專利名稱：基于凝膠的核酸等溫擴(kuò)增試劑的保存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物試劑保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ー種生化試劑組合物的保存方法，確切地說是分子生物學(xué)中核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑及試劑混合物的常溫保存方法。
背景技術(shù)：
在過去的20年里，以多聚酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)為代表的核酸擴(kuò)增技術(shù)得到了迅猛的發(fā)展和應(yīng)用。最近幾年，產(chǎn)生了一系列新型的核酸等溫擴(kuò)增技木，這些技術(shù)或基于DNA/RNA生物合成機(jī)制研究的新發(fā)現(xiàn)，或者利用具有特殊功能的核酸酶來實現(xiàn)恒溫條件下對目標(biāo)核酸的擴(kuò)增；無論在實際操作還是在儀器要求方面，這些等溫擴(kuò)增技術(shù)都比PCR技術(shù)更簡單和廉價，從而更容易被開發(fā)和利用；尤其是在核酸檢測及診斷領(lǐng)域，等溫擴(kuò)增技術(shù)正逐漸成為PCR技術(shù)的替代方法而被廣泛應(yīng)用。利用等溫擴(kuò)增技術(shù)開發(fā)的各類檢測及診斷產(chǎn)品在特異性、易用性、成本和方便性等方面具有PCR技術(shù)產(chǎn)品無可比擬的優(yōu)勢，市場前景極為廣闊。雖然等溫擴(kuò)增技木本身優(yōu)勢明顯，但基于等溫擴(kuò)增技術(shù)的產(chǎn)品在大規(guī)模應(yīng)用過程中卻面臨ー些問題的困擾。其中最為突出的是產(chǎn)品需要低溫冷凍保存和運輸。作為核酸擴(kuò)增技術(shù)的ー種，等溫擴(kuò)增也需要由具有生物活性的酶的參與，而酶生物活性的長期保持需要低溫冷凍條件，同時等溫擴(kuò)增反應(yīng)所需的寡聚核苷酸引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)和反應(yīng)緩沖液等均需在冷凍條件下貯存，并且反復(fù)凍融會使這些成份失效，所以基于等溫擴(kuò)增技術(shù)的產(chǎn)品要求在低溫冷凍條件進(jìn)行運輸和保存，這ー方面増加了運輸成本，另ー方面也限制了這些產(chǎn)品在不具備低溫保存條件的環(huán)境或地區(qū)的應(yīng)用。對于大規(guī)模生產(chǎn)、商品化的基于等溫擴(kuò)增技術(shù)的產(chǎn)品，為了保證產(chǎn)品的一致性、穩(wěn)定性和可靠性，也要求盡可能把各種反應(yīng)試劑一次性添加和分裝，并使產(chǎn)品在貯存和運輸過程中具備盡可能長的保質(zhì)期限。因此，發(fā)明一種能夠方便有效保存等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物的方法具有重要的價值。申請?zhí)枮?00810159414. 3的發(fā)明專利“環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物的保存方法”公開了ー種在環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物中添加干燥保護(hù)劑然后進(jìn)行真空干燥或快速風(fēng)干實現(xiàn)環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物常溫長期保存的方法，但這種方法需要專門的真空冷凍干燥儀或快速風(fēng)干機(jī)等復(fù)雜的設(shè)備，還需要消耗大量的能源，并不是ー種十分經(jīng)濟(jì)的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種核酸等溫擴(kuò)增試劑的保存方法，能夠使核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑的混合物在常溫或室溫長期保存，從而彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足。
本發(fā)明的保存方法，是將ー種或幾種核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分包埋在凝膠內(nèi)進(jìn)行保存。上述的凝膠，其熔點低于用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度。上述的凝膠，還包括有熔點高于用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度的凝膠，這種高熔點的凝膠必須與熔點低于用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度的凝膠同時添カロ，添加比例不高于熔點低于用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度的凝膠質(zhì)量的10%。上述的核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分為用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶。上述的核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分還包括有引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)和/或三磷酸核苷酸(NTP)、核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的反應(yīng)緩沖液中的任ー種或幾種。上述的聚合酶為DNA聚合酶和/或RNA逆轉(zhuǎn)錄酶。上述的聚合酶為DNA聚合酶和/或RNA聚合酶。核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的反應(yīng)緩沖液為核酸序列依賴性擴(kuò)增的反應(yīng)緩沖液、鏈替代擴(kuò)增反應(yīng)緩沖液或環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增反應(yīng)緩沖液。本發(fā)明的保存方法，ー種操作步驟如下首先將可形成凝膠的物質(zhì)添加到核酸等 溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分中，然后在低于核酸等溫擴(kuò)增聚合酶的滅活溫度下將凝膠熔解，最后冷卻凝固凝膠進(jìn)行保存。本發(fā)明的保存方法，另ー種操作步驟如下首先將可形成凝膠的物質(zhì)與水混合加熱使之溶解配成濃縮的母液，然后將濃縮的母液加入到核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分中，最后讓溫度下降使混合物由液態(tài)凝固為固態(tài)或半固態(tài)的凝膠進(jìn)行保存。上述的可形成凝膠的物質(zhì)在核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 01% 30%。上述的可形成凝膠的物質(zhì)為能形成凝膠的多糖類物質(zhì)和/或明膠類物質(zhì)。上述的可形成凝膠的物質(zhì)為能形成凝膠的人工聚合物。上述能形成凝膠的多糖類物質(zhì)和/或明膠類物質(zhì)為淀粉、糊精、凝結(jié)多糖(又稱凝結(jié)膠、凝膠多糖、熱凝膠、可得然膠、卡德蘭)、結(jié)冷膠、黃原膠、槐豆膠、亞麻籽膠、魔芋膠、殼聚糖、瓊脂、瓊脂糖、低熔點瓊脂糖、超低熔點瓊脂糖、紅藻膠、海藻酸(又稱藻酸、褐藻酸、海藻素)、海藻酸鹽(如海藻酸鈉，又被稱為海藻膠、褐藻膠或藻膠)、卡拉膠、果膠、低甲氧基果膠、明膠、阿拉伯膠中的任ー種或幾種。上述能形成凝膠的人工聚合物為甲基纖維素、羧甲基纖維素、丙烯酰胺、聚丙烯酰胺中的任ー種或幾種。上述的凝結(jié)多糖在核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 2% 3%，優(yōu)選為O. 5% 2%。上述的超低熔點瓊脂糖在核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 3% 3. 5%，優(yōu)選為O. 5% 3%。本發(fā)明方法處理后的等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物(核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液)，可常溫貯存和運輸，使用時無需特殊處理，直接使用即可。由于處理后的等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物呈固態(tài)狀，可以很方便的進(jìn)行航空運輸，克服了此前反應(yīng)試劑混合物呈液態(tài)較難利用航空方式進(jìn)行長距離運輸?shù)碾y題。同時本發(fā)明的方法具有エ藝簡單、成本低廉的特點，采用本發(fā)明方法處理后的等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物在便利的貯存條件下(常溫或室溫等溫度條件)具有活性穩(wěn)定持久的優(yōu)點，這在大大降低等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑的貯運成本的同時，還為等溫擴(kuò)增反應(yīng)的實際操作帶來極大的便利。該發(fā)明必將有力促進(jìn)等溫擴(kuò)增技術(shù)的在科研、醫(yī)療、檢驗和檢疫等領(lǐng)域的運用和基于等溫擴(kuò)增技術(shù)的診斷或檢測試劑產(chǎn)品的大規(guī)模推廣應(yīng)用。
具體實施例方式在目前的分子實驗、檢測操作中，若是直接將核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑(即核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分)如引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)或三磷酸核苷酸(NTP)、聚合酶(DNA聚合酶、RNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等)、聚合酶的反應(yīng)緩沖液(不同類型的等溫擴(kuò)增反應(yīng)需要不同的聚合酶和反應(yīng)試劑)等的混合物保存在常溫或者室溫條件下，通常情況下f 2天后這些反應(yīng)試劑混合物就失去了對目的核酸的擴(kuò)增能力。研究發(fā)現(xiàn)，在常溫或室溫的條件下，等溫擴(kuò)增反應(yīng)液(即等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物)中最容易失去反應(yīng)活性的是聚合酶，而這些聚合酶喪失活性的主要原因是由于長時間保存、溫度過高或溫度變化導(dǎo)致酶活性中心維持高級結(jié)構(gòu)的氫鍵、離子鍵、ニ硫鍵等分子作用カ受到破壞所致；在常溫或室溫條件下，等溫擴(kuò)增反應(yīng)液(即等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物)中的寡聚核苷酸引物、dNTP也會很快降解，無法參與基因擴(kuò)增。申請人在長期的研究中發(fā)現(xiàn)，在等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物中添加O. 019T30%(W/V，即重量體積比)可以形成凝膠的物質(zhì)，加熱至合適的溫度使凝膠分子熔解(或溶解)，然后使反應(yīng)試劑混合物溫度下降，混合物可由液態(tài)變?yōu)楣虘B(tài)(或半固態(tài))的凝膠，聚合酶分子就 會被凝膠分子形成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)所固定，酶分子的空間結(jié)構(gòu)(三維結(jié)構(gòu)或高級結(jié)構(gòu))得以長期維持，聚合酶的活性即可長期保持；凝膠也會將等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物中的引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)或三磷酸核苷酸(NTP)及聚合酶反應(yīng)緩沖液中的各種成分固定，使其包埋在凝膠分子形成的微孔內(nèi)，彼此間形成物理性的隔斷，同時也隔絕空氣，從而使等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物的各種成分得以長期穩(wěn)定保存。而當(dāng)需要使用添加了凝膠的等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物(即含有凝膠的核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液)時，可在其中加入核酸模板，加熱到一定溫度進(jìn)行保溫，在這ー溫度下凝膠完全熔化成液態(tài)，等溫擴(kuò)增反應(yīng)即可順利進(jìn)行。在較便利的貯存條件下(如常溫或室溫)和一定的貯存期內(nèi)，上述添加凝膠后的等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物進(jìn)行等溫擴(kuò)增反應(yīng)所得的結(jié)果與用新鮮配制的反應(yīng)混合物所得到的結(jié)果完全相同。因不同類型的等溫擴(kuò)增所需的最適反應(yīng)溫度不同，所以不同類型的等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物需要添加不同種類、不同熔點的凝膠或其不同比例的混合物來實現(xiàn)基于凝膠固定的常溫長期保存。實際使用中，應(yīng)根據(jù)等溫擴(kuò)增所需要的最適溫度選擇在該溫度下能夠完全或部分熔解的凝膠以取得較佳保護(hù)及擴(kuò)增效果；通常情況下，所選用的凝膠的熔點應(yīng)低于用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度，有時為了提高凝膠的強(qiáng)度，可以添加部分熔點高于用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度的凝膠，但這種高熔點的凝膠必須與熔點低于用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度的凝膠同時添加，且添加比例不高于熔點低于用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度的凝膠的10%，如可利用“ 10%明膠+0. 1%結(jié)冷膠”的方式提高明膠的強(qiáng)度，或可利用“2. 0%瓊脂糖+0. 2%聚丙烯酰胺”的方式提高瓊脂糖凝膠的強(qiáng)度(上述百分比表示凝膠在核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加濃度，為質(zhì)量體積百分比 g/ml)。上述凝膠是指溶液中的膠體粒子或高分子在一定條件下互相連接或自身分子吸水膨脹，形成空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)空隙中充滿了作為分散介質(zhì)的液體的ー種特殊的分散體系O以下通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)ー步說明。實施例I 環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)反應(yīng)試劑混合物添加凝膠后的保存效果分析I. LAMP反應(yīng)試劑混合物添加不同濃度和不同種類凝膠進(jìn)行保存
將除被測樣品核酸以外的各種LAMP反應(yīng)試劑的混合物6048 μ L (包括LAMP弓丨物FIP 和 BIP 各 I. 6 μ M，引物 F3 和 Β3 各 O. 2 μ M，dATP、dTTP、dGTP 和 dCTP 各 I. 4mM,MgCl26mM,甜菜堿 1M，Tris-HCl 20mM,KCl 10mM，MgS042mM，(NH4)2SO4IOmM, Triton X-1000· l%，Bst DNA聚合酶2016U)按每管432 μ L分裝于14個I. 5mL的離心管中，按表I第I列(共14行，包括不添加凝膠的空白對照)所示的濃度和種類向每個I. 5mL的離心管中加入可形成凝膠的物質(zhì)并混勻，然后將I. 5mL的離心管置于金屬浴上，按照不同凝膠的溶解溫度于5(T65°C保溫5分鐘，使凝膠充分溶解，再將每個I. 5mL離心管中的混合物按24 μ L的量分裝于18個O. 2mL的離心管中，然后將每組18個裝有混合物的O. 2mL的離心管分別置于4°C、20°C (常溫)、37°C條件下保存(每個溫度條件下保存6個裝有混合物的O. 2mL的離心管，分3個保存時間段進(jìn)行抽檢，每個時間段每次抽檢2個裝有混合物的O. 2mL的離心管作為重復(fù))。2. LAMP反應(yīng)試劑混合物添加兩種及兩種以上凝膠進(jìn)行保存 將除被測樣品核酸以外的各種LAMP反應(yīng)試劑的混合物6048 μ L (包括LAMP弓丨物FIP 和 BIP 各 I. 6 μ M，引物 F3 和 B3 各 O. 2 μ M，dATP、dTTP、dGTP 和 dCTP 各 I. 4mM，甜菜堿1M, Tris-HCl 20mM, KCl IOmM, MgS048mM, (NH4)2SO4IOmM, Triton X-1000. 1%, Bst DNA 聚合酶2016們按每管432レし分裝于14個I. 5mL的離心管中，按表2第I列(共14行，包括不添加凝膠的空白對照)所示的濃度和種類向每個I. 5mL的離心管中加入凝膠并混勻，然后將I. 5mL的離心管置于金屬浴上，按照不同凝膠的溶解溫度于5(T65°C保溫5分鐘(應(yīng)低于Bst DNA聚合酶的滅活溫度80°C )，使凝膠充分溶解，再將每個I. 5mL離心管中的混合物按24 μ L的量分裝于18個0. 2mL的離心管中，然后將每組18個裝有混合物的0. 2mL的離心管分別置于4°C、20°C和37°C條件下保存(每個溫度條件下保存6個裝有混合物的0. 2mL的離心管，分3個保存時間段進(jìn)行抽檢，每個時間段每次抽檢2個裝有混合物的0. 2mL的離心管作為重復(fù))。3. LAMP反應(yīng)試劑混合物的保存和有效性檢驗保存于4°C裝有反應(yīng)試劑混合物的0. 2mL的離心管分別在貯存期滿2個月、4個月和6個月時進(jìn)行抽樣檢驗，保存于20°C的裝有反應(yīng)試劑混合物的0. 2mL的離心管分別在貯存期滿I個月、2個月和3個月時進(jìn)行抽樣檢驗，保存于37°C的裝有反應(yīng)試劑混合物的0. 2mL的離心管分別在貯存期滿10天、20天和30天時進(jìn)行抽樣檢驗。檢驗方法如下I)依據(jù)上述9個貯存時間段，共需進(jìn)行9批次、每批次56個的LAMP反應(yīng)試劑混合物的有效性檢測，每次檢測的時候需將變性后的對蝦白班綜合征病毒(White spotsyndrome virus, WSSV)的核酸(30ng/ μ L)56 μ L等量分裝于56個裝有混合有凝膠的LAMP反應(yīng)試劑混合物的0. 2mL的離心管中。同時，按照本實施例步驟I中的試劑比例配制新鮮的LAMP反應(yīng)液24 μ L，添加變性后的WSSV核酸(30ng/ μ L) I μ L，作為陽性對照。2)將上述離心管于63° C保溫60miη進(jìn)行LAMP反應(yīng)。LAMP反應(yīng)終止后，在每個離心管中加入2 μ L 10倍稀釋的核酸染料GeneFinder ，然后于90° C保溫5min使反應(yīng)產(chǎn)物染色并終止反應(yīng)。如果離心管中反應(yīng)液呈現(xiàn)綠色，則說明該離心管中的LAMP反應(yīng)試劑的混合物具有正常的反應(yīng)活性；如果離心管中反應(yīng)液呈現(xiàn)橙黃色，則說明該離心管中的LAMP反應(yīng)試劑的混合物已失去正常的反應(yīng)活性。檢測結(jié)果顯示，實驗設(shè)置的陽線對照均顯綠色，表明該LAMP反應(yīng)體系工作正常；實驗設(shè)置的空白對照組(LAMP反應(yīng)試劑的混合物中不添加任何凝膠直接在4° C、20°C和37° C條件下保存)均顯色橙黃色，表明LAMP反應(yīng)試劑的混合物不添加任何凝膠而直接放置在4° C、20°C和37° C條件下，經(jīng)過上述時間的保存后，已喪失反應(yīng)能力；對上述添加不同濃度、不同種類凝膠的LAMP反應(yīng)試劑混合物的保存效果的檢測結(jié)果見表I和表2。對上述部分陽性對照、空白對照和添加凝膠的反應(yīng)體系擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，結(jié)果顯示擴(kuò)增后染色反應(yīng)液顯示綠色樣本的其電泳泳道均出現(xiàn)LAMP產(chǎn)物的典型LADDER帶型，擴(kuò)增后染色反應(yīng)液顯示橙黃色的樣本其電泳泳道均未出現(xiàn)LAMP產(chǎn)物的典型LADDER帶型。添加不同濃度、不同種類凝膠的LAMP反應(yīng)試劑混合物的保存效果的后檢測結(jié)果(見表I和2)表明保存時間為I個月、2個月時，在4°C和20°C條件下貯存的混合物絕大部分都具有正常的反應(yīng)活性；保存時間為10天時，在37°C條件下貯存的混合物絕大部分都具有正常的反應(yīng)活性。表I.不同濃度、不同種類凝膠對LAMP反應(yīng)試劑混合物的保護(hù)效果
條件 f 4-C 4Γ 4Γ 20η 20Γ2 20Γ3 37て 37で 37Γ2個月 4個/] 6個月個丨] 個J] 個丨] 10 20夭 30天凝 __
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I+++-+-+--注1.表的第I列示LAMP反應(yīng)試劑混合物中添加凝膠的種類和濃度。2.表中空白對照為不添加任何凝膠的LAMP反應(yīng)試劑混合物。3.表中“ + ”號表示LAMP反應(yīng)試劑混合物有良好擴(kuò)增活性，表示LAMP反應(yīng)試劑混合物沒有擴(kuò)增活性。表2.兩種以上凝膠對LAMP反應(yīng)試劑混合物的保護(hù)效果
權(quán)利要求
1.一種基于凝膠的核酸等溫擴(kuò)增試劑的保存方法，其特征在于所述的保存方法是將ー種或幾種核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分包埋在凝膠內(nèi)進(jìn)行保存。
2.如權(quán)利要求I所述的保存方法，其特征在于所述的凝膠，其熔點低于用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度。
3.如權(quán)利要求2所述的保存方法，其特征在于所述的凝膠，還包括有熔點高于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度的凝膠，且熔點高于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度的凝膠的添加質(zhì)量不高于熔點低于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度的凝膠的10%。
4.如權(quán)利要求I所述的保存方法，其特征在于所述的核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分為用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶。
5.如權(quán)利要求4所述的保存方法，其特征在于所述的核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分還包括有引物、三磷酸脫氧核苷酸dNTP和/或三磷酸核苷酸NTP、核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的反應(yīng)緩沖液的任ー種或幾種。
6.如權(quán)利要求4或5所述的保存方法，其特征在于所述的核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶為DNA聚合酶和/或RNA逆轉(zhuǎn)錄酶。
7.如權(quán)利要求4或5所述的保存方法，其特征在于所述的核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶為DNA聚合酶和/或RNA聚合酶。
8.如權(quán)利要求5所述的保存方法，其特征在于所述的核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的反應(yīng)緩沖液為依賴核酸序列的擴(kuò)增的反應(yīng)緩沖液、鏈替代擴(kuò)增反應(yīng)緩沖液或環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增反應(yīng)緩沖液。
9.如權(quán)利要求I所述的保存方法，其特征在于操作步驟如下首先將可形成凝膠的物質(zhì)添加到核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分中，然后在低于核酸等溫擴(kuò)增聚合酶的滅活溫度下將凝膠熔解，最后冷卻凝固進(jìn)行保存。
10.如權(quán)利要求I所述的保存方法，其特征在于操作步驟如下首先將可形成凝膠的物質(zhì)與水混合加熱使之溶解配成濃縮的母液，然后將濃縮的母液加入到核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分中，最后讓溫度下降使混合物由液態(tài)凝固為固態(tài)或半固態(tài)的凝膠進(jìn)行保存。
11.如權(quán)利要求9或10所述的保存方法，其特征在于所述的可形成凝膠的物質(zhì)在核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 019Γ30%。
12.如權(quán)利要求9或10所述的保存方法，其特征在于所述的可形成凝膠的物質(zhì)為能形成凝膠的多糖類物質(zhì)和/或明膠類物質(zhì)。
13.如權(quán)利要求12所述的保存方法，其特征在于所述的多糖類物質(zhì)和/或明膠類物質(zhì)為淀粉、糊精、凝結(jié)多糖、結(jié)冷膠、黃原膠、槐豆膠、亞麻籽膠、魔芋膠、殼聚糖、瓊脂、瓊脂糖、低熔點瓊脂糖、超低熔點瓊脂糖、紅藻膠、海藻酸、海藻酸鹽、卡拉膠、果膠、低甲氧基果膠、明膠、阿拉伯膠中的任ー種或幾種。
14.如權(quán)利要求9或10所述的保存方法，其特征在于所述的可形成凝膠的物質(zhì)為能形成凝膠的人工聚合物。
15.如權(quán)利要求14所述的能形成凝膠的人工聚合物為甲基纖維素、羧甲基纖維素、丙烯酰胺、聚丙烯酰胺中的任ー種或幾種。
16.如權(quán)利要求13所述的保存方法，其特征在于所述的凝結(jié)多糖在核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 2°/Γ3%。
17.如權(quán)利要求13所述的保存方法，其特征在于所述的超低熔點瓊脂糖在核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 39Γ3. 5%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于凝膠的核酸等溫擴(kuò)增試劑的保存方法，是將一種或幾種核酸等溫擴(kuò)增反應(yīng)液的組分包埋在凝膠內(nèi)進(jìn)行保存；所述凝膠的熔點低于用于核酸等溫擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度。本發(fā)明方法處理后的等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物，可常溫貯存和運輸，使用時無需特殊處理，直接使用即可。由于處理后的等溫擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物呈固態(tài)狀，可以很方便的進(jìn)行航空運輸，解決了此前反應(yīng)試劑混合物呈液態(tài)較難利用航空方式進(jìn)行長距離運輸?shù)碾y題。本發(fā)明必將有力促進(jìn)等溫擴(kuò)增技術(shù)的在科研、醫(yī)療、檢驗和檢疫等領(lǐng)域的運用和基于等溫擴(kuò)增技術(shù)的診斷或檢測試劑產(chǎn)品的大規(guī)模推廣應(yīng)用。
文檔編號C12N15/10GK102703427SQ201210178918
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月1日
發(fā)明者史成銀, 張慶利, 李美霞, 梁艷, 王勤濤, 黃倢 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所