專利名稱：一種提高泰樂菌素組分a轉(zhuǎn)化率的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物發(fā)酵工程技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種提高泰樂菌素A轉(zhuǎn)化率的方法。
背景技術(shù)：
泰樂菌素是由弗氏鏈霉菌經(jīng)發(fā)酵提取而得到的一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，有泰樂菌素堿、磷酸鹽和酒石酸鹽三種形態(tài)。泰樂菌素是一種禽、畜專用的高效、無殘留抗菌促生劑。對(duì)雞敗血癥、豬流行性肺炎等疾病有獨(dú)特的療效，且對(duì)禽、畜的生長(zhǎng)具有明顯的促進(jìn)作用。泰樂菌素作為動(dòng)物專用抗生素，避免了人畜共用抗生素易產(chǎn)生交叉耐藥性的問題，用于防治豬、禽支原體病。
在泰樂菌素發(fā)酵生產(chǎn)過程中影響泰樂菌素A生物轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵因素是泰樂菌素生物合成的最后一步限速反應(yīng)
大菌素(C) +鹽酸甜菜堿(甲基供體作)-油歷纖隻廢— 泰樂菌素(A)，在該過程中，大菌素甲基轉(zhuǎn)移酶屬于胞內(nèi)酶，其活性易受到發(fā)酵產(chǎn)物及產(chǎn)物類似物的反饋抑制。泰樂菌素發(fā)酵周期中，發(fā)酵前期大菌素甲基轉(zhuǎn)移酶活力較強(qiáng)，酶反應(yīng)抑制劑沒有或較少(泰樂菌素及其他泰樂菌素類似物等)，所以絕大部分大菌素C能夠迅速合成泰樂菌素A，菌體以產(chǎn)組分A為主，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，酶反應(yīng)抑制劑逐漸增多，酶活力降低，部分大菌素C不能被甲基化，此時(shí)菌體以產(chǎn)組分C為主。目前，工業(yè)生產(chǎn)泰樂菌素的發(fā)酵工藝控制仍然是針對(duì)發(fā)酵過程中的PH值、溫度、罐壓等等，其發(fā)酵水平為10000 12000u/ml,泰樂菌素A組分為80 85%。組分轉(zhuǎn)化過程中存在一定的困難,當(dāng)前針對(duì)泰樂菌素轉(zhuǎn)化困難的相關(guān)文獻(xiàn)或?qū)＠两裆形匆妶?bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種有效提高泰樂菌素A組分轉(zhuǎn)化率的方法。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所采取的技術(shù)方案為一種提高泰樂菌素A轉(zhuǎn)化率的方法，該方法是以弗氏鏈霉菌為產(chǎn)生菌，經(jīng)一級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)、二級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)和發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素，其特征是在發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)入穩(wěn)定期時(shí)，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加質(zhì)量濃度為0. 5
2.5%的非離子型表面活性劑。所述的非離子型表面活性劑為聚氧乙烯型非離子表面活性劑、多元醇型非離子型表面活性劑和烷基醇酰胺型非離子型表面活性劑。所述聚氧乙烯型非離子表面活性劑為烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、聚乙二醇或聚氧乙烯胺。所述多元醇型非離子型表面活性劑為失水山梨醇酯、吐溫、司盤或蔗糖酯。
所述烷基醇酰胺型非離子型表面活性劑為十二烷基二乙醇酰胺或烷基醇酰胺磷酸酯。所述在發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)入穩(wěn)定期是指發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)40小時(shí)后。本發(fā)明通過在發(fā)酵培養(yǎng)至穩(wěn)定期時(shí)向培養(yǎng)基中添加非離子型表面活性劑來增強(qiáng)菌絲體細(xì)胞膜通透性，從而促使細(xì)胞內(nèi)的代謝物迅速釋放到細(xì)胞外，進(jìn)而解除了大菌素甲基轉(zhuǎn)移酶的反饋抑制，提高了該酶的活力，最終促使泰樂菌素組分C向組分A的快速轉(zhuǎn)化。當(dāng)前工業(yè)生產(chǎn)中泰樂菌素A組分普遍為80 85%。通過本發(fā)明能夠最終使泰樂菌素A組分含量達(dá)到90 94%。
具體實(shí)施方式

下面用實(shí)例予以說明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，實(shí)例是用于說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。本發(fā)明的范圍與核心內(nèi)容依據(jù)權(quán)利要求書加以確定。實(shí)施例II)發(fā)酵菌株的選擇弗氏鏈霉菌(Strepyomyce fradiae)。2) Im3 一級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉10kg、鹽酸甜菜堿0. 5kg、玉米漿3kg、磷酸氫二銨0. 2kg、碳酸鈣I. 6kg、豆油13L。3) IOm3 二級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉150kg、鹽酸甜菜堿5kg、磷酸氫二銨2kg、碳酸|丐15kg、混合魚粉80kg、玉米衆(zhòng)30kg、豆油100L。4) IOOm3發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基為豆油2000L、豆餅粉1500kg、混合魚粉700kg、磷酸氫二銨30kg、碳酸韓200kg、鹽酸甜菜堿70kg、氯化鈷500g、氯化鉀50kg、氯化鈉100kg、硫酸鎂80kg。具體發(fā)酵工藝步驟如下I) 一級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)采用火焰接種法，將培養(yǎng)成熟的弗氏鏈霉菌種子液接入一級(jí)種子罐中進(jìn)行培養(yǎng)，罐壓0. 03MPa ;罐溫28 29°C;空氣流量0 20h 55m3/h ；20h 移種100/h ;攪拌轉(zhuǎn)速80r/min ；pH值6. 5 6. 8 ;培養(yǎng)時(shí)間20h。2) 二級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)將一級(jí)種子罐中發(fā)酵液全部移入二級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)；罐壓0. 03 0. 05MPa ;罐溫28 29°C ;空氣流量800m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速120r/min ;pH 6 7 ;h培養(yǎng)時(shí)間30h ；3)三級(jí)發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將二級(jí)種子罐發(fā)酵液全部移入發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為a發(fā)酵開始 40h :培養(yǎng)溫度28 29°C、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min。b在發(fā)酵培養(yǎng)40h時(shí)，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加質(zhì)量濃度為0. 5%的聚氧乙烯型非離子表面活性劑如烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯或者聚氧乙烯胺。c40h 結(jié)束溫度 28 29°C、轉(zhuǎn)速 260r/min。d 罐壓 0. 04 0. 05MPa。f發(fā)酵過程中pH6. 0 6. 5。g 空氣流量0h 40h 1600m3/h ；40h 發(fā)酵結(jié)束1500m3/h。i發(fā)酵結(jié)束，培養(yǎng)時(shí)間144h。
發(fā)酵培養(yǎng)6天后，取發(fā)酵濾液Iml加甲醇1ml、蒸餾水8ml，混勻，用0. 45ul濾膜過濾。以2mol/L高氯酸鈉溶液(用lmol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2. 5±0. I)-乙腈(60 40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，檢測(cè)泰樂菌素組分A的含量為91%。實(shí)施例2I)發(fā)酵菌株的選擇弗氏鏈霉菌(Strepyomyce fradiae)。2) Im3 一級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉10kg、鹽酸甜菜堿0. 5kg、玉米漿3kg、磷酸氫二銨0. 2kg、碳酸鈣I. 6kg、豆油13L。3) IOm3 二級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉150kg、鹽酸甜菜堿5kg、磷酸氫二銨2kg、碳酸|丐15kg、混合魚粉80kg、玉米衆(zhòng)30kg、豆油100L。4) IOOm3發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基為豆油2300L、豆餅粉1600kg、混合魚粉750kg、磷酸氫二銨35kg、碳酸韓230kg、鹽酸甜菜堿80kg、氯化鈷550g、氯化鉀55kg、氯化鈉120kg、硫酸鎂85kg。具體發(fā)酵工藝步驟如下I) 一級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)采用火焰接種法，將培養(yǎng)成熟的弗氏鏈霉菌種子液接入一級(jí)種子罐中進(jìn)行培養(yǎng)，罐壓0. 04MPa ;罐溫28 29°C;空氣流量0 20h 55m3/h ；20h 移種100/h ;攪拌轉(zhuǎn)速80r/min ；pH值6. 5 6. 8 ;培養(yǎng)時(shí)間20h。2) 二級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)將一級(jí)種子罐中發(fā)酵液全部移入二級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)；罐壓0. 03 0. 05MPa ;罐溫28 29°C ;空氣流量800m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速120r/min ;pH 6 7 ; h培養(yǎng)時(shí)間30h ；3)三級(jí)發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將二級(jí)種子罐發(fā)酵液全部移入發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為a發(fā)酵開始 40h :培養(yǎng)溫度28 29°C、攪拌轉(zhuǎn)速210r/min。b在發(fā)酵培養(yǎng)40h時(shí)，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加質(zhì)量濃度為I. 0%的非離子表面活性劑聚乙二醇系列如PEG-200、PEG-400、PEG-600、PEG-800 或者 PEG-1000。c40h 結(jié)束溫度 28 29°C、轉(zhuǎn)速 270r/min。d 罐壓 0. 04 0. 05MPa。f發(fā)酵過程中pH6. 0 6. 5。g 空氣流量0h 40h 1600m3/h ；40h 發(fā)酵結(jié)束1500m3/h。i發(fā)酵結(jié)束,培養(yǎng)時(shí)間144h。發(fā)酵培養(yǎng)6天后，取發(fā)酵濾液Iml加甲醇1ml、蒸餾水8ml，混勻，用0. 45ul濾膜過濾。以2mol/L高氯酸鈉溶液(用lmol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2. 5±0. I)-乙腈(60 40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，檢測(cè)泰樂菌素組分A的含量為93%。實(shí)施例3I)發(fā)酵菌株的選擇弗氏鏈霉菌(Strepyomyce fradiae)。2) Im3 一級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉10kg、鹽酸甜菜堿0. 5kg、玉米漿3kg、磷酸氫二銨0. 2kg、碳酸鈣I. 6kg、豆油13L。3) IOm3 二級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉150kg、鹽酸甜菜堿50kg、磷酸氫二銨20kg、碳酸|丐15kg、混合魚粉80kg、玉米衆(zhòng)30kg、豆油100L。4) IOOm3發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基為豆油2500L、豆餅粉1700kg、混合魚粉800kg、磷酸氫二銨30kg、碳酸韓250kg、鹽酸甜菜堿80kg、氯化鈷600g、氯化鉀70kg、氯化鈉130kg、硫酸鎂90kg。具體發(fā)酵工藝步驟如下I) 一級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)采用火焰接種法，將培養(yǎng)成熟的弗氏鏈霉菌種子液接入一級(jí)種子罐中進(jìn)行培養(yǎng)，罐壓0. 03MPa ;罐溫28 29°C;空氣流量0 20h 55m3/h ；20h 移種100/h ;攪拌轉(zhuǎn)速80r/min ；pH值6. 5 6. 8 ;培養(yǎng)時(shí)間20h。2) 二級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)將一級(jí)種子罐中發(fā)酵液全部移入二級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)；罐壓0. 03 0. 05MPa ;罐溫28 29°C ;空氣流量800m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速120r/min ;pH 6 7 ;h培養(yǎng)時(shí)間30h。3)三級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓(壓力0.01
0.02MPa)，然后將二級(jí)種子液全部移入發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為a發(fā)酵開始 40h :培養(yǎng)溫度28 29°C、攪拌轉(zhuǎn)速210r/min。b在發(fā)酵培養(yǎng)40h時(shí)，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加質(zhì)量濃度為I. 5%的多元醇型非離子型表面活性劑如失水山梨醇酯、司盤或者蔗糖酯。c40h 結(jié)束溫度 28 29°C、轉(zhuǎn)速 280r/min。d 罐壓 0. 05 0. 06MPa。f發(fā)酵過程中pH6. 2 6. 5。g 空氣流量0h 40h 1700m3/h ；40h 發(fā)酵結(jié)束1500m3/h。i發(fā)酵結(jié)束,培養(yǎng)時(shí)間144h。發(fā)酵培養(yǎng)6天后，取發(fā)酵濾液Iml加甲醇1ml、蒸餾水8ml，混勻，用0. 45ul濾膜過濾。以2mol/L高氯酸鈉溶液(用lmol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2. 5±0. I)-乙腈(60 40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，檢測(cè)泰樂菌素組分A的含量為94%。實(shí)施例4I)發(fā)酵菌株的選擇弗氏鏈霉菌(Strepyomyce fradiae)。2) Im3 一級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉10kg、鹽酸甜菜堿0. 5kg、玉米漿3kg、磷酸氫二銨0. 2kg、碳酸鈣I. 6kg、豆油13L。3) IOm3 二級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉150kg、鹽酸甜菜堿50kg、磷酸氫二銨20kg、碳酸|丐15kg、混合魚粉80kg、玉米衆(zhòng)30kg、豆油100L。4) IOOm3發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基為豆油2650L、豆餅粉1680kg、混合魚粉800kg、磷酸氫二銨30kg、碳酸韓250kg、鹽酸甜菜堿80kg、氯化鈷600g、氯化鉀70kg、氯化鈉130kg、硫酸鎂90kg。具體發(fā)酵工藝步驟如下I) 一級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)采用火焰接種法，將培養(yǎng)成熟的弗氏鏈霉菌種子液接入一級(jí)種子罐中進(jìn)行培養(yǎng)，罐壓0. 03MPa ;罐溫28 29°C;空氣流量0 20h 55m3/h ；20h 移種100/h ;攪拌轉(zhuǎn)速80r/min ；pH值6. 5 6. 8 ;培養(yǎng)時(shí)間20h。2) 二級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)將一級(jí)種子罐中發(fā)酵液全部移入二級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)；罐壓0. 03 0. 05MPa ;罐溫28 29°C ;空氣流量800m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速120r/min ;pH 6 7 ;h培養(yǎng)時(shí)間30h。
3)三級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓(壓力0.01
0.02MPa)，然后將二級(jí)種子液全部移入發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為a發(fā)酵開始 40h :培養(yǎng)溫度28 29°C、攪拌轉(zhuǎn)速210r/min。b在發(fā)酵培養(yǎng)40h時(shí)，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加質(zhì)量濃度為I. 5%的非離子型表面活性劑吐溫系列，如吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-80或者吐溫-85。c40h 結(jié)束溫度 28 29°C、轉(zhuǎn)速 280r/min。d 罐壓 0. 05 0. 06MPa。
f發(fā)酵過程中pH6. 2 6. 5。g 空氣流量0h 40h 1700m3/h ；40h 發(fā)酵結(jié)束1500m3/h。i發(fā)酵結(jié)束,培養(yǎng)時(shí)間144h。發(fā)酵培養(yǎng)6天后，取發(fā)酵濾液Iml加甲醇1ml、蒸餾水8ml，混勻，用0. 45ul濾膜過濾。以2mol/L高氯酸鈉溶液(用lmol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2. 5±0. I)-乙腈(60 40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，檢測(cè)泰樂菌素組分A的含量為94%。實(shí)施例5I)發(fā)酵菌株的選擇弗氏鏈霉菌(Strepyomyce fradiae)。2) Im3 一級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉10kg、鹽酸甜菜堿0. 5kg、玉米漿3kg、磷酸氫二銨0. 2kg、碳酸鈣I. 6kg、豆油13L。3) IOm3 二級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉150kg、鹽酸甜菜堿50kg、磷酸氫二銨20kg、碳酸I丐150kg、混合魚粉80kg、玉米衆(zhòng)30kg、豆油100L。4) IOOm3發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基為豆油2800L、豆餅粉1700kg、混合魚粉800kg、磷酸氫二銨30kg、碳酸韓250kg、鹽酸甜菜堿80kg、氯化鈷600g、氯化鉀70kg、氯化鈉130kg、硫酸鎂90kg。具體發(fā)酵工藝步驟如下I) 一級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)采用火焰接種法，將培養(yǎng)成熟的弗氏鏈霉菌種子液接入一級(jí)種子罐中進(jìn)行培養(yǎng)，罐壓0. 03MPa ;罐溫28 29°C;空氣流量0 20h 55m3/h ；20h 移種100/h ;攪拌轉(zhuǎn)速80r/min ；pH值6. 5 6. 8 ;培養(yǎng)時(shí)間20h。2) 二級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)將一級(jí)種子罐中發(fā)酵液全部移入二級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)；罐壓0. 03 0. 05MPa ;罐溫28 29°C ;空氣流量800m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速120r/min ;pH 6 7 ;h培養(yǎng)時(shí)間30h。3)三級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓(壓力0.01
0.02MPa)，然后將二級(jí)種子液全部移入發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為a發(fā)酵開始 40h :培養(yǎng)溫度28 29°C、攪拌轉(zhuǎn)速220r/min。b在發(fā)酵培養(yǎng)40h時(shí)，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加質(zhì)量濃度為2. 5%的烷基醇酰胺型非離子型表面活性劑如十二烷基二乙醇酰胺或者烷基醇酰胺磷酸酯。c40h 結(jié)束溫度 28 29°C、轉(zhuǎn)速 300r/min。d 罐壓 0. 04 0. 06MPa。f發(fā)酵過程中pH6. 4 6. 5。
g 空氣流量0h 40h 1800m3/h ；40h 發(fā)酵結(jié)束1600m3/h。i發(fā)酵結(jié)束,培養(yǎng)時(shí)間168h。發(fā)酵培養(yǎng)7天后，取發(fā)酵濾液Iml加甲醇1ml、蒸餾水8ml，混勻，用0. 45ul濾膜過濾。以2mol/L高氯酸鈉溶液(用lmol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2. 5±0. I)-乙腈(60 40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，檢測(cè)泰樂菌素組分A的含量為93%。實(shí)施例6對(duì)比實(shí)例發(fā)酵工藝中沒有添加非離子型表面活性劑，此發(fā)酵工藝也是當(dāng)前工業(yè)生產(chǎn)中普遍使用的工藝。I)發(fā)酵菌株的選擇弗氏鏈霉菌(Strepyomyce fradiae)。
2) Im3 一級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉10kg、鹽酸甜菜堿0. 5kg、玉米漿3kg、磷酸氫二銨0. 2kg、碳酸鈣I. 6kg、豆油13L。3) IOm3 二級(jí)種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基為豆餅粉150kg、鹽酸甜菜堿50kg、磷酸氫二銨20kg、碳酸I丐150kg、混合魚粉80kg、玉米衆(zhòng)30kg、豆油100L。4) IOOm3發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基為豆油2500L、豆餅粉1700kg、混合魚粉800kg、磷酸氫二銨30kg、碳酸韓250kg、鹽酸甜菜堿80kg、氯化鈷600g、氯化鉀70kg、氯化鈉130kg、硫酸鎂90kg。具體發(fā)酵工藝步驟如下I) 一級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)采用火焰接種法，將培養(yǎng)成熟的弗氏鏈霉菌種子液接入一級(jí)種子罐中進(jìn)行培養(yǎng)，罐壓0. 03MPa ;罐溫28 29°C;空氣流量0 20h 55m3/h ；20h 移種100/h ;攪拌轉(zhuǎn)速80r/min ；pH值6. 5 6. 8 ;培養(yǎng)時(shí)間20h。2) 二級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)將一級(jí)種子罐中發(fā)酵液全部移入二級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)；罐壓0. 03 0. 05MPa ;罐溫28 29°C ;空氣流量800m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速120r/min ;pH 6 7 ;h培養(yǎng)時(shí)間30h。3)三級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓(壓力0.01 0. 02MPa)，然后將二級(jí)種子液全部移入發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為a發(fā)酵開始 120h :培養(yǎng)溫度29°C、攪拌轉(zhuǎn)速210r/min。cl20h 結(jié)束(組分轉(zhuǎn)化):溫度36. 5 37°C、轉(zhuǎn)速260r/min。d 罐壓 0.06MPa。f發(fā)酵過程中pH6. 5 6. 7。g空氣流量0h 120h 1735m3/h ；120h 發(fā)酵結(jié)束(組分轉(zhuǎn)化)1568mVh0h發(fā)酵過程中進(jìn)行菌檢，要求無其它雜菌。i發(fā)酵結(jié)束,培養(yǎng)時(shí)間158h。發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，取發(fā)酵濾液Iml加甲醇1ml、蒸餾水8ml，混勻，用0. 45ul濾膜過濾。以2mol/L高氯酸鈉溶液(用lmol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2. 5±0. I)-乙腈(60 40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，檢測(cè)泰樂菌素組分A的含量為84%。
權(quán)利要求
1.一種提高泰樂菌素A轉(zhuǎn)化率的方法，該方法是以弗氏鏈霉菌為產(chǎn)生菌，經(jīng)一級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)、二級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)和發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素，其特征是在發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)入穩(wěn)定期時(shí)，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加質(zhì)量濃度為0. 5^2. 5%的非離子型表面活性劑。
2.按照權(quán)利要求I所述的提高泰樂菌素A轉(zhuǎn)化率的方法，其特征是所述的非離子型表面活性劑為聚氧乙烯型非離子表面活性劑、多元醇型非離子型表面活性劑和烷基醇酰胺型非離子型表面活性劑。
3.按照權(quán)利要求2所述的提高泰樂菌素A轉(zhuǎn)化率的方法，其特征是所述聚氧乙烯型非離子表面活性劑為烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、聚乙二醇或聚氧乙烯胺。
4.按照權(quán)利要求2所述的提高泰樂菌素A轉(zhuǎn)化率的方法，其特征是所述多元醇型非離子型表面活性劑為失水山梨醇酯、吐溫、司盤或蔗糖酯。
5.按照權(quán)利要求2所述的提高泰樂菌素A轉(zhuǎn)化率的方法，其特征是所述烷基醇酰胺型非離子型表面活性劑為十二烷基二乙醇酰胺或烷基醇酰胺磷酸酯。
6.按照權(quán)利要求I所述的提高泰樂菌素A轉(zhuǎn)化率的方法，其特征是所述在發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)入穩(wěn)定期是指發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)40小時(shí)后。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提高泰樂菌素A轉(zhuǎn)化率的方法，該方法是以弗氏鏈霉菌為產(chǎn)生菌，經(jīng)一級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)、二級(jí)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)和發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素，其特征是在發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)入穩(wěn)定期時(shí)，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加質(zhì)量濃度為0.5～2.5%的非離子型表面活性劑。本發(fā)明通過在發(fā)酵培養(yǎng)至穩(wěn)定期時(shí)向培養(yǎng)基中添加非離子型表面活性劑來增強(qiáng)菌絲體細(xì)胞膜通透性，從而促使細(xì)胞內(nèi)的代謝物迅速釋放到細(xì)胞外，進(jìn)而解除了大菌素甲基轉(zhuǎn)移酶的反饋抑制，提高了該酶的活力，最終促使泰樂菌素組分C向組分A的快速轉(zhuǎn)化。當(dāng)前工業(yè)生產(chǎn)中泰樂菌素A組分普遍為80～85%。通過本發(fā)明能夠最終使泰樂菌素A組分含量達(dá)到90～94%。
文檔編號(hào)C12P19/62GK102703549SQ20121018081
公開日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月5日
發(fā)明者任勇, 劉建成, 徐淑芬, 王 義, 王文超 申請(qǐng)人:寧夏泰瑞制藥股份有限公司