并且其中組合物可操作地降低或消除目標(biāo)患者中一個或多個疾病或疾病狀態(tài)的癥狀，其中疾病或疾病狀態(tài)選自退行性骨疾病、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性腸疾病、特應(yīng)性疾病(atopy )、肝炎、慢性類固醇反應(yīng)性腦膜炎動脈炎、比格犬疼痛綜合征、退行性脊髓病、慢性腎功能衰竭疾病、擴(kuò)張和二尖瓣型心肌病、干燥性角膜結(jié)膜炎、免疫介導(dǎo)的非侵蝕性關(guān)節(jié)炎、免疫介導(dǎo)的溶血性貧血、免疫介導(dǎo)的血小板減少癥、伊文氏綜合征、椎間盤疾病、疾病或外傷繼發(fā)性肌肉纖維化、難治性角膜潰瘍、糖尿病、脊髓創(chuàng)傷、嗜酸性肉芽腫綜合癥、肥厚性心肌病、膽管炎、脊髓損傷、運(yùn)動誘發(fā)的肺出血、橫紋肌溶解癥、角膜潰瘍、濕疹、多發(fā)性硬化、肌營養(yǎng)不良癥、脊髓損傷、糖尿病、肝炎、心肌梗死、充血性心衰竭以及疾病或創(chuàng)傷繼發(fā)性肌肉纖維化。本發(fā)明進(jìn)一步涉及生產(chǎn)包括MSC的組合物的方法，所述組合物可用于治療預(yù)選的疾病。本發(fā)明另外的實(shí)施方式、目標(biāo)和特征在以下的說明中表明。
具體實(shí)施例方式為了促進(jìn)對本發(fā)明原則理解的目的，現(xiàn)在將參考以下撰寫的說明書中公開的具體實(shí)施方式
。應(yīng)當(dāng)理解其并非意圖限制發(fā)明的范圍。進(jìn)一步應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明包含本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是正常發(fā)生的對描述的實(shí)施方式的任何改變和修飾以及包括發(fā)明原理的進(jìn)一步應(yīng)用。根據(jù)一個實(shí)施方式，用于治療特定疾病或疾病狀態(tài)的方法包括:向遭受已鑒別疾病或疾病狀態(tài)的患者靜脈(IV)注射治療劑量的預(yù)選的MSC。雖然在遭受已鑒別疾病或疾病狀態(tài)的患者的特定位點(diǎn)注射預(yù)選MSC落于本申請的范圍之內(nèi)，當(dāng)與特定位點(diǎn)應(yīng)用比較時，通過IV注射的全身治療已被證明減少侵襲力，提高該過程的速度和成本，并降低發(fā)病率和恢復(fù)時間。應(yīng)當(dāng)理解，根據(jù)某些實(shí)施方式，用于治療特異疾病或疾病狀態(tài)的方法包括在預(yù)選的時間間隔上的預(yù)選MSC的一個或多個劑量。通過非限定的實(shí)施例，以大約每周間隔、大約兩周間隔、大約三周間隔、大約每月間隔、大約兩個月間隔、大約三個月間隔、大約四個月間隔、大約五個月間隔或大約六個月間隔傳遞預(yù)選MSC。

在至少一個實(shí)施方式中，預(yù)選MSC的每次IV注射的治療劑量包括大約每kg患者體重600萬個MSC多至不論多少體重的最大5千萬個MSC。為了獲得必要的MSC數(shù)量，收集并使用以下進(jìn)一步詳細(xì)描述的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)擴(kuò)充預(yù)選的MSC，收獲那些擴(kuò)充的MSC并根據(jù)需要分開為大約600萬至大約5千萬細(xì)胞的細(xì)胞計數(shù)。如文中所使用的，治療劑量指足夠降低患者中特定疾病或疾病狀態(tài)的生理癥狀的量的MSC數(shù)。之后，根據(jù)一個實(shí)施方式，這些分開的細(xì)胞稀釋到平衡鹽溶液或其它合適的稀釋溶液中，使得每種稀釋的細(xì)胞群體具有每毫升溶液約2，000，000個細(xì)胞或更少的濃度。根據(jù)又一個實(shí)施方式，每個細(xì)胞計數(shù)稀釋到每毫升溶液約1，000，000個細(xì)胞或更少的濃度；每毫升溶液約500，000個細(xì)胞或更少；每毫升溶液約250，000個細(xì)胞或更少；及每毫升溶液約100，000個細(xì)胞或更少。將被理解的是，稀釋的細(xì)胞群是可收獲的，使得它們基本上不含有MSC靠其擴(kuò)充的所有培養(yǎng)基，或細(xì)胞可被收獲以包括至少一部分細(xì)胞靠其擴(kuò)充的細(xì)胞條件培養(yǎng)基。同樣地，稀釋的細(xì)胞群可以包括另外的生理電解質(zhì)添加劑?？商鎿Q地，該培養(yǎng)基可能還可以不含細(xì)胞地被遞送。在某些實(shí)施方式中，預(yù)選的MSC對于患者是自體的或同種異體的，并且這些預(yù)選MSC可以分離自與收獲MSC目的無關(guān)的健康程序過程中的供體。照這樣，MSC可以以不負(fù)面影響供體或不對供體造成不必要的醫(yī)療治療的方式進(jìn)行收集。例如，胎盤、子宮、臍帶和睪丸MSC可在常規(guī)分娩過程中，或在犬和貓的絕育/閹割處理中收獲，儲存這些組織以用于以后的擴(kuò)充或以后的使用。此外，將會被理解的是，優(yōu)選篩選供體，以確保供體處于良好的一般健康狀況，并當(dāng)需要時，可以篩選供體身體疾病的存在、目前的接種狀態(tài)或抗生素的存在。預(yù)選的MSC包括齒來源的干細(xì)胞，例如從牙髓、牙周韌帶和其他牙齒組織收獲的干細(xì)胞；從睪丸組織收獲的干細(xì)胞；從骨髓收獲的干細(xì)胞；從胎盤組織收獲的干細(xì)胞；從子宮組織(包括子宮內(nèi)膜再生細(xì)胞)收獲的干細(xì)胞，從臍帶組織收獲的干細(xì)胞以及從全層皮膚活檢收獲的干細(xì)胞。鑒別的疾病或疾病狀態(tài)包括退行性骨疾病、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性腸疾病、特應(yīng)性疾病(atopy )、肝炎、慢性類固醇反應(yīng)性腦膜炎動脈炎、比格犬疼痛綜合征、退行性脊髓病、慢性腎功能衰竭疾病、擴(kuò)張和二尖瓣型心肌病、干燥性角膜結(jié)膜炎、免疫介導(dǎo)的非侵蝕性關(guān)節(jié)炎、免疫介導(dǎo)的溶血性貧血、免疫介導(dǎo)的血小板減少癥、伊文氏綜合征、椎間盤疾病、疾病或外傷繼發(fā)性肌肉纖維化、難治性角膜潰瘍、糖尿病、脊髓創(chuàng)傷、嗜酸性肉芽腫綜合癥、肥厚性心肌病、膽管炎、脊髓損傷、運(yùn)動誘發(fā)的肺出血、橫紋肌溶解癥、角膜潰瘍、濕疹、多發(fā)性硬化、肌營養(yǎng)不良癥、脊髓損傷、糖尿病、肝炎、心肌梗死、充血性心衰竭和疾病或創(chuàng)傷繼發(fā)性肌肉纖維化。另外，根據(jù)至少一個實(shí)施方式，用于治療特定疾病或疾病狀態(tài)的方法包括:向遭受鑒別的疾病或疾病狀態(tài)的患者和/或在需要對鑒別疾病或疾病狀態(tài)治療的患者局部施與治療劑量的預(yù)選的MSC或MSC條件培養(yǎng)基。根據(jù)至少一個實(shí)施例，將鹽溶液中的MSC懸浮液局部施用到遭受特應(yīng)性疾病(atopy)或濕疹的患者。根據(jù)某些實(shí)施方式，MSC懸浮液還包含MSC靠其培養(yǎng)的細(xì)胞條件 培養(yǎng)基的部分，還可以含有使懸浮液變得更稠的試劑，如膠體或水凝膠劑。根據(jù)某些實(shí)施方式，用于治療特定疾病的方法包括局部施與不含MSC的細(xì)胞條件培養(yǎng)基的懸浮液(有時稱為“用完的介質(zhì)”)。實(shí)施例A、從收集的組織提取和處理MSC的方法本申請考慮了源自胎盤/臍帶、骨髓、皮膚或牙髓組織的自然發(fā)生細(xì)胞群的收集和傳遞。對這個群的指定名稱為間充質(zhì)干細(xì)胞或“MSC”。MSC是來源于中胚層的粘附多能間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞群，其也具有一些具有潛在外胚層起源(例如:外胚間充質(zhì))的群(如那些起源于牙齒的)。根據(jù)本發(fā)明，如通過流式細(xì)胞儀檢測到的，MSC通常是表達(dá)標(biāo)志物⑶90和⑶105090%)以及缺乏⑶34和⑶45和MHC II類表達(dá)(〈5%)的粘附細(xì)胞群。將被理解的是從如下面指出的預(yù)選組織提取并處理每個MSC。1、胎盤、睪丸和子宮組織從分娩過程中收集胎盤、從卵巢切除或閹割的過程中收集睪丸和子宮組織。無論收集哪個組織，將組織放置在具有磷酸鹽緩沖鹽水(“PBS”)、青霉素/鏈霉素和兩性霉素B的無菌容器中。具體而言，首先通過多次無菌PBS洗滌來將收獲的組織進(jìn)行表面滅菌，然后浸入在1%聚維酮碘(“PVP-1”)中2分鐘，浸潤在具有0.1 %硫代硫酸鈉的PBS中I分鐘，以及在無菌PBS中洗滌另一次。接著，將組織切至5g的小塊以用于消化。使用I型和II型膠原酶以及作為中性蛋白酶的嗜熱菌蛋白酶的混合物進(jìn)行酶消化。消化在50CC的無菌小室中進(jìn)行，持續(xù)20-45分鐘，直至組織被分解并且懸浮液由于細(xì)胞而變得混濁。然后提取溶液，留下基質(zhì)(matrix)，并加入具有5%濃度的胎牛血清(“FBS”)的冷的(4°C)平衡鹽溶液，以便淬滅酶。在600 Xg下離心該所得的懸浮液，吸取上清液并添Wmesencult 完全培養(yǎng)基(含有msc刺激補(bǔ)充劑的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可以從stemceiiTechnologies, Vancouver, British Columbia獲得)，使最終體積為消化體積的約1.5倍以中和消化酶。以500g離心該混合物5分鐘，吸取上清液。將細(xì)胞沉淀重新懸浮于新鮮的MESENCULT 完全培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基含有0.25mg/mL兩性霉素B、100IU/mL的青霉素-G和100mg/mL鏈霉素(JR Scientif ic，Woodland, CA)。細(xì)胞以每225平方厘米培養(yǎng)瓶一個起始5克組織消化的初始濃度鋪板。每天監(jiān)測培養(yǎng)瓶并立即移除任何污染的培養(yǎng)瓶并記錄。監(jiān)測未污染培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞生長，每周更換三次培養(yǎng)基。經(jīng)過14天的生長，用0.25%胰蛋白酶/ImM EDTA (可獲自Invitrogen, Carlsbad, CA)分離MSC。用流式細(xì)胞儀技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)并評估細(xì)胞活力，并通過在密封小瓶中可控速率的冷凍儲存細(xì)胞。2、骨髓收集骨髓并置于“清洗管”內(nèi)。在收集步驟前，在10，000級GMP潔凈室中的100級生物安全柜中制備“清洗管”。為了制備清洗管，將0.2mL兩性霉素B (Sigma-Aldrich, StLouis, M0)、0.2mL 青霉素 / 鏈霉素(Sigma 50ug/nl)和 0.1mL EDTANa2 (Sigma)加入到含有40mL GMP級磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS)的50mL錐形管(Nunc)中。具體而言，在100級生物安全柜中，用PBS將含有所收集的骨髓的清洗管補(bǔ)足至50mL，并在室溫下通過500g離心10分鐘洗滌細(xì)胞，這就產(chǎn)生了在錐形管底部的細(xì)胞沉淀。在無菌條件下倒去上清液，通過敲擊輕輕分離細(xì)胞沉淀，直到沉淀看上去像液體。將沉淀物重新懸浮在25mL PBS中并輕輕地混合，以產(chǎn)生在PBS中的細(xì)胞的均勻混合物。為了純化單核細(xì)胞，使用15mL移液管將15mLFicoll-Paque (Fisher Scientific, Portsmouth NH)密度梯度加到細(xì)胞-PBS 混合物的下面。隨后將混合物在900g離心20分鐘。此后，收集灰黃層并與40mL PBS —起放置到另一個50mL錐形管中。然后在400g離心細(xì)胞10分鐘，而后倒去上清并將細(xì)胞沉淀重新混懸于40mLPBS中，再次在400g離心細(xì)胞10分鐘。隨后，將細(xì)胞沉淀重新懸浮于5mL補(bǔ)充有20%胎牛血清的完全DMEM低葡萄糖培養(yǎng)基(GibcoBRL，Grand Island，NY)中，該胎牛血清的要求是內(nèi)毒素水平小于或等于100EU/ml的(常規(guī)水平小于或等于10EU/mL)，且血紅蛋白水平小于或等于30mg/dl (常規(guī)水平小于或等于25mg/dl)。分開所用的血清批次(lot)，將一個批次用于所有的實(shí)驗(yàn)。此外，培養(yǎng)基補(bǔ)充有I %青霉素/鏈霉素、I %兩性霉素B和1%谷氨酰胺。如通過視覺形態(tài)學(xué)顯微鏡所評估的，重新懸浮的細(xì)胞是基本上沒有紅細(xì)胞和多形核白細(xì)胞的單核細(xì)胞。用臺盼藍(lán)評估細(xì)胞的活性。只選擇具有>90%活性的樣品并將其冷凍保存在密封小瓶中。3、牙髓在無菌條件下取牙齒并放置到無菌的冷的小瓶中，該小瓶含有20mL具有青霉素/鏈霉素和兩性霉素B (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO)的磷酸鹽緩沖生理鹽水。此后，將牙齒外部滅菌并首先通過在無菌PBS中洗滌數(shù)次進(jìn)行處理，然后浸入在I %的聚維酮碘(PVP-1)中2分鐘，浸入在0.1 %硫代硫酸鈉的PBS中I分鐘，然后在無菌PBS中再次洗滌。使用鉗子和鑷子從牙冠分離清潔的牙齒的根以暴露牙髓，將牙髓放入由I型和II型膠原酶(Vitacyte, Indianapolis,美國)和作為中性蛋白酶的嗜熱菌蛋白酶組成的酶水浴中。允許牙髓組織在37°C下孵育20-40分鐘，以消化組織并釋放細(xì)胞。一旦消化完全，力口入MESENCi兒T 完全培養(yǎng)基至最終體積為消化體積的1.5X，來中和消化酶。該混合物以500g離心5分鐘，吸取上清液。將細(xì)胞沉淀重新懸浮在新鮮的MESENCULT 完全培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基添加了 0.25mg/mL兩性霉素B、100IU/mL青霉素-G和100mg/mL鏈霉素(JR Scientific, Woodland, CA)0以每25平方厘米培養(yǎng)瓶消化一顆牙齒的初始濃度將細(xì)胞進(jìn)行鋪板。每天監(jiān)測培養(yǎng)瓶，立即移除并記錄任何污染的培養(yǎng)瓶。監(jiān)測未污染的培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞生長，每周更換三次培養(yǎng)基。經(jīng)過14天的生長后，用0.25%胰蛋白酶/ImMEDTA(Invitrogen, Carlsbad, CA)分開MSC,使用標(biāo)準(zhǔn)的臺盼藍(lán)染料排斥法(Sigma)和血球計數(shù)儀進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和活性評估，并將bAU3DPSC (bAU3 the DPSC)在兩個75平方厘米培養(yǎng)瓶間平分。第一次傳代后，一旦它們達(dá)到70-80%匯合，收獲DPSC培養(yǎng)物。這些細(xì)胞被冷凍保存在密封的小瓶中。4、皮膚組織通過膠原酶消化過程分離來自皮膚的MSC，包括接受美容整形手術(shù)的健康成年患者的表皮、真皮和皮下組織。一旦獲得，清除掉組織任何不需要的脂肪組織和毛發(fā)。然后使用IX PVP-碘溶液和IX硫代硫酸鈉將組織滅菌，然后在無菌PBS中洗滌兩次。然后將真皮切碎成I立方毫米的碎片，而后在37° C下進(jìn)行30-40分鐘的膠原酶的酶消化。之后，通過移液到5mL移液管并在300g離心5分鐘將組織片分離。將沉淀懸浮在細(xì)胞生長培養(yǎng)基Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基:營養(yǎng)混合物F-12 (“DMEM/F12”)(購自Invitrogen公司，Carlsbad, CA) (1:1 )，其含有兩性霉素、青霉素和鏈霉素并補(bǔ)充有10 %胎牛血清。細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到T-25組織 培養(yǎng)瓶中并生長至80-90%匯合。將細(xì)胞放置在T-75培養(yǎng)瓶中，然后用于流式分析和分化。5、臍帶組織在分娩過程中收獲來自臍帶的MSC。一旦收到，在無菌PBS中洗滌該組織兩到三次，然后將其分成每個約5克的小片。此后，該組織被去污，并且每5克等分的組織放置在無菌的IOOmm組織培養(yǎng)皿中，并覆蓋上蓋以防止干燥。通過在50cc試管中的酶消化分離組織，并用無菌解剖刀將組織剁碎成小于I立方毫米的片段。然后，將切碎的組織置于酶水浴中，蓋上試管蓋并將其轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱。每10分鐘將試管渦旋15秒，總共進(jìn)行40分鐘。然后，通過加入45mL冷的DME/F12完全培養(yǎng)基(FBS，青/鏈霉素和兩性霉素B)將消化酶稀釋，蓋上試管蓋并倒轉(zhuǎn)以混合內(nèi)容物。接著，以低制動力(low break)上的400Xg離心試管15分鐘。通過在試管底部保留約5mL用25mL移液管吸取上部的培養(yǎng)基，要特別注意吸取試管內(nèi)的整個培養(yǎng)基。將底部5mL培養(yǎng)基(含組織碎片和包括MSC的細(xì)胞)重懸浮于新鮮的混合良好的20mL DME-F12完全培養(yǎng)基中，并放置到的t_75培養(yǎng)瓶中，并轉(zhuǎn)移到孵化器。消化48小時后在第一次更換培養(yǎng)基期間，洗掉組織，且每周三次更換培養(yǎng)基。細(xì)胞生長至70% 80%匯合,然后傳代,作為O傳代細(xì)胞凍結(jié)下來,或分化。不允許細(xì)胞達(dá)到匯合,或長時間維持在匯合。B、用于擴(kuò)增細(xì)胞群的方法源于任何上述組織的細(xì)胞的細(xì)胞擴(kuò)增發(fā)生在潔凈室內(nèi)，該設(shè)施建造目的是為了細(xì)胞療法的生產(chǎn)，且符合GMP潔凈室分類。在位于10，000級清潔生產(chǎn)套房中的無菌的II級生物安全柜中，在受控條件下解凍細(xì)胞，并在一個15mL錐形管中用IOML完全DMEM低葡萄糖培養(yǎng)基(cDMEM) (GibcoBRL,Grand Island, NY)洗滌細(xì)胞，該培養(yǎng)基補(bǔ)充有20%的被證實(shí)沒有BSE%的來自奶牛的胎牛血清(Atlas)，該胎牛血清的要求是內(nèi)毒素水平小于或等于100EU/ml的(常規(guī)的水平小于或等于10EU/mL)，且血紅蛋白水平小于或等于30mg/dl (常規(guī)的水平小于或等于25mg/dl)。分開所用的血清批次(lot)并將一個批次用于所有的實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞隨后被放置在一個T-225培養(yǎng)瓶中，該培養(yǎng)瓶含有45mL cDMEM，并在37°C下在5% C02中在充分加濕的環(huán)境中培養(yǎng)24小時。這使得MSC粘附。通過使用cDMEM溫和漂洗培養(yǎng)瓶將非粘附細(xì)胞洗掉。然后通過PBS沖洗和加入0.05%含有EDTA的胰蛋白酶(Gibco公司，Grand Island, NY，美國)并在37°C下在5% C02在充分加濕的環(huán)境持續(xù)2分鐘來分離粘附細(xì)胞。將細(xì)胞離心、洗滌并鋪板在T-225培養(yǎng)瓶中的45mL cDMEM中。這導(dǎo)致了每個起始T-225培養(yǎng)瓶中約600萬個細(xì)胞。然后將第一個培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞分成4個培養(yǎng)瓶。細(xì)胞生長4天，之后每個培養(yǎng)瓶存在約600萬個細(xì)胞(共2千4百萬個細(xì)胞)。重復(fù)該過程，但細(xì)胞不超過10個傳代，然后在密封小瓶中儲存600萬個細(xì)胞等份用于傳送。在產(chǎn)生、擴(kuò)增和產(chǎn)品生產(chǎn)中的所有過程都在符合現(xiàn)行的良好操作規(guī)范(GoodManufacturing Processes)和適當(dāng)控制的條件和測試下進(jìn)行，并且描述的細(xì)胞產(chǎn)品的生產(chǎn)符合以下指導(dǎo):由FDA在1998年簽發(fā)的工業(yè)指導(dǎo)意見:Guidance for HumanSomatic Cell Therapy and Gene Therapy)(無對應(yīng)中譯文)；2008 年的 Guidance forFDA Reviewers and Sponsors Content and Review of Chemistry, Manufacturing, andControl (CMC)Information for Human Somatic Cell Therapy Investigational New DrugApplications (INDs)(無對應(yīng)中譯文)；以及 1993 年的 FDA points-to-consider documentfor master cell banks (無對應(yīng)中譯文)。在無菌條件下收集供體細(xì)胞，運(yùn)至合同制造設(shè)施，評估沒有污染并擴(kuò)增。被擴(kuò)增的細(xì)胞以約600萬個細(xì)胞/瓶存儲在冷凍小瓶中，每個供體約100瓶。在擴(kuò)增的每個步驟中均有質(zhì)量控制程序，以確保沒有污染或異常細(xì)胞的生長。在另一個方面中，細(xì)胞生長在培養(yǎng)基中，且在約5-10天后細(xì)胞與培養(yǎng)基一起被回收。在此“條件”培養(yǎng)基中制備細(xì)胞以用于以小于每毫升約100，000個細(xì)胞的濃度進(jìn)行的輸送。可以添加生理電解液添加劑。細(xì)胞溶液通過靜脈施與。在進(jìn)一步的方法中，細(xì)胞在培養(yǎng)基中生長大約5 — 10天。然后將該培養(yǎng)基以不包括細(xì)胞的形式進(jìn)行靜脈輸送，或局部給予到受傷位點(diǎn)。進(jìn)一步的方法涉及干細(xì)胞產(chǎn)生的因子的分離和/或濃縮和/或這些化學(xué)物和/或化合物的進(jìn)一步精制。在一個實(shí)施方式中考慮到，可以在嚴(yán)格的訓(xùn)練后用全身的劑量給予上述治療來處置馬，特別是來糾正對運(yùn)動誘發(fā)的肺水腫、EIPH、經(jīng)常性氣道阻塞(RA0)、胸膜炎及其他呼吸系統(tǒng)問題以及勞累性橫紋肌溶解癥。因此，治療的本質(zhì)是預(yù)防性的。在另一個實(shí)施方式中，治療可以是定向劑量(directed doses)以治療背側(cè)移位(DDSP)。C、疾病和疾病狀態(tài)的描述在某些實(shí)施方式中，可以 將MSC施與至需要治療潛在地具有或不具有可用MSC治療的任何其它疾病或疾病狀態(tài)的需要的一種、或一種或多種下述疾病或疾病狀態(tài)，或文中提及的其它疾病的人/動物。
1、關(guān)節(jié)炎根據(jù)關(guān)節(jié)液的分析將關(guān)節(jié)炎分類為非炎癥或炎癥性的。退行性關(guān)節(jié)病/骨關(guān)節(jié)炎(“DJD/0A”)被視為是非炎癥性的，并顯示退行性關(guān)節(jié)改變，沒有發(fā)熱、白細(xì)胞增多或其他全身性癥狀。骨關(guān)節(jié)炎(“0A”)是關(guān)節(jié)軟骨的破裂，導(dǎo)致關(guān)節(jié)中增加的水腫、關(guān)節(jié)周圍的軟組織纖維化和骨贅形成。最終的結(jié)果是失去彈性、關(guān)節(jié)退化和不穩(wěn)定。引起炎癥的關(guān)節(jié)軟骨中的一系列變化最終會導(dǎo)致軟骨的完全喪失。重塑和炎癥改變產(chǎn)生疼痛，其降低受累關(guān)節(jié)的運(yùn)動性，因此導(dǎo)致肌肉萎縮。根據(jù)病因?qū)W，骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)一步分類為原發(fā)的或繼發(fā)的。原發(fā)性O(shè)A歸因于老化寵物中的軟骨退變，其發(fā)生的原因不明。繼發(fā)的0A，其比原發(fā)性的較常見，其針對損傷、異?；蚣膊〉姆磻?yīng)而發(fā)生，導(dǎo)致關(guān)節(jié)不穩(wěn)定。不考慮病因或治療，疾病的任何一個形式通常被認(rèn)為是進(jìn)展的。關(guān)節(jié)炎和OA被發(fā)現(xiàn)在犬和貓的所有品種和年齡中。2、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎("RA")被認(rèn)為是炎性關(guān)節(jié)疾病，其由發(fā)生在滑膜的炎性改變引起并具有全身臨床癥狀。炎性關(guān)節(jié)疾病進(jìn)一步分類為感染性或免疫介導(dǎo)的，免疫介導(dǎo)的疾病被認(rèn)為是侵蝕的或非侵蝕的。RA是犬的炎性的、非感染的、侵蝕的、免疫介導(dǎo)的多關(guān)節(jié)炎，其中滑膜增生。盡管致病機(jī)制并未完全明了，其特征為前列腺素在關(guān)節(jié)邊緣開始引起的軟骨下骨的侵蝕，隨后引起肉芽組織浸潤骨。產(chǎn)生稱為類風(fēng)濕因子的抗體(IgG、IgM和IgA)對抗抗原(IgG)，這產(chǎn)生了關(guān)節(jié)炎癥。隨后，滑膜增厚，發(fā)生纖維化、血管翳(血管組織)入侵關(guān)節(jié)并釋放蛋白水解酶，引起關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨的侵蝕。然后關(guān)節(jié)表面破損，使關(guān)節(jié)不穩(wěn)定，導(dǎo)致半脫位或脫位，其在身體檢查和射線照片時表現(xiàn)為畸形的關(guān)節(jié)。臨床癥狀根據(jù)疾病的階段而不同。在早期階段，患者表現(xiàn)為移位的腿殘疾，可能有低熱、食欲不振和中度的淋巴結(jié)病。后來殘疾變得更嚴(yán)重，伴隨其他臨床癥狀。在起初的幾周，射線照片的變化通常是不可見的，直至詳細(xì)的射線照片顯示在軟骨下骨中的類似囊的透明損傷。在疾病的后期，退行性射線照片改變是明顯的，因?yàn)殛P(guān)節(jié)腫脹皮下結(jié)節(jié)的臨床癥狀惡化，并有顯著的關(guān)節(jié) 疼痛。類風(fēng)濕因子(“RF”)可與臨床癥狀和射線照片發(fā)現(xiàn)一起在血清或關(guān)節(jié)液中被發(fā)現(xiàn)，盡管多至30%的患有RA的犬的檢測呈血清反應(yīng)陰性。因而，陰性的RF并不排除該疾病且陽性RF并不能確切地診斷RA，理由是在身體其他部位患有其他炎性疾病的非RA動物存在假陽性。RA發(fā)病的年齡是1-9歲，平均4-5歲。小的飼養(yǎng)犬最常見被感染，貴賓犬和喜樂蒂犬(shelties)過多出現(xiàn)。3、退行性脊髓脊神經(jīng)根病退行性脊髓脊神經(jīng)根病和德國牧羊犬退行性脊髓病是緩慢進(jìn)展的神經(jīng)疾病，病因未明，其最常見影響中年至較年長的大型飼養(yǎng)犬。觀察到脊髓白質(zhì)和髓鞘的逐漸消失，引起共濟(jì)失調(diào)/衰弱，并最終引起下肢癱瘓。該疾病最常發(fā)生在中年至較年長的大型飼養(yǎng)犬，但是發(fā)現(xiàn)在一些年輕的動物和貓中的所有的品種/混合種中沒有性別偏差。德國牧羊犬品種似乎過多出現(xiàn)。在疾病的早期，寵物從平躺或坐的姿勢起來困難。后端搖擺或步態(tài)看似運(yùn)動失調(diào)。下肢開始互相交叉。當(dāng)疾病進(jìn)展時，寵物在走路時在地上拖著她的腳趾甲。受影響患者的一個特征包括由于拖著后腳而使指甲磨損。動物后端泛發(fā)的衰弱變得更明顯，起身更加困難，在光滑的地板上更不容易穩(wěn)定。但是，疾病一般不導(dǎo)致患者的疼痛。4、慢性腎衰竭慢性腎衰竭(“CRF”)被定義為經(jīng)數(shù)月至數(shù)年發(fā)生的進(jìn)展性的、不可逆的腎功能障礙。在表明該疾病已經(jīng)長期存在的患者的病史、身體檢查和/或?qū)嶒?yàn)室發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，慢性疾病不同于急性的。CRF的特征在于延長時間段的氮血癥以及低尿比重(犬〈1.030，貓〈1.035)。這些動物在其功能性腎質(zhì)量中還具有75%的降低。CRF將持續(xù)地負(fù)性進(jìn)展，即使是在去除了任何可能的誘發(fā)因素之后。臨床癥狀包括食欲不振，被毛稀疏，多尿，多引，體重減輕，除非是多囊疾病或瘤性疾病，否則通常在觸診和射線照片時腎臟尺寸較小，可存在最常見于頜(橡皮頜)的骨營養(yǎng)不良，來自非再生性貧血的蒼白粘膜，口腔潰瘍，急性失明、頸部向腹側(cè)屈曲，低體溫，高血壓。5、擴(kuò)張性心肌病擴(kuò)張性心肌病("DCM")的特征在于減小的收縮功能障礙和心室擴(kuò)張。在犬中，其是心臟疾病的第二常見的形式。DCM是先天的且可能是遺傳的，因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)在葡萄牙水犬中其作為可遺傳的常染色體隱性性狀，該犬是表現(xiàn)青少年形式DCM的僅有的犬科品種。其他過多出現(xiàn)的犬科品種包括柏塞狗、杜賓犬、大丹犬、紐芬蘭犬和愛爾蘭獵狼犬。這些品種出現(xiàn)臨床癥狀時是中年，通常發(fā)生充血性心衰。收縮功能障礙導(dǎo)致充血性心衰(“CHF”)。CHF不單純是受損傷的泵功能的結(jié)果，也是神經(jīng)內(nèi)分泌綜合征，其中腎上腺素能神經(jīng)系統(tǒng)激活以及特異的內(nèi)分泌途徑如腎素一血管緊張素一醛固酮系統(tǒng)起整體作用。當(dāng)心功能降低時，代償機(jī)制激活以維持全身灌注、壓力和心輸出。

6、慢性肝炎.
慢性肝炎(〃CH〃)形態(tài)學(xué)的特征在于肝細(xì)胞凋亡或壞死、混合感染細(xì)胞和/或可變的單核細(xì)胞和纖維化。存在許多肝炎的誘因，但導(dǎo)致慢性肝炎的誘因通常是未確定的。肝炎的誘因可包括銅儲存疾病，該疾病使動物在肝臟中積蓄異常水平的銅，直至發(fā)生毒性。其為可遺傳的疾病，發(fā)現(xiàn)于其他的混合品種和純種犬，包括貝靈頓犬、西高地白犬、杜賓犬、斯凱犬、大麥町犬和拉布拉多獵犬。感染性疾病與肝炎相關(guān)，例如細(xì)螺旋體病和犬科病毒性肝炎。CH通常發(fā)生在4-10歲的年齡，在雌犬中慢性肝炎更常見。7、特應(yīng)性疾病(atopy)、濕疫特應(yīng)性疾病(吸入性皮炎)是一種遺傳性易感染的個體中對吸入或皮膚吸收的環(huán)境抗原的過敏性反應(yīng)。發(fā)病年齡可從6個月至6歲，平均為1-3歲之間。臨床癥狀包括皮膚紅斑，可以是季節(jié)性和非季節(jié)性的全身性或局部瘙癢癥(pruitis)、濕性皮炎區(qū)域、丘疹、膿皰、潰瘍爆發(fā)、鱗屑、色素沉著、苔蘚樣變或脫發(fā)。自殘(self-trauma)可導(dǎo)致繼發(fā)性皮膚損害，包括抓痕、唾液斑、舔后肉芽腫，甚至開放性傷口。特應(yīng)性疾病也可以表現(xiàn)為慢性外耳炎、結(jié)膜炎、淚溢、過敏性支氣管炎、鼻炎、繼發(fā)性膿皮病、馬拉色菌性皮炎、慢性肢端舌舔皮炎或很少見的多汗。同樣，濕疹是任何類型的皮炎或皮膚炎癥的一個通用術(shù)語。濕疹會引起瘙癢(瘙癢)，具有起泡、滲液和/或可能的脫屑的皮膚發(fā)紅。有多種皮膚疾病被認(rèn)為是濕疹與特應(yīng)性皮炎(AD)或特應(yīng)性疾病是名單上最嚴(yán)重的慢性疾病。AD存在于全球范圍內(nèi)，但似乎多見于發(fā)達(dá)國家，平等地影響所有種族的男性和女性。AD不會傳染，但可遺傳；臨床癥狀往往在嬰兒期或幼兒期的大部分時間發(fā)生。有些孩子足夠幸運(yùn)，“長得不再要”(outgrow)濕疹，但大多數(shù)受到一生的影響。AD的臨床癥狀是干燥、鱗屑、皮膚瘙癢、皮膚裂縫和在臉頰上、胳膊和腿上的皮疹。癥狀是偶發(fā)的，在突發(fā)期，發(fā)展成由感染或自我抓撓引起的開放的滲液或結(jié)痂的瘡的情況并不少見。濕疹通常會影響肘的內(nèi)部、膝蓋后部和臉，但是可以覆蓋身體的大部分。有特應(yīng)性皮炎的人通?；蛘哂屑彝コ蓡T患有哮喘、枯草熱或兩者，或者他們自己患有這些??；這三種疾病一起被稱為“特應(yīng)性疾病三聯(lián)體”。存在人們接觸到其將惡化或?qū)е缕渫话l(fā)AD的觸發(fā)因素。觸發(fā)因素是物質(zhì)或條件，如皮膚干燥、包括食物的或環(huán)境的過敏原、壓力、極端的氣候變化、運(yùn)動(熱/汗)和許多刺激物如煙、煙塵、香味、去污劑等。當(dāng)患有AD的人暴露于他們敏感的觸發(fā)因子時，過度生產(chǎn)的炎性細(xì)胞遷移到皮膚，引起搔癢和痛苦的反應(yīng)，其依次導(dǎo)致人抓癢，從而惡化反應(yīng)。導(dǎo)致AD的病理生理學(xué)是免疫系統(tǒng)對變應(yīng)原或刺激物的過度反應(yīng)。

傳統(tǒng)的濕疹或AD治療一直是外用膏齊U、皮膚保濕劑(石油為基礎(chǔ)的)以及行為改善以避免刺激，所述膏劑改變皮膚免疫反應(yīng)，從而改變炎癥反應(yīng)(可以僅短期使用氫化可的松、他克莫司和吡美莫司)，在更加進(jìn)展的情況下，使用短期注射或口服使用類固醇。AD患者容易出現(xiàn)皮膚感染，即金黃色葡萄球菌感染和皰疹，因此，教他們看皮膚感染的臨床癥狀，如有懷疑，立即咨詢他們的醫(yī)生，以避免加重疾病。近期的研究發(fā)現(xiàn)犬科特應(yīng)性疾病和特應(yīng)性皮炎的人形式之間的直接聯(lián)系，使得在犬科自然發(fā)生的疾病成為類人研究的理想模型。8、干燥性角膜結(jié)膜炎干燥性角膜結(jié)膜炎("KCS")是犬中常見的眼科疾病，其特征在于導(dǎo)致角膜和結(jié)膜疼痛和疾病的降低的淚水的產(chǎn)生。KCS能影響視力，特別是如果不治療，可發(fā)生失明或失去眼球。KCS具有許多病因，但是最常見的起因是免疫介導(dǎo)的淚腺炎(lacrimoadenitis)。根據(jù)對免疫調(diào)節(jié)治療的陽性反應(yīng)，大于75%的犬科KCS病因歸因于該淚腺的免疫介導(dǎo)的炎癥。這種免疫介導(dǎo)的病因看起來也是高度品種相關(guān)的，且最常見于那些具有特應(yīng)性皮膚疾病的犬,如金毛獵犬。其他的KCS起因包括:a)對免疫調(diào)節(jié)藥物不反應(yīng)的先天性淚腺閉鎖,常見受影響的品種包括約克犬、比格犬、小型平斯徹犬和小型臘腸犬；b)神經(jīng)性KCS可見于患有嚴(yán)重的外耳/中耳/內(nèi)耳炎的動物，這樣的動物現(xiàn)在缺少至淚腺和第三眼瞼副交感神經(jīng)的支配；c)眼表面的感染(原發(fā)或繼發(fā)于全身的疾病，犬瘟熱；d)為去除櫻桃眼的第三眼瞼切除的醫(yī)源性的KCS ;和f)某些引起眼淚產(chǎn)生降低的藥物治療。過多顯示的品種包括英國斗牛犬、美國考克斯班尼犬犬、西高地白犬、拉薩獅子犬、西施犬、哈巴狗、北京犬、波士頓犬、騎士查理王獵犬、約克夏梗犬和小型獅子犬。9、系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是多系統(tǒng)免疫介導(dǎo)的疾病，其中抗體對抗身體的組織，以及循環(huán)免疫復(fù)合物沉積，影響多個系統(tǒng)。最常見的受影響區(qū)域是關(guān)節(jié)、腎和皮膚。SLE是III型超敏反應(yīng)的結(jié)果，盡管其可能還與II型和IV型反應(yīng)有關(guān)。SLE是免疫復(fù)合物沉積的疾病，還能夠引起增強(qiáng)的抗體反應(yīng)，其傾向是產(chǎn)生自身抗體。通常，疾病的免疫復(fù)合物或自身抗體方面在動物中占主導(dǎo)。臨床癥狀可能是嚴(yán)重的和不同的，但考慮到受影響的最常見系統(tǒng)，免疫復(fù)合物SLE最常見的臨床癥狀是:跛行、發(fā)熱、疼痛(多關(guān)節(jié)炎)、多尿/煩渴、厭食、惡心脫水(腎臟病)和皮膚(皮膚粘膜)疾患。皮膚癥狀是患有SLE的動物中最常見和非常不同的臨床癥狀之一。皮膚損傷傾向于對稱的，最常影響身體、腳和耳朵的皮膚粘膜交界處。皮膚損傷常常以紅斑、硬皮性皮炎存在。與SLE的自體免疫方面有關(guān)的最常見的疾病是溶血性貧血和血小板減少。無論是SLE的哪種類型，多器官系統(tǒng)可能參與其中，包括心血管系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)。甚至已經(jīng)報道與人類SLE患者相似地，在患有SLE的動物中有精神病。雌性比雄性有稍大的風(fēng)險。德國牧羊犬、柯利犬和謝德蘭牧羊犬被認(rèn)為有更大的風(fēng)險。在診斷后一年內(nèi)，超過40%的診斷為SLE的犬屈從于該疾病。在貓和大型動物中SLE是罕見的，但已被記錄。10、免疫介導(dǎo)的血小板減少癥和免疫介導(dǎo)的溶血性貧血免疫介導(dǎo)的血小板減少癥("MT")和免疫介導(dǎo)的溶血性貧血(〃MHA〃)以原發(fā)或繼發(fā)性疾病發(fā)生在貓和犬中。當(dāng)_■者冋時發(fā)生時，該疾患稱為依文氏綜合征。在小動物中，MT是常見的非創(chuàng)傷出血的起因，頂HA是貧血的常見起因。原發(fā)性MT和MHA是自體免疫疾病的結(jié)果，而繼發(fā)性IMT或IMHA可導(dǎo)致對多種感染、炎癥或瘤性疾病的反應(yīng)，或者歸因于藥物損傷。不同于犬中的MT，在貓中，頂T最常見繼發(fā)于感染或瘤性疾病。在MHA中，紅血細(xì)胞的破壞機(jī)制是抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒(II型)。IMHA影響年輕到中年的動物，其中考克斯班尼犬、英國斯普尼斯班尼犬、貴婦犬、古英國牧羊犬在狗群中過多顯現(xiàn)。IMT最常見于中年雌性犬，平均發(fā)病年齡為6歲。IMHA臨床癥狀的范圍可以從貧血的非臨床癥狀(如粘膜蒼白)到注意到更顯著的疾病(包括嗜睡、衰弱、血性心臟雜音、經(jīng)常的代償性心動過速、呼吸急促和邊界脈沖)。有些患者會有持續(xù)的免疫或炎癥性疾病的臨床發(fā)現(xiàn)，如發(fā)燒或厭食或不常見的淋巴結(jié)病。黃疸(黃疸)是一種常見于MHA患者的發(fā)現(xiàn)，歸因于血管外溶血。肺血栓栓塞癥是一種常見的具有嚴(yán)重貧血的MHA并發(fā)癥，尤其是如果正處在積極的類固醇治療中。MT作為自發(fā)性出血出現(xiàn)在其他方面表現(xiàn)健康的犬中。貓可能有原發(fā)疾病的其他臨床癥狀。詢問其主人可能會發(fā)現(xiàn)以前較小的出血事件。在任何物種中，頂T的標(biāo)志性病變是點(diǎn)狀出血，其可能會合并成瘀斑。11、類固醇反應(yīng)性腦膜炎動脈炎類固醇反 應(yīng)性腦膜炎動脈炎("SRMA")的病因未知但被認(rèn)為其起源是免疫介導(dǎo)的。SRMA也稱為幼年型多動脈炎、壞死性血管炎、犬科幼年型多動脈炎綜合征和比格犬疼痛綜合征。SRMA在幼年發(fā)生，沒有性別偏好，最常見于比格犬。SRMA也可以發(fā)現(xiàn)在其他品種中，包括伯恩山犬(Bernese Mountain dogs)、德國短毛指不犬(German ShorthairedPointers)、柏塞犬(Boxers)、托樂獵犬(Toller Retrievers)和混合品種。疾病的兩種類型被描述為:急性/爆發(fā)性和慢性。急性類型的特征在于腦脊液中的嗜中性腦脊液細(xì)胞增多，而慢性類型在于單核或混合細(xì)胞的腦脊液細(xì)胞增多，伴有神經(jīng)功能缺損。兩種形式都可患有具有貫穿脊髓和腦干長度的嚴(yán)重蛛網(wǎng)膜下腔出血的全身壞死性血管炎。血栓形成和血管閉塞可能會導(dǎo)致神經(jīng)缺血。受影響的血管可能含有帶有IgG的細(xì)胞和充滿含鐵血黃素的巨噬細(xì)胞。淀粉樣變病和全身性血管炎可能會出現(xiàn)在一些犬中。已知SRMA影響中到大的品種的犬，通常小于2歲，但也可如7歲大。通過使用早期積極的免疫抑制治療療法，約60%至80 %的犬被治愈，20 %至40 %在治療期間內(nèi)復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)的動物看似具有更加延長的癥狀病程和治療持續(xù)時間。目前沒有方法來預(yù)測誰還會復(fù)發(fā)。12、炎性腸疾病.
在犬科、貓科和其它物種中的炎性腸疾病("IBD")可被臨床鑒定為與胃、小腸和/或結(jié)腸的慢性炎癥相關(guān)的一組胃腸道疾病。只有當(dāng)臨床癥狀慢性持續(xù)時，通常至少3周，IBD的診斷才是可疑。臨床醫(yī)生通常將根據(jù)慢性程度、臨床癥狀、對全身治療無反應(yīng)和由于各種原因不能繼續(xù)診斷，來推定IBD的診斷。由于這個原因，許多IBD病例的病因不明；但是，認(rèn)為IBD的某些類型(即，犬科柏塞犬品種的組織細(xì)胞(histiocytic))具有遺傳性的影響，且有有力的證據(jù)支持免疫介導(dǎo)的病因?qū)W。已經(jīng)指明IBD的病理在免疫系統(tǒng)。起作用的確切的免疫機(jī)制還不明確，但是認(rèn)為IBD是失去了對正常菌群或食物抗原的免疫耐受，導(dǎo)致在腸道微環(huán)境中的異常T細(xì)胞免疫反應(yīng)性。遺傳工程化的發(fā)展成IBD的動物模型涉及T細(xì)胞功能的改變，表明T細(xì)胞群負(fù)責(zé)免疫反應(yīng)的腸粘膜穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)。免疫組化研究表明了粘膜固有層的T細(xì)胞群的增加，包括CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和含有Ig-A的漿細(xì)胞。犬科IBD的許多免疫特征可由粘膜T細(xì)胞激活解釋。腸細(xì)胞也通過像抗原提呈細(xì)胞一樣作用在免疫發(fā)病機(jī)制中起作用。腸細(xì)胞還在炎癥期間產(chǎn)生白細(xì)胞介素(IL-7、IL-15)，并激活粘膜的淋巴細(xì)胞。因而，在腸上皮中過度產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子并同時缺失了其它的CD4+T細(xì)胞的CD4+T細(xì)胞的亞組及其相關(guān)的正常情況下調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)并保護(hù)腸道免受損傷的細(xì)胞因子，和作為抗原提呈細(xì)胞起作用的腸細(xì)胞，所有這些都導(dǎo)致了 IBD的病理。13、貓科膽管炎貓科膽管炎在貓中是繼肝脂質(zhì)沉積后第二常見的肝臟疾病。在貓中識別到三種形式的膽管炎:嗜中性粒細(xì)胞的(細(xì)菌或少見的原蟲)、淋巴細(xì)胞的(免疫介導(dǎo)的)和慢性(的與肝吸蟲感染有關(guān)的)。14、貓科嗜酸性粒細(xì)胞性疾病貓科嗜酸性粒細(xì)胞性疾病是一個寬泛的術(shù)語，其包括多種嗜酸性粒細(xì)胞反應(yīng)/肉芽腫。同義詞包括貓科嗜酸性肉芽腫綜合征、貓科無疼性潰瘍、侵蝕性潰瘍、嗜酸性潰瘍、嗜酸性斑塊、貓科線性 肉芽腫和貓科嗜膠原(collagenolitic)肉芽腫。雖然它也被認(rèn)為是有遺傳傾向的，潛在的過敏性疾病看起來激起了發(fā)作。臨床癥狀包括發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)邊界清楚的紅斑性的黃色一粉紅色的線性到圓形斑。這些病變可位于胸腹部、大腿、腳掌、唇緣或下巴。病變也有可能成為潰瘍的，通常是非常瘙癢和非常疼痛的。15、心臟疾病貓科的心臟疾病以不同的形式發(fā)生，盡管例如心肌炎和/或梗死的過程可以以任何類型的心臟疾病發(fā)生，最常見的是肥厚性心肌病("HCM")。由于甲狀腺功能亢進(jìn)癥或高血壓還可以發(fā)生繼發(fā)性心臟病。HCM的發(fā)生歸因于受損的心室舒張和增加的心室硬度的組合，導(dǎo)致舒張功能障礙。大多數(shù)的貓也將有動態(tài)的流出梗阻，其在收縮期導(dǎo)致二尖瓣脫垂并發(fā)生反流。這最終會依次導(dǎo)致心房的壓力增加，然后導(dǎo)致充血性心力衰竭(“CHF”)。HCM最有可能起源于遺傳。已在患有HCM的緬因綜熊(Maine coons)和布偶貓(Ragdolls)中鑒定了肌球蛋白結(jié)合蛋白C的突變，但基因突變檢測(“MBPC”)僅可供于緬因浣熊。16、運(yùn)動誘發(fā)的肺出血(“EIPH”)最常見于用于短的時間內(nèi)進(jìn)行劇烈運(yùn)動的賽馬和其他的馬。僅在約5%的已知患有運(yùn)動誘發(fā)的肺出血的馬中觀察到鼻出血。雖然認(rèn)為當(dāng)暴露于劇烈活動時，所有的運(yùn)動馬匹(performance horse)在一定程度上都經(jīng)歷EIPH,其很少導(dǎo)致死亡,但隨著時間的推移確實(shí)會造成肺功能下降。肺毛細(xì)血管破裂造成出血，隨后發(fā)生肺部炎癥、纖維化及血管生成，從而導(dǎo)致進(jìn)一步的出血。建議的EIPH最初起因的機(jī)理包括最大運(yùn)動時的高肺血管壓力，在運(yùn)動時胸腔內(nèi)產(chǎn)生的剪切力，肺系統(tǒng)不能代償或跟上極端的心輸出量的增加以滿足高強(qiáng)度運(yùn)動的需求，凝血功能障礙和/或繼發(fā)于肺部炎癥的新生血管。目前，認(rèn)為隨著疾病的慢性化，會發(fā)生肺瘢痕化，這將導(dǎo)致氣體交換減少，因此減少運(yùn)動潛能。臨床癥狀包括鼻出血、運(yùn)動后的氣管血液、咳嗽、增加的吞咽和/或運(yùn)動后恢復(fù)時間延長。17、勞累性橫紋肌溶解癥。勞累性橫紋肌溶解癥(“ER”，也被稱為tying up (無對應(yīng)中譯文))可以影響任何一匹馬，但其是一種運(yùn)動動物的常見疾病，可以是一個反復(fù)出現(xiàn)的問題。馬可遭受疾病的從亞臨床到危及生命的不同程度，而且通常運(yùn)動后的發(fā)病時間與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)，較早發(fā)病涉及更顯著的疾病。ER在對運(yùn)動著的馬骨骼肌的血流量不足的反應(yīng)中發(fā)生，由于氧化血液的缺乏，肌肉細(xì)胞開始無氧地發(fā)揮作用，以產(chǎn)生所需的ATP。馬運(yùn)動的時間越長和/或存在越多的素因性因素，越多的肌纖維被損壞，然后疾病變得越發(fā)嚴(yán)重。所涉及的肌細(xì)胞/纖維越多，那么看到的臨床癥狀越多。最后肌細(xì)胞膜分解，酶和肌紅蛋白漏出，其然后由腎系統(tǒng)過濾出來，因而，發(fā)生疾病的威脅生命形式的肌紅蛋白尿和腎小管損傷?？砂l(fā)生遺傳的和獲得性形式的疾病?；加羞z傳形式疾病的動物最可能持續(xù)患有ER的復(fù)發(fā)發(fā)作。ER的遺傳起因源自于有缺陷的鈣調(diào)節(jié)，其通常在純種中并引起疾病的復(fù)發(fā)形式。多糖沉積性肌病("PSSM")是可比較的遺傳性肌病，其通常與ER相關(guān)，并常見于夸特馬(quarter horses)以及其它品種。疾病的獲得性起因有許多，通常以組合病因發(fā)生，包括不習(xí)慣運(yùn)動的馬以及其它誘發(fā)因素，例如:喂食過多的碳水化合物(谷物、球飼料)，身體條件較差的動物突然增加工作負(fù)載，存在電解質(zhì)或礦物質(zhì)失衡(特別是鉀)，硒或維生素E缺乏(補(bǔ)充之前應(yīng)測量硒水平)，激素失調(diào)特別是在雌/母馬，甲狀腺功能減退，潮濕或寒冷的天氣條件。雌性比雄性更傾向于發(fā)病。18、脊髓疾病現(xiàn)在，兔子特別是老年兔子中的脊髓疾病并不明確或被理解。已知老年兔子可遭受脊髓疾病，其是漸進(jìn)的，并在嚴(yán)重的病例中使其處于癱瘓或運(yùn)動失調(diào)狀態(tài)。由于兔子不容易表現(xiàn)疼痛的癥狀，其臨床癥狀可能很難診斷。獸醫(yī)和主人必需機(jī)敏地尋找脊髓疾病和/或疼痛的繼發(fā)癥狀。如果兔子大部分時間被局限在籠子里，就常常忽略其步態(tài)異?；虿辉敢庖苿樱米涌赡茏兊脤χ魅嘶蚧\子中的同伴更具進(jìn)攻性，他們可能在整飾自己中存在問題，因此會有一個臟的會陰部、會陰部尿灼傷和相關(guān)的皮炎，不能整飾也導(dǎo)致積累鱗屑，從而常見的是發(fā)展成姬螯螨(Cheyletiella)，兔子通常不再能到達(dá)肛門處來攝取便球(cecotrophs),因此,可能發(fā)生繼發(fā)的消化功能紊亂低運(yùn)動不足(hypomotiIity),兔子可能會比平?；由佟⒐矟?jì)失調(diào)、有意識的預(yù)見性喪失、尿或大便失禁。脊柱椎關(guān)節(jié)強(qiáng)硬、脊柱后凸或脊柱前凸是常見的在寵物兔射線照片上的發(fā)現(xiàn)，可引起疼痛、僵硬和退行性疾病。這些脊柱畸形的原因有很多，包括先天性的、低鈣飲食、代謝骨疾病、維生素D缺乏癥、不活動和/或一個籠子大小小。退行性椎間盤疾病是椎間盤突出，在死后已經(jīng)確認(rèn)有核擠出，是后肢癱瘓的原因。這一點(diǎn)可能源于產(chǎn)生脊柱過度屈曲的有力運(yùn)動，其不會導(dǎo)致脫節(jié)或骨折，但可能會導(dǎo)致在間盤中的病變。在實(shí)驗(yàn)兔中也研究了自發(fā)的退行性脊椎病。這些由髓核的軟骨樣化生、髓核的鈣化和椎關(guān)節(jié)強(qiáng)硬組成。19、心肌梗死
每年有超過110萬美國人心臟病發(fā)作(心肌梗死或“MI”)。雖然80%活過了最初的心臟攻擊，有將近一半在未來的六年內(nèi)變得心力衰竭。當(dāng)冠狀動脈被完全阻塞而不能給心臟肌肉(心肌)的一個區(qū)段供應(yīng)氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)時，就會發(fā)生心臟病發(fā)作。如果堵塞仍然存在，部分的心肌會壞死。在幸存者中主要的并發(fā)癥是在發(fā)作以后的日子里，環(huán)繞壞死區(qū)周圍的組織沒有得到側(cè)支血管的充分灌流，也壞死了。心肌的缺失接著會導(dǎo)致心力衰竭的發(fā)病。增強(qiáng)至幸存心肌的血流量并最終導(dǎo)致心肌再生是確保將心臟病發(fā)作后心力衰竭的風(fēng)險最小化的重要目標(biāo)。20、充血性心力衰竭充血性心力衰竭(〃CHF〃)典型地發(fā)生在受損的心肌不能充分有力地泵出以維持滿足人體其它器官需要的足夠的血循環(huán)時。患者常常疲勞、氣短、經(jīng)常地住院。三分之一患有CHF的患者在離開醫(yī)院的三個月內(nèi)需要重復(fù)住院。21、脊髓損傷脊髓損傷(SCI)是對脊髓的損傷，其導(dǎo)致例如運(yùn)動或感覺功能喪失。常見的損傷起因是創(chuàng)傷(交通事故、槍傷、跌落等)或疾病(脊髓灰質(zhì)炎、脊柱裂、弗里德賴希共濟(jì)失調(diào)等)。功能喪失發(fā)生時脊髓未必傷得很嚴(yán)重。實(shí)際上，在大多數(shù)SCI的患者中，脊髓是完整的，但是，其損傷導(dǎo)致了功能的喪失。SCI的影響取決于損傷的類型和損傷的程度。SCI可分為兩種類型的損傷一完全的和不完全的。完全的損傷指在損傷的水平以下沒有功能了 ；沒有感覺，沒有自主運(yùn)動。身體的兩側(cè)同等地受影響。不完全的損傷指在損傷的原發(fā)水平以下有一些功能?；加胁煌耆珦p傷的患者可能能夠運(yùn)動一個肢體比另一個多，可能能夠感覺到身體的不能運(yùn)動的部分，或者可能在身體的一側(cè)比另一側(cè)具有更多的功能。隨著SCI急性治療的進(jìn)展，不完全損傷漸漸變得更加常見。除了感覺和運(yùn)動功能喪失外，患有SCI的個體可能經(jīng)歷其它變化。例如，他們可能經(jīng)歷腸和膀胱功能障礙。非常高 的損傷(C-l、C-2)可導(dǎo)致喪失許多非自主功能，包括呼吸的能力，需要呼吸輔助，如機(jī)械呼吸機(jī)或膈肌起搏器。SCI的其它影響可包括低血壓、不能有效地調(diào)節(jié)血壓、降低的體溫控制、在損傷水平以下不能排汗以及慢性疼痛。22、骨骼肌纖維化骨骼肌纖維化是個體中改變生活的問題，個體遭受靶向這些肌肉的疾病(肌肉萎縮癥、多發(fā)性硬化癥)或由創(chuàng)傷或神經(jīng)肌肉疾病誘導(dǎo)的去神經(jīng)萎縮。骨骼肌纖維化影響所有種族和年齡的個體，包括那些遭受去神經(jīng)纖維化的具有特定疾病的那些個體和那些過度訓(xùn)練的或遭受嚴(yán)重肌肉損傷的健康運(yùn)動員。在用力過程中隨時間在肌肉組織中發(fā)生的微細(xì)撕裂(Microscopic tears)能引起生命后期的肌肉硬化和纖維化，其能變得疼痛甚至殘毀。23、肌營養(yǎng)不良癥肌營養(yǎng)不良癥(“MD”)指的是一組遺傳性肌肉疾病，其削弱移動人體的肌肉。肌營養(yǎng)不良癥的特點(diǎn)是漸進(jìn)的骨骼肌肉衰弱、肌肉蛋白缺陷以及肌肉細(xì)胞和組織的死亡。包括杜興氏(Duchene)、貝克氏(Becker)、肢帶型、先天性的、面肩肱型(scioscapulohumeral)、肌強(qiáng)直型、眼咽的、遠(yuǎn)端的和Emery-Dreifuss型(無對應(yīng)中譯文)的九種疾病被歸類為肌營養(yǎng)不良癥，雖然總共有超過100種疾病類似于肌肉萎縮癥。大多數(shù)類型的MD是多系統(tǒng)疾病，表現(xiàn)在包括心臟、胃腸道和神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌腺體、皮膚、眼睛甚或大腦的身體系統(tǒng)。該病況也可能導(dǎo)致心境不穩(wěn)和學(xué)習(xí)困難。
24、多發(fā)性硬化癥多發(fā)性硬化癥(“MS”)是一種自身免疫性疾病，其影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)。MS是由于髓鞘(包圍神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)覆蓋物)破壞引起的，它是一種脫髓鞘性疾病。當(dāng)此神經(jīng)覆蓋物受損時，神經(jīng)脈沖放緩或停止。神經(jīng)損傷由炎癥引起。當(dāng)人體的自身免疫細(xì)胞攻擊神經(jīng)系統(tǒng)時發(fā)生炎癥。炎癥可反復(fù)發(fā)作在大腦、視神經(jīng)和脊髓的任何區(qū)域發(fā)生。因?yàn)樵诖竽X或脊髓任何部分的神經(jīng)都可能會被損壞，多發(fā)性硬化癥患者可以在許多不同的器官系統(tǒng)中有癥狀。臨床癥狀可以是普遍的，但通常是多種多樣的。MS的癥狀可能類似于許多其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病的癥狀。D、治療的臨床結(jié)果1、椎間盤疾病、脊髓損傷根據(jù)一個示例性的實(shí)施方式，對由于在治療前一個月遭受急性脊髓損傷而出現(xiàn)IVDD的犬科脊髓損傷患者用治療劑量的源自牙齒組織和睪丸組織的MSC進(jìn)行治療。在治療方案前，患者出現(xiàn)后肢共濟(jì)失調(diào)3.5/5級，患者不能支持體重來上下樓梯。而且，患者不能足夠長時間地支持體重來走顯著的距離，在遠(yuǎn)端腰椎和近頡腰椎(cranial lumbar spine)有嚴(yán)重的捻發(fā)音，并且根本不能跑。之前的類固醇及非類固醇治療在治療的時候沒有幫助，雖然患者顯示正常的膀胱和腸道控制?；颊咭悦績芍艿拈g隔接受三次MSC靜脈注射，一次劑量包含來自睪丸組織的MSC，后兩次注射來自牙齒組織。在接受治療后，患者具有明顯改善的后肢共濟(jì)失調(diào)，至1/5級，容易上下樓梯，能夠每天走超過I英里，能夠在不施與類固醇或非類固醇治療的情況下跑動。實(shí)際上，只有有當(dāng)患者非常累或者過度工作時才觀察到治療后的非常溫和的共濟(jì)失調(diào)(I 級)。另一表現(xiàn)起因于遺傳半椎體的慢性IVDD的犬科也以一個月的間隔用治療劑量的源自牙齒組織的MSC進(jìn)行治 療。在治療前，該患者使用拖車活動，因?yàn)樵谥委熐按蠹sI年其沒有表現(xiàn)后腿活動。而且，在之前的6個月，患者發(fā)展成前左肘部關(guān)節(jié)炎，使其難于有效地使用小車?；颊咄ㄟ^靜脈注射以一個月的間隔接受了三次治療劑量的MSC。在治療后，患者在后肢有一些活動，當(dāng)使用拖車時模仿“行走運(yùn)動”，但是不使用小車仍不能支持整個體重。前肘的關(guān)節(jié)炎顯著改善，使得使用拖車運(yùn)動大大改善。根據(jù)另一個示例性的實(shí)施方式，呈現(xiàn)導(dǎo)致后肢麻痹的慢性脊髓疾病(IVDD)的兔類患者通過靜脈給藥給予單次治療劑量的骨髓干細(xì)胞進(jìn)行治療。在治療前，患者幾個月不能走動，盡管在疾病發(fā)作前聰明、機(jī)靈，有良好的食欲。在用治療劑量的來自骨髓的MSC治療之前，用物理療法每天治療患者，但是患者開始不能移動其前腿或抬起其頭/頸區(qū)，在報告前一個月出現(xiàn)抑郁的癥狀。用治療劑量的MSC靜脈治療后，患者再次變得聰明、機(jī)靈，開始吃得更好，并開始試圖移動其前肢和頭部?；颊吣軌蜷_始抬起其頭/頸部區(qū)和前肢，與疾病發(fā)作之前表現(xiàn)的程度相似。2、慢性骨關(guān)節(jié)炎同時，用單一治療劑量的源自牙齒組織的MSC治療另一種犬科患者的慢性0A。在治療前，該患者長期(大約1.5年)接受非類固醇抗炎藥物處理，這需要頻繁的血液工作以監(jiān)控肝和腎功能。在治療后，患者的精力和被毛改善了，患者能夠停止所有的OA藥物處理?；颊叩幕顒有燥@著改善，該有益的結(jié)果一直維持到治療后大約6個月需要另一次治療劑量的MSC時。根據(jù)另一個示例性的實(shí)施方式，用單次治療劑量的來自牙齒組織的MSC治療老年貓科的慢性骨關(guān)節(jié)炎。在治療前，患者的慢性骨關(guān)節(jié)炎已經(jīng)發(fā)展到顯著影響活動水平的水平，并在肘部水平顯著影響患者前肢的大體解剖結(jié)構(gòu)。但是，在治療前患者沒有藥物治療。治療后，患者表現(xiàn)增加的活動、降低的昏睡和睡眠時間，并表現(xiàn)顯著增加的食欲。根據(jù)另一個示例性的實(shí)施方式，用單次治療劑量的源自骨髓的MSC治療具有嚴(yán)重的泛發(fā)的關(guān)節(jié)炎(主要是脊柱和四肢)的老年兔類。在治療前，患者每天的大部分時間很少活動，使用止痛藥物治療和非類固醇抗炎藥物治療來治療骨關(guān)節(jié)炎，容易把自己弄臟。在單次治療后，患者變得極度活躍，繞著自身轉(zhuǎn)圈。而且，患者又能夠擺出排尿和排便姿勢，減少了先前的把自己弄臟的問題。患者的整體健康、食欲和體重增加，可以中斷抗炎藥物治療。根據(jù)另一個示例性的實(shí)施方式，用單次治療劑量的源自骨髓的MSC治療具有嚴(yán)重的泛發(fā)的關(guān)節(jié)炎(特別是由于先前的前肢骨折以及隨后該部位的手術(shù)導(dǎo)致的前肢)的老年兔類患者。在治療前，患者先前骨折的前肢顯著畸形，導(dǎo)致患者經(jīng)常摔倒。而且，患者非常愛坐下來，并接受了止痛藥物治療、葡萄糖胺軟骨素補(bǔ)充劑和非類固醇抗炎。在單次治療后，患者能夠中斷止痛藥物治療，變得更加能走動和互動，并且食欲增加。3、炎性腸疾病(IBD)用間隔大約3個月的兩次治療劑量的源自牙齒組織的MSC治療另一種犬科患者的慢性0A。在治療前，患者接受處方飲食，并每日兩次投與幾種不同的藥物治療，以幫助控制嚴(yán)重的淋巴細(xì)胞一漿細(xì)胞性腸炎。隨著疾病的進(jìn)展，更加難以用藥物治療/飲食進(jìn)行控制，患者開始顯著地失去重量，患者的毛發(fā)變干而脆，標(biāo)志著營養(yǎng)素吸收不良。

在治療后，患者維持治療如的藥物治療，但在弟一次給予治療劑量的MSC后，患者的糞便從水樣便、血便變成半成形的、不出血的大便。患者恢復(fù)治療前失去的重量的四分之三，并且患者的毛發(fā)顯著改善。此后，一起停止用于治療淋巴細(xì)胞一漿細(xì)胞性腸炎的兩種藥物治療，所有其他的治療方法保持不變?；颊咦兊酶钴S，更顯示了更好的整體健康。4、早期退行性脊髓病(DM)用單次治療劑量的牙齒來源的MSC靜脈內(nèi)給藥治療另一犬科患者的退行性脊髓病。在治療之前，患者后肢變得運(yùn)動失調(diào)，并具有有意識的本體感覺障礙。當(dāng)行走時，患者會“搖擺”，并且在爬樓梯和繞著房間移動時有困難。治療后，患者表現(xiàn)出全身力量和活力增力口，共濟(jì)失調(diào)明顯改善，在治療后大約4個月沒有引人注意的偏離方向。5、心肌病根據(jù)另一個示例性的實(shí)施方式，用單次治療劑量的牙齒來源的MSC靜脈內(nèi)給藥治療另一貓科患者的病因不明的泛發(fā)的炎癥性疾病，以及通過超聲心動圖診斷的貓科心肌病。在治療如，患者的病情不能穩(wěn)定，患者顯不明顯的嗜睡。治療后，超聲心動圖測量表現(xiàn)出心肌病的癥狀明顯改善。另外，患者表現(xiàn)出治療前顯著的一般嗜睡的顯著改善，并顯示出與正常個體類似的活性和食欲。6、肌肉纖維化根據(jù)另一個示例性的實(shí)施方式，用單次劑量的來自骨髓的MSC靜脈內(nèi)治療兔類患者的IVDD以及后肢的肌肉纖維化。在治療前，患者顯示出慢性脊髓疾病，其導(dǎo)致后肢麻痹和最終的受影響后肢的肌肉組織纖維化。雖然前肢并不表現(xiàn)肌肉纖維化的癥狀，但由于過度使用，前肢變形是顯著的。在治療前患者使用移動小車6個月。治療后，患者的后肢纖維化顯著改善到物理治療時腿能夠彎曲和操控的點(diǎn)，患者的后肢不再僵硬在一個姿勢。隨著物理治療的持續(xù)，患者開始獲得能夠靠其自己的力量將腿彎在身下的能力，能夠沒有其小車而使自己平衡，并能夠靠自己走幾步?；颊弑憩F(xiàn)出改善的全身整體健康。根據(jù)另一個示例性的實(shí)施方式，用一個治療劑量的胎盤來源的MSC以一個月的間隔分三次給藥治療馬科患者的長期肌肉纖維化和來自先前右肩胛骨骨折的0A。在治療前，患者前右肩表現(xiàn)出嚴(yán)重的R上肌、R下肌肌肉纖維化，根據(jù)熱成像研究表現(xiàn)出缺乏供應(yīng)到該位點(diǎn)的血液，在受影響的肢體中活動范圍降低，且所有的肩部和近端前肢肌肉組織萎縮。肩部的骨關(guān)節(jié)炎作為創(chuàng)傷的后續(xù)疾病也成為前肢的問題。治療后，患者的肌肉纖維化顯著改善，如熱成像比較研 究所示，供應(yīng)到該區(qū)域的血流顯著改善。而且，患者受影響的肢體的活動范圍顯著改善，如通過后肢圓周所測量到的，肩部肌肉質(zhì)量比以前的記錄顯著地改善了，患者能夠終止之前的OA藥物治療。7、運(yùn)動誘導(dǎo)的肺出血(EIPH)根據(jù)一個示范性的實(shí)施方式中，用四個治療劑量的胎盤來源的MSC靜脈內(nèi)給藥治療通過胃鏡檢查及支氣管肺泡灌洗(“BAL”)診斷患有EIPH的馬科患者，以一個月的間隔給藥每個劑量。在治療前，患者會容易疲勞，并不能很好完成比賽。另外，患者顯示弱的整體身體狀態(tài)評分，測量為2/5。治療后，賽后內(nèi)視鏡檢查和BAL測試表明肺出血(EIPH)的顯著改善，患者比賽后沒有氣喘吁吁，并始終位于比賽中的完成位置。此外，患者的身體狀況得分提高到了 3.5/5。8、橫紋肌溶解癥用一個治療劑量的牙齒來源的MSC靜脈內(nèi)給藥治療診斷為運(yùn)動誘導(dǎo)的橫紋肌溶解、與電解質(zhì)異常相關(guān)的嚴(yán)重的全身肌肉酸痛的馬科患者。在治療前，運(yùn)動誘導(dǎo)的橫紋肌溶解癥的臨床癥狀持續(xù)到極端運(yùn)動發(fā)生的幾天后。治療后，患者可以正常走動，正常進(jìn)食，并開始鍛煉方案。而且，在正常的姿態(tài)和步態(tài)中患者表現(xiàn)出減少的疼痛癥狀。9、脊髓損傷用四個治療劑量的牙齒來源的MSC以一個月間隔給藥每個劑量治療在比賽中由于與墻的碰撞而表現(xiàn)尾部脊髓損傷的馬科患者。在治療前，患者后肢運(yùn)動失調(diào)，以及尿、直腸或陰莖功能失控。最初的緊急治療改善后肢共濟(jì)失調(diào)至溫和的共濟(jì)失調(diào)，允許患者走/小跑。然而，患者需要導(dǎo)尿，以減輕其膀胱并避免膀胱破裂，其發(fā)生在一個實(shí)例中。治療后，患者恢復(fù)了它的直腸功能的控制，并進(jìn)一步重新獲得足夠的陰莖功能的控制，以允許至少部分再包裹其組件，以防止干燥損傷。此外，患者恢復(fù)沒有插管而排尿的能力。
權(quán)利要求
1.一種治療遭受預(yù)選疾病或疾病狀態(tài)的患者的方法，其包括向遭受預(yù)選疾病或疾病狀態(tài)的患者通過靜脈注射全身給藥治療劑量的間充質(zhì)干細(xì)胞組合物的步驟，所述間充質(zhì)干細(xì)胞組合物包括收獲自選自胎盤組織、骨髓、牙齒組織、睪丸組織、子宮組織、臍帶組織和皮膚組織的至少一個組織的間充質(zhì)干細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中治療有效劑量是每kg患者體重大約600萬個間充質(zhì)干細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中治療有效劑量是無論患者體重如何，不超過大約5千萬個間充質(zhì)干細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中患者選自人、犬科、貓科、馬科和兔類。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中間充質(zhì)干細(xì)胞對于患者是同種異體的或自體的。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中預(yù)選疾病或疾病狀態(tài)選自退行性骨疾病、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性腸疾病、特應(yīng)性疾病、肝炎、慢性類固醇反應(yīng)性腦膜炎動脈炎、比格犬疼痛綜合征、退行性脊髓病、慢性腎功能衰竭疾病、擴(kuò)張和二尖瓣型心肌病、干燥性角膜結(jié)膜炎、免疫介導(dǎo)的非侵蝕性關(guān)節(jié)炎、免疫介導(dǎo)的溶血性貧血、免疫介導(dǎo)的血小板減少癥、伊文氏綜合征、椎間盤疾病、疾病或創(chuàng)傷繼發(fā)性肌肉纖維化、難治性角膜潰瘍、糖尿病、脊髓創(chuàng)傷、嗜酸性肉芽腫綜合癥、肥厚性心肌病、膽管炎、脊髓損傷、運(yùn)動誘發(fā)的肺出血、橫紋肌溶解癥、角膜潰瘍、濕疹、多發(fā)性硬化、肌營養(yǎng)不良癥、脊髓損傷、糖尿病、肝炎、心肌梗死、充血性心衰竭和疾病或創(chuàng)傷繼發(fā)性肌肉纖維化。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中間充質(zhì)干細(xì)胞組合物基本由間充質(zhì)干細(xì)胞和鹽溶液組成。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中間充質(zhì)干細(xì)胞組合物包括濃度不超過500,000個細(xì)胞每mL的間充質(zhì)干細(xì)胞和鹽 溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中間充質(zhì)干細(xì)胞組合物包括濃度不超過100,000個細(xì)胞每HlL的間充質(zhì)干細(xì)胞和鹽溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中間充質(zhì)干細(xì)胞組合物進(jìn)一步包括來自干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的因子。
11.一種用于治療遭受預(yù)選疾病或疾病狀態(tài)的患者的方法，其包括向遭受預(yù)選疾病或疾病狀態(tài)的患者通過靜脈注射全身給藥治療劑量的間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基組合物的步驟，其中間充質(zhì)干細(xì)胞組合物包括培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中培養(yǎng)來自選自胎盤組織、骨髓、牙齒組織、睪丸組織、子宮組織、臍帶組織和皮膚組織的至少一個組織的間充質(zhì)干細(xì)胞； 其中間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基組合物進(jìn)一步懸浮在鹽溶液中； 其中，患者選自人、犬科、貓科、馬科、或兔類； 并且其中，預(yù)選的疾病或疾病狀態(tài)選自退行性骨疾病、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性腸疾病、特應(yīng)性疾病、肝炎、慢性類固醇反應(yīng)性腦膜炎動脈炎(比格犬疼痛綜合征)、退行性脊髓病、慢性腎功能衰竭疾病、擴(kuò)張和二尖瓣型心肌病、干燥性角膜結(jié)膜炎、免疫介導(dǎo)的非侵蝕性關(guān)節(jié)炎、免疫介導(dǎo)的溶血性貧血、免疫介導(dǎo)的血小板減少癥、伊文氏綜合征、椎間盤疾病、疾病或創(chuàng)傷繼發(fā)性肌肉纖維化、難治性角膜潰瘍、糖尿病、脊髓創(chuàng)傷、嗜酸性肉芽腫綜合癥、肥厚性心肌病、膽管炎、脊髓損傷、運(yùn)動誘發(fā)的肺出血、橫紋肌溶解癥、角膜潰瘍、濕疹、多發(fā)性硬化、肌營養(yǎng)不良癥、脊髓損傷、糖尿病、肝炎、心肌梗死、充血性心衰竭和疾病或創(chuàng)傷繼發(fā)性肌肉纖維化。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中間充質(zhì)干細(xì)胞組合物基本上由間充質(zhì)干細(xì)胞和鹽溶液組成。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中治療有效劑量是每kg患者體重大約600萬個間充質(zhì)干細(xì)胞。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中治療有效劑量是無論患者體重如何，不超過大約5千萬個間充質(zhì)干細(xì)胞。
15.一種間充質(zhì)干細(xì)胞組合物，其包括: a、至少600萬個源自收獲自對目標(biāo)患者同種異體的或自體的胎盤組織、骨髓、牙齒組織、睪丸組織、子宮組織、臍帶組織或皮膚組織的祖細(xì)胞的間充質(zhì)干細(xì)胞；和 b、鹽溶液，其中組合物具有每mL組合物不超過500，000個細(xì)胞的濃度，且其中組合物有效地地降低或消除目標(biāo)患者中一種或多種疾病或疾病狀態(tài)的癥狀，其中疾病或疾病狀態(tài)選自退行性骨疾病、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性腸疾病、特應(yīng)性疾病、肝炎、慢性類固醇反應(yīng)性腦膜炎動脈炎、比格犬疼痛綜合征、退行性脊髓病、慢性腎功能衰竭疾病、擴(kuò)張和二尖瓣型心肌病、干燥性角膜結(jié)膜炎、免疫介導(dǎo)的非侵蝕性關(guān)節(jié)炎、免疫介導(dǎo)的溶血性貧血、免疫介導(dǎo)的血小板減少癥、伊文氏綜合征、椎間盤疾病、疾病或創(chuàng)傷繼發(fā)性肌肉纖維化、難治性角膜潰瘍、糖尿病、脊髓創(chuàng)傷、嗜酸性肉芽腫綜合癥、肥厚性心肌病、膽管炎、脊髓損傷、運(yùn)動誘發(fā)的肺出血、橫紋肌溶解癥、角膜潰瘍、濕疹、多發(fā)性硬化、肌營養(yǎng)不良癥、脊髓損傷、糖尿病、肝炎、心肌梗死、充血性心衰竭和疾病或創(chuàng)傷繼發(fā)性肌肉纖維化。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療預(yù)選疾病的方法，包括提供治療劑量的間充質(zhì)干細(xì)胞組合物以及通過靜脈注射向遭受預(yù)選疾病或疾病狀態(tài)的患者全身給藥間充質(zhì)干細(xì)胞組合物的步驟，所述間充質(zhì)干細(xì)胞組合物包括收獲自選自胎盤組織、骨髓、牙齒組織、睪丸組織和皮膚組織的至少一個組織的間充質(zhì)干細(xì)胞。
文檔編號C12N5/10GK103180435SQ201180051553
公開日2013年6月26日 申請日期2011年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者E·J·伍茲, S·提魯馬拉, S·J·扎卡賴亞斯 申請人:庫克通用生物技術(shù)有限責(zé)任公司