專利名稱：一種中間普氏菌培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢驗口腔微生物培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種中間普氏菌培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
牙周病是常見的口腔疾病，在世界范圍內(nèi)有很高的發(fā)病率。中間普氏菌 (Prevotella intermedia，Pi)屬產(chǎn)黑色素類的G-厭氧桿菌，大量的研究顯示Pi與牙周炎、 根尖周病和冠周炎等感染性疾病關(guān)系密切。目前的Pi檢驗手段主要是齦下菌斑采樣進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)，該種方法需要對樣本進(jìn)行DNA提取和PCR引物設(shè)計，且需要配備PCR相關(guān)儀器設(shè)備，成本昂貴，操作復(fù)雜。微生物培養(yǎng)是一種用人工方法使微生物生長繁殖的技術(shù)，而選擇性培養(yǎng)基是用來促進(jìn)或抑制一定類型的生物體(如細(xì)胞或細(xì)菌等)而設(shè)計的培養(yǎng)基，利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。非選擇性厭氧菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)牙垢標(biāo)本，很難將厭氧鏈球菌、牙齦卟啉菌、梭菌屬等分離出去，影響中間普氏菌的生長。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種適合于中間普氏菌生長
的培養(yǎng)基。本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案是一種中間普氏菌培養(yǎng)基，其特征在，配制 IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g ；牛心浸粉8g ；氯化血紅素5mg ；維生素Kl IOmg ； 氯化鈉5. 5g ；瓊脂15g ；多西環(huán)素^ig ；甲硝唑20mg ；無菌綿羊血90ml ；蒸餾水加至1000ml。優(yōu)化方案中，每IOOOml培養(yǎng)基還含有桿菌肽鋅^ig。優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有L-谷氨酰胺0. lg。優(yōu)化方案中，每IOOOml培養(yǎng)基還含有膽鹽1. 8g。優(yōu)化方案中，每IOOOml培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的射干水煮液200ml。其中所述的蛋白胨提供碳氮源和能量；牛心浸粉含有各種多肽、脂肪、生長因子、 激素等，這些物質(zhì)對促進(jìn)中間普氏菌的繁殖和生長都是很重要的因素；氯化血紅素和維生素Kl為厭氧菌營養(yǎng)劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓，且由于中間普氏菌較其他的口腔厭氧菌更為耐受高鹽環(huán)境，所以高氯化鈉水平還有利于抑制其他口腔厭氧菌生長；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；多西環(huán)素可以有效的抑制鏈球菌等革蘭氏陽性菌、放線菌屬、炭疽桿菌、李斯特菌、梭狀芽孢桿菌、奴卡菌屬、弧菌、布魯菌屬、彎曲桿菌、耶爾森菌、放線放線桿菌、黃褐色嗜二氧化碳菌；既往研究表明，甲硝唑抑制牙齦卟啉菌能力64倍于中間普氏菌；無菌綿羊血提供能量環(huán)境；桿菌肽鋅可以廣譜抑制革蘭氏的陽性菌和陰性球菌、肺炎雙球菌、葡萄球菌、淋球菌、腦膜炎雙球菌及螺旋體；L-谷氨酰胺屬氨基酸類，為營養(yǎng)劑；膽鹽抑制革蘭氏陽性菌，特別抑制革蘭氏陽性桿菌和糞鏈球菌；射干為鳶尾科植物射干的干燥根莖，現(xiàn)代研究表明，射干煎劑或浸劑，在試管中對常見的致病性皮膚癬菌有抑制作用；在體外對外感及咽喉疾患中的某些病毒，也有抑制或延緩作用。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、中間普氏菌分離率高的特點。
具體實施例方式以下結(jié)合實際情況，對本發(fā)明的具體實施方式
作詳細(xì)說明。實施例1，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g ；牛心浸粉8g ；氯化血紅素5mg ；維生素Kl IOmg ；氯化鈉5. 5g ；瓊脂15g ；多西環(huán)素^ig ；甲硝唑20mg ；無菌綿羊血 90ml ；蒸餾水加至1000ml。制備方法為稱取蛋白胨、牛心浸粉、氯化鈉；瓊脂；多西環(huán)素；甲硝唑混勻，蒸餾水溶解，210°C滅菌15 min,冷卻到45°C，加入無菌綿羊血、滅菌氯化血紅素、 滅菌維生素K1，混勻后滅菌蒸餾水定容到IOOOml后分裝。實施例2，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g ；牛心浸粉8g ；氯化血紅素5mg ；維生素Kl IOmg ；氯化鈉5. 5g ；瓊脂15g ；多西環(huán)素^ig ；甲硝唑20mg ；無菌綿羊血 90ml ；桿菌肽鋅2mg ；蒸餾水加至1000ml。制備方法為稱取蛋白胨、牛心浸粉、氯化鈉；瓊脂； 多西環(huán)素；甲硝唑；桿菌肽鋅混勻，蒸餾水溶解，210°C滅菌15 min，冷卻到45°C，加入無菌綿羊血、滅菌氯化血紅素、滅菌維生素K1，混勻后滅菌蒸餾水定容到IOOOml后分裝。實施例3，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g ；牛心浸粉8g ；氯化血紅素5mg ；維生素Kl IOmg ；氯化鈉5. 5g ；瓊脂15g ；多西環(huán)素^ig ；甲硝唑20mg ；無菌綿羊血90ml ；L-谷氨酰胺0. Ig ；膽鹽1. Sg ；蒸餾水加至1000ml。制備方法為稱取蛋白胨、牛心浸粉、氯化鈉；瓊脂；多西環(huán)素；甲硝唑；L-谷氨酰胺；膽鹽混勻，蒸餾水溶解，210°C滅菌15 min，冷卻到45°C，加入無菌綿羊血、滅菌氯化血紅素、滅菌維生素K1，混勻后滅菌蒸餾水定容到IOOOml后分裝。實施例4，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g ；牛心浸粉8g ；氯化血紅素5mg ；維生素Kl IOmg ；氯化鈉5. 5g ；瓊脂15g ；多西環(huán)素^ig ；甲硝唑20mg ；無菌綿羊血 90ml ；濃度200g/L的射干水煮液200ml ；蒸餾水加至1000ml。制備方法為取射干加水煮沸1小時，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得射干水煮液；將蛋白胨、牛心浸粉、氯化鈉；瓊脂；多西環(huán)素；甲硝唑；射干水煮液和蒸餾水混勻，在渦旋器上震蕩15min，過濾，濾液210°C滅菌15 min,冷卻到45°C，加入無菌綿羊血、滅菌氯化血紅素、滅菌維生素K1，混勻后滅菌蒸餾水定容到IOOOml后分裝。實施例5，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g ；牛心浸粉8g ；氯化血紅素5mg ；維生素Kl IOmg ；氯化鈉5. 5g ；瓊脂15g ；多西環(huán)素^ig ；甲硝唑20mg ；無菌綿羊血 90ml ；L-谷氨酰胺0. Ig ；膽鹽1. 8g ；濃度200g/L的射干水煮液200ml ；蒸餾水加至1000ml。 制備方法為取射干加水煮沸1小時，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得射干水煮液；將蛋白胨、牛心浸粉、氯化鈉；瓊脂；多西環(huán)素；甲硝唑；L-谷氨酰胺；膽鹽；射干水煮液和蒸餾水混勻，在渦旋器上震蕩15min，過濾，濾液210°C滅菌15 min，冷卻到45°C，加入無菌綿羊血、滅菌氯化血紅素、滅菌維生素K1，混勻后滅菌蒸餾水定容到IOOOml后分裝。所述的射干水煮液濃度為200g/L，指的是每升射干水煮液中含有生藥200g。本發(fā)明所得中間普氏菌培養(yǎng)基用于牙垢標(biāo)本具有檢出可靠、中間普氏菌分離率高的特點，為臨床資料充分證明，有關(guān)資料如下。1對象與方法
1. 1培養(yǎng)基制備共設(shè)6組，分別為實施例1方案組、實施例2方案組、實施例3方案組、實施例4方案組、實施例5方案組和對照組，對照組為厭氧血瓊脂培養(yǎng)基(⑶C培養(yǎng)基)。1. 2齦下菌斑采集培養(yǎng)方法隔濕唾液，齦上刮治器去除齦上牙石，碘酊消毒后， 用無菌Gracey刮治器采集2顆下頌中切牙唇側(cè)近中至遠(yuǎn)中的齦下菌斑。將采集的菌斑懸浮于Iml生理鹽水，用接種環(huán)分區(qū)劃線接種，在37°C，10%C02、10%H2和80%N2的厭氧罐內(nèi)培養(yǎng)48h，挑取細(xì)小菌落進(jìn)行菌屬鑒定。1.3目標(biāo)菌的菌落形態(tài)觀察、顯微鏡鏡檢取出培養(yǎng)皿，觀察培養(yǎng)基上黑色或棕色、光亮、圓形、低突、直徑0. 5^2 mm的菌落的生長情況，挑選目標(biāo)菌涂片，革蘭氏染色，顯微鏡鏡檢。1. 3統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS 13. 0進(jìn)行統(tǒng)計分析，P< 0. 05表示有顯著性意義。2結(jié)果在19份經(jīng)由PCR確定中間普氏菌陽性的牙垢標(biāo)本，細(xì)菌培養(yǎng)分離并鑒定為中間普氏菌的，4 實施例1方案組為16例，實施例2方案組為16例，實施例3方案組為 18例，實施例4方案組為16，實施例5方案組為17例，對照組⑶C培養(yǎng)基為11例，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，本發(fā)明各實施例組與對照組比較具有明顯差異(P<0. 05)。結(jié)果表明，本發(fā)明實施例中間普氏菌分離率明顯高現(xiàn)有的培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1.一種中間普氏菌培養(yǎng)基，其特征在，配制IOOOml培養(yǎng)基的配方中含有 蛋白胨15g;牛心浸粉8g ； 氯化血紅素5mg ； 維生素Kl IOmg ； 氯化鈉5. 5g ； 瓊脂15g ； 多西環(huán)素4mg ； 甲硝唑20mg ； 無菌綿羊血90ml ； 蒸餾水加至1000ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中間普氏菌培養(yǎng)基，其特征在于每1000ml培養(yǎng)基還含有桿菌肽鋅ang。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中間普氏菌培養(yǎng)基，其特征在于每1000ml培養(yǎng)基還含有 L-谷氨酰胺0. lg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中間普氏菌培養(yǎng)基，其特征在于每1000ml培養(yǎng)基還含有膽鹽1.8g。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中間普氏菌培養(yǎng)基，其特征在于每1000ml培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的射干水煮液200ml。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中間普氏菌培養(yǎng)基。其特征在于，配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有蛋白胨15g；牛心浸粉8g；氯化血紅素5mg；維生素K110mg；氯化鈉5.5g；瓊脂15g；多西環(huán)素4mg；甲硝唑20mg；無菌綿羊血90ml；蒸餾水加至1000ml。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、中間普氏菌分離率高的特點。
文檔編號C12Q1/04GK102533932SQ20121007024
公開日2012年7月4日 申請日期2012年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月16日
發(fā)明者劉名霞, 龐渤 申請人:劉名霞