專(zhuān)利名稱(chēng)：一種抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒增殖的microRNA及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)增殖的microRNA及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
豬繁通與呼吸綜合癥(porcinereproductive and respiratory syndrome, PRRS)，又稱(chēng)為豬藍(lán)耳病，是由PRRS病毒(PRRS virus，PRRSV)引起的豬的ー種高發(fā)傳染病，可引起母豬的繁殖障礙、各年齡豬發(fā)生呼吸道癥狀以及仔豬死亡，此外還可以導(dǎo)致免疫抑制從而誘發(fā)繼發(fā)感染，對(duì)全世界的養(yǎng)豬業(yè)都造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病在1987年首次發(fā)現(xiàn)于美國(guó)，而后迅速傳播到加拿大及歐洲各地，如今這種疾病已經(jīng)傳播到世界各地。尤其是
2006年下半年以來(lái)，我國(guó)25個(gè)省份爆發(fā)了由毒力變異的高致病性PRRSV毒株(H-PRRSV)為主要病原的“豬高熱病”(HP-PRRS)，本病的傳染性極強(qiáng)，一旦感染，會(huì)引起妊娠母豬早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎、弱胎和木乃伊胎，導(dǎo)致公豬種用性能下降，加劇病情，死亡率升高，給我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。PRRSV屬于動(dòng)脈炎病毒科動(dòng)脈炎病毒屬,根據(jù)病毒抗原的抗原性、基因組及致病性差異，PRRSV可分為2個(gè)型，即歐洲型(I型，以LV株為代表)和美洲型(II型，以VR2332株為代表)。目前在我國(guó)流行的主要是II型毒株。該病毒的基因組大約長(zhǎng)15. 4k bp,含有至少10個(gè)開(kāi)放閱讀框0RFla/lb，0RF2a/2b, 0RF3-4, 0RF5/5a, 0RF6-7,分別編碼病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白 nspl-14, Gp2a/E, Gp3, Gp4, Gp5/Gp5a，M 和 N 蛋白。疫苗接種是當(dāng)前預(yù)防PRRS的最普遍方法，國(guó)內(nèi)外已有商業(yè)化的PRRS疫苗，包括弱毒疫苗和滅活疫苗。但是，弱毒疫苗在提供免疫保護(hù)的同時(shí)，還會(huì)持續(xù)散播疫苗病毒，使得病毒在豬場(chǎng)中循環(huán)存在，可能發(fā)生重組變異等，存在著毒力返強(qiáng)等不安全性問(wèn)題，有時(shí)甚至引發(fā)PRRS爆發(fā)。而滅活疫苗存在著免疫劑量大、免疫次數(shù)多、免疫產(chǎn)生周期長(zhǎng)，不能對(duì)非疫苗株型的病毒侵染提供免疫保護(hù)等缺點(diǎn)，不太適合仔豬免疫，而仔豬帶毒是豬場(chǎng)PRRSV持續(xù)存在的重要原因。所以，研發(fā)有效抑制PRRSV感染的方法就顯得尤為重要。microRNAs (miRNA)是ー種大小約21-23個(gè)堿基的單鏈小分子RNA，是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70-90個(gè)堿基大小的單鏈RNA前體(pre-miRNA)經(jīng)過(guò)Dicer酶加工后生成。它通過(guò)與其目標(biāo)mRNA分子的3’端非編碼區(qū)域(3’UTR)互補(bǔ)匹配導(dǎo)致該mRNA分子的翻譯受到抑制，通過(guò)抑制靶基因的翻譯過(guò)程或促使靶基因的mRNA降解。miRNA的合成和作用機(jī)制如下在細(xì)胞核內(nèi)編碼miRNA的基因轉(zhuǎn)錄成pri-microRNA (pri-miRNA) wri-miRNA在一種DroshaRNase的作用下，剪切為約70個(gè)核苷酸長(zhǎng)度，具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA前體(pre-miRNA)。pre-miRNA在Ran-GTP依賴(lài)的核質(zhì)/細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Exportin 5的作用下,從核內(nèi)運(yùn)輸?shù)桨|(zhì)中。在Dicer酶(雙鏈RNA專(zhuān)ー性RNA內(nèi)切酶)的作用下，miRNA前體被剪切成21-25個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的雙鏈miRNA。起初，成熟miRNA與其互補(bǔ)序列互相結(jié)合成所謂miRNA:miRNA*雙螺旋結(jié)構(gòu)(miRNA*是miRNA的反向互補(bǔ)序列);隨后，雙螺旋解旋，其中一條結(jié)合到RNA誘導(dǎo)的基因沉默復(fù)合物(RNA-induced silencing complex, RISC)中，形成非對(duì)稱(chēng)RISC復(fù)合物(asymmetric RISC assembly),該復(fù)合物會(huì)結(jié)合到目標(biāo)祀mRNA上。在大多數(shù)情況下(例如在動(dòng)物中)，復(fù)合物中的單鏈miRNA與靶mRNA的3’ UTR不完全互補(bǔ)配對(duì)，從而阻斷該基因的翻譯過(guò)程。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)増殖的microRNA及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的microRNA為序列表的序列I所示的單鏈RNA。本發(fā)明還保護(hù)序列表的序列2所示的DNA分子(編碼所述microRNA的DNA分子)。 含有所述DNA分子的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述重組載體可為將功能DNA片段導(dǎo)入siSTRIKE U6載體得到的重組質(zhì)粒；所述功能DNA片段包括如下三個(gè)兀件所述DNA分子、與所述DNA分子反向互補(bǔ)的DNA分子以及位于兩者之間的間隔序列。所述功能DNA片段具體可為將序列表的序列3自5’末端第4-57位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列4自5’末端第10-63位核苷酸所示的單鏈DNA分子退火形成的雙鏈DNA分子。所述重組載體具體可為將序列表的序列3所示的單鏈DNA分子和序列表的序列4所示的單鏈DNA分子退火形成的雙鏈DNA分子導(dǎo)入siSTRIKE U6載體得到的重組質(zhì)粒。所述重組質(zhì)粒中，所述功能DNA片段編碼的RNA形成具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA前體。在Dicer酶的作用下，miRNA前體被剪切成雙鏈miRNA。隨后，雙螺旋解旋，其中一條(microRNA)結(jié)合到RNA誘導(dǎo)的基因沉默復(fù)合物中，形成非対稱(chēng)RISC復(fù)合物，該復(fù)合物會(huì)結(jié)合到目標(biāo)靶mRNA上，從而阻斷該基因的翻譯過(guò)程，最終抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒增殖。本發(fā)明還保護(hù)ー種抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖的產(chǎn)品，它的活性成分為所述單鏈RNA、所述DNA分子、所述重組載體、所述表達(dá)盒、所述轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系和所述重組菌中的至少ー種。本發(fā)明還保護(hù)所述單鏈RNA、所述DNA分子、所述重組載體、所述表達(dá)盒、所述轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系和所述重組菌中的至少ー種在如下(a)或(b)或(C)或(d)中的應(yīng)用(a)制備抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖的產(chǎn)品；(b)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖；(C)制備抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染的產(chǎn)品；(d)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染。以上任一所述抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖具體可體現(xiàn)為如下(I)、(2)和
(3)中的至少ー種(I)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的細(xì)胞病變；(2)抑制細(xì)胞中豬繁殖與呼吸綜合征病毒組成蛋白的表達(dá)；(3)抑制細(xì)胞中豬繁殖與呼吸綜合征病毒粒子的產(chǎn)生(降低細(xì)胞培養(yǎng)上清中的豬繁殖與呼吸綜合征病毒滴度，滴度具體可通過(guò)TCID5tl體現(xiàn))。所述組成蛋白具體可為Gp5蛋白和/或N蛋白。所述(I)和/或(2)和/或(3)中，所述細(xì)胞具體可為MARC-145細(xì)胞。以上任一所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒可為II型豬繁殖與呼吸綜合征病毒，具體可為VR2332毒株。
本發(fā)明提供的miCToRNA可以顯著降低豬繁殖與呼吸綜合征病毒對(duì)細(xì)胞的損傷(即降低細(xì)胞病變)，有效抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒的組成蛋白(以Gp5和N蛋白為代表)的合成，并極大地降低子代病毒粒子的產(chǎn)生。本發(fā)明為豬繁殖與呼吸綜合征的治療和預(yù)防提供了依據(jù)。本發(fā)明提供的microRNA有望作為新型的抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒藥物，具有重大的價(jià)值。


圖I為光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞病變的照片。圖2 為 Western-Blot 結(jié)果。圖3為各個(gè)病毒液對(duì)于MARC-145細(xì)胞的TCID5tl結(jié)果。
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。MOI (multiplicity of infection,感染復(fù)數(shù))病毒顆粒數(shù)/細(xì)胞數(shù)。ATCC即美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)(American type culture collection),網(wǎng)址為 http://www.atcc. org八siSTRIKE U6載體(自身帶有粘性末端；具有氨芐抗性)=Promega公司，C7290。Lipofectamine 2000 (購(gòu)于 Invitrogen, Cat. No. 11668-027,按說(shuō)明書(shū)操作)。細(xì)胞裂解液(購(gòu)于 Promega, E194A)。MARC-145細(xì)胞購(gòu)于美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)ATCC，CRL-12231 (編號(hào)為CRL-12231TM (LN 14832 MARC145 CELL LINE(MONKEY KIDNEY))) (http://www. atcc.orR/ATCCAdvancedCatalORSearch/ProductDetails/tabid/452/Default. aspx ATCCNum=CRL-12231&Template=patents);公眾也可從中國(guó)科學(xué)院微生物研究所獲得；參考文獻(xiàn)Yu, Μ. , X. Liu, L. Sun, C. Chen, G. Ma, Y. Kitamura, G. F. Gao and ff. Liu, 2010. Subcellularlocalization and topology of porcine reproductive and respiratory syndromevirus E protein. Virus Res 152,104-114. XPRRSV 病毒 VR2332 毒株購(gòu)于 ATCC (VR-2332 ) (http://www. atcc. org/ATCCAdvancedCataloRSearch/ProductDetaiIs/tabid/452/Default. aspx ATCCNum=VR-2332&Te即late=animalViroloRy);公眾也可從中國(guó)科學(xué)院微生物研究所獲得；參考文獻(xiàn)Yu, Μ. , X. Liu, L. Sun, C. Chen, G. Ma, Y. Kitamura, G. F. Gao and ff. Liu, 2010. Subcellularlocalization and topology of porcine reproductive and respiratory syndromevirus E protein. Virus Res 152, 104-114. X實(shí)施例I、設(shè)計(jì)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖的miCToRNA基于對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒全序列的分析，設(shè)計(jì)并篩選，得到SSC-miR-26a序列，為抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖的miciORNA。在Sanger數(shù)據(jù)庫(kù)(http://microrna. sanger. ac. uk/sequences/)中查閱線(xiàn)蟲(chóng)cel-let-7序列(作為陰性對(duì)照)，該陰性對(duì)照已經(jīng)通過(guò)BLAST比對(duì)所有豬、人、大鼠及小鼠的基因組序列以及microRNA序列。ssc-miR-26a (序列表的序列 I) :5’ -UCGGAUAGGACCUAAUGAACUU-3’。
ssc-miR-26a 的編碼序列(序列表的序列 2) :5’ -TCGGATAGGACCTAATGAACTT-3’。cel-let-7 :5’ -UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU-3，。cel-let-7 的編碼序列5’ -TGAGGTAGTAGGTTGTATAGTT-3’。實(shí)施例2、重組表達(dá)載體的構(gòu)建一、ssc_miR-26a表達(dá)載體的構(gòu)建 I、分別合成序列表的序列3所示的單鏈DNA分子和序列表的序列4所示的單鏈DNA分子。序列表的序列3如下(5，一 3’):ACCTCGGATAGGACCTAATGAACTTCTTCCTGTCAAAGTTCATTAGGTCCTATCCGATTTTC(I)(II)(I)為ssc-miR_26a的編碼序列，(II)為(I)的反向互補(bǔ)序列。序列表的序列4如下(5，一 3’)TGCAGAAAATCGGATAGGACCTAATGAACTTTGACAGGAAGAAGTTCATTAGGTCCTATCCGAT2、將序列表的序列3所示的單鏈DNA分子和序列表的序列4所示的單鏈DNA分子退火，形成帶有粘末端的雙鏈DNA分子。3、將步驟2得到的帶有粘末端的雙鏈DNA分子與siSTRIKE U6載體鏈接，得到SSC-miR-26a表達(dá)載體(重組質(zhì)粒甲)。根據(jù)測(cè)序結(jié)果，對(duì)重組質(zhì)粒甲進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下在siSTRIKE U6載體的粘性末端插入了帶有粘末端的雙鏈DNA分子(由序列表的序列3所示單鏈DNA分子和序列表的序列4所示單鏈DNA分子退火后形成)。ニ、cel-let-7表達(dá)載體的構(gòu)建I、分別合成序列表的序列5所示的單鏈DNA分子和序列表的序列6所示的單鏈DNA分子。序列表的序列5如下(5，一 3’):ACCTGAGGTAGTAGGTTGTATAGTTCTTCCTGTCAAACTATACAACCTACTACCTCATTTTC(HI)(IV)(III)為cel-let-7的編碼序列，(IV)為(III)的反向互補(bǔ)序列。序列表的序列6如下(5，一 3’):TGCAGAAAATGAGGTAGTAGGTTGTATAGTTTGACAGGAAGAACTATACAACCTACTACCTCAT2、將序列表的序列5所示的單鏈DNA分子和序列表的序列6所示的單鏈DNA分子退火，形成帶有粘末端的雙鏈DNA分子。3、將步驟2得到的帶有粘末端的雙鏈DNA分子與siSTRIKE U6載體鏈接，得到cel-let-7表達(dá)載體(重組質(zhì)粒こ)。根據(jù)測(cè)序結(jié)果，對(duì)重組質(zhì)粒こ進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下在siSTRIKE U6載體的粘性末端插入了帶有粘末端的雙鏈DNA分子(由序列表的序列5所示單鏈DNA分子和序列表的序列6所示單鏈DNA分子退火后形成)。實(shí)施例3、ssc-miR-26a對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖的抑制作用分別進(jìn)行以下四組處理(平行試驗(yàn)；每個(gè)處理進(jìn)行三次重復(fù))處理ー(PRRSV感染一 miR_26a):用MARC-145細(xì)胞鋪24孔板；當(dāng)每孔細(xì)胞密度達(dá)到80%的時(shí)候，通過(guò)Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染實(shí)施例2構(gòu)建的重組質(zhì)粒甲(轉(zhuǎn)染劑量為Iug/孔)，37°C孵育24小時(shí)；然后感染PRRSV病毒VR2332毒株(感染劑量為1M0I)，37°C孵育72小時(shí)；處理ニ(PRRSV感染一陰性對(duì)照)用MARC-145細(xì)胞鋪24孔板；當(dāng)每孔細(xì)胞密度達(dá)到80%的時(shí)候，通過(guò)Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染實(shí)施例2構(gòu)建的重組質(zhì)粒こ(轉(zhuǎn)染劑量為I μ g/孔)37°C孵育24小時(shí)；然后感染PRRSV病毒VR2332毒株(感染劑量為1M0I)，37°C孵育72小吋。處理三(PRRSV感染一陽(yáng)性對(duì)照)用MARC-145細(xì)胞鋪24孔板；當(dāng)每孔細(xì)胞密度達(dá)到80%的時(shí)候，加入與處理一等量的LipofectamineTM2000，37°C孵育24小時(shí)；然后感染PRRSV病毒VR2332毒株(感染劑量為1M0I) ，37°C孵育72小時(shí)。處理四(空白對(duì)照)用MARC-145細(xì)胞鋪24孔板；當(dāng)每孔細(xì)胞密度達(dá)到80%的時(shí)候，加入與處理一等量的Lipofectamine 2000，37°C孵育96小時(shí)。完成上述處理后，分別取細(xì)胞培養(yǎng)上清(病毒液)和細(xì)胞。取細(xì)胞，先用PBS緩沖液洗3次，然后在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞病變(Cytopathiceffect，CPE)，拍照存圖。見(jiàn)圖I。重組質(zhì)粒甲能顯著減輕PRRSV感染造成的MARC-145細(xì)胞病變(根據(jù)microRNA的作用機(jī)理,是ssc_miR-26a發(fā)揮作用),而重組質(zhì)粒こ無(wú)此功能。取細(xì)胞，先用PBS緩沖液洗3次，然后用100 μ I/孔細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，通過(guò)Western-Blot方法檢測(cè)PRRSV的Gp5蛋白和N蛋白表達(dá)情況(以β-act in蛋白為內(nèi)參)。Western-Blot檢測(cè)Gp5蛋白所用的ー抗為小鼠抗PRRSV的Gp5蛋白多抗(用于制備ー抗的抗原如序列表的序列的序列7所示，；制備方法參見(jiàn)文獻(xiàn)孫穎；馬艷；李彬；江云波；肖少波；方六榮；陳煥春.“抗PRRSV GP5蛋白單克隆抗體的制備及鑒定《動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展》
2007年第11期)，所用的ニ抗為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)(購(gòu)于碧云天，A0216)。Western-Blot檢測(cè)N蛋白所用的一抗為小鼠抗PRRSV的N蛋白多抗(用于制備ー抗的抗原如序列表的序列的序列8所示；制備方法參見(jiàn)文獻(xiàn)夏向榮，李玉峰，姜平.“PRRSV重組N蛋白的抗原性分析及其特異性抗體制備”.《畜牧與獸醫(yī)》2003年第09期)，所用的ニ抗為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)(購(gòu)于碧云天,A0216)。Western-Blot檢測(cè)β-actin蛋白所用的ー抗為β-actin小鼠單抗(購(gòu)于碧云天，AA128),所用的ニ抗為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)(購(gòu)于碧云天,A0216)。Western-Blot結(jié)果見(jiàn)圖2。重組質(zhì)粒甲能抑制PRRSV的Gp5蛋白和N蛋白的表達(dá)水平(根據(jù)microRNA的作用機(jī)理，是ssc-miR-26a發(fā)揮作用),而重組質(zhì)粒こ無(wú)此功能。取病毒液測(cè)定對(duì)于MARC-145細(xì)胞的TCID5tl,通過(guò)Reed-Muench法(Reed, L.J. ;Muench, H. (1938). A simple method of estimating fifty percent endpoints. TheAmerican Journal of Hygiene 27:493 - 497.)計(jì)算病毒的 TCID5(I。結(jié)果見(jiàn)圖 3 (三次試驗(yàn)的平均值)。圖3中，縱坐標(biāo)為Ig (每毫升病毒液的TCID5tl值)。重組質(zhì)粒甲能降低所感染的MARC-145細(xì)胞得到的病毒液中PRRSV病毒的滴度(根據(jù)microRNA的作用機(jī)理，是ssc-miR-26a發(fā)揮作用),而重組質(zhì)粒こ無(wú)此功能。
權(quán)利要求
1.序列表的序列I所示的單鏈RNA。
2.序列表的序列2所不的DNA分子。
3.含有權(quán)利要求2所述DNA分子的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。
4.如權(quán)利要求3所述的重組載體，其特征在于所述重組載體為將功能DNA片段導(dǎo)入siSTRIKE U6載體得到的重組質(zhì)粒；所述功能DNA片段包括如下三個(gè)元件權(quán)利要求2所述DNA分子、與權(quán)利要求2所述DNA分子反向互補(bǔ)的DNA分子以及位于兩者之間的間隔序列。
5.ー種抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖的產(chǎn)品，它的活性成分為權(quán)利要求I所述單鏈RNA、權(quán)利要求2所述DNA分子、權(quán)利要求3或4所述重組載體、權(quán)利要求3所述表達(dá)盒、權(quán)利要求3所述轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系和權(quán)利要求3所述重組菌中的至少ー種。
6.權(quán)利要求I所述單鏈RNA在如下(a)或(b)或(c)或(d)中的應(yīng)用 Ca)制備抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖的產(chǎn)品； (b)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖； (C)制備抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染的產(chǎn)品； Cd)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染。
7.權(quán)利要求2所述DNA分子在如下(a)或(b)或(c)或(d)中的應(yīng)用 Ca)制備抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖的產(chǎn)品； (b)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖； (C)制備抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染的產(chǎn)品； Cd)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染。
8.權(quán)利要求3或4所述重組載體在如下(a)或(b)或(C)或(d)中的應(yīng)用 Ca)制備抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖的產(chǎn)品； (b)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖； (C)制備抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染的產(chǎn)品； Cd)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染。
9.權(quán)利要求3所述表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌在如下(a)或(b)或(C)或(d)中的應(yīng)用 Ca)制備抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖的產(chǎn)品； (b)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒増殖； (C)制備抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染的產(chǎn)品； Cd)抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒增殖的microRNA及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了序列表的序列1所示的單鏈RNA(microRNA)。本發(fā)明提供的microRNA可以顯著降低豬繁殖與呼吸綜合征病毒對(duì)細(xì)胞的損傷(即降低細(xì)胞病變)，有效抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒的組成蛋白(以Gp5和N蛋白為代表)的合成，并極大地降低子代病毒粒子的產(chǎn)生。本發(fā)明為豬繁殖與呼吸綜合征的治療和預(yù)防提供了依據(jù)。本發(fā)明提供的microRNA有望作為新型的抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒藥物，具有重大的價(jià)值。
文檔編號(hào)C12N1/19GK102676519SQ20121013897
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年5月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月7日
發(fā)明者劉亭見(jiàn), 李晶, 楊利敏, 牟身蕓, 陳才偉 申請(qǐng)人:北京諾派生物科技有限公司