專利名稱：轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，及其在定性檢測(cè)轉(zhuǎn)Bt基因農(nóng)作物及定量檢測(cè)轉(zhuǎn)Bt基因棉花轉(zhuǎn)基因含量上的應(yīng)用，以及利用該標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因農(nóng)作物的轉(zhuǎn)基因含量進(jìn)行檢測(cè)的熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
Bt基因是蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)晶體蛋白基因的簡稱。 1981年，Schnepf等人首次成功地克隆了第一個(gè)編碼Bt殺蟲晶體蛋白基因，揭開了利用基因工程培育抗蟲植物的序幕。Bt基因中分為Cry和Cyt 二大類。迄今為止，已經(jīng)報(bào)道的 Bt 達(dá)至Ij 476 種，其中 Cry 分為 58 群、449 種，Cyt 分為 2 群、27 種(http://www. lifesci. sussex. ac. uk/home/Neil_Crickmore/Bt/toxins2. html)。經(jīng)過密碼子優(yōu)化的 Bt 基因已被成功地導(dǎo)入煙草、玉米、棉花等多種植物，獲得一大批具良好抗蟲性的轉(zhuǎn)基因植物品種和種質(zhì)資源，Bt基因已成為植物基因工程及轉(zhuǎn)基因育種中應(yīng)用最廣泛、最具潛力和應(yīng)用前景的抗蟲基因。目前全世界總共已獲得了50多種轉(zhuǎn)Bt殺蟲晶體蛋白基因植物，其中水稻、玉米、 棉花、馬鈴薯、油菜、楊樹、煙草等已商品化，我國農(nóng)業(yè)部于2009年批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻的生物安全證書。自1996年首例轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用以來，全球轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究與應(yīng)用產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展。截至2010年底，已有25個(gè)國家批準(zhǔn)了 24種轉(zhuǎn)基因作物的商業(yè)化應(yīng)用。以轉(zhuǎn)基因大豆、棉花、玉米、油菜為代表的轉(zhuǎn)基因作物種植面積由1996年的170萬公頃發(fā)展到 2010年的14800萬公頃，14年間增長了 87倍。ACP基因是棉花內(nèi)源基因，用于定量檢測(cè)的棉花ACP基因片段長度為116bp的DNA 片段；其核苷酸序列不僅具備種內(nèi)一致性，即所有棉花品種中含有ACP基因；還具備種間特異性，即在除棉花外其它物種里沒有該基因DNA片段。近年來，關(guān)于轉(zhuǎn)基因植物的安全性事件報(bào)道不斷，如1996年巴西豆過敏事件、 1998年P(guān)usztai事件、1999年美國大斑蝶事件和墨西哥玉米污染事件、2000年星聯(lián)Bt玉米事件、2007年印度轉(zhuǎn)基因抗蟲棉事件、加拿大超級(jí)雜草事件和中國抗蟲棉事件等，這些事件促使國際組織和國家紛紛制定相應(yīng)的安全管理法規(guī)，加強(qiáng)遺傳改良作物的規(guī)范管理，并對(duì)遺傳改良植物及其產(chǎn)品實(shí)施標(biāo)識(shí)制度。為了應(yīng)對(duì)遺傳改良作物管理相關(guān)的法律法規(guī)和制度，有必要建立一套高效、快速、 特異的檢測(cè)技術(shù)。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)無疑是最佳選擇。在實(shí)際檢測(cè)中，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)十分關(guān)鍵。質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子的概念由日本科學(xué)家Kuribara等于2002年提出，它是指一種含有檢測(cè)目的基因特異性片段的線性化重組質(zhì)粒分子。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，不管是由單一特異性外源序列還是多段目標(biāo)序列構(gòu)建的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子，都能很好的達(dá)到轉(zhuǎn)基因作物定量分析檢測(cè)，特別是定量PCR檢測(cè)的目的。質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子由于生產(chǎn)方便、易擴(kuò)增、操作簡便、穩(wěn)定性好、純度較高、高效經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)愈來愈受全世界轉(zhuǎn)基因檢測(cè)專家和研究者們重視，在轉(zhuǎn)基因生物鑒定檢測(cè)中是很好的標(biāo)準(zhǔn)陽性物質(zhì)替代物，應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因品系以及其加工品的定量PCR檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子在轉(zhuǎn)基因作物和附屬產(chǎn)品檢測(cè)鑒定中的應(yīng)用將會(huì)發(fā)揮越來越重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，解決轉(zhuǎn)基因Bt農(nóng)作物尤其是轉(zhuǎn)Bt基因棉花檢測(cè)中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)缺乏的難題，提供一種準(zhǔn)確、快速、簡便的轉(zhuǎn)基因Bt農(nóng)作物尤其是轉(zhuǎn)基因棉花檢測(cè)方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，由SEQ ID No. I (174bp)所示核苷酸片段與SEQ ID No. 2 (116bp)所示核苷酸片段經(jīng)過拼接后，加入常見的酶切位點(diǎn)，插入常規(guī)克隆載體(如 PEASY-T3、PMD18-T、PMD19-T 等)制得。具體的，所述的轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，由SEQ ID No. 3插入pEASY_T3載體制的， 以下簡稱308號(hào)質(zhì)粒。所述SEQ ID No. 3由SEQ ID No. I (174bp)所示核苷酸片段與SEQ ID No. 2 (116bp)所示核苷酸片段經(jīng)過拼接，加入酶切位點(diǎn)Pst I、Nde I及Sal I (該酶切位點(diǎn)位于兩片段間)得到。所述308號(hào)質(zhì)粒由如下方法構(gòu)建
I.設(shè)計(jì)PCR特異性引物；
2.PCR擴(kuò)增；
3.Bt目標(biāo)序列獲取，片段長度174bp，通過測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證;:并設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物及探針；
4.ACP目標(biāo)序列獲取，片段長度116bp，通過測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證;并設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物及探針；
5.構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒；
6.通過PCR、酶切、測(cè)序等驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒；
7.對(duì)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒進(jìn)行特異性、穩(wěn)定性及均勻性檢測(cè)；
8.對(duì)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒特異性、穩(wěn)定性及均勻性結(jié)果進(jìn)行分析。
本發(fā)明轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子既含有Bt外源基因又包括ACP棉花內(nèi)源基
因，Bt外源基因既可用于定性待測(cè)農(nóng)產(chǎn)制品是否含有轉(zhuǎn)Bt基因，棉花ACP內(nèi)源基因可定性檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)制品中是否含有棉花；同時(shí)，Bt外源基因和棉花ACP內(nèi)源基因可以定量檢測(cè)棉花類農(nóng)產(chǎn)制品中的轉(zhuǎn)Bt基因棉花的含量。本發(fā)明還涉及所述轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒在檢測(cè)棉花類農(nóng)產(chǎn)制品中轉(zhuǎn)Bt基因棉花含量中的應(yīng)用。所述轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒可用于檢測(cè)下列之一的轉(zhuǎn)Bt外源基因農(nóng)作物(I) CryIA(a), (2)CryIA(b), (3)CryIA(c), (4)Crylab/ac。所述轉(zhuǎn)Bt基因農(nóng)作物可為下列之一水稻、玉米、大豆、棉花、油菜，優(yōu)選為棉花。所述轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒含有棉花ACP內(nèi)源基因，可在轉(zhuǎn)Bt基因棉花轉(zhuǎn)基因含量檢測(cè)中的定性定量應(yīng)用。本發(fā)明還涉及一種轉(zhuǎn)Bt基因棉花的熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒，主要包括特異性引物和探針、PCR緩沖液、脫氧三磷酸核苷混合物和DNA聚合酶和轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，所述特異性引物和探針序列如下用于檢測(cè)Bt外源基因的引物和探針Bt-F-Primer :5’ -GTAAGGTCGTTGTAACGGCTATTG-3’Bt-R-Primer :5’ -CGCCTTGACCACAGCTATCC-3’Bt-Probe :5， -FAM-CCACCTTTGCCCAAACACGCTAACG-Eclipse_3’用于檢測(cè)棉花ACP內(nèi)源基因的引物和探針ACP-F-Primer :5，-CAAACAAGAGACCGTGGATAAGGTA-3’ACP-R-Pnmer :5，-CAAGAGAATCAGCTCCAAGATCAAG-3 ACP-Probe :5， -FAM-TTAGCTTTAGACAATGACAAACCAATCACCGG-TAMRA-3’，其中FAM為熒光報(bào)告基團(tuán)，TAMRA為熒光淬滅基團(tuán)。所述的轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒由SEQ ID No. 3所述核苷酸片段插入pEASY_T3載體制的。使用以上試劑盒對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因農(nóng)作物的熒光定量PCR檢測(cè)可按本領(lǐng)域常規(guī)方法進(jìn)行，提取待測(cè)樣品基因組DNA后，配制PCR緩沖液進(jìn)行PCR擴(kuò)增，取PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)電泳結(jié)果是否出現(xiàn)Bt基因的特異性條帶(174bp)，判斷待測(cè)農(nóng)作物是否含有相應(yīng)外源基因，若電泳結(jié)果同時(shí)出現(xiàn)ACP基因特異性條帶(I 16bp)，則待測(cè)農(nóng)作物為轉(zhuǎn)Bt 基因棉花；同時(shí)以標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒梯度濃度溶液于相同條件下進(jìn)行擴(kuò)增，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可獲得待測(cè)樣品中外源基因和內(nèi)源基因的拷貝數(shù)，即可獲知待測(cè)樣品的外源基因含量。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在本發(fā)明提供了一種轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，生產(chǎn)方便、易擴(kuò)增、操作簡便、穩(wěn)定性好、高效經(jīng)濟(jì)，解決了轉(zhuǎn)Bt基因農(nóng)作物檢測(cè)中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)缺乏的難題，并且提供了一種準(zhǔn)確、快速、簡便的轉(zhuǎn)Bt基因農(nóng)作物檢測(cè)試劑盒，能夠很好的進(jìn)行轉(zhuǎn)Bt基因農(nóng)作物的定量分析檢測(cè)。
(四)
因； 4 :308


圖I為pEASY-T3重組載體結(jié)構(gòu)
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質(zhì)粒
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2為Bt和ACP基因驗(yàn)證電泳圖；Marker DL2000 ;1、2為Bt基因；3、4為ACP基 3 為 EcoRI 單酶切；M DL2000 ；1 Sal I 酶切；2 EcoR I 酶切；3 Pst I 酶切；
4為308號(hào)質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果與合成序列比對(duì)5為308號(hào)質(zhì)粒的Bt基因熒光定量PCR結(jié)果(標(biāo)準(zhǔn)曲線)；
6為308號(hào)質(zhì)粒的ACP基因熒光定量PCR結(jié)果(標(biāo)準(zhǔn)曲線)；
7為308號(hào)質(zhì)粒4°C下Bt片段第I天熒光定量PCR結(jié)果；
8為308號(hào)質(zhì)粒4°C下Bt片段第14天熒光定量PCR結(jié)果；
9為308號(hào)質(zhì)粒4°C下Bt片段第28天熒光定量PCR結(jié)果；
10為308號(hào)質(zhì)粒4°C ACP片段第I天熒光定量PCR結(jié)果；
11為308號(hào)質(zhì)粒4°C ACP片段第14天熒光定量PCR結(jié)果；
12為308號(hào)質(zhì)粒4°C ACP片段第28天熒光定量PCR結(jié)果；
圖13為308號(hào)質(zhì)粒Bt基因均勻性qPCR分析；圖14為308號(hào)質(zhì)粒ACP基因均勻性qPCR分析；圖15為308號(hào)質(zhì)粒熒光定量檢測(cè)極限分析。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此實(shí)施例I :308號(hào)質(zhì)粒的構(gòu)建本發(fā)明所述一種轉(zhuǎn)基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒包含外源Bt基因和ACP棉花內(nèi)源基因，其構(gòu)建方法包括如下步驟I.設(shè)計(jì)PCR特異性引物Bt-F :5，-TTCCTTGGACGAAATCCCACC-3’Bt-R :5，-GCCAGAATTGAACACATGAGCGC-3，2. PCR 擴(kuò)增利用設(shè)計(jì)的PCR引物特異性擴(kuò)增轉(zhuǎn)Bt基因農(nóng)作物的特異性序列。3. Bt目標(biāo)序列獲取，并通過測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證步驟2獲得的擴(kuò)增后特異性序列即為Bt目標(biāo)序列，其片段為174bp，用美國ABI公司3730型測(cè)序儀對(duì)其進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證；并設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物及探針，熒光定量PCR引物及探針如下所示Bt-F-Primer :5’ -GTAAGGTCGTTGTAACGGCTATTG-3’Bt-R-Primer :5’ -CGCCTTGACCACAGCTATCC-3’Bt-Probe :5， -FAM-CCACCTTTGCCCAAACACGCTAACG-Eclipse_3’4.采用與步驟4相同方法選擇ACP目標(biāo)序列，選取長度為116bp的序列作為質(zhì)粒的內(nèi)源基因特異性片段，并設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物及探針。熒光定量PCR引物及探針如下所示ACP-F-Primer :5，-CAAACAAGAGACCGTGGATAAGGTA-3’ACP-R-Primer :5，-CAAGAGAATCAGCTCCAAGATCAAG-3 ACP-Probe :5， -FAM-TTAGCTTTAGACAATGACAAACCAATCACCGG-TAMRA-3，，其中FAM為熒光報(bào)告基團(tuán)，TAMRA為熒光淬滅基團(tuán)。5.構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒將步驟4中所選取的174bp的Bt特異片段與步驟5中選取的116bp的ACP內(nèi)源特異性片段經(jīng)過拼接，兩端添加Pst I、Nde I酶切位點(diǎn)，兩片段間添加酶切位點(diǎn)Sal I后， 所得片段插入PEASY-T3克隆載體(購自北京全式金生物技術(shù)有限公司)，完成標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的組合，標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子如附圖I (因其插入片段長度為308bp，本發(fā)明簡稱308號(hào)質(zhì)粒)。其重組流程如下a.基因序列的QC :對(duì)所需合成的基因全序列進(jìn)行分析，檢查基因內(nèi)部是否含有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)和重復(fù)序列。根據(jù)序列情況設(shè)計(jì)合成方案；b.根據(jù)基因序列分析的結(jié)果，進(jìn)行單鏈oligo的設(shè)計(jì)及合成；c.利用PCR將合成的oligo拼接成完整的基因；
d.將合成好的基因裝入PEASY-T3 Cloning載體并轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞DH5 α ；e.測(cè)序驗(yàn)證重組克隆中基因序列是否與要求相符。質(zhì)粒重組片段序列如下308號(hào)質(zhì)粒插入片段長度為308bp，包括Bt(174bp)、ACP(116bp)、連接兩個(gè)片段的酶切位點(diǎn)Sal I和插入片段兩端的酶切位點(diǎn)Pst I、Nde I。。6.通過PCR、酶切、測(cè)序等驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒(I) PCR 驗(yàn)證對(duì)所構(gòu)建的308號(hào)質(zhì)粒用Bt基因及ACP基因的前述引物進(jìn)行擴(kuò)增電泳，在目標(biāo)片段區(qū)域獲得清晰的單一預(yù)期條帶，如圖2，說明這二個(gè)片段已經(jīng)被正確地插入質(zhì)粒中。(2)酶切驗(yàn)證根據(jù)插入片段和pEASY-T3載體TA克隆位點(diǎn)兩端特異性較高的酶切位點(diǎn)選擇Sal I> EcoR I、Pst I分別單酶切308質(zhì)粒，結(jié)果見圖3，分別可以看到預(yù)期大小的酶切片段，由此基本肯定質(zhì)粒片段的正確性。(3)測(cè)序驗(yàn)證根據(jù)插入片段(含兩端酶切位點(diǎn))設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行測(cè)序。并對(duì)測(cè)序結(jié)果與設(shè)計(jì)序列進(jìn)行匹配對(duì)比，結(jié)果完全吻合，驗(yàn)證了質(zhì)粒序列100%的可靠性，比較結(jié)果如圖4。7.對(duì)308號(hào)質(zhì)粒進(jìn)行特異性、穩(wěn)定性及均勻性檢測(cè)(1)308號(hào)質(zhì)粒的濃度測(cè)定和檢測(cè)重復(fù)性質(zhì)粒突光定量PCR引物與步驟4、5中相同,探針采用Primer Express2. O和Beacon designer 設(shè)計(jì)，然后由 TaKaRa 公司負(fù)責(zé)合成。根據(jù) PicoGreen dsDNA Reagent and Kits 所測(cè)定母液濃度計(jì)算質(zhì)?？截悢?shù)，再用滅菌去離子水分別稀釋成初始模板拷貝數(shù)為107，IO6, IO5, IO4, IO3,100，10拷貝的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒進(jìn)行熒光定量PCR繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而建立標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的qPCR定量分析體系并用于實(shí)際標(biāo)準(zhǔn)分子的定量分析，重復(fù)定量分析3次，分析檢測(cè)靈敏性。表I為熒光定量PCR 25 μ L擴(kuò)增體系，表2為qPCR擴(kuò)增程序，熒光定量PCR探針序列如下Bt :5’ -FAM-CCACCTTTGCCCAAACACGCTAACG-Eclipse-3’ACP :5，-FAM-TTAGCTTTAGACAATGACAAACCAATCACCGG-TAMRA-3，表I :熒光定量PCR 25uL擴(kuò)增體系
權(quán)利要求
1.一種轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，由SEQ ID No. I所示核苷酸片段與SEQ ID No. 2所示核苷酸片段經(jīng)過拼接后，插入克隆載體制得。
2.如權(quán)利要求I所述的轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，由SEQID No. 3所示核苷酸片段插入 PEASY-T3載體制得。
3.如權(quán)利要求I所述的轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒在檢測(cè)轉(zhuǎn)Bt基因農(nóng)作物的轉(zhuǎn)基因含量中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒用于檢測(cè)下列之一的 Bt 外源基因(I)CryIA(a), (2)CryIA(b), (3)CryIA(c), (4)Crylab/ac。
5.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的農(nóng)作物為下列之一水稻、玉米、大豆、棉花、油菜。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的農(nóng)作物為棉花。
7.一種轉(zhuǎn)Bt基因棉花的熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒，主要包括特異性引物和探針、PCR 緩沖液、脫氧三磷酸核苷混合物和DNA聚合酶和轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，其特征在于所述特異性引物和探針序列如下Bt-F-Primer :5’ -GTAAGGTCGTTGTAACGGCTATTG-3’Bt-R-Primer :5’ -CGCCTTGACCACAGCTATCC-3’Bt-Probe :5， -FAM-CCACCTTTGCCCAAACACGCTAACG-Eclipse_3’其中FAM為熒光報(bào)告基團(tuán)，Eclipse為熒光淬滅基團(tuán)；ACP-F-Primer :5’ -CAAACAAGAGACCGTGGATAAGGTA-3，ACP-R-Primer :5，-CAAGAGAATCAGCTCCAAGATCAAG-3，ACP-Probe :5’ -FAM-TTAGCTTTAGACAATGACAAACCAATCACCGG-TAMRA-3，其中FAM為熒光報(bào)告基團(tuán)，TAMRA為熒光淬滅基團(tuán)；所述轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒由SEQ ID No. 3所示核苷酸片段插入pEASY-T3載體制得。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒及其應(yīng)用，一種轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，由SEQ ID No.1(174bp)所示核苷酸片段與SEQ ID No.2(116bp)所示核苷酸片段經(jīng)過拼接后，加入常見的酶切位點(diǎn)，插入常規(guī)卡隆載體制得。本發(fā)明提供的轉(zhuǎn)Bt基因棉花標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，生產(chǎn)方便、易擴(kuò)增、操作簡便、穩(wěn)定性好、純度較高、高效經(jīng)濟(jì)，解決了轉(zhuǎn)Bt基因棉花和轉(zhuǎn)Bt基因農(nóng)作物檢測(cè)中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)缺乏的難題，并且提供了一種準(zhǔn)確、快速、簡便、省時(shí)省力的轉(zhuǎn)Bt基因農(nóng)作物檢測(cè)試劑盒，能夠很好的達(dá)到轉(zhuǎn)Bt基因作物定量分析檢測(cè)，特別是定量PCR檢測(cè)的目的。
文檔編號(hào)C12N15/63GK102586302SQ20121000832
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月12日
發(fā)明者付賢樹, 俞曉平, 葉子弘, 崔海峰, 趙煦泓, 金榮愉 申請(qǐng)人:中國計(jì)量學(xué)院