專利名稱：利用秀麗隱桿線蟲休眠作為生物標(biāo)志物甄別地溝油的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種地溝油甄別方法。
背景技術(shù)：
秀I 隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans,縮寫為C. elegans)為線蟲動(dòng)物門泄管綱動(dòng)物，作為一種典型模式生物在科研領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。秀麗隱桿線蟲通體透明，易于觀察形態(tài)和行為；生命周期短，培養(yǎng)方便且廉價(jià)，易于保存和便于試驗(yàn)操作，秀麗隱桿線蟲的實(shí)驗(yàn)研究已形成一系列國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化與規(guī)范化操作。在食物不足如重要營(yíng)養(yǎng)因子匱乏等不適宜環(huán)境條件時(shí)，秀麗隱桿線蟲會(huì)停止正常的生長(zhǎng)發(fā)育，進(jìn)入休眠階段(dauer stage)。進(jìn)入休眠狀態(tài)的幼蟲與正常發(fā)育的秀麗隱桿線蟲在行為、形態(tài)和生理上存在顯著差異，表現(xiàn)為活動(dòng)行為顯著減緩或者靜止，停止進(jìn)食，體型改變?yōu)槭蓍L(zhǎng)，體色增黑，表皮(cuticle)增厚，生殖細(xì)胞停止分裂等。這種低代謝、保能量的狀態(tài)，使其能夠在惡劣環(huán)境條件下的存活時(shí)間遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于秀麗隱桿線蟲的正常生命周期壽命(約20天)。地溝油，泛指在社會(huì)生活中普遍存在的各類劣質(zhì)油，如回收的食用油、反復(fù)使用的炸油，以及通過(guò)過(guò)濾、加熱、沉淀、分離等方法對(duì)城市下水道里的垃圾加工而成的“食用油”。 “地溝油”是一種質(zhì)量極差、極不衛(wèi)生的非食用油。一旦食用“地溝油”，它會(huì)破壞人們的白血球和消化道黏膜，引起食物中毒，甚至致癌的嚴(yán)重后果。地溝油回流到餐桌的現(xiàn)象在中國(guó)普遍存在并在近年被廣泛關(guān)注，而鑒定地溝油成為難題。目前國(guó)內(nèi)尚未有檢測(cè)地溝油的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。單憑人的感官，地溝油的色、香、味與普通食用油幾乎沒有分別。即便是能探明底細(xì)的儀器也常常難以辨別真假。見諸報(bào)道的地溝油檢測(cè)方法都存在一定盲區(qū)，準(zhǔn)確率也有待提高，尚不足以對(duì)地溝油進(jìn)行充分有效的鑒定。常規(guī)的通過(guò)膽固醇檢測(cè)鑒定地溝油的方法存在操作復(fù)雜，儀器依賴度大，造成鑒定成本高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是為了解決現(xiàn)有地溝油鑒定方法存在靈敏度低、精確度差、操作復(fù)雜、 成本高的問(wèn)題，而提供一種利用秀麗隱桿線蟲休眠作為生物標(biāo)志物甄別地溝油的方法。利用秀麗隱桿線蟲休眠作為生物標(biāo)志物甄別地溝油的方法，具體是按以下步驟完成一、制備培養(yǎng)基采用NaCl、瓊脂粉、蛋白胨、O. 8mol/L I. 2mol/L的CaCl2水溶液、
O.8mol/L I. 2mol/L的MgSO4水溶液、磷酸鹽緩沖液和蒸餾水混合均勻得到培養(yǎng)液，密封后置于高壓蒸汽滅菌鍋中，并在120°C下滅菌處理15min 25min,然后降溫至50°C 60°C，并在無(wú)菌環(huán)境下加入待檢測(cè)食用油，再轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，最后在溫度為20°C的無(wú)菌環(huán)境下干燥8h 12h，即得到培養(yǎng)基；二、培養(yǎng)向步驟一制備的培養(yǎng)基中均勻涂入濃度為 I X IO9個(gè)/mL 2 X IO9個(gè)/mL大腸桿菌0P50菌液，然后37°C培養(yǎng)8h 12h，再將接入秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)行培養(yǎng)46h，在培養(yǎng)24h時(shí)秀麗隱桿線蟲幼蟲發(fā)育為秀麗隱桿線蟲成蟲并產(chǎn)卵；繼續(xù)培養(yǎng)12h時(shí)產(chǎn)卵發(fā)育成第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲；再繼續(xù)培養(yǎng)10h，若第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)入休眠狀態(tài)，則待檢測(cè)食用油不是地溝油；若第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲不進(jìn)入休眠狀態(tài)，與正常培養(yǎng)基生長(zhǎng)的秀麗隱桿線蟲子代無(wú)明顯差別，則待檢測(cè)食用油是地溝油；步驟一中所述的培養(yǎng)液中NaCl的濃度為2X 10_3g/mL 3 X 10_3g/mL，瓊脂粉的濃度為 15X lCT3g/mL 20X lCT3g/mL,蛋白胨的濃度為 2X lCT3g/mL 3X lCT3g/mL, CaCl2 的濃度為 O. 8 XlO-VmL I X l(T6g/mL，MgSO4 的濃度為 O. 8X l(T6g/mL I X l(T6g/mL ;步驟一中所述的培養(yǎng)液中加入的磷酸鹽緩沖液占培養(yǎng)液總體積的20%。 25%。;步驟一中所述加入的待檢測(cè)食用油與培養(yǎng)液的體積比為(I 10) 1000;步驟二中所述濃度為I X IO9個(gè) /mL 2X IO9個(gè)/mL大腸桿菌0P50菌液的涂入量為2mL/cm2 3mL/cm2 ;步驟二中所述的秀麗隱桿線蟲幼蟲的接種量為5只/cm2 10只/cm2。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明檢測(cè)方法與傳統(tǒng)的利用分析儀器鑒定地溝油的方法相比，彌補(bǔ)了常規(guī)膽固醇檢測(cè)方法5mg/g檢出限較高的不足，對(duì)特異成分痕量低的高精煉地溝油可以有效鑒定；利用秀麗隱桿線蟲休眠狀態(tài)指標(biāo)，可以直觀高效的甄別食用油的質(zhì)量?jī)?yōu)劣； 此外，本發(fā)明檢測(cè)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器和檢測(cè)設(shè)備，實(shí)驗(yàn)操作方便，成本低廉，易于培訓(xùn)和掌握。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式是一種利用秀麗隱桿線蟲休眠作為生物標(biāo)志物甄別地溝油的方法，具體是按以下步驟完成一、制備培養(yǎng)基采用NaCl、瓊脂粉、蛋白胨、O. 8mol/L I. 2mol/L的CaCl2水溶液、O. 8mol/L I. 2mol/L的MgSO4水溶液、磷酸鹽緩沖液和蒸餾水混合均勻得到培養(yǎng)液， 密封后置于高壓蒸汽滅菌鍋中，并在120°C下滅菌處理15min 25min,然后降溫至50°C 60°C，并在無(wú)菌環(huán)境下加入待檢測(cè)食用油，再轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，最后在溫度為20°C的無(wú)菌環(huán)境下干燥8h 12h，即得到培養(yǎng)基；二、培養(yǎng)向步驟一制備的培養(yǎng)基中均勻涂入濃度為 1\109個(gè)/1^ 2\109個(gè)/1^大腸桿菌0卩50菌液，然后37°C培養(yǎng)8h 12h，再將接入秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)行培養(yǎng)46h，在培養(yǎng)24h時(shí)秀麗隱桿線蟲幼蟲發(fā)育為秀麗隱桿線蟲成蟲并產(chǎn)卵；繼續(xù)培養(yǎng)12h時(shí)產(chǎn)卵發(fā)育成第二代秀I 隱桿線蟲幼蟲；再繼續(xù)培養(yǎng)IOh,若第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)入休眠狀態(tài)，則待檢測(cè)食用油不是地溝油；若第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲不進(jìn)入休眠狀態(tài)，與正常培養(yǎng)基生長(zhǎng)的秀麗隱桿線蟲子代無(wú)明顯差別，則待檢測(cè)食用油是地溝油。本實(shí)施方式步驟一中所述的培養(yǎng)液中NaCl的濃度為2X 10_3g/mL 3X 10_3g/mL， 瓊脂粉的濃度為15X 10_3g/mL 20X 10_3g/mL，蛋白胨的濃度為2X 10_3g/mL 3X 10_3g/ mL, CaCl2 的濃度為 O. 8X 10 6g/mL IX 10 6g/mL, MgSO4 的濃度為 O. 8X 10 6g/mL I X l(T6g/mL ;本實(shí)施方式步驟一中所述的培養(yǎng)液中加入的磷酸鹽緩沖液占培養(yǎng)液總體積的 20%。 25%。；步驟一中所述加入的待檢測(cè)食用油與培養(yǎng)液的體積比為(I 10) 1000。本實(shí)施方式步驟二中所述濃度為I X IO9個(gè)/mL 2X IO9個(gè)/mL大腸桿菌0P50菌液的涂入量為2mL/cm2 3mL/cm2 ;本實(shí)施方式步驟二中所述的秀麗隱桿線蟲幼蟲的接種量為5只/ cm2 10只/ cm2。地溝油中含有膽固醇及其膽固醇衍生物，而植物油中沒用這類具有動(dòng)物油屬性的成分；即使地溝油經(jīng)過(guò)數(shù)級(jí)精煉，膽固醇及其膽固醇衍生物也會(huì)痕量存在。膽固醇是秀麗隱桿線蟲繁殖與發(fā)育的必需營(yíng)養(yǎng)，是秀麗隱桿線蟲培養(yǎng)基中不可或缺的成分。在不添加膽固醇的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的秀麗隱桿線蟲，其繁衍的第二代幼蟲發(fā)育停滯進(jìn)入休眠狀態(tài)。而在培養(yǎng)基中添加極微量的膽固醇便，秀麗隱桿線蟲繁殖的后代可正常生長(zhǎng)發(fā)育。本實(shí)施方式檢測(cè)方法與傳統(tǒng)的利用分析儀器鑒定地溝油的方法相比，彌補(bǔ)了常規(guī)膽固醇檢測(cè)方法5mg/g檢出限較高的不足，對(duì)特異成分痕量低的高精煉地溝油可以有效鑒定；利用秀麗隱桿線蟲休眠狀態(tài)指標(biāo)，可以直觀高效的甄別食用油的質(zhì)量?jī)?yōu)劣；此外，本實(shí)施方式檢測(cè)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器和檢測(cè)設(shè)備，實(shí)驗(yàn)操作方便，成本低廉，易于培訓(xùn)和掌握。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同點(diǎn)的是步驟一中所述的磷酸鹽緩沖液是由KH2P04、KOH和蒸餾水配置而成，磷酸鹽緩沖液中KH2PO4的濃度為
I.36 X 10 VmL, KOH的濃度為O. 18 X 10_3g/mL，且磷酸鹽緩沖液的pH值為6. O。其它與具體實(shí)施方式
一相同。采用下述試驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明效果試驗(yàn)一一、制備培養(yǎng)基采用NaCl、瓊脂粉、蛋白胨、lmol/L的CaCl2水溶液、 lmol/L的MgSO4水溶液、磷酸鹽緩沖液和蒸餾水混合均勻得到培養(yǎng)液，密封后置于高壓蒸汽滅菌鍋中，并在120°C下滅菌處理20min，然后降溫至55°C，并在無(wú)菌環(huán)境下加入待檢測(cè)食用油，再轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，最后在溫度為20°C的無(wú)菌環(huán)境下干燥10h，即得到培養(yǎng)基；二、培養(yǎng)向步驟一制備的培養(yǎng)基中均勻涂入濃度為I. O X IO9個(gè)/mL大大腸桿菌0P50菌液，然后 37°C培養(yǎng)10h，再將接入秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)行培養(yǎng)46h，在培養(yǎng)24h時(shí)秀麗隱桿線蟲幼蟲發(fā)育為秀麗隱桿線蟲成蟲并產(chǎn)卵，繼續(xù)培養(yǎng)12h時(shí)產(chǎn)卵發(fā)育成第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲， 再繼續(xù)培養(yǎng)IOh。本試驗(yàn)步驟一中所述的培養(yǎng)液中NaCl的濃度為3X10_3g/mL，瓊脂粉的濃度為 17X 10_3g/mL，蛋白胨的濃度為2. 5 X 10 VmL, CaCl2的濃度為I X W6gMU MgSO4的濃度為IX l(T6g/mL ;本試驗(yàn)步驟一中所述的培養(yǎng)液中加入的磷酸鹽緩沖液占培養(yǎng)液總體積的 25%。；本試驗(yàn)步驟一中所述加入的待檢測(cè)食用油與培養(yǎng)液的體積比為5 1000，且所述的待檢測(cè)食用油為植物油。本試驗(yàn)步驟一中所述的磷酸鹽緩沖液是由KH2P04、KOH和蒸餾水配置而成，磷酸鹽緩沖液中KH2PO4的濃度為I. 36 X 10 VmL, KOH的濃度為O. 18 X 10_3g/mL，且磷酸鹽緩沖液的pH值為6.0。本試驗(yàn)步驟二中所述濃度為I. OX IO9個(gè)/mL大腸桿菌0P50菌液的涂入量為2mL/ cm2 ;本試驗(yàn)步驟二中所述的秀麗隱桿線蟲幼蟲的接種量為10只/cm2。本試驗(yàn)步驟二中再繼續(xù)培養(yǎng)IOh后第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)入休眠狀態(tài)，表現(xiàn)為行為顯著減緩甚至靜止，不攝食，體型瘦長(zhǎng)，體色增黑，表皮增厚，因?yàn)橹参镉椭胁缓行沱愲[桿線蟲生長(zhǎng)需要的膽固醇，因此第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)入休眠狀態(tài)。試驗(yàn)二 一、制備培養(yǎng)基采用NaCl、瓊脂粉、蛋白胨、lmol/L的CaCl2水溶液、 lmol/L的MgSO4水溶液、磷酸鹽緩沖液和蒸餾水混合均勻得到培養(yǎng)液，密封后置于高壓蒸汽滅菌鍋中，并在120°C下滅菌處理20min，然后降溫至55°C，并在無(wú)菌環(huán)境下加入待檢測(cè)食用油，再轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，最后在溫度為20°C的無(wú)菌環(huán)境下干燥10h，即得到培養(yǎng)基；二、培養(yǎng)向步驟一制備的培養(yǎng)基中均勻涂入濃度為I. O X IO9個(gè)/mL大大腸桿菌0P50菌液，然后 37°C培養(yǎng)10h，再將接入秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)行培養(yǎng)46h，在培養(yǎng)24h時(shí)秀麗隱桿線蟲幼蟲發(fā)育為秀麗隱桿線蟲成蟲并產(chǎn)卵，繼續(xù)培養(yǎng)12h時(shí)產(chǎn)卵發(fā)育成第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲， 再繼續(xù)培養(yǎng)IOh。本試驗(yàn)步驟一中所述的培養(yǎng)液中NaCl的濃度為3X10_3g/mL，瓊脂粉的濃度為 17X 10_3g/mL，蛋白胨的濃度為2. 5 X 10 VmL, CaCl2的濃度為I X W6gMU MgSO4的濃度為IX l(T6g/mL ;本試驗(yàn)步驟一中所述的培養(yǎng)液中加入的磷酸鹽緩沖液占培養(yǎng)液總體積的 25%。；本試驗(yàn)步驟一中所述加入的待檢測(cè)食用油與培養(yǎng)液的體積比為5 1000，且所述的待檢測(cè)食用油為動(dòng)物油。本試驗(yàn)步驟一中所述的磷酸鹽緩沖液是由KH2P04、KOH和蒸餾水配置而成，磷酸鹽緩沖液中KH2PO4的濃度為I. 36 X 10 VmL, KOH的濃度為O. 18 X 10_3g/mL，且磷酸鹽緩沖液的pH值為6.0。本試驗(yàn)步驟二中所述濃度為I. OX IO9個(gè)/mL大腸桿菌0P50菌液的涂入量為2mL/ cm2 ;本試驗(yàn)步驟二中所述的秀麗隱桿線蟲幼蟲的接種量為10只/cm2。本試驗(yàn)步驟二中再繼續(xù)培養(yǎng)IOh后第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲不進(jìn)入休眠狀態(tài)，與正常培養(yǎng)基生長(zhǎng)的秀麗隱桿線蟲子代無(wú)明顯差別，因?yàn)閯?dòng)物油中含有秀麗隱桿線蟲生長(zhǎng)需要的膽固醇，因此第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲不進(jìn)入休眠狀態(tài)，與正常培養(yǎng)基生長(zhǎng)的秀麗隱桿線蟲子代無(wú)明顯差別。試驗(yàn)三一、制備培養(yǎng)基采用NaCl、瓊脂粉、蛋白胨、lmol/L的CaCl2水溶液、 lmol/L的MgSO4水溶液、磷酸鹽緩沖液和蒸餾水混合均勻得到培養(yǎng)液，密封后置于高壓蒸汽滅菌鍋中，并在120°C下滅菌處理20min，然后降溫至55°C，并在無(wú)菌環(huán)境下加入待檢測(cè)食用油，再轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，最后在溫度為20°C的無(wú)菌環(huán)境下干燥10h，即得到培養(yǎng)基；二、培養(yǎng)向步驟一制備的培養(yǎng)基中均勻涂入濃度為I. O X IO9個(gè)/mL大大腸桿菌0P50菌液，然后 37°C培養(yǎng)10h，再將接入秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)行培養(yǎng)46h，在培養(yǎng)24h時(shí)秀麗隱桿線蟲幼蟲發(fā)育為秀麗隱桿線蟲成蟲并產(chǎn)卵，繼續(xù)培養(yǎng)12h時(shí)產(chǎn)卵發(fā)育成第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲， 再繼續(xù)培養(yǎng)IOh。本試驗(yàn)步驟一中所述的培養(yǎng)液中NaCl的濃度為3X 10_3g/mL，瓊脂粉的濃度為 17X 10_3g/mL，蛋白胨的濃度為2. 5 X 10 VmL, CaCl2的濃度為I X W6gMU MgSO4的濃度為IX l(T6g/mL ;本試驗(yàn)步驟一中所述的培養(yǎng)液中加入的磷酸鹽緩沖液占培養(yǎng)液總體積的 25%。；本試驗(yàn)步驟一中所述加入的待檢測(cè)食用油與培養(yǎng)液的體積比為5 1000，且所述的待檢測(cè)食用油為地溝油。本試驗(yàn)步驟一中所述的磷酸鹽緩沖液是由KH2P04、KOH和蒸餾水配置而成，磷酸鹽緩沖液中KH2PO4的濃度為I. 36 X 10 VmL, KOH的濃度為O. 18 X 10_3g/mL，且磷酸鹽緩沖液的pH值為6.0。本試驗(yàn)步驟二中所述濃度為I. OX IO9個(gè)/mL大腸桿菌0P50菌液的涂入量為2mL/ cm2 ;本試驗(yàn)步驟二中所述的秀麗隱桿線蟲幼蟲的接種量為10只/cm2。本試驗(yàn)步驟二中再繼續(xù)培養(yǎng)IOh后第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲不進(jìn)入休眠狀態(tài)，與正常培養(yǎng)基生長(zhǎng)的秀麗隱桿線蟲子代無(wú)明顯差別，因?yàn)榈販嫌椭泻行沱愲[桿線蟲生長(zhǎng)需要的膽固醇及其膽固醇衍生物，因此第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲不進(jìn)入休眠狀態(tài)，與正常培養(yǎng)基生長(zhǎng)的秀麗隱桿線蟲子代無(wú)明顯差別。
權(quán)利要求
1.利用秀麗隱桿線蟲休眠作為生物標(biāo)志物甄別地溝油的方法，其特征在于利用秀麗隱桿線蟲休眠作為生物標(biāo)志物甄別地溝油的方法是按以下步驟完成一、制備培養(yǎng)基采用NaCl、瓊脂粉、蛋白胨、O. 8mol/L I. 2mol/L的CaCl2水溶液、O.8mol/L I. 2mol/L的MgSO4水溶液、磷酸鹽緩沖液和蒸餾水混合均勻得到培養(yǎng)液，密封后置于高壓蒸汽滅菌鍋中，并在120°C下滅菌處理15min 25min,然后降溫至50°C 60°C，并在無(wú)菌環(huán)境下加入待檢測(cè)食用油，再轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，最后在溫度為20°C的無(wú)菌環(huán)境下干燥8h 12h，即得到培養(yǎng)基；二、培養(yǎng)向步驟一制備的培養(yǎng)基中均勻涂入濃度為 I X IO9個(gè)/mL 2 X IO9個(gè)/mL大腸桿菌0P50菌液，然后37°C培養(yǎng)8h 12h，再將接入秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)行培養(yǎng)46h，在培養(yǎng)24h時(shí)秀麗隱桿線蟲幼蟲發(fā)育為秀麗隱桿線蟲成蟲并產(chǎn)卵；繼續(xù)培養(yǎng)12h時(shí)產(chǎn)卵發(fā)育成第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲；再繼續(xù)培養(yǎng)10h，若第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)入休眠狀態(tài)，則待檢測(cè)食用油不是地溝油；若第二代秀麗隱桿線蟲幼蟲不進(jìn)入休眠狀態(tài)，與正常培養(yǎng)基生長(zhǎng)的秀麗隱桿線蟲子代無(wú)明顯差別，則待檢測(cè)食用油是地溝油；步驟一中所述的培養(yǎng)液中NaCl的濃度為2X 10_3g/mL 3 X 10_3g/mL，瓊脂粉的濃度為 15X lCT3g/mL 20X lCT3g/mL,蛋白胨的濃度為 2X lCT3g/mL 3X lCT3g/mL, CaCl2 的濃度為 O. 8 X 10 6g/mL I X 10 6g/mL, MgSO4 的濃度為 O. 8 X 10_6g/mL I X 10 6g/mL ;步驟一中所述的培養(yǎng)液中加入的磷酸鹽緩沖液占培養(yǎng)液總體積的20%。 25%。;步驟一中所述加入的待檢測(cè)食用油與培養(yǎng)液的體積比為(I 10) 1000;步驟二中所述濃度為I X IO9個(gè) /mL 2X IO9個(gè)/mL大腸桿菌0P50菌液的涂入量為2mL/cm2 3mL/cm2 ;步驟二中所述的秀麗隱桿線蟲幼蟲的接種量為5只/cm2 10只/cm2。
2.根據(jù)權(quán)利要I所述的利用秀麗隱桿線蟲休眠作為生物標(biāo)志物甄別地溝油的方法，其特征在于步驟一中所述的磷酸鹽緩沖液是由KH2P04、KOH和蒸餾水配置而成，磷酸鹽緩沖液中KH2PO4的濃度為I. 36 X 10 VmL, KOH的濃度為O. 18 X 10 VmL,且磷酸鹽緩沖液的pH值為 6. O。
全文摘要
利用秀麗隱桿線蟲休眠作為生物標(biāo)志物甄別地溝油的方法，它涉及一種地溝油甄別方法。本發(fā)明目的要解決現(xiàn)有地溝油鑒定方法存在靈敏度低、精確度差、操作復(fù)雜、成本高的問(wèn)題。方法，一、采用NaCl、瓊脂粉、蛋白胨、CaCl2水溶液、MgSO4水溶液、磷酸鹽緩沖液和蒸餾水混合均勻得到培養(yǎng)液，然后滅菌處理，最用經(jīng)干燥處理即得到培養(yǎng)基；二、先向步驟一制備的培養(yǎng)基中涂入大腸桿菌OP50菌液，并培養(yǎng)一定時(shí)間，再將接入秀麗隱桿線蟲幼蟲進(jìn)行培養(yǎng)46h。優(yōu)點(diǎn)一、實(shí)現(xiàn)對(duì)特異成分痕量低的高精煉地溝油可以有效鑒定；二、操作方便，成本低廉，易于培訓(xùn)和掌握。本發(fā)明主要用于甄別地溝油。
文檔編號(hào)C12Q1/02GK102586387SQ201210051560
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月1日
發(fā)明者唐占輝, 張雁慧, 王云彪 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所