專利名稱：一種具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種堿性蛋白酶組合物，具體涉及ー種具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物。
背景技術(shù)：
堿性蛋白酶是通過深層發(fā)酵、提取及精制而成的ー種蛋白水解酶。它能水解蛋白質(zhì)分子肽鏈生成多肽或氨基酸，具有較強(qiáng)分解蛋白質(zhì)的能力。目前エ業(yè)用酶制劑中75%是蛋白水解酶，而蛋白酶是エ業(yè)用酶中占據(jù)比例最大的酶類，大約占全世界毎年總銷售量的60%左右。 利用其蛋白水解特性，堿性蛋白酶在食品加工、釀造、絲綢、制革以及洗滌劑等眾多行業(yè)均有廣泛應(yīng)用
堿性蛋白酶是目前市場(chǎng)上流行的洗滌添加剤，能大幅度提高洗滌去污能力，特別對(duì)血潰、汗?jié)?、奶潰、油潰等蛋白類污垢具有?dú)特的洗滌效果。堿性蛋白酶用來處理毛、絲等蛋白質(zhì)纖維，對(duì)羊毛制品能起到拋光作用，制得的羊毛制品光澤度高，低溫染色的色澤鮮艷，經(jīng)柔軟整理后，織物具有手感柔軟、滑爽的性能，具有機(jī)可洗、抗起球、起毛等護(hù)理功能；此外還能有效消除有機(jī)氯，且對(duì)人體無傷害，還可用干絲的脫膠，無損纖維。堿性蛋白酶在用于浸泡皮革(獸皮)時(shí)，可水化皮革，使鮮皮回水，用于鹽干皮或鹽濕皮中，可避免儲(chǔ)存期間皮革腐爛，這種浸水酶可以節(jié)省浸泡時(shí)間約4-6小時(shí)，節(jié)約能源。堿性蛋白酶可制成香皂、肥皂、膏霜、洗面奶、洗滌劑、洗衣粉、洗手液、沐浴露、美容護(hù)膚品等。可作用于人體皮膚上的老化角質(zhì)層，促使其退化、分解、去除，促進(jìn)皮膚新陳代謝，減少因日曬引起的膚色深現(xiàn)象，使皮膚保養(yǎng)呈現(xiàn)良好的白嫩狀態(tài)，具有獨(dú)特的美白嫩膚、美顔保健、祛斑除污垢的優(yōu)異功效，而且去污能力強(qiáng)，除菌消毒、安全放心。在食品加工中堿性蛋白酶可應(yīng)用于食品行業(yè)動(dòng)植物蛋白質(zhì)的水解，生成多肽或氣基酸，形成具有獨(dú)特風(fēng)味的蛋白質(zhì)水解液，被廣泛使用在調(diào)味液和保健品打業(yè)當(dāng)中。包括利用堿性蛋白酶提取大米水解蛋白。大米蛋白以其合理的氨基酸組成，較高的生物利用率及特有的低過敏性等特點(diǎn)被公認(rèn)為優(yōu)質(zhì)植物蛋白。與傳統(tǒng)的堿提酸沉法相比，酶法提取是利用蛋白酶對(duì)大米蛋白的降解和修飾作用，使其變成可溶性的肽而被提取出來。酶法提取反應(yīng)條件溫和，蛋白質(zhì)多肽鏈可水解為短肽鏈，提高了蛋白質(zhì)的溶解性，同時(shí)其反應(yīng)的液固比小，提高了提取液中的固形物含量，降低了用于除去提取液水分的能量消耗，為エ業(yè)生產(chǎn)創(chuàng)造了有利條件。堿性蛋白酶在制作面包過程中的應(yīng)用面粉是面包制作過程的主要原料。它含有不溶解的谷蛋白，這決定了面包的質(zhì)量。通過堿性蛋白酶可以通過限制性降解來修飾小麥谷蛋白。酶處理的面團(tuán)可以増加其韌性和機(jī)械強(qiáng)度從而增加其應(yīng)用范圍。過量使用蛋白酶可以減少面團(tuán)的混合時(shí)間和増加面包的產(chǎn)量。使用細(xì)菌蛋白酶可以増加面團(tuán)的延展性。由于堿性蛋白酶的制作程序復(fù)雜，如果能提高其活性就能提高對(duì)它的利用率，間接降低成本。低聚木糖(xylooligosaccharide, X0S),又稱為木寡糖，是由2-7個(gè)木糖分子以β-1，4糖苷鍵結(jié)合而成的功能性聚合糖，其天然存在于竹根、水果、蔬菜、牛乳和蜂蜜中，來源廣泛，獲得成本低。低聚木糖以其顯著的雙歧桿菌増殖作用以及其他功效而在食品、醫(yī)藥和保健品中廣泛應(yīng)用，成為最近發(fā)展起來的一種功能性食品，具有極大的開發(fā)前景。然而，據(jù)發(fā)明人了解，目前尚未有關(guān)于低聚木糖對(duì)堿性蛋白酶活性增強(qiáng)作用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物，以及其應(yīng)用。
為此，本發(fā)明一方面提供ー種具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物，包括堿性蛋白酶和低聚木糖，其中每1000 U堿性蛋白酶對(duì)應(yīng)的低聚木糖含量小于100 g，如可以是
O.01-100 g, 1-100 g, 80-100 g，或?yàn)?100 go本發(fā)明另一方面提供ー種具有蛋白質(zhì)分解功能的產(chǎn)品，包括所述具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物，所述產(chǎn)品可為加酶洗滌齊 、纖維改性齊 、皮革處理齊 、化妝品、食品、醫(yī)藥用品等。本發(fā)明的有益效果在于利用低聚木糖對(duì)堿性蛋白酶活性的增強(qiáng)作用，提高了堿性蛋白酶的利用率，降低了分解蛋白質(zhì)的產(chǎn)品的成本；利用低聚木糖自身的多重功能，如降血糖、降血壓、雙歧桿菌増殖效果等，使得產(chǎn)品功能性得以擴(kuò)展，應(yīng)用領(lǐng)域更為廣泛。


圖I是示出堿性蛋白酶活性增強(qiáng)率與低聚木糖相對(duì)含量之間關(guān)系的圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)ー步詳細(xì)說明。按照《QB/T 1803-1993エ業(yè)酶制劑通用試驗(yàn)方法》中的福林法來測(cè)定蛋白酶的活性。材料和試劑
福林試劑于2000 mL磨ロ回流裝置中加入鎢酸鈉(Na2WO4- 2Η20) 100 g、鑰酸鈉(Na2MoO4- 2H20)25 g、水700 mL、85%磷酸50 mL、濃鹽酸100 mL，小火沸騰回流10 h，取下回流冷卻器，在通風(fēng)櫥中加入硫酸鋰(Li2S04)50 g、水50 mL和數(shù)滴濃溴水(99%)，再微沸15min以除去多余的溴,冷卻,加水定容至1000 mL,混勻,過濾。忙存于棕色瓶?jī)?nèi)。使用時(shí)用ー份福林試劑與ニ份水混合，搖勻。碳酸鈉溶液O. 4 mol/L 三氯こ酸0. 4 mol/L
氫氧化鈉溶液0. 5 mol/L 鹽酸溶液I mol/L及0. I mol/L緩沖溶液硼酸緩沖溶液(PH= 10. 5)適用于堿性蛋白酶 甲液稱取硼酸鈉(硼砂)19. 08 g，加水溶解并定容至1000 mL ；
こ液稱取氫氧化鈉4. O g,加水溶解并定容至1000 mL。使用中，取甲液500 mL、こ液400 mL混勻，用水稀釋至1000 mL，并用pH劑校正。低聚木糖蘇州先闊生物科技有限公司產(chǎn)品。堿性蛋白酶購自上海源葉生物科技有限公司(1000 U/g)，使用時(shí)稀釋600倍。酪素購自上海源葉生物科技有限公司，使用時(shí)配成10g/L。堿性蛋白酶活性測(cè)試對(duì)照實(shí)驗(yàn)
(1).在試劑瓶中加入ImL的堿性蛋白酶及ImL的各種濃度的低聚木糖溶液(包括濃度 為零，即不含低聚木糖)于40°C ±0. 2°C環(huán)境中靜置2min ；
(2).再在上述試劑瓶中加入2.OOmL的三氯こ酸，搖勻，于40°C ±0. 2°C環(huán)境中靜置IOmin ；
(3).再在上述試劑瓶中加入I.OOmL酪素，混合均勻；
(4).將上述試劑瓶取出靜置IOmin后過濾；
(5).用量杯取I.OOmL濾液，再在量杯中加入5. OOmL碳酸鈉溶液；
(6).在上述量杯中加入I.OOmL福林試劑使用溶液，混合均勻；
(7).將步驟(6)中最終的溶液置于40°C±0. 2°C，顯色20 min，并于680nm波長(zhǎng)，用IOmm比色皿，選取低聚木糖濃度為零的樣品管設(shè)背景管，并調(diào)零。樣品測(cè)試
(1).在試劑瓶中加入ImL的堿性蛋白酶及ImL的各種濃度的低聚木糖溶液(包括濃度為零，即不含低聚木糖)于40°C ±0. 2°C環(huán)境中靜置2min ；
(2).再在上述試劑瓶中加入1.00mL酪素，混合均勻，于40°C ±0.2°C環(huán)境中靜置IOmin ；
(3).再在上述試劑瓶中加入2.00 mL的三氯こ酸，搖勻；
(4).將上述試劑瓶取出靜置10min后過濾；
(5).用量杯取I.OOmL濾液，再在量杯中加入5. OOmL碳酸鈉溶液；
(6).再在上述量杯中加入I.OOmL福林試劑使用溶液，混合均勻；
(7).將步驟(6)中最終的溶液置于40°C±0. 2°C，顯色20 min，并于680nm波長(zhǎng)，用IOmm比色皿測(cè)試其吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線
繪制相應(yīng)的含有不同含量低聚木糖的酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算吸光常數(shù)K是否在規(guī)定范圍內(nèi)。計(jì)算得出K=98. 2895±0. 0013。即K值基本相同。實(shí)驗(yàn)所述濃度的低聚木糖在680nm波長(zhǎng)處無明顯吸光度。X = 5/10 XAXKXn
X——樣品的酶活力，u/g(u/mL)
A-----樣品吸光度；
K------吸光常數(shù)；
5------反應(yīng)試劑的總體積，mL;
10----反應(yīng)時(shí)間IOmin,以I min計(jì);η——稀釋倍數(shù)。由此可以看出，由于K值基本相同，酶活的變化可以由A的變化來計(jì)算，本發(fā)明提供的實(shí)施例基于這ー原理，通過計(jì)算樣品吸光度A變化率來表征樣品的酶活性變化率。提高率按照下式計(jì)算
低聚木糖對(duì)堿性蛋白酶的增強(qiáng)作用=(加入低聚木糖后堿性蛋白酶的樣品吸光度-不加入低聚木糖時(shí)堿性蛋白酶的樣品吸光度)/不加入低聚木糖時(shí)堿性蛋白酶的樣品吸光度 X 100%O結(jié)果示于下表I中，不含低聚木糖的堿性蛋白酶樣品最終的吸光度為O. 0364
權(quán)利要求
1.一種具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物，包括堿性蛋白酶和低聚木糖，其中每1000U堿性蛋白酶對(duì)應(yīng)的低聚木糖含量小于100 go
2.權(quán)利要求I所述的具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物，其特征在于，每1000u堿性蛋白酶對(duì)應(yīng)的低聚木糖含量為0. 01-100 g。
3.權(quán)利要求2所述的具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物，其特征在于，每1000u堿性蛋白酶對(duì)應(yīng)的低聚木糖含量為1-100 g。
4.權(quán)利要求3所述的具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物，其特征在于，每1000u堿性蛋白酶對(duì)應(yīng)的低聚木糖含量為80-100 g。
5.權(quán)利要求4所述的具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物，其特征在于，每1000u堿性蛋白酶對(duì)應(yīng)的低聚木糖含量為100 g。
6.一種具有蛋白質(zhì)分解功能的產(chǎn)品，包括權(quán)利要求1-5之任一項(xiàng)所述的具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物。
7.權(quán)利要求6所述具有蛋白質(zhì)分解功能的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品為加酶洗滌劑、纖維改性劑、皮革處理劑、美容化妝品、食品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物，包括堿性蛋白酶和低聚木糖，其中每1000u堿性蛋白酶對(duì)應(yīng)的低聚木糖含量小于100g。本發(fā)明還涉及一種具有蛋白質(zhì)分解功能的產(chǎn)品，包括所述具有增強(qiáng)活性的堿性蛋白酶組合物，所述產(chǎn)品可為加酶洗滌劑、纖維改性劑、皮革處理劑、美容化妝品、食品等。
文檔編號(hào)C12N9/96GK102660530SQ20121015166
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月16日
發(fā)明者周虹, 李旭, 陳功 申請(qǐng)人:蘇州先闊生物科技有限公司