專利名稱：一種缺氧培養(yǎng)盒及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)備及其使用方法，具體涉及一種缺氧培養(yǎng)盒及其使用方法。
背景技術(shù)：
組織缺氧是臨床常見的病理現(xiàn)象，是多種疾病中導(dǎo)致細(xì)胞損傷的常見因素。為研究體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)無氧條件的反應(yīng)，各國(guó)科學(xué)家采取多種方式建立細(xì)胞無氧培養(yǎng)條件，典型的幾種缺氧模型如下有研究者向常規(guī)培養(yǎng)箱中充入氮?dú)馓鎿Q氧氣，并檢測(cè)培養(yǎng)箱中氧氣濃度；有研究者在密閉容器中放入細(xì)胞，進(jìn)行真空抽吸后，充入95% N2+5% C02?，F(xiàn)有技術(shù)中的以上設(shè)計(jì)存在以下幾點(diǎn)缺點(diǎn)1、氮?dú)馓鎿Q氧氣不充分，需要較長(zhǎng)時(shí)間才能達(dá)到無氧要求，另外開關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)箱又需較長(zhǎng)時(shí)間達(dá)到無氧條件，且所需時(shí)間不能把握，不易準(zhǔn)確計(jì)算缺氧時(shí)間；2、在密閉容器抽真空，容器內(nèi)負(fù)壓可對(duì)細(xì)胞造成損傷，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；3、所需設(shè)備昂貴，設(shè)計(jì)復(fù)雜不易操作。簡(jiǎn)單快速地建立培養(yǎng)細(xì)胞的無氧條件有助于實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確研究細(xì)胞對(duì)無氧的病理生理反應(yīng)及其分子機(jī)制，而現(xiàn)存的條件無法滿足這一要求。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種缺氧培養(yǎng)盒及其使用方法，本發(fā)明的缺氧培養(yǎng)盒能夠快速達(dá)到缺氧條件，并能長(zhǎng)時(shí)間滿足無氧條件，且本發(fā)明簡(jiǎn)單易于操作，造價(jià)低，可大量生產(chǎn)，可重復(fù)使用，可消毒。具體技術(shù)方案為—種缺氧培養(yǎng)盒，包括密封盒蓋I、盒體2和堿性焦性沒食子酸溶液袋3，其特征是密封盒蓋I內(nèi)側(cè)設(shè)有壓力緩沖氣囊12，氣囊通過通氣閥門11與外界相通，盒體2底部設(shè)有培養(yǎng)器皿支架25，盒體2壁上設(shè)有加液閥門23、加取培養(yǎng)基閥門及通道24、加液盤腸25，堿性焦性沒食子酸溶液袋3內(nèi)溶液通過輸液器輸32及加液閥門23加入到缺氧培養(yǎng)盒內(nèi)。在密封盒蓋I內(nèi)側(cè)設(shè)有壓力緩沖氣囊12通過氣囊通氣閥門11與外界相通，來平衡缺氧培養(yǎng)盒與外界的壓力，且，所述壓力緩沖囊12可拆卸。所述加液盤腸25開有噴灑液小孔。所述盒體2壁上設(shè)有加取培養(yǎng)液閥門及通道24。堿性焦性沒食子酸溶液袋3是真空密封袋或醫(yī)療用棄的250ml輸液袋，經(jīng)蒸餾水沖洗后用注射器抽成真空。其使用方法特征是先將18. 87g焦性沒食子酸溶于水中配成IOOml溶液，用注射器加入到真空密封袋中，再將17. 96g氫氧化鈉溶于水中，配成50ml溶液，用注射器加入到真空密封袋中，混勻，置于25°C水浴缸中，預(yù)熱后使用。 一種缺氧培養(yǎng)盒的使用方法，包括以下步驟在加堿性焦性沒食子酸溶液去除盒內(nèi)氧氣后，并用注射器通過加液閥門23向缺氧盒內(nèi)加入檸檬酸溶液，使檸檬酸、氫氧化鈉和焦性沒食子酸構(gòu)成緩沖液。其配比特征是如果實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不需加二氧化碳，可不加檸檬酸；如果實(shí)驗(yàn)需清除過多二氧化碳蓄積，可加檸檬酸24g溶于50ml水中配成的溶液；如實(shí)驗(yàn)不需清除蓄積的二氧化碳，可加檸檬酸28g溶液50ml水中配成的溶液。在加檸檬酸溶液后，如果發(fā)明設(shè)計(jì)所用氫氧化鈉為分析純，含有碳酸鈉I. 5%，則不需加入二氧化碳，所生成的二氧化碳已能滿足細(xì)胞培養(yǎng)所需；如果所用氫氧化鈉純度較高，貝1J需進(jìn)一步加入二氧化碳?xì)怏w60ml。缺氧培養(yǎng)盒工作原理堿性焦性沒食子酸能快速與氧發(fā)生反應(yīng)，吸收空氣中的氧 氣，達(dá)到清除培養(yǎng)盒內(nèi)氧氣的作用，而不與培養(yǎng)基接觸。3Na0H+C6H3 (OH) 3 — C6H3 (ONa) 3+H204C6H3 (ONa) 3+02 — 2 (KO) 3C6H2_H2C6 (OK) 3+2H20缺氧培養(yǎng)盒工作過程預(yù)先配制吸氧液，氫氧化鈉17. 96g溶于40ml水中，焦性沒食子酸18. 87g溶于80ml水中，先后注入到真空密封的塑料袋中，混勻，置于25°C水浴中預(yù)熱。將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板置于缺氧盒內(nèi)支架上，蓋上盒蓋，打開缺氧盒通氣閥，用50ml注射器向壓力緩沖袋內(nèi)注入IOOml空氣，關(guān)閉通氣閥，用輸液器將配好的吸氧液袋連接于加液閥門，打開加液閥門，打開壓力緩沖袋通氣閥門，使用輸液器將吸氧液袋內(nèi)的吸氧液通過加液閥門加入到缺氧培養(yǎng)盒內(nèi)，關(guān)閉加液閥門。將缺氧培養(yǎng)盒置于搖床上，震蕩5分鐘，此時(shí)培養(yǎng)環(huán)境中氧濃度可低于0.6%。將缺氧培養(yǎng)箱置于37°C環(huán)境中，半小時(shí)后。用50ml注射器經(jīng)加液孔加入檸檬酸溶液(預(yù)熱溫度為20°C )50ml溶有24g檸檬酸。使之構(gòu)成緩沖液，PH值在7-8之間，用以緩沖盒內(nèi)而過多蓄積的二氧化碳。如果試驗(yàn)中不需加二氧化碳可考慮不用加檸檬酸，如果實(shí)驗(yàn)中不需清除蓄積的二氧化碳，可加入檸檬酸28g。搖床震蕩，I分鐘。經(jīng)氣體閥門加入二氧化碳?xì)怏w60ml (不需加二氧化碳的實(shí)驗(yàn)，此步可省去)。將缺氧培養(yǎng)箱置于37°C中進(jìn)行培養(yǎng)。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的缺氧培養(yǎng)盒能夠快速達(dá)到缺氧條件，并能長(zhǎng)時(shí)間滿足無氧條件，且本發(fā)明簡(jiǎn)單易于操作，造價(jià)低，可大量生產(chǎn)，可重復(fù)使用，可消毒。


圖I為本發(fā)明缺氧培養(yǎng)盒的結(jié)構(gòu)圖示意圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明的方法作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。參照?qǐng)D1，一種缺氧培養(yǎng)盒由透明盒塑料制成，盒內(nèi)容積為I. 4升，包括密封盒蓋I、盒體2和堿性焦性沒食子酸溶液袋3，密封盒蓋I內(nèi)側(cè)設(shè)有壓力緩沖氣囊12，密封盒蓋通過與盒體連接的鎖扣13固定于盒體上，密封盒蓋與盒體連接鎖扣13設(shè)計(jì)中置于密封盒蓋I的側(cè)邊，設(shè)有卡槽可與盒體2側(cè)壁上的卡槽相扣，密封盒蓋I周邊有與盒體銜接槽14，槽裝有橡膠密封條15，壓力緩沖氣囊12有密封塑料袋制成，帶有連接冒與壓力緩沖氣囊通氣閥門11相連；盒體2壁上設(shè)有通氣閥門21、取液閥門及通道22、加液閥門23、加取培養(yǎng)基閥門及通道24、加液盤腸道26，加入到盒內(nèi)的液體27為經(jīng)過加液閥門23及加液盤腸26加入到盒內(nèi)的堿性焦性沒食子酸溶液與檸檬酸溶液的混合液體，加取培養(yǎng)基通道、取液通道及加液盤腸道有塑料軟管制成，加液盤腸道26上均勻開有直徑約Imm小孔，小孔開口向下，盤腸道螺旋向下粘于盒體2內(nèi)側(cè)壁，盒體底部設(shè)有培養(yǎng)器皿支架25，培養(yǎng)皿支架有塑料制成并焊接與盒體2底部；堿性焦性沒食子酸溶液袋3有塑料制成的密封袋，容積250ml，一端設(shè)有橡皮塞，加取試劑使用注射可實(shí)現(xiàn)，或使用醫(yī)療廢棄的輸液袋代替塑料密封袋，使用前用注射器加入蒸餾水進(jìn)行沖洗，并抽出里面空氣。使用時(shí)，預(yù)先配制堿性焦性沒食子酸溶液31，氫氧化鈉17. 96g溶于40ml水中，焦性沒食子酸18. 87g溶于80ml水中，先后注入到堿性焦性沒食子酸溶液袋3中，混勻，置于25°C水浴中預(yù)熱。將培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿置于缺氧盒內(nèi)支架25上，蓋上密封盒蓋1，打開缺氧盒通氣閥21，用50ml注射器經(jīng)壓力緩沖氣囊通氣閥門11向壓力緩沖囊12內(nèi)注入IOOml空氣，關(guān)閉通氣閥 11，用輸液器將配好的堿性焦性沒食子酸溶液袋3連接于加液閥門23，打開加液閥門23，打開壓力緩沖囊通氣閥門11，使用輸液器將堿性焦性沒食子酸溶液31通過加液閥門加入到缺氧培養(yǎng)盒內(nèi)，關(guān)閉加液閥門23。將缺氧培養(yǎng)盒置于搖床上，震蕩5分鐘。將缺氧培養(yǎng)箱置于37°C環(huán)境中，半小時(shí)后。用50ml注射器經(jīng)加液孔加入朽1檬酸溶液50ml (預(yù)熱溫度20°C )溶有24g檸檬酸。如果試驗(yàn)中不需加二氧化碳可考慮不用加檸檬酸，如果實(shí)驗(yàn)中不需清除蓄積的二氧化碳，可加入檸檬酸28g。搖床震蕩，I分鐘。經(jīng)氣體閥門加入二氧化碳?xì)怏w60ml (如果不需加二氧化碳的實(shí)驗(yàn)，此步可省去)。將缺氧培養(yǎng)箱置于37°C中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，可通過加取培養(yǎng)基閥門及通道24在保證無氧的條件下加取培養(yǎng)基，并進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式
，本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可顯而易見地得到的技術(shù)方案的簡(jiǎn)單變化或等效替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種缺氧培養(yǎng)盒，其特征在于，包括密封盒蓋(I)、盒體(2)和堿性焦性沒食子酸溶液袋(3)，其特征是密封盒蓋(I)內(nèi)側(cè)設(shè)有壓力緩沖氣囊(12)，氣囊通過通氣閥門(11)與外界相通，盒體(2)底部設(shè)有培養(yǎng)器皿支架(25)，盒體(2)壁上設(shè)有加液閥門(23)、加取培養(yǎng)基閥門及通道(24)、加液盤腸(25)，堿性焦性沒食子酸溶液袋(3)內(nèi)溶液通過輸液器輸(32)及加液閥門(23)加入到缺氧培養(yǎng)盒內(nèi)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的缺氧培養(yǎng)盒，其特征在于，在密封盒蓋(I)內(nèi)側(cè)設(shè)有壓力緩沖氣囊(12)通過氣囊通氣閥門(11)與外界相通，所述壓力緩沖囊(12)可拆卸。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的缺氧培養(yǎng)盒，其特征在于，所述加液盤腸(25)開有噴灑液小孔。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的缺氧培養(yǎng)盒，其特征在于，所述盒體(2)壁上設(shè)有加取培養(yǎng)液閥門及通道(24)。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的缺氧培養(yǎng)盒，其特征在于，堿性焦性沒食子酸溶液袋(3)是真空密封袋或醫(yī)療用棄的250ml輸液袋，經(jīng)蒸餾水沖洗后用注射器抽成真空。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的缺氧培養(yǎng)盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟在加堿性焦性沒食子酸溶液去除盒內(nèi)氧氣后，并用注射器通過加液閥門(23)向缺氧盒內(nèi)加入檸檬酸溶液，使檸檬酸、氫氧化鈉和焦性沒食子酸構(gòu)成緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的缺氧培養(yǎng)盒的使用方法，其特征在于，在加檸檬酸溶液后，通過加液閥門(23)加入二氧化碳?xì)怏w60ml。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種缺氧培養(yǎng)盒及其使用方法，是一種用于缺氧環(huán)境中培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的醫(yī)療實(shí)驗(yàn)設(shè)備，培養(yǎng)盒要求快速清除培養(yǎng)環(huán)境中的氧氣，并維持盒內(nèi)外壓力平衡。該缺氧培養(yǎng)盒有密封盒蓋(1)、盒體(2)和堿性焦性沒食子酸溶液袋(3)三部分構(gòu)成，密封盒蓋內(nèi)側(cè)設(shè)有壓力緩沖氣囊(12)；盒體(2)壁上設(shè)有加液閥門(23)、加取培養(yǎng)基閥門及通道(24)、加液盤腸(25)。方法包括如下步驟在密封塑料袋中配制堿性焦性沒食子酸溶液；去除氧氣后加入檸檬酸溶液，構(gòu)成緩沖液；加入二氧化碳?xì)怏w，維持細(xì)胞或細(xì)菌代謝需要及培養(yǎng)環(huán)境中的酸堿度。優(yōu)點(diǎn)是實(shí)現(xiàn)無氧速度快，可計(jì)時(shí)缺氧時(shí)間，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)適用，體積小，可大量生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12M3/00GK102660459SQ20121014644
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月14日
發(fā)明者李曉明, 殷安安, 熊偉, 程鵬, 章翔, 韓寧 申請(qǐng)人:韓寧