專(zhuān)利名稱(chēng)：一種對(duì)動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)螞蟻、土鱉蟲(chóng)等動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法。
背景技術(shù)：
纖溶系統(tǒng)是指纖溶酶原經(jīng)特異性激活物作用轉(zhuǎn)化為纖溶酶，導(dǎo)致體內(nèi)纖維蛋白不斷溶解的反應(yīng)體系，主要包括纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原激活物及纖溶酶原激活物抑制劑。肝纖維化是肝臟對(duì)各種因素所致的慢性損傷的一種修復(fù)反應(yīng)，其特征是細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在肝內(nèi)過(guò)度沉積，而ECM的降解受多種因素的調(diào)控，近年有研究顯示纖溶酶原激活系統(tǒng)可通過(guò)調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的活性參與ECM的降解過(guò)程。纖溶酶可以直接降解纖維蛋白原和纖維蛋白，還可以降解多種ECM成分，包括纖維連接蛋白、層連蛋白等。此外，纖溶酶又是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)活化所必需的，MMPs是最重要的一類(lèi)降解ECM的蛋白酶類(lèi)。肝纖維化屬中醫(yī)“癥結(jié)痞塊”范疇，中醫(yī)認(rèn)為肝血瘀阻是基本病機(jī)，用藥以活血化瘀為主的治療原則；現(xiàn)代研究顯示纖溶酶原激活系統(tǒng)與肝纖維化有直接關(guān)系，活血化瘀中藥能明顯影響機(jī)體纖溶系統(tǒng)，有抗凝血和促進(jìn)纖維蛋白溶解的功效。因此我們選擇中藥中動(dòng)物藥材提取純化具有纖溶活性的成分，研究其在抗肝纖維化的藥物領(lǐng)域的開(kāi)發(fā)?，F(xiàn)代中藥一直無(wú)法準(zhǔn)確提供動(dòng)物藥(如螞蟻、土鱉蟲(chóng))的成品制劑中的含量測(cè)定方法，因此極大的限制了動(dòng)物藥的使用，本專(zhuān)利首次將體外測(cè)定蛋白活性方法引入藥物含量測(cè)定過(guò)程中，為同類(lèi)型制劑的質(zhì)量研究、生產(chǎn)控制提供了新的手段。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種對(duì)螞蟻、土鱉蟲(chóng)等動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其方法步驟:
1、取牛血纖維蛋白原適量，研細(xì)，精密稱(chēng)定，用硼砂緩沖液制成每Iml含2mg的溶液，即得；2、纖維蛋白標(biāo)準(zhǔn)板的制備:取已消毒的培養(yǎng)皿，分別加入纖維蛋白原溶液10ml，快速加入凝血酶溶液(用上述硼砂緩沖液制成每Iml含牛凝血酶40單位)0.5ml，混勻，室溫靜置10分鐘，即成纖維蛋白標(biāo)準(zhǔn)板；3、對(duì)照品溶液的制備:取尿激酶對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用無(wú)菌水制成每Iml含8U的溶液，作為對(duì)照品溶液；
4、供試品溶液的制備:取本品內(nèi)容物適量，精密稱(chēng)定，用無(wú)菌水制成每Iml含30mg的溶液，振搖20分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液；
5、測(cè)定法:取纖維蛋白板，分別吸取對(duì)照品、供試品溶液點(diǎn)于板上，每點(diǎn)10iU，置37°C電熱恒溫箱中 放置18小時(shí)，取出，分別測(cè)出每個(gè)點(diǎn)溶斑的長(zhǎng)徑和短徑，再根據(jù)融圈面積計(jì)算纖溶活性成分的量。本發(fā)明有益效果:提供了一種新的對(duì)螞蟻、土鱉蟲(chóng)等動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法，工藝簡(jiǎn)易，效果顯著。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:
取牛血纖維蛋白原適量，研細(xì)，精密稱(chēng)定，用硼砂緩沖液(取四硼酸鈉32.42g和氯化鈉5.84g，加蒸餾水500ml，加熱溶解，用7mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.8)制成每Iml含2mg的溶液，即得。取已消毒的培養(yǎng)皿，加入纖維蛋白原溶液10ml，快速加入凝血酶溶液(用上述硼砂緩沖液制成每Iml含牛凝血酶40單位)0.5ml，混勻，室溫靜置10分鐘，即成纖維蛋白標(biāo)準(zhǔn)板。取尿激酶對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用無(wú)菌水制成每Iml含8U的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品內(nèi)容物適量，精密稱(chēng)定，用無(wú)菌水制成每Iml含30mg的溶液，振搖20分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液。取纖維蛋白板I只，分別吸取對(duì)照品、供試品溶液點(diǎn)于板上，每點(diǎn)lOiil，置37°C電熱恒溫箱中放置18小時(shí)，取出，分別測(cè)出每個(gè)點(diǎn)溶斑的長(zhǎng)徑和短徑，再根據(jù)融圈面積計(jì)算纖溶活性成分的量。雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例公開(kāi)如上，但實(shí)施例并不是用來(lái)限定本發(fā)明，任何熟悉此技藝者，在不脫離本發(fā)明之精神和范圍內(nèi)，自當(dāng)可作各種變化或潤(rùn)飾，同樣屬于本發(fā)明之保護(hù)范圍。因此本 發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)當(dāng)以本申請(qǐng)的權(quán)利要求所界定的為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.一種對(duì)動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特征在于: 以尿激酶為對(duì)照，確定螞蟻、土鱉蟲(chóng)等動(dòng)物藥材中纖溶活性成分含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特征在于: 其方法步驟: 取牛血纖維蛋白原適量，研細(xì)，精密稱(chēng)定，用硼砂緩沖液制成每Iml含2mg的溶液，即得; 制備纖維蛋白標(biāo)準(zhǔn)板； 制備對(duì)照品溶液； 制備供試品溶液； 測(cè)定法:取纖維蛋白板，分別吸取對(duì)照品、供試品溶液點(diǎn)于板上，每點(diǎn)IOiU,置37°C電熱恒溫箱中放置18小時(shí)，取出，分別測(cè)出每個(gè)點(diǎn)溶斑的長(zhǎng)徑和短徑，再根據(jù)融圈面積計(jì)算纖溶活性成分的量。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的對(duì)動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特征在于:所述纖維蛋白標(biāo)準(zhǔn)板的制備:取已消毒的培養(yǎng)皿，分別加入纖維蛋白原溶液10ml，快速加入凝血酶溶液(用上述硼砂緩沖液制成每Iml含牛凝血酶40單位)0.5ml，混勻，室溫靜置10分鐘，即成纖維蛋白標(biāo)準(zhǔn)板。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的對(duì)動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特征在于:所述對(duì)照品溶液的制備:取尿激酶對(duì) 照品適量，精密稱(chēng)定，用無(wú)菌水制成每Iml含8U的溶液，作為對(duì)照品溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的對(duì)動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特征在于:所述供試品溶液的制備:取本品內(nèi)容物適量，精密稱(chēng)定，用無(wú)菌水制成每Iml含30mg的溶液，振搖20分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4或者5所述的對(duì)動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特征在于:所述硼砂緩沖液，是取四硼酸鈉和氯化鈉，加蒸餾水，加熱溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至 7.8。
全文摘要
一種對(duì)動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法，1取牛血纖維蛋白原適量，研細(xì)，精密稱(chēng)定，用硼砂緩沖液制成每1ml含2mg的溶液；2取已消毒的培養(yǎng)皿，分別加入纖維蛋白原溶液10ml，快速加入凝血酶溶液0.5ml，混勻，室溫靜置10分鐘；3取尿激酶對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用無(wú)菌水制成每1ml含8U的溶液，作為對(duì)照品溶液；4取本品內(nèi)容物適量，精密稱(chēng)定，用無(wú)菌水制成每1ml含30mg的溶液，振搖20分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液；5取纖維蛋白板，分別吸取對(duì)照品、供試品溶液點(diǎn)于板上，每點(diǎn)10μl，置37℃電熱恒溫箱中放置18小時(shí)，取出，分別測(cè)出每個(gè)點(diǎn)溶斑的長(zhǎng)徑和短徑，再根據(jù)融圈面積計(jì)算纖溶活性成分的量。
文檔編號(hào)C12Q1/56GK103243150SQ20121003246
公開(kāi)日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2012年2月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月14日
發(fā)明者樂(lè)智勇, 夏培元, 劉任, 劉麗玲, 辛小娜, 張兵兵 申請(qǐng)人:江蘇仁壽藥業(yè)有限公司