專利名稱：樣品盛裝裝置的制作方法
技術(shù)領域：
本申請涉及樣品盛裝裝置。
背景技術(shù)：
最可能數(shù)(MPN)是估計測試樣品中活微生物的群體密度的方法。其基于將概率論應用于觀察到正增長的數(shù)量，來估測系列稀釋后進行培養(yǎng)的樣品于一定數(shù)量的多管培養(yǎng)基管中的樣品接種體。培養(yǎng)之后的正增長反應可以用如下觀察結(jié)果來表示，如發(fā)酵管中的氣體產(chǎn)生、液體培養(yǎng)管中的可見混濁度、液體的顏色改變或者在紫外光下觀察時的熒光反應等，這取決于所用的培養(yǎng)基的類型。一般來說，利用不同體積的幾個不同的樣品盛載容器來進行MPN的測試。例如，當對MPN實施15管系列稀釋法時，十五個管均需要充滿樣品液流。制備系列稀釋物并分裝多個單獨的容器，非常耗 費時間，并增加了污染機會、操作錯誤以及陽性樣品外溢污染的風險?，F(xiàn)有如樣品測試袋的裝置，其允許使用者僅填充一個容器。然而，這些裝置是特殊化的并且需要額外的設備。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的實施方式涉及微生物計數(shù)裝置，其根據(jù)標準方法中的MPN指標和95 %置信度而設計。該裝置能夠與試劑一起使用，可以對水樣品中總大腸菌群和大腸埃希氏菌(E.coli)進行精確、快速以及可靠的評估。該裝置具有不同大小的樣品孔，這些不同容積大小的孔模擬傳統(tǒng)的多管發(fā)酵法中的統(tǒng)計模型。以這種方式，結(jié)果讀取非常直接，并且MPN計算簡單。這種裝置精確、靈敏并且每IOOml可檢測I至高達細菌的1600MPN。該裝置是獨立的樣品盛載器，也不需要昂貴的設備。整個操作過程包含少許步驟，使得每次測試能在一分鐘內(nèi)完成。計數(shù)裝置也能夠使用相同的統(tǒng)計模型并且以類似的方式與其它試劑一起使用，用于評估液體樣品中微生物的MPN。本發(fā)明的一個實施方式涉及樣品盛載裝置，其包括:上部，具有上表面；底部；多個液體樣品盛裝孔，在所述上表面上開口 ；至少一個溢流樣品孔，在所述上表面上開口 ；以及溢流槽，至少部分環(huán)繞所述多個液體樣品盛裝孔，當所述裝置水平放置時，所述溢流槽至少將多余樣品液體導流入所述溢流樣品孔中，所述溢流槽與所述溢流樣品孔相連通。在所述樣品盛載裝置的一方面，所述多個液體樣品盛裝孔包括五個10.0毫升樣品孔、五個1.0毫升樣品孔以及五個0.1毫升樣品孔。另一方面，所述多個液體樣品盛裝孔和所述至少一個溢流樣品孔的總?cè)萘坎恍∮?00暈升。另一方面，所述液體樣品盛裝孔按容積大小成排設置。另一方面，所述多個液體樣品盛裝孔包括五i^一個孔，每個孔均不小于1.96毫升，并且第五十一個孔用于溢流液體并連接到周圍的溢流槽。所述多個液體樣品孔和至少一個溢流孔的總?cè)萘坎恍∮?00ml。這51孔型號可估算出最高200的MPN數(shù)。
另一方面，所述上表面被配置成能夠通過平展密封膜繞所述溢流槽并且在每一個液體樣品盛裝孔之間進行膜密封，以使得所述多個液體樣品盛裝孔中的每一個液體樣品盛裝孔彼此隔離，并且均與所述至少一個溢流樣品孔以及所述溢流槽隔離。另一方面，所述底部被配置成與所述上部匹配，以使得所述裝置與同樣的樣品盛裝裝置進行層疊。另一方面，所述上部和所述底部被連接于所述上部和所述底部之間的多個壁分隔。另一方面，所述上部是矩形的。另一方面，所述溢流槽包括一個或多個傾斜槽。另一方面，所述樣品盛載裝置由透明材料構(gòu)造。另一方面，所述透明材料包括聚苯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、或者聚對苯二甲酸乙二醇酯(PETE)。本發(fā)明的另一實施方式涉及使用這種裝置的方法。所述方法包括將所述樣品盛裝裝置放置于水平面以使得所述上表面保持水平狀態(tài)。在所述多個孔的上方將樣品液體注入以填充每一個孔，并且使得多余樣品液體流入到所述溢流槽之后被導入到所述溢流樣品孔。在所述方法的一個方面中，將密封膜粘附至所述樣品盛載裝置的上表面，以將所述樣品液體密封于所述裝置的多個液體樣品盛裝孔、至少一個溢流樣品孔以及溢流槽之中，以使得所有液體樣品盛裝孔的液體樣品相互隔離，并且與所述溢流樣品孔以及所述溢流槽相隔離。在一些實施方式和方面中，所述樣品保持裝置基于最可能數(shù)(MPN)原理研發(fā)。最可能數(shù)方法也被稱為多管方法，并且以獲得的結(jié)果的統(tǒng)計值為基礎。在傳統(tǒng)的方法中，將測量的樣品量或者一種或多種稀釋物添加到包含適當?shù)囊后w培養(yǎng)基的一系列管中。在適當?shù)呐囵B(yǎng)之后，被測試的微生物(如果存在的話)將生長并產(chǎn)生顯示性狀的變化。例如，顏色、混濁度、氣體的產(chǎn)生或者熒光等等。根據(jù)變化的觀察結(jié)果，這些管被分為反應結(jié)果陰性或者陽性。顯示陽性反應的管的數(shù)量和分布將用于根據(jù)MPN表來估計所被測試微生物的最可能數(shù)。在一些實施方式和方面中，樣品保持裝置用于依照MPN值估計液體樣品中微生物的密度。樣品盛載裝置能夠根據(jù)不同的模型來設置。16孔模型基于Standard Methodsfor the Examination of Water and Wastewater (用于檢查水和廢水的標準方法)(20th edition, by American Public Health Association, American Water WorksAssociation,and Water Environmental Federation(第20版，由美國公共衛(wèi)生協(xié)會、美國給水工程協(xié)會以及水環(huán)境聯(lián)盟出版))中的15管稀釋法而研發(fā)。在這個模型中，包含五個IOml孔、五個Iml孔以及五個0 .1ml孔。當全部充滿時,每一個孔包含IOmlUml或者0.1ml的樣品。這種多個不同大小的樣品孔系統(tǒng)替代了進行系列稀釋的需求。在培養(yǎng)之后，統(tǒng)計每一個不同容積類型中陽性反應孔的數(shù)量。根據(jù)陽性反應孔的數(shù)量的組合，參考標準方法中表9221.1V所示的MPN指數(shù)，進行95%置信度的MPN值的查找。第16個孔(即溢流孔)的并入設計是為儲存IOOml樣品中的剩余樣品。如果包括第16個孔在內(nèi)的全部孔均示出陰性反應結(jié)果，那么MPN值被確定為每IOOml小于1MPN。
51 孔模型基于 Standard Examination Methods for DrinkingWater-Microbiology Parameters (用于飲用水的標準檢查方法-微生物參數(shù))(People, s Republic of China National Standards GBIT 5750.12-2006 (中華人民共和國GBIT 5750.12-2006國家標準))研發(fā)。在這個模型中，存在50個相同容量的孔，當其充分注滿時，每個樣品孔均包含1.96ml的樣品，并且第51個孔稍微更大以保存剩余或過多的樣品。在測試操作和培養(yǎng)之后，記錄陽性反應孔的數(shù)量，并根據(jù)中華人民共和國國家標準GBIT 5750.12-2006中的表5依據(jù)95%置信度內(nèi)的MPN值來估計MPN數(shù)。周圍設置的溢流槽和第51個溢流孔相連，用于儲存IOOml樣品中的剩余樣品。如果包括第51個樣品孔的全部樣品孔均示出陰性結(jié)果，那么MPN值被確定為每IOOml小于1MPN。


圖1是根據(jù) 本發(fā)明的實施方式、樣品盛裝裝置的俯視圖；圖2是沿圖1中的線A-A所得的橫截面圖；圖3-5是圖1中的樣品盛裝裝置的不同的立體圖；圖6是根據(jù)本發(fā)明的實施方式、樣品盛裝裝置的頂部立體圖；圖7是圖6中的樣品盛裝裝置的底部立體圖。
具體實施例方式圖1-5示出了根據(jù)本發(fā)明的實施方式的樣品盛裝裝置100的視圖。裝置100具有盒狀形狀，其包括上部102和底部104。一個或多個壁連接上部與下部。壁中的部分能具有切塊，如圖所示，或者壁能夠是連續(xù)的。底部104能夠包括設置為與上部的邊緣匹配的階梯式邊緣。以這種方式，裝置能夠?qū)盈B在同樣的裝置的上方或者下方。底部104能具有標準的SBS微孔滴定板的印跡。裝置100能夠由與所需測試程序兼容的任何材料構(gòu)造，例如，透明非熒光的材料。在一些實施方式中，裝置100由透明材料構(gòu)造，例如聚合物(如，聚苯乙烯、聚碳酸酯、聚丙烯)或玻璃。裝置100能夠由多個子結(jié)構(gòu)構(gòu)造，或者制造在例如模塑聚合物的連續(xù)材料片上。裝置100的上部102關(guān)于其外部末端成矩形的形狀。上部102部分地由上表面106限定。上表面106是平坦的，并且被裝置內(nèi)朝向底部延伸的多個樣品孔108斷開。樣品孔108被示出成排設置，然而并非必須如此。在一些實施方式中，裝置100的總?cè)萘坎恍∮?00毫升。如圖所示，裝置100包括五個10毫升孔、五個I毫升孔、五個0.1毫升孔以及至少一個能夠盛裝至少55毫升的流體的溢流樣品孔110。這個設置使得能夠進行關(guān)于MPN的多管發(fā)酵法及其關(guān)聯(lián)的統(tǒng)計模型的實踐。如圖所示，裝置100允許執(zhí)行在如上所述的StandardMethods for the Examination of Water and Wastewater 中的 15 管稀釋法。另一實施方式包括具有可變?nèi)萘康牟簧儆?6個孔的設置，以增加能夠檢測的最大的MPN值。上表面106還包括至少部分環(huán)繞每一個孔的溢流槽112。如圖所示，四側(cè)溢流槽112包括環(huán)繞樣品孔108的傾斜槽，并且與溢流樣品孔110流體連通。溢流槽112具有不平行于上表面106的下表面，S卩，每一個下表面向下朝底部傾斜。溢流槽112還以階梯的方式設置，以使得溢流槽的最低點在溢流樣品孔110處結(jié)束。相應地，當上表面106水平時，涌進溢流槽112的流體將流進溢流樣品孔110。上表面106包括樣品孔108、溢流樣品孔以及周圍的溢流槽112之間的足夠的平坦表面區(qū)域，以使得當平展密封膜被粘附至上表面時，每一個樣品孔彼此流體隔離。類似地，溢流槽112和溢流樣品孔110也與樣品孔108流體隔離。在使用中，裝置100能夠用于執(zhí)行關(guān)于MPN的已知多管發(fā)酵法及其統(tǒng)計模型，而無需具有多個管并執(zhí)行耗時的且勞動密集型的傳統(tǒng)方法。在與適當?shù)脑噭?例如，Colitag )混合之后，樣品流體能夠直接注入樣品孔108中的每一個內(nèi)以填充這些孔，并且剩余的流體注入溢流樣品孔110內(nèi)。當注入樣品水時，由于注入到樣品孔108之間的上表面106的部分上的樣品流體將流進溢流槽中并隨后流入溢流樣品孔110，所以無需極其謹慎地填充樣品孔。然后能夠通過高溫和/或壓力來應用密封膜以密封裝置100，并孵育樣品。在孵育之后，陽性孔的數(shù)量被計數(shù)并用于從標準的MPN表中獲得MPN值。圖6和7示出了根據(jù)本發(fā)明的實施方式、樣品盛裝(裝置)114的視圖。裝置114與圖1-5中的裝置100類似地構(gòu)造，并且相應地共享相同的創(chuàng)造性特征。然而，裝置114的區(qū)別在于其具有51個孔的設置，每一個孔不小于1.96毫升，而不是裝置100的16個孔(包括溢流樣品孔110)。第51個孔是溢流樣品孔110，其與溢流槽112流體連通。裝置114能夠執(zhí)行如上所述的中華人民共和國GB/T 5750.12-2006國家標準。雖然為了清楚地理解相當詳細地并且通過實施例的方式描述了示例性的實施方式，但是可實現(xiàn)若干修改、 改變和改動和/或這些修改、改變和改動將對本領域的技術(shù)人員顯而易見。
權(quán)利要求
1.一種樣品盛裝裝置，包括: 上部，具有上表面； 底部； 多個液體樣品盛裝孔，在所述上表面上開口 ； 至少一個溢流樣品孔，在所述上表面上開口 ；以及 溢流槽，至少部分環(huán)繞所述多個液體樣品盛裝孔， 當所述裝置水平放置時，所述溢流槽至少將多余樣品液體導流入所述溢流樣品孔中，所述溢流槽與所述溢流樣品孔相連通。
2.如權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述多個液體樣品盛裝孔包括五個10.0毫升樣品孔、五個1.0毫升樣品孔以及五個0.1毫升樣品孔。
3.如權(quán)利要求2所述的裝置，其中所述多個液體樣品盛裝孔和所述至少一個溢流樣品孔的總?cè)萘坎恍∮?00暈升。
4.如權(quán)利要求2所述的裝置，其中所述液體樣品盛裝孔按容積大小成排設置。
5.如權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述多個液體樣品盛裝孔包括五十一個孔，每個孔均不小于1.96毫升。
6.如權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述上表面被配置成能夠通過平展密封膜繞所述溢流槽并且在每一個液體樣品盛裝孔之間進行膜密封，以使得所述多個液體樣品盛裝孔中的每一個液體樣品盛裝孔彼此隔離，并且均與所述至少一個溢流樣品孔以及所述溢流槽隔 離。
7.如權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述底部被配置成與所述上部匹配，以使得所述裝置與同樣的樣品盛裝裝置進行層疊。
8.如權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述上部和所述底部被連接于所述上部和所述底部之間的多個壁分隔。
9.如權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述上部是矩形的。
10.如權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述溢流槽包括一個或多個傾斜槽。
11.如權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述樣品盛裝裝置由透明材料構(gòu)造。
12.如權(quán)利要求11所述的裝置，其中所述透明材料包括聚苯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、或者聚對苯二甲酸乙二醇酯(PETE)。
13.—種方法,包括: 將如權(quán)利要求1所述的樣品盛裝裝置放置于水平面以使得所述上表面保持水平狀態(tài)，以及 在所述多個孔的上方將樣品液體注入以填充每一個孔，并且使得多余樣品液體流入到所述溢流槽之后被導入到所述溢流樣品孔。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，還包括:將密封膜粘附至所述樣品盛載裝置的上表面，以將所述樣品液體密封于所述裝置的多個液體樣品盛裝孔、至少一個溢流樣品孔以及溢流槽之中，以使得所有液體樣品盛裝孔的液體樣品相互隔離，并且與所述溢流樣品孔以及所述溢流槽相隔離。
15.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述樣品盛載裝置根據(jù)最可能數(shù)(MPN)查值表格和95%置信區(qū)間使用。
16.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，使用所述樣品盛載裝置以微生物最可能數(shù)(MPN)的方法進行液體樣品中微生物密度的 估計。
全文摘要
一種樣品盛載裝置，具有多個樣品孔。外周的環(huán)繞樣品溢流槽與樣品溢流孔相連通。當該裝置的上表面被密封膜密封后，使每一個樣品孔彼此液體隔離，也使每一樣品孔隔離于溢流槽及溢流孔的液體。該裝置適用于進行微生物樣品密度最可能數(shù)(MPN)的估計測試。
文檔編號C12M1/34GK103215182SQ201210115069
公開日2013年7月24日 申請日期2012年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月20日
發(fā)明者吳秋欣, 小歐內(nèi)斯特·J·奧利佛拉斯, 黃永青 申請人:安泰凱生物技術(shù)有限公司