專利名稱：一種高效降解糞便的復合微生物菌劑及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種高效降解糞便的復合微生物菌劑及其制備方法與應用，屬于微生物發(fā)酵技術領域。
背景技術：
隨著養(yǎng)殖業(yè)集約化程度的提高和生產(chǎn)規(guī)模的不斷擴大，畜禽數(shù)量飛速增加導致糞便的排放量也隨之提高，大量的畜禽糞便不經(jīng)處理就排放到環(huán)境中，不僅污染了環(huán)境，而且也會導致病原菌的擴散，嚴重危害了畜禽和人類的健康。畜禽糞便中含有豐富的粗蛋白、粗纖維、粗脂肪、礦物質(zhì)及氮、磷、鉀等營養(yǎng)成分，是生產(chǎn)質(zhì)優(yōu)有機肥的廉價原料。傳統(tǒng)的堆肥技術存在肥效低、有害微生物殺滅不徹底、發(fā)酵時間長、環(huán)境污染嚴重等現(xiàn)象。利用微生物發(fā)酵技術，通過往糞便中添加有益微生物菌可以對糞便進行殺菌、除臭、降解等一系列無害化處理，從而制得優(yōu)質(zhì)生物有機肥。中國專利文獻CN 102093975A (申請?zhí)?01010584414. 5)公開了ー種快速降解有機廢棄物的復合菌劑及應用，所述的復合菌劑，由功能菌劑和特征菌劑按照體積比為2 4 I的比例復混制備而成的液態(tài)菌劑，應用于城市固體廢棄物和禽畜糞便處理，以及污泥減量的技術領域。該復合菌劑可以增強堆體中總微生物區(qū)系和木質(zhì)纖維素降解菌的活性，可以處理污水，但對于禽畜糞便類處理速度和效果并不理想。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種高效降解糞便的復合微生物菌劑及其制備方法與應用。一種高效降解糞便的復合微生物菌劑，其特征在干，是由枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CICC10088、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus) CICC20515、巨大芽抱桿菌(Bacillus megaterium) CICCl20611、嗜熱脂肪地芽抱桿菌(GeobacillusstearothermophiIus) CICC22975、米曲霉(Asperqillus oryzae) CICC41474、長柄木霉(Trichoderma viride)ACCC30150、嗜熱側抱霉(Thermophilic sporotrichum)ACCC30346>細黃鏈霉菌(Streptomyces microflavus) CICC11006經(jīng)固體發(fā)酵制得。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，上述復合微生物菌劑每克含有是由枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis) CICC10088 活菌數(shù) IO8 101° 個、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus) CICC20515活菌數(shù)IO8 IOici個、巨大芽抱桿菌(Bacillus megaterium)CICC120611活菌數(shù)IO7 IO9個、嗜熱脂肪地芽抱桿菌(Geobacillus stearothermophiIus)CICC22975 活菌數(shù) IO7 IO9個、米曲霉(Asperqillus oryzae) CICC41474 抱子數(shù) IO7 IO9 個、長柄木霉(Trichodermaviride) ACCC30150 抱子數(shù) IO7 IO9 個、嗜熱側抱霉(Thermophilic sporotrichum)ACCC30346 抱子數(shù) IO7 IO9 個、細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus )CICC11006 抱子數(shù)IO7 IO9個。所述枯草芽抱桿菌(Bacillussubtilis) CICC10088、臘狀芽抱桿菌(Bacilluscereus) CICC20515、巨大芽抱桿菌(Bacillus megaterium) CICC120611、米曲霉(Asperqillus oryzae) CICC41474、細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) CICC11006、嗜熱脂肪地芽抱桿菌(Geobacillus stearothermophiIus)CICC22975均購自中國エ業(yè)微生物菌種保藏管理中心；所述長柄木霉(Trichodermaviride) ACCC30150、嗜熱側抱霉(Sporotrichumthermophilic) ACCC30346均購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心。上述復合微生物菌劑的制備方法，包括如下步驟
(I)將枯草芽孢桿菌CICC10088接種于LB液體培養(yǎng)基，在30 37°C條件下液體培養(yǎng)18 24h，然后按l(T20wt%的接種量接種于固體培養(yǎng)基A中，在30 37°C培養(yǎng)3 5天，制得含有枯草芽孢桿菌CICC10088活菌數(shù)8 15 X IO9個/g的固體菌劑A ；(2)將蠟狀芽孢桿菌CICC20515接種于LB液體培養(yǎng)基，在30 37°C條件下液體培養(yǎng)18 24h，然后按l(T20wt%的接種量將蠟狀芽孢桿菌接種于固體培養(yǎng)基B中，在30 37°C培養(yǎng)3飛天，制得含有蠟狀芽孢桿菌CICC20515活菌數(shù)8 15 X IO9個/g的固體菌劑B ；(3)將巨大芽孢桿菌CICC120611接種于LB液體培養(yǎng)基，在30 37°C條件下液體培養(yǎng)18 24h，然后按l(T20wt%的接種量將巨大芽孢桿菌接種于固體培養(yǎng)基C中，在30 37°C培養(yǎng)3飛天，制得含有巨大芽孢桿菌CICC120611活菌數(shù)I 10X IO9個/g的固體菌劑C ;(4)將嗜熱脂肪地芽孢桿菌CICC22975接種于LB液體培養(yǎng)基，在55 60°C條件下液體培養(yǎng)18 24h，然后按l(T20wt%的接種量將嗜熱脂肪地芽孢桿菌接種于固體培養(yǎng)基D中，在55 60°C培養(yǎng)3 5天，制得含有嗜熱脂肪地芽孢桿菌CICC22975活菌數(shù)I 10X IO9個/g的固體菌劑D ;(5)將米曲霉CICC41474接種于PDA固體培養(yǎng)基，在25 30°C條件下固體培養(yǎng)48 72h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按l(T20wt%的接種量將米曲霉接種于固體培養(yǎng)基E中，在25 30°C培養(yǎng)5 7天，制得含有米曲霉CICC41474孢子數(shù)I 3X IO9個/g的固體菌劑E ;(6)將長柄木霉ACCC30150接種于PDA固體培養(yǎng)基，在25 30°C條件下固體培養(yǎng)48 72h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按l(T20wt%的接種量將長柄木霉接種于固體培養(yǎng)基F中，在25 30°C培養(yǎng)5 7天，制得含有長柄木霉ACCC30150孢子數(shù)I
3X IO9個/g的固體菌劑F ;(7)將細黃鏈霉菌CICC11006接種于PDA固體培養(yǎng)基，在25 30°C條件下固體培養(yǎng)48 72h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按l(T20wt%的接種量將細黃鏈霉菌接種于固體培養(yǎng)基G中，在25 30°C培養(yǎng)5 7天，制得含有細黃鏈霉菌CICC11006孢子數(shù)0.5 I. 5 X IO9個/g的固體菌劑G ;(8)將嗜熱側孢霉ACCC30346接種于PDA固體培養(yǎng)基，在40 45°C條件下固體培養(yǎng)48 72h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按l(T20wt%的接種量將嗜熱側孢霉接種于固體培養(yǎng)基H中，在40 45°C培養(yǎng)5 7天，制得含有嗜熱側孢霉ACCC30346孢子數(shù)0.5 I. 5 X IO9個/g的固體菌劑H;(9)取I 3重量份步驟(I)制得的固體菌劑A、1 3重量份步驟(2)制得的固體菌劑B、1 3重量份步驟(3)制得的固體菌劑C、1 3重量份步驟(4)制得的固體菌劑D、1 3重量份步驟(5)制得的固體菌劑E、1 3重量份步驟(6)制得的固體菌劑F、1
3重量份步驟(7)制得的固體菌劑G和I 3重量份步驟(8)制得的固體菌劑H進行混合，制得復合微生物菌劑。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述固體培養(yǎng)基A、固體培養(yǎng)基B、固體培養(yǎng)基C和固體培養(yǎng)基D組分相同，均采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得，原料均為重量份 麩皮粉600 800份，稻殼100 300份 ，玉米面60 100份，豆柏粉10 30份，(NH4)2S044 6 份，MgSO4 · 7H20 O. 4 O. 6 份，KH2PO4 O. 4 O. 6 份，石灰粉 16 20 份，水1000 1200 份，pH 7. O 8. O。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述固體培養(yǎng)基E和固體培養(yǎng)基G組分相同，均采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得，原料均為重量份秸桿粉500 700 份，麩皮粉 300 500 份，(NH4) 2S04 10 30 份，KH2PO4 O. 5 I. 5 份，MgSO4 · 7H20 O. 4 O. 6 份，水 1500 2500 份，ρΗ6· 0 6· 5。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述固體培養(yǎng)基F，采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得，原料均為重量份麩皮粉200 400份，玉米面600 800份，過磷酸鈣3 5份，水400 700份，ρΗ6· 0 6· 5。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述固體培養(yǎng)基H采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得，原料均為重量份麩皮粉300 400 份，甘蔗渣 600 700 份，(NH4) 2S04 10 30 份，KH2PO4 I 3份，MgSO4 · 7H20 O. 4 O. 6 份，水 1000 2000 份，pH 6. 0 6· 5。上述LB液體培養(yǎng)基和I3DA固體培養(yǎng)基均為本領域常用培養(yǎng)基，LB液體培養(yǎng)基組分如下酵母膏5g，蛋白胨10g，NaCl 10g，加蒸餾水至1000ml，用NaOH和HCl調(diào)節(jié)ρΗ7· (Γ7. 2，分裝滅菌;PDA固體培養(yǎng)基組分如下 馬鈴薯汁IOOOml，葡萄糖20g，瓊脂20g，溶化后分裝滅菌；上述復合微生物菌劑在降解糞便中的應用。上述應用，步驟如下(I)將糞便置于發(fā)酵槽中，按照糞便30wt% 50wt%的量添加植物纖維，調(diào)節(jié)水份至40 60wt%,得到預處理物料；(2)按照預處理物料重量2 3%的量稱取復合微生物菌劑，添加到步驟(I)制得的預處理物料中，混合均勻，發(fā)酵過程中通過攪拌使物料溫度維持在70°C以下，發(fā)酵15 30天，含水量降至15 25%，便得到優(yōu)質(zhì)有機肥。上述步驟(I)中的植物纖維為作物秸桿、稻殼、木屑。上述操作步驟如無特別說明，均按本領域常規(guī)操作。有益效果(I)所述復合微生物菌劑利用微生物腐熟，能夠縮短糞便發(fā)酵時間，有效殺死糞便中的幼蟲、卵、病原體，同時提高發(fā)酵后物料中有機質(zhì)、全氮、全磷、全鉀的含量；
(2)所述復合微生物菌劑為固體形態(tài)，単位原料中含菌量高，微生物在干燥情況下以芽孢和孢子的形式存在，可長期保存，利于分裝、運輸及貯存；(3)所述復合微生物菌劑制備エ藝簡單，生產(chǎn)過程不需要大型設備，生產(chǎn)成本低，對環(huán)境污染低。具體實施方法下面結合實施例對本發(fā)明做進ー步闡述，但本發(fā)明所保護范圍不限于此。生物材料
實施例中所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) CICC10088、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)CICC20515> 巨大芽抱桿菌(Bacillus megaterium)CICC120611、米曲霉(Asperqillus oryzae) CICC41474、細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus) CICC11006、嗜熱脂肪地芽抱桿菌(Geobacillus stearothermophiIus)CICC22975均購自中國エ業(yè)微生物菌種保藏管理中心；所述長柄木霉(Trichodermaviride) ACCC30150、嗜熱側抱霉(Sporotrichumthermophilic) ACCC30346均購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心。實施例中所述培養(yǎng)基原料均為本領域常用原料，均可市場購得。實施例I高效降解糞便的復合微生物菌劑的制備方法，包括如下步驟(I)將枯草芽孢桿菌CICC10088接種于LB液體培養(yǎng)基，在30°C條件下液體培養(yǎng)24h，然后按10wt%的接種量接種于固體培養(yǎng)基A中，在37°C培養(yǎng)3天，制得含有枯草芽孢桿菌CICC10088活菌數(shù)IOXlO9個/g的固體菌劑A ；(2)將蠟狀芽孢桿菌CICC20515接種于LB液體培養(yǎng)基，在30°C條件下液體培養(yǎng)24h，然后按10wt%的接種量將蠟狀芽孢桿菌接種于固體培養(yǎng)基B中，在30°C培養(yǎng)3天，制得含有蠟狀芽孢桿菌CICC20515活菌數(shù)8 X IO9個/g的固體菌劑B ；(3)巨大芽孢桿菌CICC120611接種于LB液體培養(yǎng)基，在30°C條件下液體培養(yǎng)24h，然后按10wt%的接種量將巨大芽孢桿菌接種于固體培養(yǎng)基C中，在30°C培養(yǎng)3天，制得含有巨大芽孢桿菌CICC120611活菌數(shù)2X109個/g的固體菌劑C ;(4)嗜熱脂肪地芽孢桿菌CICC22975接種于LB液體培養(yǎng)基，在55°C條件下液體培養(yǎng)24h，然后按10wt%的接種量將嗜熱脂肪地芽孢桿菌接種于固體培養(yǎng)基D中，在55°C培養(yǎng)3天，制得含有嗜熱脂肪地芽孢桿菌CICC22975活菌數(shù)2 X IO9個/g的固體菌劑D ；(5)將米曲霉CICC41474接種于PDA固體培養(yǎng)基，在28°C條件下固體培養(yǎng)60h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按10wt%的接種量將米曲霉接種于固體培養(yǎng)基E中，在28°C培養(yǎng)5天，制得含有米曲霉CICC41474孢子數(shù)I. 5X IO9個/g的固體菌劑E ；(6)將長柄木霉ACCC30150接種于HM固體培養(yǎng)基，在30°C條件下固體培養(yǎng)72h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按15wt%的接種量將長柄木霉接種于固體培養(yǎng)基F中，在30°C培養(yǎng)7天，制得含有長柄木霉ACCC30150孢子數(shù)I. 5X IO9個/g的固體菌劑F；(7)細黃鏈霉菌CICC11006接種于I3DA固體培養(yǎng)基，在30°C條件下固體培養(yǎng)60h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按10wt%的接種量將細黃鏈霉菌接種于固體培養(yǎng)基G中，在30°C培養(yǎng)7天，制得含有細黃鏈霉菌CICCl 1006孢子數(shù)IO9個/g的固體菌劑G；(8)將嗜熱側孢霉ACCC30346接種于PDA固體培養(yǎng)基，在45°C條件下固體培養(yǎng)60h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按10wt%的接種量將嗜熱側孢霉接種于固體培養(yǎng)基H中，在45°C培養(yǎng)7天，制得含有嗜熱側孢霉ACCC30346孢子數(shù)IO9個/g的固體菌劑H;(9 )取相等重量步驟(I)制得的固體菌劑A、步驟(2 )制得的固體菌劑B、步驟(3 )制得的固體菌劑C、步驟(4)制得的固體菌劑D、步 驟(5)制得的固體菌劑E、步驟(6)制得的固體菌劑F、步驟(7)制得的固體菌劑G和步驟(8)制得的固體菌劑H進行混合，制得復合微生物菌劑。所述固體培養(yǎng)基A、固體培養(yǎng)基B、固體培養(yǎng)基C和固體培養(yǎng)基D組分相同,均采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得麩皮粉80kg,稻殼 IOkg,玉米面 8kg,豆柏粉 2kg, (NH4)2SO4 O. 5kg, MgSO4 · 7H2O
O.05kg, KH2PO4 O. 05kg，石灰粉 I. 8kg，水 100L, pH 7. 4。所述固體培養(yǎng)基E和固體培養(yǎng)基G組分相同，均采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得秸桿粉60kg，麩皮粉 40kg，(NH4)2SO4 2kg，KH2PO4 O. 1kg，MgSO4 · 7H20 0. 05kg，水200L，pH 6. O0所述固體培養(yǎng)基F，采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得，原料均為重量份麩皮粉30kg,玉米面70kg,過磷酸I丐O. 4kg,水50L, pH 6. O。所述固體培養(yǎng)基H采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得，原料均為重量份麩皮粉35kg，甘蔗渣 65kg，(NH4)2SO4 2kg，KH2PO4 O. 2kg，MgSO4 · 7H20 0. 05kg，水150L, pH 6. 0。經(jīng)檢測，制得的降解糞便的復合微生物菌劑中，每克復合微生物菌劑含有枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)活菌數(shù) I. 25X IO9 個、臘狀芽抱桿菌(Bacillus cereus)活菌數(shù)IO9個、巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)活菌數(shù)2. 5X IO8個、嗜熱脂肪地芽抱桿菌(Geobacillus stearothermophi Ius )活菌數(shù) 2.5X108 個、米曲霉(Asperqillusoryzae)抱子數(shù) I. 87X IO8 個、長柄木霉(Trichoderma viride)抱子數(shù) 1.87X108 個、細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus)抱子數(shù) I. 25 X IO8 個、嗜熱側抱霉(Sporotrichumthermophilic)抱子數(shù) I. 25X IO8 個。實施例2采用如實施例I所述的方法，不同之處在于，步驟(9)固體菌劑A、固體菌劑B、固體菌劑C、固體菌劑D、固體菌劑E、固體菌劑F、固體菌劑G和固體菌劑H的混合重量比為3l3l3l3lo經(jīng)檢測，制得的降解糞便的復合微生物菌劑中，每克復合微生物菌劑含有枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)活菌數(shù) I. 87 X IO9 個、錯狀芽抱桿菌(Bacillus cereus)活菌數(shù)5X IO8個、巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)活菌數(shù)3. 57X IO8個、嗜熱脂肪地芽抱桿菌(Geobacillus stearothermophiIus)活菌數(shù) I. 25X IO8 個、米曲霉(Asperqillusoryzae)抱子數(shù) 2. 81 X IO8 個、長柄木霉(Trichoderma viride)抱子數(shù) 9. 37 X IO7 個、細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus)抱子數(shù) I. 87X IO8 個、嗜熱側抱霉(Sporotrichumthermophilic)抱子數(shù) 6. 25X IO7 個。實施例3采用如實施例I所述的方法，不同之處在于步驟(9)固體菌劑A、固體菌劑B、固體菌劑C、固體菌劑D、固體菌劑E、固體菌劑F、固體菌劑G和固體菌劑H的混合重量比為2
I : I : I : 2 : I : I : I。 經(jīng)檢測，制得的降解糞便的復合微生物菌劑中，每克復合微生物菌劑含有枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)活菌數(shù)2X IO9個、臘狀芽抱桿菌(Bacillus cereus)活菌數(shù)8X IO8個、巨大芽孢桿菌(BaciIIus megaterium)活菌數(shù)2X IO8個、嗜熱脂肪地芽孢桿菌(Geobacillus stearothermophiIus)活菌數(shù) 2X IO8 個、米曲霉(Asperqillus oryzae)孢子數(shù)3X IO8個、長柄木霉(Trichoderma viride)孢子數(shù)I. 5X IO8個、細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus)抱子數(shù) IO8 個、嗜熱側抱霉(Sporotrichum thermophilic)抱子數(shù)IO8個。實施例4上述復合微生物菌劑在降解豬糞便中的應用，步驟如下(I)將300kg豬糞便與IOOkg玉米秸桿置于發(fā)酵槽中，調(diào)節(jié)水份至55wt%，得到預處理物料；(2)稱取8kg復合微生物菌劑，添加到步驟(I)制得的處理糞便中，混合均勻，發(fā)酵過程中通過攪拌使物料溫度維持在70°C以下，發(fā)酵20天左右，含水量降至20%左右，臭氣消失，便得到優(yōu)質(zhì)有機肥。按上述方法分別對實施例I、實施例2和實施例3制得的復合微生物菌劑進行試驗，分別為處理I、處理2、處理3。糞便在降解過程中，溫度變化顯示了微生物對糞便的作用效果，在發(fā)酵過程中，每隔一段時間記錄糞便的發(fā)酵溫度，結果如表I所示。種子發(fā)芽指數(shù)(GI)是用來檢測堆肥對植物有無毒性，當GI大于50%時就可以認為基本無毒，當達到80%以上就可以認為對植物沒有毒性。具體方法如下培養(yǎng)皿內(nèi)墊ー張濾紙，均勻放入20顆黃瓜種子，加入堆肥浸提液(樣品按固液比I :5浸提30min)5. OmL，在30°C黑暗的生化培養(yǎng)箱中恒溫保濕培養(yǎng)48h后，測定發(fā)芽率和根長，根據(jù)式(I)計算種子的發(fā)芽指數(shù)，以蒸餾水作空白対照。發(fā)芽指數(shù)(GI)=(處理發(fā)芽率X處理根長)/ (空白發(fā)芽率X空白根長)X 100%Cl)在發(fā)酵過程中每隔一段時間記錄糞便的發(fā)芽指數(shù)，結果如表3所示。待發(fā)酵結束后，采用農(nóng)業(yè)標準NY525-2002測定含水量、有機質(zhì)、全氮、全磷、全鉀的含量，結果如表5所不。實施例5上述復合微生物菌劑在降解雞糞便中的應用，步驟如下(I)將300kg雞糞便與140kg雜木屑置于發(fā)酵槽中，調(diào)節(jié)水份至55wt%，得到預處理物料；(2)稱取9kg復合微生物菌劑，添加到步驟(I)制得的處理糞便中，混合均勻，發(fā)酵過程中通過攪拌使物料溫度維持在70°C以下，發(fā)酵20天左右，含水量降至20wt%左右，臭氣消失，便得到優(yōu)質(zhì)有機肥。按上述方法分別對實施例I、實施例2和實施例3制得的復合微生物菌劑進行試驗，分別為處理4、處理5、處理6。檢測方法與實施例4相同，實驗結果如表2、表4、表6所不。對照例I (I)將300kg豬糞便與IOOkg玉米秸桿置于發(fā)酵槽中，調(diào)節(jié)水份至55wt%進行發(fā)酵，發(fā)酵過程中通過攪拌使物料溫度維持在70°C以下，發(fā)酵30天左右。檢測方法與實施例4相同，實驗結果如表I、表3、表5所不。對照例2參照中國專利文獻CN 102093975A中實施例I所記載的技術方案配制對比菌劑，按照本申請實施例4的方法施用上述對比菌劑。檢測方法與實施例4相同，實驗結果如表I、表3、表5所不。對照例3(I)將300kg雞糞便與140kg玉米秸桿粉置于發(fā)酵槽中，調(diào)節(jié)水份至55wt%進行發(fā)酵，發(fā)酵過程中通過攪拌使物料溫度維持在70°C以下，發(fā)酵30天左右。檢測方法與實施例5相同，實驗結果如表2、表4、表6所不。對照例4參照中國專利文獻CN 102093975A中實施例I所記載的技術方案配制對比菌劑，按照本申請實施例5的方法施用上述對比菌劑。實驗結果如表2、表4、表6所不。結果檢測表I不同處理豬糞便對發(fā)酵溫度的影響(V )
權利要求
1.一種高效降解糞便的復合微生物菌劑，其特征在干，是由枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) CICC10088、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus) CICC20515、巨大芽抱桿菌(Bacillus megaterium) CICCl20611、嗜熱脂肪地芽抱桿菌(GeobacillusstearothermophiIus) CICC22975、米曲霉(Asperqillus oryzae) CICC41474、長柄木霉(Trichoderma viride)ACCC30150、嗜熱側抱霉(Thermophilic sporotrichum)ACCC30346、細黃鏈霉菌(Streptomyces microflavus) CICC11006經(jīng)固體發(fā)酵制得。
2.如權利要求I所述的復合微生物菌劑，其特征在于，姆克復合微生物菌劑含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) CICC10088活菌數(shù)IO8 101°個、蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)CICC20515 活菌數(shù) IO8 IOici個、巨大芽抱桿菌(Bacillus megaterium)CICC120611活菌數(shù) IO7 IO9 個、嗜熱脂肪地芽抱桿菌(Geobacillus stearothermophiIus)CICC22975活菌數(shù)IO7 IO9個、米曲霉(Asperqillus oryzae) CICC41474抱子數(shù)IO7 IO9個、長柄木霉(Trichoderma viride) ACCC30150 抱子數(shù) IO7 IO9 個、嗜熱側抱霉(Thermophilicsporotrichum) ACCC30346 抱子數(shù) IO7 IO9 個、細黃鏈霉菌(Streptomyces microf lavus)CICCl 1006 孢子數(shù) IO7 IO9 個。
3.根據(jù)權利要求I或2所述復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)將枯草芽孢桿菌CICC10088接種于LB液體培養(yǎng)基，在30 37°C條件下液體培養(yǎng)18 24h，然后按l(T20wt%的接種量接種于固體培養(yǎng)基A中，在30 37°C培養(yǎng)3 5天，制得含有枯草芽孢桿菌CICC10088活菌數(shù)8 15 X IO9個/g的固體菌劑A ； (2)將蠟狀芽孢桿菌CICC20515接種于LB液體培養(yǎng)基，在30 37°C條件下液體培養(yǎng)18 24h，然后按l(T20wt%的接種量將蠟狀芽孢桿菌接種于固體培養(yǎng)基B中，在30 37°C培養(yǎng)3 5天，制得含有蠟狀芽孢桿菌CICC20515活菌數(shù)8 15 X IO9個/g的固體菌劑B ； (3)將巨大芽孢桿菌CICC120611接種于LB液體培養(yǎng)基，在30 37°C條件下液體培養(yǎng)18 24h，然后按l(T20wt%的接種量將巨大芽孢桿菌接種于固體培養(yǎng)基C中，在30 37°C培養(yǎng):Γ5天，制得含有巨大芽孢桿菌CICC120611活菌數(shù)I IOX IO9個/g的固體菌劑C ; (4)將嗜熱脂肪地芽孢桿菌CICC22975接種于LB液體培養(yǎng)基，在55 60°C條件下液體培養(yǎng)18 24h，然后按l(T20wt%的接種量將嗜熱脂肪地芽孢桿菌接種于固體培養(yǎng)基D中，在55 60°C培養(yǎng)3 5天，制得含有嗜熱脂肪地芽孢桿菌CICC22975活菌數(shù)I 10X IO9個/g的固體菌劑D ; (5)將米曲霉CICC41474接種于PDA固體培養(yǎng)基，在25 30°C條件下固體培養(yǎng)48 72h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按l(T20wt%的接種量將米曲霉接種于固體培養(yǎng)基E中，在25 30°C培養(yǎng)5 7天，制得含有米曲霉CICC41474孢子數(shù)I 3X IO9個/g的固體菌劑E ; (6)將長柄木霉ACCC30150接種于PDA固體培養(yǎng)基，在25 30°C條件下固體培養(yǎng)48 72h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按l(T20wt%的接種量將長柄木霉接種于固體培養(yǎng)基F中，在25 30°C培養(yǎng)5 7天，制得含有長柄木霉ACCC30150孢子數(shù)I 3X IO9個/g的固體菌劑F ; (7)將細黃鏈霉菌CICC11006接種于PDA固體培養(yǎng)基，在25 30°C條件下固體培養(yǎng)48 72h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按l(T20wt%的接種量將細黃鏈霉菌接種于固體培養(yǎng)基G中，在25 30°C培養(yǎng)5 7天，制得含有細黃鏈霉菌CICC11006孢子數(shù)O. 5 I. 5X IO9個/g的固體菌劑G ; (8)將嗜熱側孢霉ACCC30346接種于PDA固體培養(yǎng)基，在40 45°C條件下固體培養(yǎng)48 72h，加入無菌水調(diào)整孢子濃度到IO8個/ml，然后按l(T20wt%的接種量將嗜熱側孢霉接種于固體培養(yǎng)基H中，在40 45°C培養(yǎng)5 7天，制得含有嗜熱側孢霉ACCC30346孢子數(shù)O.5 I. 5X IO9個/g的固體菌劑H ； (9)取I 3重量份步驟(I)制得的固體菌劑A、1 3重量份步驟(2)制得的固體菌劑B、1 3重量份步驟(3)制得的固體菌劑C、1 3重量份步驟(4)制得的固體菌劑D、1 3重量份步驟(5)制得的固體菌劑E、1 3重量份步驟(6)制得的固體菌劑F、1 3重量份步驟(7 )制得的固體菌劑G和I 3重量份步驟(8 )制得的固體菌劑H進行混合，制得復合微生物菌劑。
4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基A、固體培養(yǎng)基B、固體培養(yǎng)基C和固體培養(yǎng)基D組分相同，均采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得，原料均為重量份 麩皮粉600 800份，稻殼100 300份，玉米面60 100份，豆柏粉10 30份，(NH4) 2S044 6 份，MgSO4 · 7H20 O. 4 O. 6 份，KH2PO4O. 4 O. 6 份，石灰粉 16 20 份，水1000 1200 份，pH 7. O 8. O。
5.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基E和固體培養(yǎng)基G組分相同，均采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得，原料均為重量份 秸桿粉500 700份，麩皮粉300 500份，(NH4)2SO4IO 30份，KH2PO4O. 5 I. 5份，MgSO4 · 7H20 O. 4 O. 6 份，水 1500 2500 份，ρΗ6· 0 6· 5。
6.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基F，采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得，原料均為重量份 麩皮粉200 400份，玉米面600 800份，過磷酸鈣3 5份，水400 700份，ρΗ6· 0 6· 5。
7.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基H采用如下原料混合、經(jīng)滅菌后制得，原料均為重量份 麩皮粉300 400份，甘蔗渣600 700份，(NH4)2SO4IO 30份，KH2PO4I 3份，MgSO4 · 7Η200· 4 O. 6 份，水 1000 2000 份，pH 6. 0 6· 5。
8.權利要求I所述復合微生物菌劑在降解糞便中的應用。
9.如權利要求8所述的應用，其特征在于，步驟如下 Cl)將糞便置于發(fā)酵槽中，按照糞便30wt% 50wt%的量添加植物纖維，調(diào)節(jié)水份至40 60wt%,得到預處理物料； (2)按照預處理物料重量2 3%的量稱取復合微生物菌劑，添加到步驟(I)制得的預處理物料中，混合均勻，發(fā)酵過程中通過攪拌使物料溫度維持在70°C以下，發(fā)酵15 30天，含水量降至15 25%，便得到優(yōu)質(zhì)有機肥。
10.如權利要求9所述的應用，其特征在于，所述步驟(I)中的植物纖維為作物秸桿、稻殼、木屑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高效降解糞便的復合微生物菌劑及其制備方法與應用，復合微生物菌劑是由枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、嗜熱脂肪地芽孢桿菌、米曲霉、長柄木霉、嗜熱側孢霉、細黃鏈霉菌經(jīng)固體發(fā)酵制得。該復合微生物菌劑能夠縮短糞便發(fā)酵時間，有效殺死糞便中的幼蟲、卵、病原體，同時提高發(fā)酵后物料中有機質(zhì)、全氮、全磷、全鉀的含量。
文檔編號C12R1/01GK102690769SQ20121017871
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月1日 優(yōu)先權日2012年6月1日
發(fā)明者展寧, 楊瑞 申請人:德州市元和農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限責任公司