專利名稱：一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法。
背景技術(shù)：
藍(lán)鰓太陽(yáng)魚隸屬鱸形目太陽(yáng)魚科，原產(chǎn)于北美，是一種肉味鮮美、易起捕、可觀賞、適溫較廣的名貴小型淡水魚類。六十年代除由北美移入日本，現(xiàn)已在日本內(nèi)陸流域的許多湖泊形成了藍(lán)鰓太陽(yáng)魚的自然種群。1987年，中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)從日本引進(jìn)太陽(yáng)魚并于1999年人工繁殖成功，現(xiàn)已作為優(yōu)質(zhì)魚類進(jìn)行推廣。藍(lán)鰓太陽(yáng)魚是多次產(chǎn)卵魚類，多年的累代繁育與養(yǎng)殖，可能導(dǎo)致養(yǎng)殖太陽(yáng)魚的遺傳多樣性降低。因此，很有必要對(duì)中國(guó)現(xiàn)有太陽(yáng)魚的種群結(jié)構(gòu)、遺傳多樣性現(xiàn)狀進(jìn)行分析。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法來(lái)分析不同地域群體內(nèi)繁殖所得的子代群體和群體間繁殖所得子一代群體的遺傳多樣性，以適應(yīng)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的要求，開(kāi)展藍(lán)鰓太陽(yáng)魚育種工作。為了達(dá)到以上目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法，它包括以下步驟
(1)從尾靜脈采血，提取基因組DNA；
(2)測(cè)定DNA完整性和濃度；
(3)利用隨機(jī)引物進(jìn)行PCR反應(yīng)；
(4)擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分離；
(5)根據(jù)遷移率計(jì)算各群體遺傳變異的各個(gè)參數(shù)。進(jìn)一步地，步驟I中，采集的血樣使用蛋白酶K消化12小時(shí)以上。更進(jìn)一步地,步驟I中，用酹氯法提取基因組DNA。進(jìn)一步地，步驟2中，提取的DNA樣本用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行電泳，電泳完成后通過(guò)紫外分光光度計(jì)檢驗(yàn)DNA完整性和濃度。更進(jìn)一步地，步驟4中，擴(kuò)增產(chǎn)物在2±0. 5%的瓊脂糖進(jìn)行電泳，分離不同分子量大小的DNA片段。進(jìn)一步地，步驟5中，根據(jù)遷移率計(jì)算各群體遺傳變異的各個(gè)參數(shù)，其實(shí)現(xiàn)過(guò)程如下
根據(jù)電泳結(jié)果，遷移率相同的都視為同一位點(diǎn)，有帶的記為1，無(wú)帶的記為0，將電泳圖轉(zhuǎn)化為O、I矩陣，根據(jù)RAPD擴(kuò)增結(jié)果所統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)，計(jì)算各群體遺傳變異的各個(gè)參數(shù)，
卜上LU /K n &、丄齡 八4 D_擴(kuò)増的!多態(tài)位點(diǎn)數(shù)，I 多心k,,、、比例的I十算:A式:P-擴(kuò)増的總為點(diǎn)數(shù)xlCK)/° ’群體內(nèi)和群體間的遺傳相似系數(shù)的計(jì)算公式
權(quán)利要求
1.一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法，它包括以下步驟 (1)從尾靜脈采血，提取基因組DNA； (2)測(cè)定DNA完整性和濃度； (3)利用隨機(jī)引物進(jìn)行PCR反應(yīng)； (4)擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分離； (5)根據(jù)遷移率計(jì)算各群體遺傳變異的各個(gè)參數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法，其特征在于所述的步驟I中，采集的血樣使用蛋白酶K消化12小時(shí)以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法，其特征在于所述的步驟I中，用酚氯法提取基因組DNA。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法，其特征在于所述的步驟2中，提取的DNA樣本用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行電泳，電泳完成后通過(guò)紫外分光光度計(jì)檢驗(yàn)DNA完整性和濃度。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法，其特征在于所述的步驟4中，擴(kuò)增產(chǎn)物在2±0. 5%的瓊脂糖進(jìn)行電泳，分離不同分子量大小的DNA片段。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法，其特征在于所述的步驟5中，所述的根據(jù)遷移率計(jì)算各群體遺傳變異的各個(gè)參數(shù)，其實(shí)現(xiàn)過(guò)程如下 根據(jù)電泳結(jié)果，遷移率相同的都視為同一位點(diǎn)，有帶的記為1，無(wú)帶的記為O，將電泳圖轉(zhuǎn)化為0、1矩陣，根據(jù)RAro擴(kuò)增結(jié)果所統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)，計(jì)算各群體遺傳變異的各個(gè)參數(shù)， 多態(tài)位點(diǎn)比例P的計(jì)算公式
7.群體內(nèi)和群體間的遺傳距離計(jì)算公式
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法，它包括以下步驟(1)從尾靜脈采血，提取基因組DNA；(2)測(cè)定DNA完整性和濃度；(3)利用隨機(jī)引物進(jìn)行PCR反應(yīng)；(4)擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分離；(5)根據(jù)遷移率計(jì)算各群體遺傳變異的各個(gè)參數(shù)。通過(guò)采用以上技術(shù)方案，本發(fā)明一種藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析方法，實(shí)現(xiàn)藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性分析，采用本技術(shù)分析藍(lán)鰓太陽(yáng)魚遺傳多樣性，速度快、準(zhǔn)確率高、效果好。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102676686SQ201210183859
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月6日
發(fā)明者宣云峰, 徐海華, 王榮泉, 阮瑞霞 申請(qǐng)人:吳江市水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司