含有非復制型益生微生物的飲用酸乳制品的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及可飲用酸乳組合物領(lǐng)域。特別是，本發(fā)明提供了包含非復制型益生微生物的可飲用酸乳組合物。這些非復制型益生微生物例如可為生物活性的經(jīng)熱處理的益生微生物。本發(fā)明還涉及由這些非復制型益生微生物提供的健康益處。
【專利說明】含有非復制型益生微生物的飲用酸乳制品
[0001]本發(fā)明涉及可飲用酸乳組合物領(lǐng)域。特別是，本發(fā)明提供了包含非復制型益生微生物的可飲用酸乳組合物。這些非復制型益生微生物例如可為生物活性的經(jīng)熱處理的益生微生物。本發(fā)明還涉及由這些非復制型益生微生物提供的健康益處。
[0002]益生菌的健康益處同時已被本領(lǐng)域接受，并且例如總結(jié)于Blum等人.Curr IssuesIntest Microbiol.2003年9月;4 (2): 53—60中。益生菌經(jīng)常與益生元一起在共生制劑中施用，這可更提高了健康益處。
[0003]當前益生菌通常例如在酸乳或酸乳飲料中出售。
[0004]可飲用的酸乳組合物看起來是特別優(yōu)選的，因為它們可在早晨或在白天作為健康美食而被欣然地消費。
[0005]已知益生菌能夠附著人體腸道細胞，并清除人體腸道細胞上的致病菌。為擁有這一活性，益生菌必須在產(chǎn)品中保持存活直至被消費。這對工業(yè)而言是一種挑戰(zhàn)，并使得往食品中添加益生菌是不平凡的。
[0006]特別是，對于在生產(chǎn)過程中被加熱、和/或在被消費之前可能有較長貯存時間的產(chǎn)品(諸如貨架穩(wěn)定產(chǎn)品)，通常認為難以保證益生菌在產(chǎn)品中保持存活直至被消費，此外也難以確保它們有活力地到達腸道。
[0007]期望能夠獲得這樣的可飲用酸乳組合物，其甚至能夠在對益生菌苛刻的條件下長時間貯存后提供益生菌的益處，而且制備簡單。如果其通過使用對施與者安全、無副作用且應用現(xiàn)有的工業(yè)技術(shù)容易地摻入可飲用酸乳組合物的天然成分來實現(xiàn)，則是優(yōu)選的。
[0008]還期望提供具有改善的免疫增強效果的包含益生菌的組合物。
[0009]還期望提供具有改善的抗炎效果的包含益生菌的組合物。
[0010]本發(fā)明人已經(jīng)解決了此需要。因此本發(fā)明的目的為改進現(xiàn)有技術(shù)和提供滿足上面所述的需要的可飲用酸乳組合物。
[0011]本發(fā)明人令人驚訝地看到通過獨立權(quán)利要求的主題他們能夠?qū)崿F(xiàn)此目標。從屬權(quán)利要求進一步發(fā)展了本發(fā)明的想法。
[0012]因此，本發(fā)明人提供了包含非復制型益生微生物的可飲用酸乳組合物。
[0013]向產(chǎn)品中添加非復制型益生微生物的一個優(yōu)點是:與有活力的益生菌不同，當存在于產(chǎn)品中時，它們對纖維結(jié)構(gòu)(texture)沒有影響，因此組合物的口感不隨時間改變。
[0014]此外，本發(fā)明人還能夠表明非復制型益生菌能夠提供益生菌的健康益處，并且甚至可能具有改善的益處。
[0015]因此，在終產(chǎn)品中保持益生菌存活以及確保它們有活力地到達腸道的復雜措施看來是不必要的。此外，在可飲用酸乳組合物中使用非復制型益生菌還使得允許在一制品中同時含有益生菌和益生元，而沒有在產(chǎn)品的制備和貯存期間不希望的過早破壞纖維的風險。
[0016]本發(fā)明可飲用酸乳組合物中非復制型微生物的量可相應于每份約IO6至1012cfu。
[0017]很明顯，非復制型微生物不形成菌落，因而，此術(shù)語理解為從IO4到1012cfu/g的復制型細菌獲得的非復制型微生物的量。這包括失活的、無活力的或死亡的或以片段例如DNA或細胞壁或細胞質(zhì)復合物存在的微生物。換句話說，組合物含有的微生物的量以微生物的菌落形成能力(Cfu)的量表示，就好像所述所有微生物是活的而不管它們實際上是否是非復制型的，例如失活的或死亡的、碎片的或任何或所有這些狀態(tài)的混合物。
[0018]根據(jù)本發(fā)明的可飲用酸乳組合物可包含約80-90%重量的水、約3-15%重量的糖以及約2.5-5%重量的脫脂奶粉。
[0019]可飲用酸乳組合物還可包含約0.3-0.5%重量的果膠。
[0020]可飲用酸乳組合物可貯存于冷藏條件下。冷藏條件通常具有2°C至15°C、優(yōu)選4°C至8 °C的溫度。
[0021]可飲用酸乳組合物還可貯存于環(huán)境(ambient)條件下。環(huán)境條件通常具有16°C至25°C、優(yōu)選18°C至23°C的溫度。在環(huán)境條件下長時間保持益生菌活力是特別有挑戰(zhàn)性的。因此，尤其對于在環(huán)境條件下貯存的可飲用酸乳組合物而言，添加非復制型益生微生物是賦予所述產(chǎn)品更多健康益處的有前途的途徑。
[0022]可飲用酸乳組合物還可包含益生元。
[0023]“益生元”意指在腸中促進益生菌生長的食物物質(zhì)。它們在攝入它們的人的胃和/或腸上部中不被分解或在胃腸道中不被吸收，但它們被胃腸微生物群和/或益生菌發(fā)酵。益生兀定義在例如 Glenn R.Gibson 和 Marcel B.Roberfroid, Dietary Modulationof the Human Colonic Microbiota:1ntroducing the Concept of Prebiotics, J.Nutr.1995125:1401-1412 中。
[0024]根據(jù)本發(fā)明可使用的益生元沒有特別限制，包括在腸中促進益生菌生長的所有食物物質(zhì)。優(yōu)選的，它們可選自低聚糖，其任選包含果糖、半乳糖、甘露糖；膳食纖維，特別是可溶纖維、大豆纖維；菊粉；或其混合物。優(yōu)選的益生元為低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(galacto-oligosaccharides) (IOS)、低聚異麥芽糖、低聚木糖、大豆低聚糖、葡糖基鹿糖(GS)、乳蔗糖(LS)、乳果糖(LA)、低聚異麥芽酮糖(PAO)、低聚麥芽糖(MOS)、樹膠和/或其水解產(chǎn)物、果膠和/或其水解產(chǎn)物。
[0025]益生元的典型實例為低聚果糖和菊粉。
[0026]根據(jù)本發(fā)明的可飲用酸乳組合物中的益生元的量取決于它們促進乳酸菌生長的能力。
[0027]可飲用酸乳組合物例如可包含相當于至少103CfU/g益生元、優(yōu)選IO4至107CfU/g益生元的量的益生菌。
[0028]本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，例如，在免疫增強作用方面和/或在抗炎作用方面，非復制型益生微生物甚至可比復制型益生微生物更有效。
[0029]這是令人驚奇的，因為益生菌經(jīng)常被定義為“當以足夠的量施用時賦予宿主健康益處的活的微生物”(FA0/WH0指南)。絕大多數(shù)公開的文獻涉及活益生菌。此夕卜，若干研究調(diào)查了由非復制型細菌遞送的健康益處，它們中多數(shù)表明了益生菌的失活(例如，通過熱處理)導致它們的聲稱的健康益處的損失(Rachmilewitz, D.等人，2004，Gastroenterologyl26:520 — 528;Castagliuolo 等人，2005，F(xiàn)EMS Tmmuno1.Med.Microbiol.43:197-204;Gill, H.S.和 K.J.Rutherfurd, 2001，Br.J.Nutr.86:285 —289; Kai la, M.等人，1995，Arch.Dis.Child72:51-53.)。一些研究顯示了滅活的益生菌可保留一些健康作用(Rachmilewitz, D.等人，2004，Gastroenterology 126:520 —528;Gill, H.S.K.J.Rutherfurd, 2001, Br.J.Nutr.86:285 — 289)，但明確的是，本領(lǐng)域迄今認為活益生菌為更有效的。
[0030]“非復制型”益生微生物包括已被熱處理的益生細菌。這包括失活的、死亡的、無活力的和/或以片段例如DNA、代謝物、細胞質(zhì)復合物、和/或細胞壁物質(zhì)存在的微生物。
[0031]“非復制型”意指沒有活細胞和/或菌落形成單位能夠由經(jīng)典的平板培養(yǎng)法檢出。此類經(jīng)典的平板培養(yǎng)法總結(jié)于微生物學書:James Monroe Jay, Martin J.Loessner, DavidA.Golden.2005.Modern food microbiology.第 7 版，Springer Science, New York, N.Y.790p中。典型地，可如下表明不存在活細胞:在用不同濃度的細菌制備物(“非復制型”樣品)接種和在適當條件(需氧和/或厭氧氣氛下至少24小時)溫育之后，在瓊脂平板上沒有可見的菌落或液體生長培養(yǎng)基中濁度不增加。
[0032]對于本發(fā)明的目的，益生菌定義為“對宿主的健康或安康具有有益作用的微生物細胞制備物或微生物細胞的組分”(Salminen S，Ouwehand A.Benno Y.等人“Probiotics:how should they be defined”Trends Food Sc1.Technol.1999:10107-10)。
[0033]本發(fā)明的組合物包含足以至少部分地產(chǎn)生健康益處的量的益生微生物和/或非復制型益生微生物。足以實現(xiàn)所述的量被定義為“治療有效劑量”。對該目的有效的量將取決于本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的許多因素例如消費者的重量和一般健康狀態(tài)，并取決于食物基質(zhì)(matrix)的影響。
[0034]在預防性應用中，以足以至少部分降低患病風險的量對易患病或有患病風險的消費者施用根據(jù)本發(fā)明的組合物。此類量被定義為“預防有效劑量”。再一次，準確的量取決于許多因素例如消費者的健康狀態(tài)和重量，并取決于食物基質(zhì)的影響。
[0035]本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠適當?shù)卣{(diào)整治療有效劑量和/或預防有效劑量。
[0036]一般來說，本發(fā)明的組合物含有治療有效劑量和/或預防有效劑量的非復制型益生微生物。
[0037]典型地，治療有效劑量和/或預防有效劑量在每日劑量約0.005mg -1OOOmg非復制型益生微生物的范圍內(nèi)。
[0038]優(yōu)選地，非復制型微生物以相當于IO4至109cfu/g干組合物的量存在，更優(yōu)選以相當于IO5至109cfu/g干組合物的量存在
[0039]可通過本領(lǐng)域已知的任何方法使益生菌成為非復制型的。
[0040]當今可用的使得益生菌菌株成為非復制型的技術(shù)通常為熱處理、Y-輻射、UV線或使用化學試劑(福爾馬林，多聚甲醛)。
[0041]就數(shù)量而言，“短時間高溫”處理的非復制型微生物可以以相當于IO4至IO12當量cfu/g干組合物的量存在于組合物中。
[0042]優(yōu)選地，使用在食品工業(yè)的工業(yè)環(huán)境下相對容易應用的致使益生菌成為非復制型的技術(shù)。
[0043]例如，可使益生菌成為非復制型的，并可作為非復制型益生菌添加至可飲用酸乳組合物中。
[0044]當今市場上的多數(shù)含有益生菌的產(chǎn)品在它們的生產(chǎn)過程中被熱處理。因此，能夠與生產(chǎn)的產(chǎn)品一起或至少以相似的方式熱處理益生菌，同時益生菌保持或提高它們的有益的性質(zhì)或甚至獲得對消費者的新的有益性質(zhì)，將是方便的。[0045]因此，還可將益生菌以有活力的形式添加至可飲用酸乳組合物中，并在該可飲用酸乳的正常生產(chǎn)過程中的加熱處理步驟期間使其成為非復制型的。
[0046]在文獻中，通過熱處理的益生微生物失活通常與益生菌活性的至少部分喪失相關(guān)聯(lián)，然而本發(fā)明人現(xiàn)在驚奇地發(fā)現(xiàn)，例如，通過熱處理使得益生微生物成為非復制型不導致益生菌健康益處的喪失，相反地，可增強現(xiàn)存的健康益處，并且甚至產(chǎn)生新的健康益處。
[0047]因此，本發(fā)明的一個實施方案是可飲用酸乳組合物，其中非復制型益生微生物通過熱處理成為非復制型的。
[0048]可在至少71.5°C處理至少I秒來進行此熱處理。
[0049]可使用長時熱處理或短時熱處理。
[0050]在當今工業(yè)規(guī)模中，通常優(yōu)選短時熱處理，例如UHT-樣熱處理。這類熱處理減少細菌負載，并且減少加工時間，從而減少營養(yǎng)物質(zhì)的破壞。
[0051]本發(fā)明人首次證實，不管它們的初始性質(zhì)，被高溫短時間熱處理的益生微生物表現(xiàn)了抗炎免疫譜(profile)。特別地通過這種熱處理發(fā)展新的抗炎譜或加強現(xiàn)有的抗炎譜。
[0052]因此通過使用特定的熱處理參數(shù)，現(xiàn)在可能產(chǎn)生具有抗炎免疫譜的非復制型益生微生物，即使活的對應物不是抗炎菌株，所述熱處理參數(shù)對應于典型的工業(yè)可應用的熱處理。
[0053]因此，例如，熱處理可為在約71.5 - 150°C、約1-120秒的高溫處理。高溫處理可為高溫/短時(HTST)處理或超高溫(UHT)處理。
[0054]益生微生物可在約71.5 - 150°C高溫處理約1-120秒的短時間。
[0055]更為優(yōu)選地，所述微生物可在約90 - 140°C例如90 — 120°C高溫處理約1_30秒的短時間。
[0056]此高溫處理使得微生物至少部分成為非復制型的。
[0057]可在正常大氣壓力但也可在高壓力下進行高溫處理。典型的壓力范圍是I至50巴，優(yōu)選I至10巴,更優(yōu)選2至5巴。明顯地，當加熱時，優(yōu)選在為液體或固體的介質(zhì)中熱處理益生菌。因此，應用的理想的壓力將取決于提供微生物的組合物的性質(zhì)和使用的溫度。
[0058]高溫處理可在約71.5_150°C、優(yōu)選約90_120°C、更優(yōu)選約120_140°C的溫度范圍內(nèi)進行。
[0059]高溫處理可進行約1-120秒、優(yōu)選約1-30秒、更優(yōu)選約5-15秒的短時間。
[0060]該給定的時間范圍指益生微生物在給定的溫度下的時間。需注意的是，取決于提供微生物的組合物的性質(zhì)和量以及取決于使用的加熱裝置的構(gòu)造，熱施用的時間可不同。
[0061]然而，典型地，本發(fā)明的組合物和/或微生物通過高溫短時(HTST)處理、巴氏瞬間滅菌法或超高溫(UHT)處理來進行處理。
[0062]UHT處理是超高溫加工或超熱處理(兩者都縮寫為UHT)，涉及通過大約1_10秒、溫度超過135°C (275° F)短時加熱的組合物的至少部分滅菌，所述溫度是殺死奶中的細菌芽孢所需要的溫度。例如，使用超過135°C溫度用這種方法加工奶使得在必要持續(xù)時間內(nèi)(至2-5秒)降低細菌負載，使能夠連續(xù)流操作。
[0063]有兩種主要類型的UHT系統(tǒng):直接和間接系統(tǒng)。在直接系統(tǒng)中，通過蒸汽注射或蒸汽輸注處理產(chǎn)品，而在間接系統(tǒng)中，使用平板熱交換器、管狀熱交換器或刮面熱交換器熱處理產(chǎn)品?？稍诋a(chǎn)品制備方法中的任一步驟或多個步驟中應用UHT系統(tǒng)的組合。[0064]HTST處理如下定義(高溫/短時):巴氏滅菌法設(shè)計達到5-log減少，殺死在奶中活的微生物數(shù)量的99.9999%。這被認為足以破壞幾乎全部酵母、霉菌和常見的腐敗細菌，并且也保證常見病原性熱抗性生物的足夠的破壞。在HTST方法中，加熱奶至71.7°C (161° F)達15 — 20秒。
[0065]巴氏瞬間滅菌法是易腐的飲料(如水果和蔬菜汁、啤酒和乳制品)的熱巴氏滅菌的方法。它在裝入容器前完成，以殺死腐敗微生物，以使得產(chǎn)品更安全以及延長它們的貯存期限。液體在71.50C (160° F)至74°C (165° F)溫度處理約15到30秒的同時以受控制的連續(xù)流移動。
[0066]對于本發(fā)明的目的，術(shù)語“短時高溫處理”應包括例如高溫短時(HTST)處理、UHT處理和巴氏瞬間滅菌法。
[0067]由于此類熱處理提供了具有改善的抗炎譜的非復制型益生菌，本發(fā)明的組合物可用于炎性疾病的預防或治療。
[0068]不特別限制能夠通過本發(fā)明的組合物治療或預防的炎性疾病。例如，它們可選自急性炎癥例如膿毒病；灼傷；和慢性炎癥，例如炎性腸病，例如，克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、隱窩炎(pouchitis);壞死性小腸結(jié)腸炎；皮膚炎癥，例如UV或化學誘導的皮膚炎癥、濕疹、反應性皮膚；腸易激綜合征；眼炎癥；變態(tài)反應、哮喘；和它們的組合。
[0069]如果使用長時熱處理使得益生微生物成為非復制型，可在約70 - 150°C溫度范圍內(nèi)達約3分鐘-2小時，優(yōu)選地在80 — 140°C范圍內(nèi)從5分鐘-40分鐘進行此類熱處理。
[0070]盡管現(xiàn)有技術(shù)通常教導通過長時熱處理變成非復制型的細菌通常就發(fā)揮它們的益生性質(zhì)而言不如活細胞有效，但是本發(fā)明人能夠證實與它們的活對應物相比被熱處理的益生菌在刺激免疫系統(tǒng)中是優(yōu)越的。
[0071]本發(fā)明也涉及包含益生微生物的組合物，所述微生物通過在至少約70°C、至少約3分鐘的熱處理成為非復制型的。
[0072]通過體外免疫譜分析(immuneprofiling)確認非復制型益生菌的免疫增強作用。使用的體外模型使用來自人外周血單核細胞(PBMC)的細胞因子譜分析并且作為測試免疫調(diào)節(jié)化合物的標準模型在本領(lǐng)域中被廣為接受(Schultz等人，2003，Journal of Dairy Research70, 165 — 173;Taylor 等人，2006，Clinicaland Experimental Allergy, 36, 1227-1235;Kekkonen 等人，2008，World Journal ofGastroenterology, 14, 1192-1203)。
[0073]若干作者/研究隊伍已經(jīng)使用了體外PBMC測定法，以例如根據(jù)益生菌的免疫譜，即它們的抗或促炎特征對它們分類(Kekkonen等人，2008，WorldJournal of Gastroenterology, 14, 1192-1203)。例如，在結(jié)腸炎小鼠模型中已經(jīng)顯示出此測定法允許預測益生候選物的抗炎作用(Foligne, B.,等人，2007，WorldJ.Gastroenterol.13:236-243)。此外，在臨床試驗中此測定法被經(jīng)常地用作讀出(read-out)測定法并且顯示了此測定法導致與臨床結(jié)果一致的結(jié)果(Schultz等人，2003，Journal of Dairy Research70, 165 — 173;Taylor 等人，2006，Clinical andExperimental Allergy, 36, 1227-1235)。
[0074]在過去的幾十年中變態(tài)反應性疾病穩(wěn)定地上升并且當前WHO認為它們是流行病。一般地，認為變態(tài)反應由免疫系統(tǒng)的Thl和Th2應答的不平衡造成，所述不平衡導致強烈偏向于Th2介質(zhì)的生產(chǎn)。因此，通過恢復免疫系統(tǒng)的Thl分路和Th2分路之間的適當?shù)钠胶饽軌蚓徍?、下調(diào)或預防變態(tài)反應。這暗示了減少Th2應答或至少瞬時增強Thl應答的必要性。后者將是免疫增強應答的特征，通常由例如較高水平的IFNy、TNF-a和IL-12伴隨。(Kekkonen 等人，2008，World Journal of Gastroenterology, 14, 1192-1203; Vil janen M.等人，2005，Allergy, 60，494-500)。
[0075]本發(fā)明的可飲用酸乳組合物因而允許其治療或預防與受損的免疫防御相關(guān)的疾病。
[0076]因此，不特別限制能夠通過本發(fā)明組合物治療或預防的與受損的免疫防御相關(guān)的疾病。
[0077]例如，它們可選自感染，特別地為細菌的、病毒的、真菌的和/或寄生蟲感染；吞噬細胞缺乏；低的到嚴重的免疫抑制水平例如由應激或免疫抑制藥物、化學療法或放射療法誘導的那些免疫抑制水平；較少免疫活性的免疫系統(tǒng)的天然狀態(tài)，例如新生兒的那些免疫系統(tǒng)；變態(tài)反應；以及其組合。
[0078]本發(fā)明描述的可飲用酸乳組合物也允許其增強兒童對疫苗的應答，特別是對口服疫苗的應答。
[0079]任何量的非復制型微生物將會是有效力的。然而，一般優(yōu)選，如果至少90%，優(yōu)選至少95%，更優(yōu)選至少98%，最優(yōu)選至少99%，理想地至少99.9%，最理想地全部益生菌為非復制型的。
[0080]在本發(fā)明的一個實施方案中全部微生物為非復制型的。
[0081]因此，在本發(fā)明的組合物中至少90%，優(yōu)選地至少95%，更優(yōu)選地至少98%，最優(yōu)選地至少99%，理想地至少99.9%，最理想地全部益生菌可為非復制型的。
[0082]所有益生微生物可用于本發(fā)明的目的。
[0083]例如，益生微生物可選自雙歧桿菌屬(bifidobacteria)、乳桿菌屬(Iactobacilli)、丙酸桿菌屬(propionibacteria)，或其組合，例如長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)、動物雙歧桿菌(Bifidobacterium animalis)、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)、青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、干釀乳桿菌(Lactobacillus casei)、類干釀乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、路氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、約漢遜氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、雙乙酸乳酸乳球菌(Lactococcus diacetylactis)、乳脂乳球菌(Lactococcus cremoris)、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)、瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)、德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、大腸桿菌(Escherichia coli)和 / 或它們的混合物。
[0084]根據(jù)本發(fā)明的組合物可包含例如選自長雙歧桿菌NCC3001、長雙歧桿菌NCC2705、短雙歧桿菌NCC2950、乳雙歧桿菌NCC2818、約漢遜氏乳桿菌LaU類干酪乳桿菌NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC4007、路氏乳桿菌DSMl7983、路氏乳桿菌ATCC55730、嗜熱鏈球菌NCC2019、嗜熱鏈球菌NCC2059、干酪乳桿菌NCC4006、嗜酸乳桿菌NCC3009、干酪乳桿菌ACA-DC6002 (NCC1825)、大腸桿菌Nissle、保加利亞乳桿菌NCC15、乳酸乳球菌NCC2287，或它們的組合的益生微生物。
[0085]所有這些菌株根據(jù)布達佩斯條約保藏和/或是可商購的。
[0086]根據(jù)布達佩斯條約保藏的菌株如下:
[0087]長雙歧桿菌NCC3001: ATCC BAA-999，分離于 1969 年 6 月
[0088]長雙歧桿菌NCC2705: CNCM 1-2618，保藏于 2001.01.29
[0089]短雙歧桿菌NCC2950 CNCM 1-3865，保藏于 2007.11.15
[0090]乳雙歧桿菌NCC2818: CNCM 1-3446，保藏于 2005.06.07
[0091]類干酪乳桿菌NCC2461: CNCM 1-2116，保藏于 1999.01.12
[0092]鼠李糖乳桿菌NCC4007: CGMCC1.3724，保藏于2004年10月
[0093]嗜熱鏈球菌NCC2019: CNCM 1-1422，保藏于 1994.05.18
[0094]嗜熱鏈球菌NCC2059: CNCM 1-4153，保藏于 2009.04.24
[0095]乳酸乳球菌NCC2287: CNCM 1-4154，保藏于 2009.04.24
[0096]干酪乳桿菌NCC4006: CNCM 1-1518，保藏于 1994.12.30
[0097]干酪乳桿菌NCC1825: ACA-DC6002，保藏日不詳
[0098]嗜酸乳桿菌NCC3009: ATCC700396，保藏日不詳
[0099]保加利亞乳桿菌NCC15: CNCM 1-1198，保藏于 1992.04.02
[0100]約漢遜氏乳桿菌Lal CNCM 1-1225，保藏于1992.06.30
[0101]路氏乳桿菌DSM17938 DSM17938，保藏于 2006.02.06
[0102]路氏乳桿菌ATCC55730 ATCC55730，保藏于 1995.12.07
[0103]大腸桿菌Nisslel917: DSM6601，保藏日 1991.07.11
[0104]以 ATCC 命名的菌株保藏于 ATCC Patent Depository, 10801UniversityBlvd., Manassas, VA20110, USA。
[0105]以CNCM命名的菌株保藏于國立微生物保藏中心(CNCM)，25，杜博士路，F(xiàn)-75724巴黎15區(qū)，法國。
[0106]以CGMCC命名的菌株保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，微生物研究所，中國科學院，中關(guān)村，P.0.Box2714,北京100080，中國。
[0107]以ACA-DC 命名的菌株保藏于 Greek Coordinated Collectionsof Microorganisms,Dairy Laboratory, Department of Food Scienceand Technology,Agricultural University of Athens,75,Ieraodos, Botanikos, Athens, 11855,希臘。
[0108]以 DSM 命名的菌株保藏于 DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH, Inhoffenstr.7B', 38124Braunschweig,德國。
[0109]本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解他們能夠自由地組合文中描述的本發(fā)明的全部特征而不偏尚本發(fā)明公開的范圍。
[0110]本發(fā)明另外的優(yōu)勢和特點從下述實施例和圖中顯而易見。
[0111]圖1A和B顯示了用“短時高溫”處理的益生菌的抗炎免疫譜(profiles)的增強。
[0112]圖2顯示了非抗炎益生菌菌株變?yōu)榭寡椎?，即非抗炎益生菌菌株在用“短時高溫”處理后表現(xiàn)出顯著的體外抗炎免疫譜。
[0113]圖3A和B顯示了在可商購的產(chǎn)品中使用的益生菌菌株，其在用“短時高溫”處理之后表現(xiàn)出增強的或新的體外抗炎免疫譜。
[0114]圖4A和B顯示了乳品起子菌株(即Lcl起子菌株)，經(jīng)高溫熱處理所述起子菌株表現(xiàn)出增強的或新的體外抗炎免疫譜。
[0115]圖5顯示了非抗炎益生菌菌株，在被HTST處理之后其表現(xiàn)出體外抗炎免疫譜。
[0116]圖6:用以它們活的和熱處理(140°C、15秒)形式的益生和乳品起子菌株生成的PBMC數(shù)據(jù)的主成分分析(IL-12p40、IFN- y、TNF- a、IL-10)。每一個點代表用NCC數(shù)字或名稱標識的活的或熱處理的一種菌株。
[0117]圖1顯示了活的和熱處理的(85°C，20分鐘)菌株的IL-12p40/IL-10比率?？傮w地，在85°C達20分鐘的熱處理導致IL-12p40/IL-10比率上升，與本發(fā)明的“短時高溫”處理相反(圖1、2、3、4、和5)。
[0118]圖8顯示了來自用熱處理的細菌刺激的人PBMCs的體外細胞因子分泌的增強。
[0119]圖9顯示了在受鹽水攻擊的OVA致敏的小鼠中(陰性對照)、在受OVA攻擊的OVA致敏的小鼠中(陽性對照)和在受OVA攻擊以及用熱處理的或活的短雙歧桿菌NCC2950處理的OVA致敏的小鼠中觀測到的腹瀉強度百分數(shù)。以腹瀉強度百分數(shù)展示結(jié)果(從4個獨立實驗中計算平均值土SEM)，100%腹瀉強度對應于在陽性對照(由變態(tài)反應原致敏和攻擊)組中出現(xiàn)的癥狀。
[0120]實施例1:
[0121]方法學:
[0122]細菌制備物
[0123]通常認為活的益生菌對宿主免疫系統(tǒng)遞送的健康益處是菌株特異性的。已經(jīng)顯示誘導高水平的IL-10和/或體外誘導低水平的促炎細胞因子(PBMC測定法)的益生菌是有效的體內(nèi)抗炎菌株(Foligne, B.等人，2007，World J.Gastroenterol.13:236-243)。
[0124]使用若干益生菌菌株以研究熱處理的益生菌的抗炎性質(zhì)。這些菌株為長雙歧桿菌NCC3001、長雙歧桿菌NCC2705、短雙歧桿菌NCC2950、乳雙歧桿菌NCC2818、類干酪乳桿菌NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC4007、干酪乳桿菌NCC4006、嗜酸乳桿菌NCC3009、干酪乳桿菌ACA-DC6002 (NCC1825)和大腸桿菌Nissle。也測試了包括商業(yè)用于生產(chǎn)Nestl6 Lcl發(fā)酵產(chǎn)物的一些菌株在內(nèi)的若干起子培養(yǎng)物菌株:嗜熱鏈球菌NCC2019、嗜熱鏈球菌NCC2059、保加利亞乳桿菌NCC15和乳酸乳球菌NCC2287。
[0125]在對每一菌株優(yōu)化的條件下在5 - 15L的生物反應器中培養(yǎng)細菌細胞。全部的典型細菌生長培養(yǎng)基為可用的。此類培養(yǎng)基為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。當調(diào)整pH至5.5時，連續(xù)地加入30%堿溶液(NaOH或Ca(OH)2)。當足夠時，通過用CO2充氣頂部空間維持厭氧的條件。在標準需氧條件下培養(yǎng)大腸桿菌。
[0126]通過離心(5000xg，4°C)收集細菌細胞并且重懸于足夠體積的磷酸鹽緩沖液(PBS)中以達到約109-101QCfu/ml的最終濃度。一部分制備物與15%甘油冷凍在-80°C。通過以下方法熱處理另一部分細胞:
[0127]-超高溫:140°C達15秒；通過間接蒸汽注射。
[0128]-高溫短時(HTST):通過間接蒸汽注射74°C、90°C和120°C處理15秒。[0129]-在水浴中長時間低溫度(85°C，20分鐘)
[0130]熱處理后，在_80°C凍存樣品直到使用。
[0131]細菌制備物的體外免疫譜分析:
[0132]評價活的和熱處理的細菌制備物的免疫譜(即從體外人血細胞誘導特定細胞因子分泌的能力)。從血液過濾器分離人外周血單核細胞(PBMCs)。在通過細胞密度梯度分離之后，收集單核細胞并用Hank平衡鹽溶液洗滌兩次。隨后在用10%胎牛血清(Bioconcept, Paris,法國)、1%L_ 谷氨酰胺(Sigma)、1% 青霉素 / 鏈霉素(Sigma)和 0.1%慶大霉素補充的Iscove改良的Dulbecco培養(yǎng)基(MDM，Sigma)中重懸細胞。隨后在48孔板中用活的和熱處理的細菌(相當于7xl06cfu/孔)溫育PBMC(7xl05個細胞/孔)達36小時。在來自8個個體供體的PBMC上測試活的和熱處理的細菌的作用，所述個體供體被分至兩個分離的實驗。在溫育36小時之后，冷凍并在_20°C保存培養(yǎng)板直到細胞因子測量。對活細菌和它們熱處理的對應物平行地實施(即，在同一實驗中對同一批PBMC實施)細胞因子譜分析。
[0133]在36小時溫育后依照制造者的說明書通過ELISA(R&D DuoSet Human IL-10, BDOptEIA人IL12p40、BD OptEIA人TNF a、BD OptEIA人IFN- y )確定在細胞培養(yǎng)物上清液中的細胞因子(IFN-Y、IL-12p40、TNF-a 和 IL-10)的水平。IFN-Y、IL_12p40、和 TNF-a是促炎細胞因子，而IL-1O是強效的抗炎介質(zhì)。用4個個體供體的平均值(pg/ml)+/-SEM表示結(jié)果，并且結(jié)果代表了兩個單獨實驗，每一個所述單獨實驗用4個供體實施。對每一菌株計算IL-12p40/IL-10的比率作為體內(nèi)抗炎作用的預測值(Folign6，B.，等人，2007，WorldJ.Gastroenterol.13:236-243)。
[0134]把對每一菌株通過ELISA(見上)確定的細胞因子數(shù)值(pg/ml)轉(zhuǎn)移入BioNumerics v5.10 軟件(Applied Maths, Sint-Martens-Latem,比利時)。在此數(shù)據(jù)集上實施主成分分析(PCA，量度技術(shù))。此分析包括就特征減去平均值和就特征除以方差。
[0135]結(jié)果
[0136]通過超高溫(UHT)/高溫短時(HTST)樣處理生成的抗炎譜
[0137]將研究中的益生菌菌株進行一系列熱處理(超高溫(UHT)、高溫短時(HTST)和85°C達20分鐘)并且把它們的免疫譜和體外活細胞的那些免疫譜相比較。當與人PBMC —起溫育時活微生物(益生菌和/或乳品起子培養(yǎng)物)誘導了不同水平的細胞因子產(chǎn)生(圖1、2、3、4和5)。這些微生物的熱處理以溫度依賴性的方式改變了由PBMC生產(chǎn)的細胞因子的水平。“短時高溫”處理(120°C或140°C，15秒)產(chǎn)生了具有抗炎免疫譜的非復制型細菌(圖1、2、3和4)。實際上，UHT-樣處理的菌株(140°C，15秒)誘導了更少的促炎細胞因子(TNF- a，IFN- y，IL_12p40)，同時維持或誘導額外的IL-1O產(chǎn)生(與活的對應物相比)。對于任何UHT-樣處理的菌株，獲得的IL-12p40/IL-10比率與活細胞相比更低(圖1、2、3和4)。對于由HTST-樣處理處理的細菌，即受到120°C持續(xù)15秒(圖1、2、3和4)、或74°C和90°C持續(xù)15秒(圖5)處理的細菌，這一觀察結(jié)果也是有效的。熱處理(UHT-樣或HTST-樣處理)對益生菌菌株(圖1、2、3和5)和乳品起子培養(yǎng)物(圖4)的體外免疫譜具有相似的效果。對用活的和熱處理的(140°C，15秒)益生菌和乳品起子菌株生成的PBMC數(shù)據(jù)的主成分分析揭示了活的菌株全部沿X軸分散，表明菌株表現(xiàn)出非常不同的體外免疫譜，從低(左偵U)促炎細胞因子的誘導物到高(右側(cè))促炎細胞因子的誘導物。熱處理的菌株聚集在圖表左側(cè)，顯示了熱處理菌株更少誘導促炎細胞因子(圖6)。與之相反，在85°C達20分鐘的熱處理的細菌比活細胞誘導更多的促炎細胞因子和更少的IL-10，導致更高的IL-12p40/IL-10比率(圖7)。
[0138]UHT-樣和HTST-樣處理增強或生成抗炎譜。
[0139]不管它們各自初始的免疫譜(活細胞)，UHT和HTST處理的菌株表現(xiàn)出抗炎譜。已表明，在“短時高溫”處理以后，已知為體內(nèi)抗炎且體外表現(xiàn)抗炎譜的益生菌菌株(長雙歧桿菌NCC3001、長雙歧桿菌NCC2705、短雙歧桿菌NCC2950、乳雙歧桿菌NCC2818)表現(xiàn)出增強的體外抗炎譜。如圖1中所示，UHT-樣處理的雙歧桿菌屬菌株的IL-12p40/IL-10比率低于來自活的對應物的那些比率，因此顯示了 UHT-樣處理的樣品的提高的抗炎譜。更突出地，對于非抗炎的活菌株也確認了由HUT-樣和HTST-樣處理產(chǎn)生抗炎譜?；钍罄钐侨闂U菌NCC4007和類干酪乳桿菌NCC2461都表現(xiàn)出體外高IL-12p40/IL_10比率(圖2和5)。顯示了這兩種活菌株對小鼠中TNBS-誘導的結(jié)腸炎是非保護性的。在“短時高溫”處理(UHT或HTST)以后，由鼠李糖乳桿菌NCC4007和類干酪乳桿菌NCC2461誘導的IL-12p40/IL_10比率劇烈下降，達到與用雙歧桿菌屬菌株獲得的水平一樣低的水平。這些低IL-12p40/IL-10比率由于與沒有變化(鼠李糖乳桿菌NCC4007)或劇烈誘導(類干酪乳桿菌NCC2461)的IL-10分泌相結(jié)合的低水平IL-12p40產(chǎn)生所致(圖2)。
[0140]因此:
[0141]-通過UHT-樣和HTST-樣熱處理能夠增強活微生物的抗炎譜(例如長雙歧桿菌NCC2705、長雙歧桿菌NCC3001、短雙歧桿菌NCC2950、乳雙歧桿菌NCC2818)。
[0142]-通過UHT-樣和HTST-樣熱處理能夠從非抗炎活微生物產(chǎn)生抗炎譜(例如鼠李糖乳桿菌NCC4007、類干酪乳桿菌NCC2461、乳品起子嗜熱鏈球菌NCC2019)。
[0143]-對于從可商購的產(chǎn)品(包含益生大腸桿菌菌株)分離的菌株也顯示了抗炎譜(圖 3A&B)。
[0144]對于所有測試的益生菌和乳品起子例如乳桿菌、雙歧桿菌和鏈球菌，UHT/HTST-樣處理的影響是相似的。
[0145]將UHT/HTST-樣處理施用于表現(xiàn)出不同體外免疫譜的若干乳桿菌、雙歧桿菌和鏈球菌。與它們活的對應物相比，在UHT/HTST-樣處理以后所有菌株誘導更少的促炎細胞因子(圖1、2、3、4、5和6)，這證實了 UHT/HTST-樣處理對獲得的非復制型細菌的免疫性質(zhì)的作用能夠概括至全部益生菌，特別是概括至乳桿菌屬和雙歧桿菌屬和特定的大腸桿菌株以及概括至全部乳品起子培養(yǎng)物，特別是概括至鏈球菌屬、乳球菌屬和乳桿菌屬。
[0146]實施例2:
[0147]方法學:
[0148]細菌制備物:
[0149]使用5株益生菌菌株以研究非復制型益生菌的免疫增強性質(zhì):3株雙歧桿菌(長雙歧桿菌NCC3001、乳雙歧桿菌NCC2818、短雙歧桿菌NCC2950)和2株乳桿菌(類干酪乳桿菌NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC4007)。
[0150]在37°C、無pH控制下以分批發(fā)酵使細菌細胞在MRS上生長達16-18小時。把細菌細胞離心下來(5，000xg，4°C)并重懸于磷酸鹽緩沖液中，然后在鹽水中稀釋，以達到約10E10cfu/ml的最終濃度。在水浴中在85°C將長雙歧桿菌NCC3001、乳雙歧桿菌NCC2818、類干酪乳桿菌NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC4007熱處理20分鐘。在水浴中在90°C將短雙歧桿菌NCC2950熱處理30分鐘。將熱處理的細菌懸液等分(aliquoted)并凍存于_80°C直到使用?；罴毦A存在_80°C、15%PBS-甘油中直到使用。
[0151]細菌制備物的體外免疫譜分析
[0152]評價活的和熱處理的細菌制備物的免疫譜(即體外誘導人血細胞特定細胞因子分泌的能力)。從血液過濾器分離人外周血單核細胞(PBMCs)。在通過細胞密度梯度分離之后，收集單核細胞并用Hank平衡鹽溶液洗滌兩次。隨后在用10%胎牛血清(Bioconcept, Paris,法國)、1%L_ 谷氨酰胺(Sigma)、1% 青霉素 / 鏈霉素(Sigma)和 0.1%慶大霉素補充的Iscove改良的Dulbecco培養(yǎng)基(MDM，Sigma)中重懸細胞。隨后在48孔板中用活的和熱處理的細菌(相當于7xl06cfu/孔)溫育PBMC(7xl05個細胞/孔)達36小時。在來自8個個體供體的PBMC上測試活的和熱處理的細菌的作用，所述個體供體被分至兩個分離的實驗。在溫育36小時之后，冷凍并在_20°C保存培養(yǎng)板直到細胞因子測量。對活細菌和它們熱處理的對應物平行地實施(即，在同一實驗中對同一批PBMC實施)細胞因子譜分析。
[0153]在36小時溫育后依照制造者的說明書通過ELISA (R&D DuoSet Human IL-10, BDOptEIA人IL12p40、BD OptEIA人TNF、BD OptEIA人IFN- y )確定在細胞培養(yǎng)物上清液中的細胞因子(IFN-Y、IL-12p40、TNF-a 和 IL-10)的水平。IFN-Y、IL_12p40、TNF-a 是促炎細胞因子，而IL-1O是強效的抗炎介質(zhì)。用4個個體供體的平均值(pg/ml)+/-SEM表示結(jié)果，并且結(jié)果代表了兩個單獨實驗，每一個所述單獨實驗用4個供體實施。
[0154]活的和熱處理的短雙歧桿菌NCC2950在預防變態(tài)反應性腹瀉中的體內(nèi)作用 [0155]使用變態(tài)反應性腹瀉的小鼠模型以測試短雙歧桿菌NCC2950的Thl促進作用(Brandt E.B 等人? JCI2003; 112 (11): 1666-1667)。在致敏(間隔 14 天，在第 0 和第 14 天2次腹膜內(nèi)注射卵清蛋白(OVA)和硫酸鋁鉀)之后，用OVA 口服攻擊雄性Balb/c小鼠6次(第27、29、32、34、36、39天)，導致瞬時的臨床癥狀(腹瀉)和免疫參數(shù)(總IgE、0VA特異性的IgE、小鼠肥大細胞蛋白質(zhì)酶I即MMCP-1的血漿濃度)的改變。在OVA致敏之前四天(第-3、-2、_1、0天和第11、12、13和14天)和在攻擊期間(第23至39天)通過管飼法施用活的或在90°C熱處理30分鐘的短雙歧桿菌NCC2950。使用約109菌落形成單位(cfu)或相當?shù)腸fu/小鼠的日細菌劑量。
[0156]
[0157]熱處理后“促炎”細胞因子分泌的誘導
[0158]體外評估熱處理的細菌菌株刺激人外周血單核細胞(PBMC)分泌細胞因子的能力。在相同的體外測定法中將經(jīng)熱處理的細菌刺激PBMC的基于4種細胞因子的免疫譜與活細菌細胞誘導的基于4種細胞因子的免疫譜相比較。
[0159]將熱處理的制備物平板接種并評估活菌數(shù)的缺乏。熱處理的細菌制備物在平板接種后不產(chǎn)生菌落。
[0160]當與人PBMC —起溫育時活的益生菌誘導不同的和菌株依賴性水平的細胞因子產(chǎn)生(圖8)。與它們的活的對應物相比，益生菌的熱處理改變了 PBMC產(chǎn)生的細胞因子的水平。熱處理的細菌比它們的活的對應物誘導更多的促炎細胞因子(TNF-a、IFN-Y和IL-12p40)。相反,與活細胞對比,熱處理的細菌誘導相似或更低量的IL-10 (圖8)。這些數(shù)據(jù)顯示了熱處理的細菌比它們的活的對應物更能夠刺激免疫系統(tǒng)且因此更能夠增強弱化的免疫防御。換言之，體外數(shù)據(jù)說明了在熱處理之后細菌菌株的提高的免疫增強效果。
[0161]為了說明熱處理的短雙歧桿菌NCC2950對免疫系統(tǒng)的增強的作用(與活細胞相比)，在變態(tài)反應性腹瀉的動物模型中測試活的和熱處理的短雙歧桿菌NCC2950 (菌株A)。
[0162]與陽性對照組相比，在用熱處理的短雙歧桿菌NCC2950處理后，腹瀉的強度顯著地和持續(xù)地下降(41.1%±4.8)，而在用活的短雙歧桿菌NCC2950處理后腹瀉的強度僅降低了 20±28.3%。這些結(jié)果顯示了熱處理的短雙歧桿菌NCC2950表現(xiàn)出比它的活的對應物增強的對變態(tài)反應性腹瀉的保護作用(圖9)
[0163]因此，顯示了在熱處理后益生菌增強免疫防御的能力被提高了。
[0164]其他實施例
[0165]可應用標準技術(shù)制備在冷藏溫度(4_8°C )貯存的以下可飲用酸乳組合物。
【權(quán)利要求】
1.可飲用酸乳組合物，其包含非復制型益生微生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的可飲用酸乳組合物，其包含非相當于每份約IO6至IO12Cfu的量的非復制型益生微生物。
3.根據(jù)前述項權(quán)利要求之一的可飲用酸乳組合物，其包含約80-90%重量的水、約3-15%重量的糖以及約2.5-5%重量的脫脂奶粉。
4.根據(jù)前述項權(quán)利要求之一的可飲用酸乳組合物，其還包含約0.3-0.5%重量的果膠。
5.根據(jù)前述項權(quán)利要求之一的可飲用酸乳組合物，特征在于所述組合物待在冷藏溫度或環(huán)境溫下貯存。
6.根據(jù)前述項權(quán)利要求之一的可飲用酸乳組合物，其還包含益生元，例如低聚果糖和菊粉。
7.根據(jù)前述項權(quán)利要求之一的可飲用酸乳組合物，其中益生微生物是通過熱處理成為非復制型的，所述熱處理優(yōu)選是在至少71.5°C處理至少I秒的高溫處理。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的可飲用酸乳組合物，其中熱處理為在約71.5 - 150°C處理約I 一120秒的高溫處理，并且優(yōu)選為高溫/短時(HTST)處理或超高溫(UHT)處理。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的可飲用酸乳組合物，其用于預防或治療炎性疾病。
10.根據(jù)權(quán)利要求7的可飲用酸乳組合物，其中熱處理在約70- 150°C溫度范圍內(nèi)進行約3分鐘一 2小時,優(yōu)選在80 — 14CTC范圍內(nèi)進行5分鐘一 40分鐘。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的可飲用酸乳組合物，其用于預防或治療與受損的免疫防御相關(guān)的疾病。
12.根據(jù)前述項權(quán)利要求之一的可飲用酸乳組合物，其中至少90%、優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少98%、最優(yōu)選至少99%、理想地至少99.9%、最理想地全部益生菌為非復制型的。
13.根據(jù)前述項權(quán)利要求之一的可飲用酸乳組合物，其中益生微生物選自雙歧桿菌屬(bifidobacteria)、乳桿菌屬(Iactobacilli)、丙酸桿菌屬(propionibacteria)或它們的組合，例如長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、乳雙歧桿菌(Bifidobacteriumlactis)、動物雙歧桿菌(Bifidobacterium animalis)、短雙歧桿菌(Bifidobacteriumbreve)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)、青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)、類干釀乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、唾液乳桿菌(Lactobacillussalivarius)、路氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)、約漢遜氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)、植物乳桿菌(Lactobacillusp I ant arum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、雙乙酸乳酸乳球菌(Lactococcus diacetylactis)、乳脂乳球菌(Lactococcuscremoris)、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、大腸桿菌(Escherichia coli)和/或它們的混合物。
14.根據(jù)前述項權(quán)利要求之一的可飲用酸乳組合物，其中益生微生物選自長雙歧桿菌NCC3001、長雙歧桿菌NCC2705、短雙歧桿菌NCC2950、乳雙歧桿菌NCC2818、約漢遜氏乳桿菌LaU類干酪乳桿菌NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC4007、路氏乳桿菌DSM17983、路氏乳桿菌ATCC55730、嗜熱鏈球菌NCC2019、嗜熱鏈球菌NCC2059、干酪乳桿菌NCC4006、嗜酸乳桿菌NCC3009、干酪乳桿菌ACA-DC6002(NCC1825)、大腸桿菌Nissle、保加利亞乳桿菌NCC15、乳酸乳球菌NCC2287，或它們的組合。
15.根據(jù)前述項權(quán)利要求之一的可飲用酸乳組合物，其每日劑量含有約0.005mg —1000mg非復制型微生物 。
【文檔編號】A23C9/123GK103648305SQ201180064202
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2011年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2010年11月5日
【發(fā)明者】A·梅賽尼爾, G·普里烏特, S·努特恩 申請人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司