專利名稱：哈克尼西棉不育胞質(zhì)棉花恢復(fù)系的分子鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ー種棉花恢復(fù)系純度鑒定和分子標(biāo)記輔助育種的分子鑒定方法。
背景技術(shù)：
雜種優(yōu)勢(shì)的研究和利用對(duì)提高棉花的產(chǎn)量、改進(jìn)品質(zhì)、提高抗性具有顯著效果。目前，我國(guó)育苗移栽地區(qū)的大部分棉農(nóng)都已經(jīng)栽種雜交棉；而且黃河流域棉區(qū)，甚至新疆等直播棉區(qū)也正在大力發(fā)展雜交棉。然而，棉花雜交種子的生產(chǎn)方式主要是人工去雄輔助授粉雜交制種法(占90%以上)。隨著棉花主要生產(chǎn)區(qū)及其周邊地區(qū)勞動(dòng)カ成本逐年提高，種子生產(chǎn)成本已經(jīng)越來越高，從而大大限制了雜交棉的進(jìn)ー步大規(guī)模推廣利用。與人工去雄輔助授粉雜交制種方式相比，利用“三系法”進(jìn)行制種具有程序簡(jiǎn)便，成本僅為人工去雄雜交的30-40%，種子純度高，適合大面積制種等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。因而，三系雜交棉花的大面積推廣，對(duì)于提高植棉效益，増加棉農(nóng)收益，穩(wěn)定棉花種植面積都具有重要的意義。目前，以哈克尼西棉細(xì)胞質(zhì)雄性不育材料為基礎(chǔ)的三系配套材料已經(jīng)在我國(guó)得到成功應(yīng)用，并已經(jīng)在生產(chǎn)上開始應(yīng)用。但是，與人工制種相比，可用的親本資源仍然很少，特別是具有強(qiáng)恢復(fù)力的優(yōu)良恢復(fù)系材料仍然是三系雜交棉選育的主要限制因素。因此，在三系雜交棉選育過程中，具有強(qiáng)恢復(fù)力的優(yōu)良恢復(fù)系選育和改良一直是研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。而采用常規(guī)育種技術(shù)選育和改良新恢復(fù)系材料需要年限長(zhǎng)，且每年轉(zhuǎn)育后都需要進(jìn)行大量的田間測(cè)交和鑒定工作，以確?；謴?fù)基因在轉(zhuǎn)育和改良過程中沒有丟失，從而需要耗費(fèi)大量的棉田、人力和財(cái)力。因此，通過分子標(biāo)記輔助選擇如何穩(wěn)定可靠又快速簡(jiǎn)便的進(jìn)行恢復(fù)系選育和改良成為本發(fā)明的關(guān)鍵核心。分子標(biāo)記直接從DNA水平反映出核苷酸序列的差異，它不受發(fā)育階段、環(huán)境因素以及基因是否表達(dá)的影響，具有數(shù)量非常豐富，遺傳穩(wěn)定等特點(diǎn)。目前，隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，分子標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)發(fā)展出幾十種技術(shù)可用于分子標(biāo)記的篩選，比較常用的有RFLP、RAPD、ISSR、SSR、SCAR、STS、AFLP和SNP等，隨著分子標(biāo)記技術(shù)的不斷發(fā)展和應(yīng)用，目前，國(guó)內(nèi)外已經(jīng)越來越多的將各種分子標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用在作物育種材料的分子標(biāo)記輔助選擇育種中。SSR(simple sequence repeat)也稱為微衛(wèi)星,是由基因組中1-6個(gè)核苷酸組成的基本単位重復(fù)多次構(gòu)成的一段DNA。在所有真核生物基因組中均存在并且含量非常豐富，不僅存在于內(nèi)含子中，也可以存在于編碼區(qū)以及染色體的其它任何區(qū)域，具有多態(tài)性豐富、穩(wěn)定性好、位點(diǎn)專ー性、共顯性等特點(diǎn)。該方法對(duì)于目的基因具有很好的輔助選擇效果，已成為分子標(biāo)記在育種實(shí)踐中直接應(yīng)用的首選方法。在棉花中目前已開發(fā)的SSR引物已經(jīng)超過一萬對(duì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)中含哈克尼西棉細(xì)胞質(zhì)雄性不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系選育田間鑒定檢測(cè)方法所需時(shí)間長(zhǎng)，消耗大、準(zhǔn)確性差等的問題，提供ー種含哈克尼西棉不育胞質(zhì)棉花恢復(fù)系的分子鑒定方法，從而可以加快恢復(fù)系選育和改良進(jìn)程，同時(shí)保證恢復(fù)系種子純度。為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明以含恢復(fù)基因的近等基因系群體和F2群體為材料，通過對(duì)7256對(duì)SSR引物的篩選，從中篩選到得到兩對(duì)可以用于檢測(cè)恢復(fù)基因及位點(diǎn)是否純合的SSR引物C0T010 引物對(duì)正向引物5，-TCACGCTTATACCTACAATGC-3，(SEQ ID No. I)反向引物5’ -TTGGGATGAGGCTGAAC-3’ (SEQ ID No. 2)
CGR5340 引物對(duì)正向引物5’ -GGTGAACCAGTCGGAGATTT-3’ (SEQ ID No. 3)反向引物5’ -AGGCCACCGATCTTCACTC-3’ (SEQ ID No. 4)本發(fā)明還提供用于鑒定含哈克尼西棉不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系的SSR標(biāo)記，其為用SEQ ID No. I和2所示的引物擴(kuò)增出的250bp處的特異性條帶和/或SEQ ID No. 3和4所示的引物擴(kuò)增出的370bp處的特異性條帶。本發(fā)明的另ー個(gè)目的在于提供用所述的標(biāo)記或引物在鑒定棉花恢復(fù)系純度或新恢復(fù)系選育中的應(yīng)用。本發(fā)明的還ー個(gè)目的在于提供用所述的標(biāo)記或引物在鑒定含哈克尼西棉不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系中的應(yīng)用。在本發(fā)明ー個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，用所述的SSR引物擴(kuò)增待測(cè)棉花樣本的基因組DNA，篩選出與恢復(fù)系具有相同特異性條帶或帶型的棉花樣本；用上述SSR標(biāo)記的引物擴(kuò)增步驟I)篩選出的具特異性條帶的棉花樣本的基因組DNA，能擴(kuò)增出與恢復(fù)系具有相同特異性條帶的即為含哈克尼西棉不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系材料。本發(fā)明采用SSR標(biāo)記對(duì)含哈克尼西棉細(xì)胞質(zhì)雄性不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系材料進(jìn)行了分子水平的多態(tài)性檢測(cè)，從本研究的結(jié)果中可以看出，兩標(biāo)記鑒定的結(jié)果條帶清晰、穩(wěn)定、可靠，因此該方法非常適用于含哈克尼西棉細(xì)胞質(zhì)雄性不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系材料真實(shí)性的室內(nèi)鑒定和新恢復(fù)系材料的分子標(biāo)記輔助選育。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有益效果為I)速度快SSR標(biāo)記鑒定對(duì)輔助選育哈克尼西棉細(xì)胞質(zhì)雄性不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系選育和保證恢復(fù)系種子純度具有重要作用。棉花三系雜交種制種過程中，如果發(fā)生恢復(fù)系混雜將在雜交后代中產(chǎn)生不育棉株，從而對(duì)棉花產(chǎn)量造成重大影響，并嚴(yán)重影響棉農(nóng)受益。此外，常規(guī)恢復(fù)系的選育過程涉及大量的測(cè)交等試驗(yàn)，并且需要調(diào)查大量的外部性狀，需要投入大量的時(shí)間、人力和物力，且易受環(huán)境因素影響，因此，常規(guī)手段并不能完全準(zhǔn)確、真實(shí)地反映恢復(fù)系的遺傳情況。本發(fā)明只需提供棉花材料的種子或葉片，提取DNA后，用SSR引物對(duì)進(jìn)行分子標(biāo)記鑒定，利用相應(yīng)分子鑒定體系可以很快地鑒定出恢復(fù)系種子的真實(shí)性，同時(shí)利用本發(fā)明可以在恢復(fù)系分子標(biāo)記輔助選擇過程中可以有效跟蹤恢復(fù)基因的存在與否并通過共顯性帶型能很快鑒定恢復(fù)基因位點(diǎn)是否純合，從而極大加快恢復(fù)系選育和改良過程。2)準(zhǔn)確率高SSR標(biāo)記具有簡(jiǎn)單、穩(wěn)定可靠、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，很容易通過PCR快速擴(kuò)增和聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)。本發(fā)明利用兩對(duì)SSR引物對(duì)恢復(fù)系進(jìn)行鑒定，増加了鑒定的可靠性，且分子鑒定不受環(huán)境因素的影響，真正從DNA水平上鑒定恢復(fù)系的遺傳情況，提高了準(zhǔn)確性。3)實(shí)用簡(jiǎn)單本發(fā)明鑒定哈克尼西棉細(xì)胞質(zhì)雄性不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系真實(shí)性和分子標(biāo)記輔助選擇育種的整個(gè)程序只是幾次機(jī)械式的加樣過程，易于操作，具有很好的商業(yè)化應(yīng)用前景。 總之，本發(fā)明提供的SSR標(biāo)記及其引物能夠快速鑒定哈克尼西棉細(xì)胞質(zhì)雄性不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系，其鑒定方法簡(jiǎn)單實(shí)用，其鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，所以本發(fā)明提供的SSR標(biāo)記及其引物能夠快速有效的輔助棉花育種，對(duì)推動(dòng)育種進(jìn)程起了決定性的作用。


圖I為本發(fā)明棉花細(xì)胞質(zhì)雄性不育恢復(fù)系和其它常規(guī)親本SSR分析。其中，M marker, 1-6分別為恢復(fù)系中恢46，恢復(fù)系中恢80，常規(guī)棉品種中棉所12、中棉所41、中棉所45和中棉所69。其中兩個(gè)恢復(fù)系親本以marker為標(biāo)準(zhǔn)的250bp(A，以C0T010引物對(duì)(SEQID No. I和2)進(jìn)行擴(kuò)增)和370bp (B,以CGR5340引物對(duì)(SEQ ID No. 3和4)進(jìn)行擴(kuò)增)位置能檢測(cè)到與恢復(fù)系相關(guān)的特異性條帶(圖中箭頭所示位置)。圖2為本發(fā)明以C0T010引物對(duì)對(duì)140份種子DNA進(jìn)行擴(kuò)增的結(jié)果。其中，圖2A，1-50，中恢 46 ;圖 2B, 51-100,中恢 80 ;圖 2C，101-110，中棉所 12 ;圖 2C，111-120，中棉所41 ;圖 2C，121-130，中棉所 45 ;圖 2C，131-140，中棉所 69。圖3為本發(fā)明以CGR5340引物對(duì)對(duì)140份種子DNA進(jìn)行擴(kuò)增的結(jié)果。其中，圖3A，1-50，中恢 46 ;圖 3B, 51-100,中恢 80 ;圖 3C，101-110，中棉所 12 ;圖 3C，111-120，中棉所41 ;圖 3C，121-130，中棉所 45 ;圖 3C，131-140，中棉所 69。圖4為本發(fā)明以CGR5340引物對(duì)對(duì)自交群體50粒種子的分析結(jié)果。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作進(jìn)ー步詳細(xì)描述。以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例I哈克尼西棉不育胞質(zhì)棉花恢復(fù)系的分子鑒定方法2. IDNA 提取含哈克尼西棉不育胞質(zhì)的恢復(fù)系中恢46(保藏號(hào)CGMCC5166)和中恢80(保藏號(hào)CGMCC5167)、常規(guī)棉品種中棉所12、中棉所41、中棉所45和中棉所69共6個(gè)材料的去殼，每粒種子單獨(dú)粉碎后轉(zhuǎn)入2ml的離心管中；加入1000 μ IDNA提取液(O. 05Μ Tris-Cl,O. 01MEDTA,2% SDS, I % PVP，O. 5 % 山梨醇，O. 705M NaCl，調(diào)整 pH 值為 8. O,高壓滅菌；使用前加入1% β -巰基こ醇，體系中的1^代表體積比)，漩渦混勻后，65°C水浴30min，間隔IOmin左右輕搖下；水浴結(jié)束后，加入800 μ I苯酚氯仿異戊醇(體積比25 : 24 : I)，上下顛倒混勻至不分層(動(dòng)作輕緩時(shí)間充分)，12000rpm離心IOmin ;吸取上清液(約800 μ I)轉(zhuǎn)移到另ー 2ml離心管中，加入2 μ IRNase酶(10mg/ml)，混勻后37°C水浴30min ；取出后加入1000 μ I的苯酚氯仿異戊醇(體積比25 24 I)，上下顛倒混勻至不分層(動(dòng)作輕緩時(shí)間充分)，12000rpm離心IOmin ;用剪ロ槍頭吸取上清液轉(zhuǎn)移(約700 μ I)到另ー 2ml離心管中，加入O. 7倍體積(5001)異丙醇緩慢搖動(dòng)幾次，靜置30min，絮狀DNA成團(tuán)析出；用剪口槍頭吸取DNA轉(zhuǎn)移至盛有70%乙醇的2ml硅化離心管中，浸泡兩次，每次十分鐘，無水乙醇浸泡過夜；倒掉乙醇，倒置管壁晾干后(約30min)，加入200 u IddH2O，溫室溶解2h，測(cè)定濃度后稀釋到25ng/iil，_20°C保存?zhèn)溆谩?. 2SSR標(biāo)記SSR :將上述 DNA 樣品 I ii I 與 I PCR 反應(yīng)液(10X PCR Bufferl. 0 y I，IOmM dNTPs 0. 2u l,25mM MgCL2O. 8 u I, IOmM SSR 引物對(duì)各 0. 5 y 1，2U/y I TaqDNA 聚合酶
0.2u I, ddH20 5. 8 u I)混合，進(jìn)行 PCR 反應(yīng)95°C 預(yù)變性 2min，94°C 變性 30sec，55°C 退火 45sec，72°C延伸 45sec，30 個(gè)循環(huán)；72°C延伸 10min，4°C保存。擴(kuò)增結(jié)束后，在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入2 U I溴酚藍(lán)混勻，加樣與6%的聚丙烯酰胺凝膠中，在IXTBE的電泳緩沖液中電泳檢測(cè)，電泳電壓為220伏，電流164毫安，時(shí)間50分鐘。電泳結(jié)束后采用銀染的方法進(jìn)行染色，具體步驟如下固定液(95%乙醇40ml+100% 乙酸2ml+358ml蒸餾水)中固定10分鐘；染色液(0. 6g硝酸銀+300ml蒸餾水)中染色12 分；用蒸懼水快速洗兩遍，在顯色液(6g氫氧化鈉+5ml甲醒+3ml 0. 2%硫代硫酸鈉(最后力口)+400ml蒸餾水)中顯色約5分鐘，直至條帶清晰為止；蒸餾水速洗兩遍，放入終止液(3g 碳酸鈉+400ml蒸餾水)中終止反應(yīng)。結(jié)果如圖I所示。2個(gè)恢復(fù)系親本和4個(gè)常規(guī)棉品種分別以C0T010引物對(duì)(SEQ ID No. I和2)和以CGR5340引物對(duì)(SEQ ID No. 3和4)進(jìn)行擴(kuò)增，兩對(duì)引物分別在250bp (C0T010)和370bp (CGR5340)位置有特征帶，其他不含恢復(fù)基因的材料不能擴(kuò)增得到相應(yīng)特征帶。實(shí)施例2恢復(fù)系種子純度鑒定利用篩選出的SSR引物對(duì)含哈克尼西棉不育胞質(zhì)的恢復(fù)系中恢46和中恢80各 100粒種子純度進(jìn)彳丁鑒定，以常規(guī)棉品種中棉所12、中棉所41、中棉所45和中棉所69各10 粒種子作為對(duì)照。分別以C0T010引物對(duì)(SEQ ID No. I和2)和CGR5340引物對(duì)(SEQ ID No. 3和4)對(duì)140份種子DNA進(jìn)行擴(kuò)增，其中COTO10弓丨物對(duì)能在以marker為標(biāo)準(zhǔn)的250bp位置處檢測(cè)到恢復(fù)系的特異性條帶(圖2A，1-50，中恢46 ;圖2B，51-100，中恢80)，不含恢復(fù)基因的中棉所12 (圖2C，101-110)、中棉所41 (圖2C，111-120)、中棉所45 (圖2C，121-130) 和中棉所69 (圖2C，131-140)親本材料在250bp位置處不能檢測(cè)到相應(yīng)特征帶。CGR5340 引物對(duì)能在以marker為標(biāo)準(zhǔn)的370bp位置處檢測(cè)到恢復(fù)系的特異性條帶(圖3A，1-50,中恢46 ;圖3B，51-100，中恢80)，不含恢復(fù)基因的中棉所12(圖3C，101-110)、中棉所41 (圖 3C, 111-120)、中棉所 45 (圖 3C, 121-130)和中棉所 69 (圖 3C, 131-140)親本材料在 370bp 位置處不能檢測(cè)到相應(yīng)特征帶實(shí)施例3恢復(fù)系選育分子鑒定 為了達(dá)到改良恢復(fù)系的目的，以含哈克尼西棉不育胞質(zhì)恢復(fù)基因的恢復(fù)系中恢46 為父本與具有優(yōu)異性狀的親本材料P5 (中棉所52母本)雜交，然后以P5作為回交親本進(jìn)行目標(biāo)性狀的改良(P5X中恢46) XP5)，并最終通過自交獲得恢復(fù)基因位點(diǎn)純合的改良恢復(fù)系。在這一過程中，為確?；謴?fù)基因不會(huì)丟失，從回交世代開始都需要與不育系進(jìn)行測(cè)交， 從而需要耗費(fèi)大量的人力和物力。在恢復(fù)系改良過程中，利用篩選出的SSR引物對(duì)含哈克尼西棉不育胞質(zhì)恢復(fù)基因的中恢46轉(zhuǎn)育群體材料((P5X中恢46) XP5)進(jìn)行分子鑒定。從回交群體中選擇以C0T010 引物對(duì)(SEQ ID No. I和2)能在以marker為標(biāo)準(zhǔn)的250bp位置處檢測(cè)到恢復(fù)系的特異性條帶和CGR5340引物對(duì)能(SEQ ID No. 3和4)在以marker為標(biāo)準(zhǔn)的370bp位置處檢測(cè)到恢復(fù)系的特異性條帶的單株，淘汰沒有目標(biāo)條帶的單株?；亟?代以上，然后選擇具有特異性條帶的單株自交，利用CGR5340引物對(duì)對(duì)自交群體50粒種子的分析，共得到3種不同帶型的單株(圖4)。其中恢復(fù)基因位點(diǎn)純合單株在以marker為標(biāo)準(zhǔn)的370bp位置處檢測(cè)到恢復(fù)系的特異性條帶等共4個(gè)條帯，恢復(fù)基因位點(diǎn)雜合單株在以marker為標(biāo)準(zhǔn)的370bp位置處檢測(cè)到恢復(fù)系的特異性條帶等共5個(gè)條帯，不含恢復(fù)基因的單株在在以marker為標(biāo)準(zhǔn)的370bp位置處不能檢測(cè)到恢復(fù)系的特異性條帶。為了驗(yàn)證標(biāo)記選擇的效果，對(duì)自交群體中分子標(biāo)記檢測(cè)到的3種單株類型，分別選取了 10個(gè)恢復(fù)基因純合單株、5個(gè)恢復(fù)基因雜合單株和5個(gè)不含恢復(fù)基因的單株與不育系進(jìn)行了測(cè)交，其中恢復(fù)基因純合單株共得到測(cè)交后代302株，恢復(fù)基因雜合單株共得到測(cè)交后代148株，不含恢復(fù)基因的單株共得到測(cè)交后代152株。測(cè)交后代育性調(diào)查結(jié)果表明，恢復(fù)基因純合單株的302株測(cè)交后代中，有2株不育株(其產(chǎn)生的原因可能是棉花為常異花授粉植物，因此，在測(cè)交過程中可能發(fā)生不含恢復(fù)基因的花粉竄粉等現(xiàn)象)；在148株恢復(fù)基因雜合單株的測(cè)交后代中有78株可育株，70株不育株，符合I : I的分離比例；而不含恢復(fù)基因的單株的152株測(cè)交后代全部不育。
雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作ー些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍
權(quán)利要求
1.用于鑒定含哈克尼西棉不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系的SSR標(biāo)記的引物，其為核苷酸序列如SEQ ID No. I和2所示的引物和/或SEQ ID No. 3和4所示的引物。
2.用于鑒定含哈克尼西棉不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系的SSR標(biāo)記，其為用SEQID No. I和2所示的引物擴(kuò)增出的250bp處的特異性條帶和/或SEQ ID No. 3和4所示的引物擴(kuò)增出的370bp處的特異性條帶。
3.權(quán)利要求I所述的引物或權(quán)利要求2所述的標(biāo)記在鑒定棉花恢復(fù)系純度或新恢復(fù)系選育中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求I所述的引物或權(quán)利要求2所述的標(biāo)記在鑒定含哈克尼西棉不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系中的應(yīng)用。
5.一種鑒定含哈克尼西棉不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系的方法，其包括 1)用權(quán)利要求I所述的引物擴(kuò)增待測(cè)棉花樣本的基因組DNA，篩選出與恢復(fù)系具有相同特異性條帶的棉花樣本； 2)用權(quán)利要求2所述的SSR標(biāo)記的引物擴(kuò)增步驟I)篩選出的具特異性條帶的棉花樣本的基因組DNA，能擴(kuò)增出與恢復(fù)系具有相同特異性條帶的即為含哈克尼西棉不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系材料。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及棉花恢復(fù)系純度的分子鑒定方法，具體提供了用于鑒定含哈克尼西棉不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系的SSR標(biāo)記的引物，其為核苷酸序列如SEQ ID No.1和2所示的引物和/或SEQ ID No.3和4所示的引物。本發(fā)明采用SSR標(biāo)記對(duì)含哈克尼西棉細(xì)胞質(zhì)雄性不育胞質(zhì)的棉花恢復(fù)系材料進(jìn)行了分子水平的多態(tài)性檢測(cè)。該方法鑒定速度快、準(zhǔn)確率高、操作簡(jiǎn)單，非常適用于棉花恢復(fù)系的室內(nèi)鑒定和分子標(biāo)記輔助選擇育種。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102618647SQ20121009277
公開日2012年8月1日 申請(qǐng)日期2012年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月31日
發(fā)明者吳建勇, 戚廷香, 邢朝柱, 郭立平 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所