專利名稱：基于凝膠的多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試劑保存方法及反應(yīng)試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生化試劑組合物的保存方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ー種基于凝膠的多聚酶鏈反應(yīng)試劑保存方法及反應(yīng)試劑。
背景技術(shù)：
在過去的20年里，以多聚酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction, PCR)為代表的核酸擴(kuò)增技術(shù)得到了迅猛的發(fā)展和應(yīng)用。由于PCR技術(shù)方便快捷、可在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目標(biāo)核酸片段，所以該技術(shù)在基因克隆與重組表達(dá)、生物物種鑒別與分類、物種起源與進(jìn)化、流行病病原檢測和法醫(yī)鑒定等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。雖然PCR技木本身優(yōu)勢明顯，但基于該技術(shù)的產(chǎn)品在大規(guī)模應(yīng)用過程中卻面臨ー些問題的困擾，其中最為突出的是產(chǎn)品需要低溫冷凍保存和運(yùn)輸。作為核酸擴(kuò)增技術(shù)的ー種，PCR擴(kuò)增需要由具有生物活性的酶的參與，而酶生物活性的長期保持需要低溫冷凍條件，同時(shí)PCR反應(yīng)所需的寡聚核苷酸引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)和反應(yīng)緩沖液等均需在冷凍條件下貯存，并且反復(fù)凍融會(huì)使這些成份失效，所以基于PCR擴(kuò)增技術(shù)的產(chǎn)品要求在低溫冷凍條件進(jìn)行運(yùn)輸和保存，這ー方面增加了運(yùn)輸成本，另ー方面也限制了這些產(chǎn)品在不具備低溫保存條件的環(huán)境或地區(qū)的應(yīng)用。對(duì)于大規(guī)模生產(chǎn)、商品化的基于PCR擴(kuò)增技術(shù)的產(chǎn)品，為了保證產(chǎn)品的一致性、穩(wěn)定性和可靠性，也要求盡可能把各種反應(yīng)試劑一次性添加和分裝，并使產(chǎn)品在貯存和運(yùn)輸過程中具備盡可能長的保質(zhì)期限。因此，發(fā)明一種能夠方便有效保存PCR反應(yīng)試劑混合物的方法具有重要的價(jià)值。發(fā)明專利“聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)混合物的保存方法(ZL 0011250. 4)”公開了ー種利用核酸真空濃縮儀在低溫條件下干燥PCR反應(yīng)試劑混合物來實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)試劑混合物長期保存的方法，但這種方法需要專門的核酸真空濃縮儀或真空冷凍干燥儀等復(fù)雜的設(shè)備，還需要消耗大量的能源，并不是ー種十分經(jīng)濟(jì)的方法。發(fā)明專利“含高濃度甘油的PCR和RT-PCR全預(yù)混試劑(ZL 03117011. O)”公開了ー種利用添加30-65% (v/v)甘油實(shí)現(xiàn)PCR試劑低溫長期保存的方法，但該方法無法用于PCR試劑的常溫長期保存。因此有必要提供一種能使PCR試劑在常溫下長期保存的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種基于凝膠的多聚酶鏈反應(yīng)試劑保存方法及反應(yīng)試劑，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。本發(fā)明的ー個(gè)方面是提供一種在多聚酶鏈反應(yīng)試劑中添加能形成凝膠的物質(zhì)并形成凝膠從而使PCR反應(yīng)試劑混合物在常溫或室溫長期保存的方法。本發(fā)明的另ー個(gè)方面是提供一種采用上述方法制作的PCR反應(yīng)試劑，以及包含有該反應(yīng)試劑的試劑盒。本發(fā)明的基于凝膠的多聚酶鏈反應(yīng)試劑保存方法，是將ー種或幾種多聚酶鏈反應(yīng)液的組分包埋在凝膠內(nèi)進(jìn)行保存。上述的凝膠，其熔點(diǎn)低于用于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶的滅活溫度。
上述的凝膠，還包括有熔點(diǎn)高于用于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶的滅活溫度的凝膠，這種高熔點(diǎn)的凝膠必須與熔點(diǎn)低于用于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶的滅活溫度的凝膠同時(shí)添カロ，添加比例不高于熔點(diǎn)低于用于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶的滅活溫度的凝膠質(zhì)量的10%。上述的多聚酶鏈反應(yīng)液的組分為用于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶。上述的多聚酶鏈反應(yīng)液的組分還包括有引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)、多聚酶鏈反應(yīng)聚合酶的反應(yīng)緩沖液中的任ー種或幾種。上述的用于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶為DNA聚合酶。上述的DNA聚合酶為Taq DNA聚合酶。本發(fā)明的保存方法，ー種操作步驟如下首先將可形成凝膠的物質(zhì)添加到多聚酶 鏈反應(yīng)液的組分中，然后在低于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶的滅活溫度下將凝膠熔解，最后冷卻凝固凝膠進(jìn)行保存。本發(fā)明的保存方法，另ー種操作步驟如下首先將可形成凝膠的物質(zhì)與水或含水的溶劑加熱使之溶解配成濃縮的母液，然后將濃縮的母液加入到多聚酶鏈反應(yīng)液的組分中，最后讓溫度下降使混合物由液態(tài)凝固為固態(tài)或半固態(tài)的凝膠進(jìn)行保存。上述的可形成凝膠的物質(zhì)在多聚酶鏈反應(yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比 g/ml 為 O. 01% 30%。上述的可形成凝膠的物質(zhì)為能形成凝膠的多糖類物質(zhì)和/或明膠類物質(zhì)。上述能形成凝膠的多糖類物質(zhì)和/或明膠類物質(zhì)為淀粉、糊精、凝結(jié)多糖(又稱凝結(jié)膠、凝膠多糖、熱凝膠、可得然膠、卡德蘭)、結(jié)冷膠、黃原膠、槐豆膠、亞麻籽膠、魔芋膠、殼聚糖、瓊脂、瓊脂糖、低熔點(diǎn)瓊脂糖、超低熔點(diǎn)瓊脂糖、紅藻膠、海藻酸(又稱藻酸、褐藻酸、海藻素)、海藻酸鹽(如海藻酸鈉，又被稱為海藻膠、褐藻膠或藻膠)、卡拉膠、果膠、低甲氧基果膠、明膠和阿拉伯膠中的任ー種或幾種。上述的可以形成凝膠的物質(zhì)為能形成凝膠的人工聚合物。上述能形成凝膠的人工聚合物為甲基纖維素、羧甲基纖維素、丙烯酰胺、聚丙烯酰胺中的任ー種或幾種。上述的凝結(jié)多糖在多聚酶鏈反應(yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 2% 3%，優(yōu)選為 O. 5% 2. 5%ο上述的瓊脂糖在多聚酶鏈反應(yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為
O.3% 3. 5%，優(yōu)選為 O. 5% 3%。本發(fā)明還涉及ー種可在常溫下長期保存的多聚酶鏈反應(yīng)試劑，該反應(yīng)試劑是將除核酸模板外的ー種或幾種多聚酶鏈反應(yīng)液的組分包埋在凝膠內(nèi)制備的。本發(fā)明還包括一種可以在常溫保存和運(yùn)輸?shù)亩嗑勖告湻磻?yīng)試劑盒，該試劑盒包括有可在常溫下長期保存的多聚酶鏈反應(yīng)試劑，以及其它分子實(shí)驗(yàn)需要的組分。采用本發(fā)明方法處理后的多聚酶鏈反應(yīng)試劑，可常溫貯存和運(yùn)輸，使用時(shí)無需特殊處理，直接使用即可。由于處理后的多聚酶鏈擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物呈固態(tài)狀，可以很方便的進(jìn)行航空運(yùn)輸，克服了此前反應(yīng)試劑混合物呈液態(tài)較難利用航空方式進(jìn)行長距離運(yùn)輸?shù)碾y題。同時(shí)本發(fā)明的方法和試劑盒具有エ藝簡單、成本低廉的特點(diǎn)，采用本發(fā)明方法處理后的多聚酶鏈反應(yīng)試劑混合物及試劑盒在便利的貯存條件下(常溫或室溫等溫度條件)具有活性穩(wěn)定持久的優(yōu)點(diǎn)，這在大大降低多聚酶鏈反應(yīng)試劑的貯運(yùn)成本的同時(shí)，還為多聚酶鏈反應(yīng)的實(shí)際操作帶來極大的便利。該發(fā)明必將有力促進(jìn)多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)的在科研、醫(yī)療、檢驗(yàn)和檢疫等領(lǐng)域的運(yùn)用和基于多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)的診斷或檢測試劑產(chǎn)品的大規(guī)模推廣應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式在目前的分子實(shí)驗(yàn)、檢測操作中，若是直接將PCR反應(yīng)試劑(即多聚酶鏈反應(yīng)液的組分)如引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)、DNA聚合酶、DNA聚合酶的反應(yīng)緩沖液(不同類型的PCR反應(yīng)需要不同的反應(yīng)試劑)等的混合物保存在常溫或者室溫條件下，通常情況下f 2天后這些反應(yīng)試劑混合物就失去了對(duì)目的核酸的擴(kuò)增能力。研究發(fā)現(xiàn)，在常溫或室溫的條件下，PCR反應(yīng)試劑混合物中最容易失去反應(yīng)活性的是DNA聚合酶，而這些聚合酶喪失活性的主要原因是由于長時(shí)間保存或溫度過高或溫度變化導(dǎo)致聚合酶活性中心維持高級(jí)結(jié)
構(gòu)的氫鍵、離子鍵、ニ硫鍵等分子作用力受到破壞所致；在常溫或室溫條件下，多聚酶鏈反應(yīng)液(即PCR反應(yīng)試劑混合物)中的寡聚核苷酸引物、dNTP也會(huì)很快降解，無法參與基因擴(kuò)增。申請(qǐng)人在長期的研究中發(fā)現(xiàn)，在PCR反應(yīng)試劑混合物中添加O. 019T30%(W/V，即重量體積比)可以形成凝膠的物質(zhì)，加熱至合適的溫度使凝膠分子熔解(或熔解)，然后使反應(yīng)試劑混合物溫度下降，混合物可由液態(tài)變?yōu)楣虘B(tài)(或半固態(tài))的凝膠，聚合酶分子就會(huì)被凝膠分子形成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)所固定，聚合酶分子的空間結(jié)構(gòu)(三維結(jié)構(gòu)或高級(jí)結(jié)構(gòu))得以長期維持，聚合酶的活性即可長期保持。而且凝膠也會(huì)將PCR反應(yīng)試劑混合物中的引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)以及聚合酶反應(yīng)緩沖液中的各種成分固定，使其包埋在凝膠分子形成的微孔內(nèi)，彼此間形成物理性的隔斷，同時(shí)也隔絕空氣，從而使PCR反應(yīng)試劑混合物的各種成分得以長期穩(wěn)定保存。本發(fā)明是通過在PCR反應(yīng)試劑混合物中添加可以形成凝膠的物質(zhì)并使反應(yīng)試劑混合物形成凝膠，將反應(yīng)試劑的成分包埋在凝膠內(nèi)部的微孔內(nèi)，使諸成分被固定、形成物理性的隔斷來實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)試劑混合物的常溫長期保存的。當(dāng)需要使用添加了凝膠的PCR反應(yīng)試劑混合物時(shí)，可在其中加入核酸模板按照PCR程序進(jìn)行溫度循環(huán)，當(dāng)加熱到一定溫度時(shí)凝膠完全熔化成液態(tài)，PCR反應(yīng)即可順利進(jìn)行。在較便利的貯存條件下(如常溫或室溫)和一定的貯存期內(nèi)，上述添加凝膠后的PCR反應(yīng)試劑混合物進(jìn)行PCR反應(yīng)所得的結(jié)果與用新鮮配制的PCR反應(yīng)混合物所得到的結(jié)果完全相同。因不同類型的PCR所需的最適反應(yīng)溫度不同，所以不同類型的PCR反應(yīng)試劑混合物需要添加不同種類、不同熔點(diǎn)的凝膠或其不同比例的混合物來實(shí)現(xiàn)基于凝膠固定的常溫長期保存。實(shí)際使用中，應(yīng)根據(jù)PCR所需要的最適溫度選擇在該溫度下能夠完全或部分熔解的凝膠以取得較佳保護(hù)及擴(kuò)增效果；通常情況下，所選用的凝膠的熔點(diǎn)應(yīng)低于用于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶的滅活溫度，有時(shí)為了提高凝膠的強(qiáng)度，可以添加部分熔點(diǎn)高于用于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶的滅活溫度的凝膠，但這種高熔點(diǎn)的凝膠必須與熔點(diǎn)低于用于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶的滅活溫度的凝膠同時(shí)添加，且添加比例不高于熔點(diǎn)低于用于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶的滅活溫度的凝膠的10%，如可利用“10%明膠+0. 1%結(jié)冷膠”的方式提高明膠的強(qiáng)度，或可利用“2. 0%瓊脂糖+0. 2%聚丙烯酰胺”的方式提高瓊脂糖凝膠的強(qiáng)度(上述百分比表示凝膠在多聚酶鏈反應(yīng)液的組分中的添加濃度，為質(zhì)量體積百分比g/ml)。上述凝膠是指溶液中的膠體粒子或高分子在一定條件下互相連接或自身分子吸水膨脹，形成空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)空隙中充滿了作為分散介質(zhì)的液體的ー種特殊的分散體
系O通常選用的可以形成凝膠的物質(zhì)的是指各種能形成凝膠的多糖類物質(zhì)、明膠類物質(zhì)，如淀粉、糊精、凝結(jié)多糖(又稱凝結(jié)膠、凝膠多糖、熱凝膠、可得然膠、卡德蘭)、結(jié)冷膠、黃原膠、槐豆膠、亞麻籽膠、魔芋膠、殼聚糖、瓊脂、瓊脂糖、低熔點(diǎn)瓊脂糖、紅藻膠、海藻酸(又稱藻酸、褐藻酸、海藻素)、海藻酸鹽(如海藻酸鈉，又被稱為海藻膠、褐藻膠或藻膠；又如海藻酸等)、卡拉膠、果膠、低甲氧基果膠、明膠和阿拉伯膠等；也可選用其他能形成凝膠的物質(zhì)，如甲基纖維素、羧甲基纖維素、丙烯酰胺、聚丙烯酰胺等。實(shí)際使用中，應(yīng)以熱可逆的凝膠為主，非熱可逆的凝膠可少量添加以提高凝膠的熔點(diǎn)、增強(qiáng)凝膠的強(qiáng)度。將PCR反應(yīng)試劑混合物保存于常溫或者室溫，Γ2天后這些反應(yīng)試劑混合物對(duì)目的核酸的擴(kuò)增能力就基本完全喪失了。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用本發(fā)明的方法處理后的PCR反應(yīng)試劑的混合物可以在常溫或室溫條件下存放2個(gè)月或以上而不會(huì)失去正常反應(yīng)活性，在較低的溫度條件下(如4°C或以下)存放6個(gè)月仍具有正常的反應(yīng)活性。
以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)ー步說明。實(shí)施例I :PCR反應(yīng)試劑混合物添加凝膠后的保存效果分析I. PCR反應(yīng)試劑混合物添加不同濃度和不同種類凝膠進(jìn)行保存將除核酸模板以外的各種PCR反應(yīng)試劑的混合物6048 μ L(包括PCR引物F和引物R 各 O. 4 μ M，dATP、dTTP、dGTP 和 dCTP 各 I. 4mM, KCl 50mM, Tris/HCl (pH 9. 0) IOmM, MgCl2
I.5mM, l%Triton X-100，Taq DNA 聚合酶 630U)按每管 432 μ L 分裝于 14 個(gè) I. 5mL 的離心管中，按表I第I列(共14行)所示的濃度和種類向每個(gè)I. 5mL的離心管中加入可形成凝膠的物質(zhì)并混勻，然后將I. 5mL的離心管置于金屬浴上，按照不同凝膠的溶解溫度于5(T65°C保溫5分鐘(低于Taq DNA聚合酶的滅活溫度100°C )，使凝膠充分溶解，再將每個(gè)I. 5mL離心管中的混合物按24 μ L的量分裝于18個(gè)O. 2mL的離心管中，然后將每組18個(gè)裝有混合物的O. 2mL的離心管分別置于4°C、20°C (常溫)、37°C條件下保存(每個(gè)溫度條件下保存6個(gè)裝有混合物的O. 2mL的離心管，分3個(gè)保存時(shí)間段進(jìn)行抽檢，每個(gè)時(shí)間段每次抽檢2個(gè)裝有混合物的O. 2mL的離心管作為重復(fù))。2. PCR反應(yīng)試劑混合物添加兩種及兩種以上凝膠進(jìn)行保存將除核酸模板以外的各種PCR反應(yīng)試劑的混合物6048 μ L (包括PCR引物F和引物 R 各 O. 4 μ M，dATP、dTTP、dGTP 和 dCTP 各 I. 4mM, KCl 50mM, Tris/HCl (pH 9. 0) IOmM,MgCl2L 5mM, l%Triton X-100, Taq DNA 聚合酶 630U)按每管 432 μ L 分裝于 14 個(gè) I. 5mL 的離心管中，按表2第I列(共14行)所示的濃度和種類向每個(gè)I. 5mL的離心管中加入凝膠并混勻，然后將I. 5mL的離心管置于金屬浴上，按照不同凝膠的溶解溫度于5(T63°C保溫5分鐘，使凝膠充分溶解，再將每個(gè)I. 5mL離心管中的混合物按24 μ L的量分裝于18個(gè)O. 2mL的離心管中，然后將每組18個(gè)裝有混合物的O. 2mL的離心管分別置于4°C、20°C和37°C條件下保存(每個(gè)溫度條件下保存6個(gè)裝有混合物的O. 2mL的離心管，分3個(gè)保存時(shí)間段進(jìn)行抽檢，每個(gè)時(shí)間段每次抽檢2個(gè)裝有混合物的O. 2mL的離心管作為重復(fù))。3. PCR反應(yīng)試劑混合物的保存和有效性檢驗(yàn)保存于4°C裝有反應(yīng)試劑混合物的O. 2mL的離心管分別在貯存期滿2個(gè)月、4個(gè)月和6個(gè)月時(shí)進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，保存于20°C的裝有反應(yīng)試劑混合物的O. 2mL的離心管分別在貯存期滿I個(gè)月、2個(gè)月和3個(gè)月時(shí)進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，保存于37°C的裝有反應(yīng)試劑混合物的
O.2mL的離心管分別在貯存期滿10天、20天和30天時(shí)進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)。檢驗(yàn)方法如下I)依據(jù)上述9個(gè)貯存時(shí)間段，共需進(jìn)行9批次、每批次56個(gè)的PCR反應(yīng)試劑混合物的有效性檢測，每次檢測的時(shí)候需將變性后的對(duì)蝦白班綜合征病毒(White spot syndromevirus, WSSV)的核酸(30ng/ μ L) 56 μ L等量分裝于56個(gè)裝有混合有凝膠的PCR反應(yīng)試劑混合物的O. 2mL的離心管中。同時(shí)，按照本實(shí)施例步驟I中的試劑比例配制新鮮的PCR反應(yīng)液24μ L，添加變性后的WSSV核酸(30ng/l·! L) I μ L，作為陽性對(duì)照。2)將上述離心管于放入PCR儀中進(jìn)行PCR反應(yīng)95°C保溫5min，I個(gè)循環(huán)；95°C保溫30sec，63°C保溫30sec，72°C保溫lmin，共35個(gè)循環(huán)；72°C保溫5min，I個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)終止后，將上述部分陽性對(duì)照、對(duì)照和添加凝膠的反應(yīng)體系擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，結(jié)果顯示陽性對(duì)照有目的條帶出現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)設(shè)置的對(duì)照組(PCR反應(yīng)試劑的混合物中不添加 任何凝膠直接在4° C、20°C和37° C條件下保存)均無擴(kuò)增產(chǎn)物，添加不同濃度、不同種類凝膠的PCR反應(yīng)試劑混合物的保存效果的檢測結(jié)果見表I和表2。添加不同濃度、不同種類凝膠的PCR反應(yīng)試劑混合物保存后的檢測結(jié)果(見表I和
2)表明保存時(shí)間為I個(gè)月、2個(gè)月時(shí)，在4°C和20°C條件下貯存的混合物絕大部分都具有正常的反應(yīng)活性；保存時(shí)間為10天和20天時(shí)，在37°C條件下貯存的混合物絕大部分都具有正常的反應(yīng)活性。表I.不同濃度、不同種類凝膠對(duì)PCR反應(yīng)試劑混合物的保護(hù)效果
權(quán)利要求
1.一種基于凝膠的多聚酶鏈反應(yīng)試劑保存方法，其特征在干，是將ー種或幾種多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液的組分包埋在凝膠內(nèi)進(jìn)行保存。
2.如權(quán)利要求I所述的保存方法，其特征在于所述的凝膠，其熔點(diǎn)低于用于多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的聚合酶的滅活溫度。
3.如權(quán)利要求2所述的保存方法，其特征在于所述的凝膠，還包括有熔點(diǎn)高于多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的聚合酶的滅活溫度的凝膠，且添加比例不高于熔點(diǎn)低于用于聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的聚合酶的滅活溫度的凝膠質(zhì)量的10%。
4.如權(quán)利要求I所述的保存方法，其特征在于所述的多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液的組分為用于多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的聚合酶。
5.如權(quán)利要求4所述的保存方法，其特征在于所述的多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液的組分還包括有引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶反應(yīng)緩沖液中的任ー種或幾種。
6.如權(quán)利要求2-5任一項(xiàng)所述的保存方法，其特征在于所述的用于多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的聚合酶為DNA聚合酶。
7.如權(quán)利要求6所述的保存方法，其特征在于所述的DNA聚合酶為TaqDNA聚合酶。
8.如權(quán)利要求I所述的保存方法，其特征在于，操作步驟如下首先將可形成凝膠的物質(zhì)添加到多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液的組分中，然后在低于多聚酶鏈反應(yīng)的聚合酶的滅活溫度下將凝膠熔解，最后冷卻凝固凝膠進(jìn)行保存。
9.如權(quán)利要求I所述的保存方法，其特征在于操作步驟如下首先將可形成凝膠的物質(zhì)與含水的溶劑加熱使之溶解配成濃縮的母液，然后將濃縮的母液加入到多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液的組分中，最后讓溫度下降使混合物由液態(tài)凝固為固態(tài)或半固態(tài)的凝膠進(jìn)行保存。
10.如權(quán)利要求8或9所述的保存方法，其特征在于所述的可形成凝膠的物質(zhì)在多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 01°/Γ30%。
11.如權(quán)利要求8或9所述的保存方法，其特征在于所述的可形成凝膠的物質(zhì)為能形成凝膠的多糖類物質(zhì)和/或明膠類物質(zhì)。
12.如權(quán)利要求11所述的保存方法，其特征在于所述的多糖類物質(zhì)和/或明膠類物質(zhì)為淀粉、糊精、凝結(jié)多糖、結(jié)冷膠、黃原膠、槐豆膠、亞麻籽膠、魔芋膠、殼聚糖、瓊脂、瓊脂糖、低熔點(diǎn)瓊脂糖、超低熔點(diǎn)瓊脂糖、紅藻膠、海藻酸、海藻酸鹽、卡拉膠、果膠、低甲氧基果膠、明膠、阿拉伯膠中的任ー種或幾種。
13.如權(quán)利要求8或9所述的保存方法，其特征在于所述的可形成凝膠的物質(zhì)為能形成凝膠的人工聚合物。
14.如權(quán)利要求13所述的保存方法，其特征在于所述的人工聚合物為甲基纖維素、羧甲基纖維素、丙烯酰胺、聚丙烯酰胺中的任ー種或幾種。
15.如權(quán)利要求12所述的保存方法，其特征在于所述的凝結(jié)多糖在多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 2°/Γ3%。
16.如權(quán)利要求12所述的保存方法，其特征在于所述的超低熔點(diǎn)瓊脂糖在多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液的組分中的添加濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 39Γ3. 5%。
17.一種多聚酶鏈反應(yīng)試劑，其特征在于，所述的反應(yīng)試劑是將除核酸模板外的ー種或幾種多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液的組分包埋在凝膠內(nèi)制備的。
18.如權(quán)利要求17所述的反應(yīng)試劑，其特征在于所述的多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液為多聚酶鏈反應(yīng)聚合酶、引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)、多聚酶鏈反應(yīng)聚合酶反應(yīng)緩沖液中的任ー種或幾種。
19.ー種多聚酶鏈反應(yīng)試劑盒，其特征在于所述的試劑盒包含有權(quán)利要求17所述的多聚酶鏈反應(yīng)試劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于凝膠的多聚酶鏈反應(yīng)試劑保存方法及反應(yīng)試劑，是將一種或幾種多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液的組分包埋在凝膠內(nèi)進(jìn)行保存，其中凝膠的熔點(diǎn)低于用于多聚酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增的聚合酶的滅活溫度。另外本發(fā)明還包括可以常溫保存和運(yùn)輸?shù)姆磻?yīng)試劑和試劑盒，采用本發(fā)明方法處理后的多聚酶鏈反應(yīng)試劑，可常溫貯存和運(yùn)輸，使用時(shí)無需特殊處理，直接使用即可。由于處理后的多聚酶鏈擴(kuò)增反應(yīng)試劑混合物呈固態(tài)狀，可以很方便的進(jìn)行航空運(yùn)輸，克服了此前反應(yīng)試劑混合物呈液態(tài)較難利用航空方式進(jìn)行長距離運(yùn)輸?shù)碾y題。
文檔編號(hào)C12N15/10GK102703428SQ201210178919
公開日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月1日
發(fā)明者劉慶慧, 劉莉, 宋曉玲, 張慶利, 楊冰, 黃倢 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所