專利名稱：一種燕麥肽的酶法提取方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種燕麥肽及其提取方法與應用，特別涉及一種燕麥肽及其提取方法與其在制備抑制ACE活性和降血壓的食品或藥物中的應用。屬于酶法提取燕麥肽技術領域。
背景技術：
燕麥，禾本科燕麥屬，一年生或多年生草本植物。燕麥營養(yǎng)價值豐富而全面，其蛋白質(zhì)、脂肪、維生素E、膳食纖維以及鈣、鎂、鐵、磷等礦物元素含量均高于其它谷類作物，具有降血脂、降低膽固醇、降血壓、降血糖和抗氧化性等多種生物活性功能。血管緊張素轉化酶(Angiotensin-I-convertingenenzyme, ACE,EC 3. 4. 15. I)是一種含鋅二肽羧酶，廣泛分布于哺乳動物組織中并對其血壓調(diào)節(jié)起著關鍵性的作用。ACE在人體腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin angiotensin system, RAS)和激肽-激肽生成酶系統(tǒng) (Kallikerni-kinin system,KKS)中，對血壓調(diào)節(jié)起著重要的作用。因此通過抑制體內(nèi)ACE 活性來達到治療高血壓的目的是一條非常重要的途徑。近年來，一些具有特定生理活性的短肽，如ACE抑制肽、阿片肽、免疫調(diào)節(jié)肽等引起了人們的極大關注，這些肽具有安全性高、無副作用、來源廣泛等優(yōu)點。植物蛋白以其不可替代的優(yōu)點成為人們研究活性肽的主要來源。燕麥降壓肽即是從燕麥蛋白中得到的一種活性多肽。燕麥麩皮是燕麥加工過程中的副產(chǎn)物，其中蛋白質(zhì)含量很高，目前國內(nèi)外對燕麥麩皮的研究主要集中在膳食纖維方面，對燕麥麩皮蛋白的利用很少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種燕麥肽的酶法提取方法及其應用。本發(fā)明的技術方案所提供的燕麥肽的酶法提取方法，以燕麥麩皮為原料采用酶法提取燕麥肽，包括如下步驟
(1)預處理將燕麥麩皮粉碎過60-100目篩,燕麥麩皮與水混合,燕麥麩皮水的重量比為I : 10-1 20，調(diào)節(jié)pH為8. 0-9. 5，在溫度為50-60°C條件下，進行攪拌預處理，預處理時間為30-50min ；
(2)酶處理在經(jīng)過步驟(I)預處理后的液體中加入堿性蛋白酶，堿性蛋白酶的添加量為20-50mL/kg燕麥麩皮，在45-55 °C下攪拌處理2_5小時；
然后，加入風味蛋白酶，風味蛋白酶的添加量為50-70mL/Kg燕麥麩皮，在50_60°C下攪拌處理1-2小時；
(3)純化將步驟(2)酶處理后的液體離心取上清液，在上清液中加入β-葡聚糖酶和真菌淀粉酶反應2-4小時，β -葡聚糖酶的用量為30-50mL/Kg燕麥麩皮，真菌淀粉酶的用量為60-80ml/Kg燕麥麩皮，過濾得到澄清液體；將所述澄清液體加入到以CBE313ADS17大孔吸附樹脂為填料的吸附柱中，然后用去離子水沖洗至洗脫液中沒有糖分和鹽分，最后用體積濃度60%-75%乙醇溶液洗脫，得到含燕麥肽的溶液；
3(4)制干粉將含燕麥肽溶液旋轉蒸發(fā)濃縮至一半體積，噴射干燥得到燕麥肽干粉。所述步驟(2)中，所述堿性蛋白酶的添加量優(yōu)選為40mL/Kg燕麥麩皮；所述風味蛋白酶的添加量優(yōu)選為60mL/Kg燕麥麩皮。所述堿性蛋白酶和所述風味蛋白酶為諾維信公司產(chǎn)品。所述步驟(3)中，所述過濾得到澄清液體，過濾的濾徑為O. 5-0. 8 μ m。所述步驟(3)中，所述澄清液體優(yōu)選按照CBE313ADS17大孔吸附樹脂的2倍體積加入到吸附柱中；所述乙醇溶液洗脫的體積優(yōu)選為吸附柱體積的2倍。用所述方法制備的燕麥肽的應用，其在制備抑制ACE活性和降血壓的食品或藥物中的應用。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的方法將燕麥麩皮用酶法降解燕麥麩皮蛋白成為燕麥肽，通過板框過濾、樹脂吸附等手段將其分離提純，所得燕麥肽89%的分子量在1500Da以下，具有抑制ACE的活性，可以廣泛應用于降壓保健食品或制備降壓藥物等領域。
具體實施例方式下面結合具體實例對本發(fā)明做詳細說明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。實施例I、燕麥肽的制備一、燕麥肽的制備
具體步驟如下
I、燕麥麩皮預處理
燕麥麩皮粉碎至60-100目，凱氏定氮法測定其中蛋白含量可達25%。將80g步驟I所述60-100目的燕麥麩皮與去離子水按重量比I : 10混合，調(diào)pH值到9.0，在55°C水浴中攪拌處理時間為40min。2、酶處理
預處理后測定液體pH值至8. 0-8. 5，加入堿性蛋白酶(諾維信Alcalase2. 4L)，添加量為20mL/kg燕麥麩皮。在溫度55°C條件下，繼續(xù)攪拌2小時；然后加入風味蛋白酶(諾維信FlavourzymelOOOL)，添加量為50mL/Kg燕麥麩皮，在55°C繼續(xù)攪拌2小時。3、將步驟2酶解后的液體在4000rpm下離心10分鐘取上清液，在上清液中加入 β -葡聚糖酶(購自湖南尤特爾生化，添加量為50mL/Kg燕麥麩皮)，真菌淀粉酶(購自江蘇博立生物制品有限公司，添加量為80mL/Kg燕麥麩皮)反應3小時，利用板框過濾機(濾徑為O. 5-0. 8 μ m)過濾，加入硅藻土助濾，得到棕色澄清液體。4、將步驟3得到的澄清液體按照2 I倍體積加入到裝有CBE313ADS17吸附樹脂的吸附柱中，用去離子水沖洗至洗脫液沒有糖分和鹽分。再用75% (體積百分含量)的乙醇水溶液洗脫，接收洗脫液體積為柱體積的2倍。旋轉蒸發(fā)濃縮至一半體積，噴射干燥得 IOg燕麥肽。二、燕麥肽的分子量分析
將步驟一獲得的燕麥肽進行相對分子量分布測定，采用HPLC法，測定色譜條件安捷侖高效液相色譜儀1100 ;色譜柱TSKgel2000 SffXL體積排阻色譜柱(300mmX7. 8mm);流動相:乙腈/冰醋酸/三氟乙酸:45/55/0. I (v/v/v);檢測UV 220nm ;流速:0. 5mL/min ;柱溫30°C。結果表明95%的多肽分子量在1500Da以下，是較好的ACE抑制肽源。實施例2、燕麥肽的制備一、燕麥肽的制備
提取燕麥肽的工藝流程具體步驟如下
I、燕麥麩皮處理
為了獲得更多燕麥肽，選用60-100目燕麥麩皮，凱氏定氮法測定其中蛋白含量可達
25%。將50Kg所述60-100目的燕麥麩皮與去離子水按重量比I : 15混合，調(diào)pH值到
8.5，在55°C水浴中攪拌處理時間為30min。2、酶處理
預處理后測定液體pH值至8. 0-8. 5，加入堿性蛋白酶(諾維信Alcalase2. 4L)，添加量為20-50mL/kg燕麥麩皮。在溫度55°C條件下，繼續(xù)攪拌3小時；然后加入風味蛋白酶(諾維信FlavourzymelOOOL)，添加量為50_70mL/Kg燕麥麩皮，在55°C繼續(xù)攪拌I小時。3、將步驟2酶解后的液體在4000rpm下離心10分鐘取上清液，在上清液中加入 β -葡聚糖酶(購自湖南尤特爾生化，添加量為30-50mL/Kg燕麥麩皮)，真菌淀粉酶(購自江蘇博立生物制品有限公司，添加量為60-80mL/Kg燕麥麩皮)反應4小時，利用板框過濾機(濾徑為O. 5-0. 8 μ m)過濾，加入硅藻土助濾，得到棕色澄清液體。4、將步驟3得到的澄清液體按照2 I倍體積加入到裝有CBE313ADS17吸附樹脂的吸附柱中，用去離子水沖洗至洗脫液沒有糖分和鹽分。再用75% (體積百分含量)的乙醇水溶液洗脫，接收洗脫液體積為柱體積的2倍。旋轉蒸發(fā)濃縮至一半體積，噴射干燥得
6.5Kg燕麥肽。二、燕麥肽的分子量分析
將步驟一獲得的燕麥肽進行相對分子量分布測定，采用HPLC法，測定色譜條件安捷侖高效液相色譜儀1100 ;色譜柱TSKgel2000 SffXL體積排阻色譜柱(300mmX7. 8mm);流動相:乙腈/冰醋酸/三氟乙酸:45/55/0. I (v/v/v);檢測UV 220nm ;流速:0. 5mL/min ;柱溫30°C。結果表明88%的多肽分子量在1500Da以下，是較好的ACE抑制肽源。
權利要求
1.一種燕麥肽的酶法提取方法，其特征在于以燕麥麩皮為原料米用酶法提取燕麥肽， 步驟如下(1)預處理將燕麥麩皮粉碎過60-100目篩,燕麥麩皮與水混合,燕麥麩皮水的重量比為I : 10-1 20，調(diào)節(jié)pH為8-9. 5，在溫度為50-60°C條件下，進行攪拌預處理，預處理時間為30-50min ；(2)酶處理在經(jīng)過步驟(I)預處理后的液體中加入堿性蛋白酶，堿性蛋白酶的添加量為20-50mL/kg燕麥麩皮，在45-55 °C下攪拌處理2_5小時；然后，加入風味蛋白酶，風味蛋白酶的添加量為50-70mL/Kg燕麥麩皮，在50_60°C下攪拌處理1-2小時；(3)純化將步驟(2)酶處理后的液體離心取上清液，在上清液中加入β-葡聚糖酶，真菌淀粉酶反應2-4小時，β -葡聚糖酶的用量為30-50mL/Kg燕麥麩皮，真菌淀粉酶的用量為60-80mL/Kg燕麥麩皮，過濾得到澄清液體；將所述澄清液體加入到以CBE313ADS17大孔吸附樹脂為填料的吸附柱中，然后用去離子水沖洗至洗脫液中沒有糖分和鹽分，最后用體積濃度60%-75%乙醇溶液洗脫，得到含燕麥肽的溶液；(4)制干粉將含燕麥肽溶液旋轉蒸發(fā)濃縮至一半體積，噴射干燥得到燕麥肽干粉。
2.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(2)中，所述堿性蛋白酶的添加量優(yōu)選為40mL/Kg燕麥麩皮；所述風味蛋白酶的添加量優(yōu)選為60mL/Kg燕麥麩皮。
3.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中，所述過濾得到澄清液體， 過濾的濾徑為O. 5-0. 8 μ m。
4.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中，所述澄清液體優(yōu)選按照 CBE313ADS17大孔吸附樹脂的2倍體積加入到吸附柱中；所述乙醇溶液洗脫的體積優(yōu)選為吸附柱體積的2倍。
5.用權利要求I所述方法制備的燕麥肽的應用，其特征在于其在制備抑制ACE活性和降血壓的食品或藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種燕麥肽的酶法提取方法，屬于酶法提取燕麥肽技術領域。該燕麥肽的制備方法，包括如下步驟(1)將燕麥麩皮與水混合，調(diào)節(jié)pH為8.0-9.5，在溫度為50-60℃條件下攪拌預處理；(2)在預處理后的液體中加入堿性蛋白酶，在45-55℃下攪拌處理2-5小時；然后，加入風味蛋白酶，在50-60℃下攪拌處理1-2小時；(3)將酶解后的液體離心取上清液，在上清液中加入β-葡聚糖酶和真菌淀粉酶反應2-4小時，過濾得到澄清液體；將澄清液體用大孔吸附樹脂吸附純化得到含燕麥肽的溶液。該燕麥肽具有抑制ACE酶的活性，可以廣泛應用于降壓保健食品等領域。本發(fā)明方法操作簡單，具有較高的純度和得率。
文檔編號C12P21/06GK102605030SQ201210077339
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月22日 優(yōu)先權日2012年3月22日
發(fā)明者鄒聯(lián), 郁磊, 陶丁偉 申請人:無錫德冠生物科技有限公司