專利名稱：一種人mmp-14抗原、相應(yīng)單克隆抗體及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ー種人MMP-14抗原、相應(yīng)單克隆抗體及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix ECM)對(duì)維持細(xì)胞生長(zhǎng)分化所需要的環(huán)境起著重要作用。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)是ー個(gè)蛋白超家族,其依賴鋅離子而發(fā)揮降解細(xì)胞外基質(zhì)作用。在1962年Jerome Gross和Charles Lapiere在觀察蝌抖尾巴脫變過程中發(fā)現(xiàn)有一種酶能降解膠原酶，所以他們就把這種酶命名為膠原酶也就是MMP-1。目前在脊椎動(dòng)物共 發(fā)現(xiàn)24種不同的基質(zhì)金屬蛋白酶，其中23種在人體中存在?；|(zhì)金屬蛋白酶家族成員具有相似的結(jié)構(gòu)，一般由5個(gè)功能不同的結(jié)構(gòu)域組成前肽區(qū)，催化域，鉸鏈區(qū)，類血紅素結(jié)合蛋白區(qū)。(I)疏水信號(hào)肽序列，主要作用是保持酶原的穩(wěn)定。當(dāng)該區(qū)域被外源性酶切斷后，MMPs酶原被激活；(3)催化活性區(qū)，有鋅離子結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)酶催化作用的發(fā)揮至關(guān)重要；(4)富含脯氨酸的鉸鏈區(qū)；(5)羧基末端區(qū)，與酶的底物特異性有夫。其中酶催化活性區(qū)和前肽區(qū)具有高度保守性。MMPs成員上述結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上各有特點(diǎn)。各種MMP間具有一定的底物特異性，但不是絕對(duì)的。同一種MMP可降解多種細(xì)胞外基質(zhì)成份，而某一種細(xì)胞外基質(zhì)成分又可被多種MMP降解，但不同酶的降解效率可不同?；|(zhì)金屬蛋白酶幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)中的各種蛋白成分，破壞腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵性作用，被認(rèn)為是該過程中主要的蛋白水解酶。其中MMP-14是與腫瘤侵襲關(guān)系最密切的酶，而且是在該蛋白酶家族中最具腫瘤特異性的蛋白。MMP-14也稱膜型基質(zhì)金屬蛋白酶I (MT1-MMP)，不但高表達(dá)于腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞上，還高表達(dá)于腫瘤細(xì)胞和腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞上，具有以下特點(diǎn)
(1)MMP-14在多種腫瘤組織中高表達(dá)如乳腺癌，小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、食管癌、頭頸部腫瘤等，而在正常組織幾乎不表達(dá)；
(2)MMP-14與腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)MMP-14不僅可直接降解細(xì)胞外基質(zhì)，而且可以通過切割MMP-2前體而激活MMP-2，活化的MMP-2是降解IV型膠原的主要酶，在腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移灶的形成以及瘤組織內(nèi)新生血管的形成中均起重要作用；
(3)MMP-14促進(jìn)腫瘤血管新生MMP-14通過上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子bFGF，以及通過與整合素aVi3 3共同發(fā)揮作用，促進(jìn)腫瘤血管生成。(4)臨床證實(shí)MMP-14與腫瘤的預(yù)后和轉(zhuǎn)移相關(guān)如在乳腺癌患者中，MMP-14的表達(dá)水平越高，預(yù)后越差、腫瘤體積越大，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移易常見。所以，以MMP-14作為腫瘤治療的靶分子，也具有適用于大多數(shù)實(shí)體腫瘤的通用性。綜上所述，由于MMP-14在多種腫瘤組織中高表達(dá)并與腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)等原因，開展對(duì)MMP-14的體外檢測(cè)對(duì)腫瘤的診斷及治療具有重要意義，MMP-14的單克隆抗原及抗體的成功研制對(duì)實(shí)現(xiàn)MMP-14的快速、準(zhǔn)確、特異性的檢測(cè)具有決定性的作用。目前，尚未見相關(guān)MMP-14的單克隆抗原及抗體等的技術(shù)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供ー種人MMP-14抗原、相應(yīng)雜交瘤細(xì)胞株及其單克隆抗體和應(yīng)用。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的
ー種人MMP-14抗原，氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示(氨基酸序列簡(jiǎn)寫為REVPYAYIREGHEKQA)。、一株雜交瘤細(xì)胞株92F11A，是由上述人MMP-14多肽制備得到的，于2011年8月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(地址北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所)，保藏編號(hào)CGMCC No. 5080。上述雜交瘤細(xì)胞株92F11A的制備方法，步驟如下
(1)用人MMP-14抗原與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)作為抗原免疫小鼠；
(2)取免疫后小鼠的脾臟細(xì)胞,與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行細(xì)胞融合；
(3)融合細(xì)胞用ELISA法篩選陽性克隆，得到雜交瘤細(xì)胞株92F11A。ー種人MMP-14單克隆抗體，是由所述雜交瘤細(xì)胞株92F11A分泌所得的，能特異結(jié)合SEQ ID NO: I所示的抗原多肽，其抗體亞型為IgM型。上述人MMP-14單克隆抗體在制備人MMP-14特異性檢測(cè)試劑中的應(yīng)用，如可以用于ELISA、Western Blot、免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光檢測(cè)等方法中。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果
本發(fā)明填補(bǔ)了人MMP-14檢測(cè)技術(shù)的不足，提供ー種人MMP-14單克隆抗原和抗體，可以應(yīng)用于人MMP-14特異性檢測(cè)，明顯降低MMP-14的檢測(cè)成本，應(yīng)用前景廣闊。保藏信息雜交瘤細(xì)胞92F11A株，2011年8月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號(hào)CGMCC No. 5080。


圖I.抗原表位設(shè)計(jì)分析結(jié)果圖，第一組峰圖是氨基酸親水性預(yù)測(cè)，第二組有色坐標(biāo)為氨基酸弾性序列預(yù)測(cè)，第三組峰圖為抗原表位預(yù)測(cè)序列，第四組峰圖是序列是否處于結(jié)構(gòu)表面的預(yù)測(cè)結(jié)果，最下面圈住的序列為本發(fā)明設(shè)計(jì)的抗原多肽。圖2. HPLC檢測(cè)抗原多肽純度結(jié)果示意圖。圖3.抗原多肽質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果示意圖。圖4.小鼠三次免疫后血清抗體濃度。圖5. Western blot檢測(cè)92F11A所分泌抗體的特異性。圖6. 92F11A雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體檢測(cè)HT1080細(xì)胞中MMP-14的表達(dá)情況，左圖為FITC熒光信號(hào)的檢測(cè)情況，中圖為DAPI細(xì)胞核染色，右圖是前面兩張圖的合成。圖7. 92F11A雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體檢測(cè)和MCF-7細(xì)胞中MMP-14的表達(dá)情況，左圖為FITC熒光信號(hào)的檢測(cè)情況，中圖為DAPI細(xì)胞核染色，右圖是前面兩張圖的合成。
圖8. 92F11A所分泌抗體用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HT1080細(xì)胞株MMP-14表達(dá)情況。圖9. 92F11A所分泌抗體用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MCF-7中MMP-14表達(dá)情況。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I抗原設(shè)計(jì)與合成
使用DNAStar軟件里面的Protean組件對(duì)MMP-14進(jìn)行抗原表位分析(GenBank:AAV40837. 1)，結(jié)果見附圖1，其中第一組峰圖是氨基酸親水性預(yù)測(cè)，零坐標(biāo)軸上方為親水性序列，下方則為疏水性序列。第二組黑色坐標(biāo)為氨基酸弾性序列預(yù)測(cè)。第三組峰圖為抗原表位預(yù)測(cè)序列，零坐標(biāo)軸上方為可能的抗原表位，下方則是非抗原表位。第四組峰圖是預(yù)測(cè)序列是否處于結(jié)構(gòu)表面，默認(rèn)的坐標(biāo)軸為1，位于坐標(biāo)軸上方則是處于結(jié)構(gòu)表面，坐標(biāo)軸上方則不在結(jié)構(gòu)表面。
附圖I中黑色高亮部分是選取的氨基酸序列，如SEQ ID NO: I。從圖上可以看到所選的氨基酸序列符合親水性、具有弾性和處于結(jié)構(gòu)表面等抗原設(shè)計(jì)的基本原則。SEQ ID NO: I的抗原合成使用常規(guī)化學(xué)方法或生物學(xué)方法。實(shí)施例2人MMP-14單克隆抗體的制備
(I)動(dòng)物免疫
以多肽-血藍(lán)蛋白(Keyhole limpet hemocyanin KLH)偶聯(lián)作為抗原,免疫8周齡
雌性Balb/c小鼠(中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，共免疫4次。第一次免疫，將實(shí)施例I制備的多肽抗原配制成200 Pg/mL的溶液,用等體積弗氏完全佐劑(Sigma-Aldrich)充分將多肽抗原乳化，總量為lmL。在小鼠頸背皮下多點(diǎn)注射，O. 2mL/點(diǎn)。第二次和第三次免疫等量弗氏不完全佐劑乳化多肽抗原，第四次直接腹腔注射多肽抗原，毎次免疫間隔2周，第四次在融合前3天進(jìn)行。(2)細(xì)胞融合
用未免疫的雌性Balb/c小鼠脾臟細(xì)胞作為飼養(yǎng)細(xì)胞。具體操作是在融合前一天，取一只實(shí)驗(yàn)用的5周齡的Balb/c雌性小鼠，頸椎脫臼致死，75%(V/V)酒精浸泡消毒5 min，移入超凈工作臺(tái)，鑷子提起小鼠腹部表皮，無菌剪開腹部表皮，剪刀鈍性剝離使腹膜充分暴露。用鑷子取出脾臟，過細(xì)胞篩，去除紅細(xì)胞。計(jì)數(shù)融合前一個(gè)星期左右復(fù)蘇SP2/0細(xì)胞(骨髄瘤細(xì)胞購自中科院上海細(xì)胞庫)，用添加了 2(^g/mL 8-氮鳥嘌呤的完全培養(yǎng)液進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，防止HGPRT酶缺失回復(fù)突變。融合當(dāng)天，用滴管將細(xì)胞從瓶壁瘤輕輕吹下，收集于50mL離心管或融合管內(nèi)。IOOOrpm離心5 IOmin,棄去上清。加入30mL不完全培養(yǎng)基,離心洗滌一次。然后將細(xì)胞重懸浮于IOmL不完全培養(yǎng)基，混勻。取骨髓瘤細(xì)胞懸液，加O. 4% (ff/W)臺(tái)盼藍(lán)染液作活細(xì)胞計(jì)數(shù)后備用。細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，取細(xì)胞懸液O. 5mL加入O. 5mL臺(tái)盼藍(lán)染液中，混勻，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。計(jì)算細(xì)胞數(shù)目的公式為每毫升細(xì)胞數(shù)=4個(gè)大方格細(xì)胞數(shù) X104/4。取步驟(I)已經(jīng)免疫的BALB/c小鼠，摘除眼球采血，并分離血清作為抗體檢測(cè)時(shí)的陽性對(duì)照血清。同時(shí)通過頸脫位致死小鼠，浸泡于75%酒精中5分鐘，于解剖臺(tái)板上固定后掀開右側(cè)腹部皮膚，可看到脾臟，換眼科剪鑷，在超凈臺(tái)中用無菌手術(shù)剪剪開腹膜，取出脾臟，去除脂肪和結(jié)締組織，用無血清培養(yǎng)液沖洗。將脾臟移入盛有2mL無血清培養(yǎng)液的平皿中，用滅菌剪刀將脾臟充分剪碎，置于200目不銹鋼網(wǎng)上，用注射器內(nèi)芯輕擠壓脾臟，使脾細(xì)胞進(jìn)入平皿中的不完全培養(yǎng)基。用吸管吹打數(shù)次，制成單細(xì)胞懸液，置于50mL離心管中，使用低滲透法去除紅細(xì)胞，將單細(xì)胞懸液1500r/min離心5分鐘,棄去上清液。加入2mL滅菌水,作用IOs左右，再加入2mL濃度為1.8%(W/V)生理鹽水。1500r/min離心5分鐘，棄去上清液。用無血清培養(yǎng)液離心洗滌3次，然后將細(xì)胞重懸于IOmL不完全培養(yǎng)基混勻，取上述懸液，加臺(tái)酚藍(lán)染液作活細(xì)胞計(jì)數(shù)后備用。將50%PEG(聚こニ醇)置于37°C水浴中預(yù)熱，取免疫鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0按細(xì)胞數(shù)量5:1混合，加入50mL離心管內(nèi)，1500 rpm離心5min，棄上清，手掌輕擊管底，使兩種細(xì)胞充分混勻，直至成糊狀；吸取預(yù)熱的PEG溶液lmL，Imin內(nèi)緩慢滴入，邊滴邊轉(zhuǎn)動(dòng)離心管，靜止作用lmin，2min內(nèi)滴入預(yù)熱的基礎(chǔ)培養(yǎng)基10mL，邊滴邊轉(zhuǎn)動(dòng)離心管，輕輕攪動(dòng)離心管使PEG徹底稀釋而失去融合作用。1000 rpm離心5min，棄上清，用HAT選擇培養(yǎng)液輕懸細(xì)胞沉淀，混合均勻，移液器分裝到已鋪有飼養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100 μ L，至37°C、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(3)雜交瘤細(xì)胞株的篩選
將融合后的細(xì)胞第3天采用半換液方式更換HAT完全培養(yǎng)基，一周后融合細(xì)胞布滿底部1/3左右開始用ELISA法篩選陽性克隆，以SP2/0細(xì)胞培養(yǎng)上清液作陰性對(duì)照，免疫小鼠陽性血清做陽性對(duì)照，兩周后用HT完全培養(yǎng)基換出HAT完全培養(yǎng)基。用ELISA發(fā)篩選出陽性克隆細(xì)胞孔，具體做法是當(dāng)檢測(cè)孔的OD值大于陰性對(duì)照孔OD值的2. I倍時(shí)，將此空定義為陽性孔，并將此空細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新96孔板中，一周后觀察細(xì)胞群，檢測(cè)只有一個(gè)細(xì)胞群的孔，如為陽性孔，則再次重復(fù)上述操作2次，最后得到由單ー細(xì)胞形成的單克隆抗體細(xì)胞株，并命名為92F11A。實(shí)施例3小鼠免疫后血清抗體效價(jià)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
取4只8周齡SPF級(jí)Balb/C雌性小鼠，在免疫前對(duì)所有小鼠進(jìn)行斷尾采血，置于室溫
I 2h，待血清充分析出時(shí)離心分離血清，4°C保存?zhèn)溆米鳛殛幮詫?duì)照，以檢測(cè)抗原免疫效果，當(dāng)達(dá)到符合要求的效價(jià)后可做下一歩操作。另取4只8周齡雌性Balb/c小鼠，按實(shí)施例2中步驟(I)方法免疫，第三次免疫后第10天(d)再次采血，檢測(cè)血清中抗體效價(jià)。用合成抗原(SEQ ID NO: I所示多肽)以lPg/mL包被Elisa板,4で過夜；第二天，棄去ELISA板中液體，多道移液器加入洗滌液200μ 7孔，室溫下輕微搖動(dòng)3min，棄洗滌液，吸水紙拍干，重復(fù)洗滌3次；加O. 1%明膠封閉液200μ 7孔，37°C封閉30min，洗滌3次，吸水紙拍干；陰、陽性血清用稀釋液作 1:1000、1:2000,1:4000,1:8000、1:16000、1:32000、1:64000稀釋，加入相應(yīng)孔中，IOOPL/孔，設(shè)空白對(duì)照，37°C溫育60min，溫育后洗滌液洗滌3次，吸水紙拍干；加入羊抗小鼠IgG-HRP (鼎國生物)(1:5000稀釋￥八)，10(^17孔，37で溫育60min，溫育后洗滌液洗滌3次，吸水紙拍干；加底物溶液OPD (鄰苯ニ胺)，ΙΟΟμΙ/孔，室溫溫育15min，2M H2SO4終止液終止反應(yīng)，ΙΟΟμΙ/孔，Imin內(nèi)在酶標(biāo)儀上讀取0D490nm吸光值。以陽性血清孔的OD值接近I. O, P/N>2. I的孔為陽性孔。圖4顯示了小鼠三次免疫后血清抗體濃度。實(shí)施例4單克隆抗體在western blot法檢測(cè)MMP-14表達(dá)方面的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)
用三去污裂解液提取HT1080 (購于ATCC)細(xì)胞和MCF-7 (購于ATCC)細(xì)胞總蛋白，按每孔2(^g的蛋白量進(jìn)行SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜封閉后加入92F11A的培養(yǎng)上清，室溫孵育lh，洗滌，然后加入HRP標(biāo)記抗鼠的ニ抗(購于鼎國生物)，室溫孵育lh，洗滌，用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HT1080細(xì)胞中MMP-14的表達(dá)。具體實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果見附圖2和附圖3所示。其中附圖5是以92F11A雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清作為ー抗檢測(cè)MMP-14的表達(dá)，第一泳道為MCF-7全細(xì)胞裂解液，第二泳道為HT1080全細(xì)胞裂解液。從附圖5中可以看到所述92F11A細(xì)胞株所分泌的單克隆抗體可以檢測(cè)到HT1080細(xì)胞中大小約為64kd的MMP-14特異性條帶，而陰性對(duì)照MCF-7全胞沒有條帶。實(shí)施例5單克隆抗體在免疫熒光檢測(cè)方面的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)
HT1080細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞制備細(xì)胞爬片，取出玻片，PBS洗3次；4%多聚甲醛固定30min ；PBS洗3次；滴加正常山羊血清封閉I小時(shí)，甩去多余液體，滴加實(shí)施例2中92F11A細(xì)胞株所分泌的單克隆抗體，室溫孵育I小時(shí)；PBS洗3次；加FITC標(biāo)記羊抗小鼠ニ抗(購于英偉創(chuàng)津)，室溫孵育I小時(shí)；PBS洗3次；滴加200 μ I DAPI，避光孵育5min，PBS洗3次各5 min;用甘油封片，在共聚焦顯微鏡下觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見附圖6 7所示。其中，附圖6·和附圖7是92F11A雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清分別檢測(cè)HT1080和MCF-7細(xì)胞中MMP-14的表達(dá)情況，左圖為FITC熒光信號(hào)的檢測(cè)情況，中圖為DAPI細(xì)胞核染色，右圖是前面兩張圖的合成。實(shí)施例6流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)抗體特異性
制備單細(xì)胞懸液使用HT1080和MCF-7細(xì)胞，于細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期內(nèi)，用胰酶消化好細(xì)胞，充分吹打，使之成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后稀釋分裝于I. 5 mL EP管中每管細(xì)胞數(shù)約為106，HT1080和MCF-7細(xì)胞各分3管，分別標(biāo)記為空白對(duì)照組、不加一抗對(duì)照組和加ー抗ニ抗對(duì)照組。加ー抗在加一抗ニ抗對(duì)照組中，按1:25加入92F1IA細(xì)胞株所分泌的單克隆抗體，于冰上孵育I h。然后用4000 rpm離心I min,去上清,加PBS輕輕重懸,重復(fù)3次。加熒光二抗在加ー抗ニ抗對(duì)照組和不加ー抗對(duì)照組中，按1:50加FITC羊抗小鼠IgM,于冰上避光孵育I h。然后用4000 rpm離心I min,去上清,加PBS輕輕重懸,重復(fù)3次后，姆管加O. 5 mL PBS使細(xì)胞重懸。上機(jī)檢測(cè)。上機(jī)檢測(cè)先檢測(cè)MCF-7細(xì)胞組中空白對(duì)照，并以此確定流式細(xì)胞儀中FS和SS值，再檢測(cè)MCF-7細(xì)胞組中不加ー抗對(duì)照，最后檢測(cè)MCF-7細(xì)胞組中加ー抗ニ抗對(duì)照，同理，HT1080細(xì)胞組也按照相同的順序進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果見圖8和圖9，檢測(cè)結(jié)果表明HT1080細(xì)胞組中添加一抗ニ抗細(xì)胞群中FITC值明顯升高，而對(duì)照組的值基本都相同，說明92F11A細(xì)胞株所分泌的單克隆抗體用于流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，并且具備較高的特異性。
權(quán)利要求
1.ー種人MMP-14抗原，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示。
2.雜交瘤細(xì)胞株92F11A，其特征在于由權(quán)利要求I所述人MMP-14多肽制備得到，于.2011年8月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)CGMCCNo.5080。
3.權(quán)利要求2所述雜交瘤細(xì)胞株92F11A的制備方法，其特征在于步驟如下 (1)權(quán)利要求I所述人MMP-14抗原與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)作為抗原免疫小鼠； (2)取免疫后小鼠的脾臟細(xì)胞,與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行細(xì)胞融合； (3)融合細(xì)胞用ELISA法篩選陽性克隆，得到雜交瘤細(xì)胞株92F11A。
4.ー種人MMP-14單克隆抗體，其特征在于由權(quán)利要求2所述雜交瘤細(xì)胞株92F11A分泌所得。
5.權(quán)利要求4所述人MMP-14單克隆抗體在制備人MMP-14特異性檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人MMP-14抗原、相應(yīng)單克隆抗體及其應(yīng)用。本發(fā)明的人MMP-14抗原氨基酸序列為REVPYAYIREGHEKQA，用該抗原制備得到一株雜交瘤細(xì)胞株92F11A，保藏編號(hào)為CGMCCNo.5080，能分泌與人MMP-14抗原特異性結(jié)合的單克隆抗體，該人MMP-14單克隆抗體特異性好，靈敏度高，可用于制備人MMP-14特異性檢測(cè)試劑，在Elisa、WesternBlot、免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光等檢測(cè)方法中廣泛使用。
文檔編號(hào)C12N5/20GK102718840SQ20121008381
公開日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2012年8月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月6日
發(fā)明者張革, 李翰, 杜軍, 蔡紹暉 申請(qǐng)人:中山大學(xué)