專利名稱：與冠心病相關(guān)的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素組合及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及與冠心病相關(guān)的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素組合及其應(yīng)用，具體涉及包括 rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259和rsl 1066280的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的遺傳因素與待測(cè)個(gè)體環(huán)境暴露因素包括吸煙、飲酒等的組合，以及基于這樣的組合因素在評(píng)估人群冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
動(dòng)脈粥樣硬化性心腦血管病已成為世界范圍關(guān)注的主要健康問題。2004年的世界衛(wèi)生組織(WHO)報(bào)告顯示，全世界每年心血管疾病以冠心病和腦卒中為主導(dǎo)致的死亡人數(shù)達(dá)高達(dá)1720萬，占所有死亡人數(shù)的三分之一。預(yù)計(jì)2020年這一數(shù)字將進(jìn)一步增加50%， 也顯示，心臟疾病已經(jīng)成為中國人群的主要死亡原因，分列男、女性死亡原因的第2位和第I位。我國每年新發(fā)心肌梗死50萬人，隨著生活方式的改變以及動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的危險(xiǎn)因素持續(xù)增加，冠心病與心肌梗死發(fā)病也還將呈持續(xù)上升趨勢(shì)。目前已確認(rèn)的冠心病環(huán)境危險(xiǎn)因素包括吸煙、飲酒、肥胖和血脂異常等。大量的研究資料表明，冠心病是一種復(fù)雜疾病，是由多個(gè)微效基因與環(huán)境因素長期相互作用所致。因此鑒定出與冠心病相關(guān)的易感基因或致病基因并與環(huán)境危險(xiǎn)因素相結(jié)合，在人群中進(jìn)一步篩選增加疾病風(fēng)險(xiǎn)的易感基因確定易感個(gè)體，將有助于冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)、新藥開發(fā)、診斷和個(gè)體化治療。從基礎(chǔ)到臨床，人們對(duì)此進(jìn)行了大量的研究，并在冠心病的危險(xiǎn)因素和冠心病發(fā)生的病理生理學(xué)方面積累了大量的知識(shí)，但是關(guān)于冠心病與心肌梗死發(fā)生的確切遺傳分子機(jī)制卻知之甚少，對(duì)于怎樣鑒定遺傳易感基因以及鑒定受試者的冠心病遺傳易感性，一直缺乏全面系統(tǒng)有效的識(shí)別方法。早期識(shí)別冠心病高危人群，采取針對(duì)性的生活方式干預(yù)，是減少冠心病發(fā)生，從而遏制醫(yī)療費(fèi)用增長、延長期望壽命的關(guān)鍵。目前，大家普遍認(rèn)為在個(gè)體水平采用模型方法利用個(gè)體傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素水平是識(shí)別冠心病高危人群的有效方法。危險(xiǎn)預(yù)測(cè)已為疾病預(yù)防、政府決策和衛(wèi)生干預(yù)方案效果評(píng)價(jià)，同時(shí)也可以為臨床治療提供可參考的信息。全基因組學(xué)技術(shù)與流行病學(xué)方法的整合為人類復(fù)雜疾病或性狀的生物學(xué)研究帶來了全新的視角。個(gè)體風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是其臨床決策的一個(gè)重要組成部分，若據(jù)此采取更早或更強(qiáng)的干預(yù)措施，患者有可能從中受益。目前已發(fā)現(xiàn)，冠心病相關(guān)的遺傳易感性基因座可對(duì)冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)發(fā)揮獨(dú)立影響，因此應(yīng)重新評(píng)估這些遺傳變異在疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)中的作用。以有效提高疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的能力，從而在傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素的基礎(chǔ)上進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)疾病風(fēng)險(xiǎn)的認(rèn)識(shí)。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述問題，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素的組合；本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素組合的應(yīng)用，具體是其在制備用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)裝置中的應(yīng)用；本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種檢測(cè)本發(fā)明的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素的方法；本發(fā)明的另一目的是提供一種體外檢測(cè)冠心病相關(guān)多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素的方法；本發(fā)明的另一目的是提供一種檢測(cè)本發(fā)明的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素的試劑組合在制備用于體外檢測(cè)冠心病相關(guān)因素的制劑、試劑盒或檢測(cè)裝置或模型中的應(yīng)用；本發(fā)明的另一目的是提供一種體外檢測(cè)來自待測(cè)個(gè)體的樣品中多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素的試劑組合在制備預(yù)測(cè)待測(cè)個(gè)體患冠心病的危險(xiǎn)性的制齊U、試劑盒或檢測(cè)裝置或模型中的應(yīng)用；本發(fā)明的另一目的是提供一種體外預(yù)測(cè)待測(cè)個(gè)體患冠心病的危險(xiǎn)性的方法。 本發(fā)明的另一目的是提供一種用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)裝置，根據(jù)基因多態(tài)性以及環(huán)境因素預(yù)測(cè)個(gè)體冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，能夠很好的識(shí)別冠心病的高危人群，從而針對(duì)性的進(jìn)行干預(yù)，達(dá)到延緩和預(yù)防冠心病發(fā)生的目的。首先，本發(fā)明提供了一種多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素組合，其中，所述的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)包括以下位點(diǎn)rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259 和 rsll066280 ;所述的環(huán)境因素包括個(gè)體吸煙、飲酒、體重指數(shù)信息以及靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值。本發(fā)明中，所述的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs2123536、rs 1842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259 和 rsll066280,以及所述的環(huán)境因素個(gè)體是否吸煙、是否飲酒、體重指數(shù)信息以及靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值等信息，是在大量實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上得出的。在本發(fā)明的具體實(shí)施方式
中，利用FludigmiEPl GENETIC ANALYSIS system, Taqman MGB 探針法對(duì) 7012 例冠心病患者和 8579例對(duì)照樣本進(jìn)行基因分型實(shí)驗(yàn)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行大量實(shí)驗(yàn)研究分析，首次得出上述9個(gè)SNP位點(diǎn)(rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259和rsll066280)與冠心病易感性顯著相關(guān)，并提出環(huán)境因素個(gè)體是否吸煙、是否飲酒、體重指數(shù)信息以及靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值等信息與冠心病易感性的相關(guān)性。在本發(fā)明的大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上，本發(fā)明的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，這些SNPs的危險(xiǎn)等位基因分別是rs2123536多態(tài)性位點(diǎn)為T、rsl842896多態(tài)性位點(diǎn)為T、rs9349379多態(tài)性位點(diǎn)為G、rs9268402多態(tài)性位點(diǎn)為G、rsl2524865多態(tài)性位點(diǎn)為C、rsl0757274多態(tài)性位點(diǎn)為G、rsl333042多態(tài)性位點(diǎn)為G、rs7136259多態(tài)性位點(diǎn)為T、rsl 1066280多態(tài)性位點(diǎn)為A。攜帶這些危險(xiǎn)等位基因的個(gè)體發(fā)生冠心病的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)是沒有攜帶者的I. 13到I. 36倍。另一方面，在所述環(huán)境因素中，個(gè)體吸煙、飲酒、體重指數(shù)信息以及靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值等均與冠心病易感性相關(guān)。從而，一方面，本發(fā)明提供一種檢測(cè)本發(fā)明的多個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素的方法。其中，檢測(cè)所述環(huán)境因素包括個(gè)體吸煙、飲酒、體重指數(shù)信息以及靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值的方法均是所屬領(lǐng)域的常規(guī)方法，本發(fā)明不再贅述。檢測(cè)本發(fā)明的多個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)也可用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)在DNA水平、RNA水平檢測(cè)本發(fā)明所述的多個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)。例如
可以采用直接測(cè)序的方法，通過DNA直接測(cè)序可以直接揭示對(duì)照基因和攜帶突變基因之間的序列差異，具體可以是傳統(tǒng)的使用商業(yè)測(cè)序試劑盒或自動(dòng)測(cè)序儀對(duì)DNA直接進(jìn)行測(cè)序，或是近年來發(fā)展的焦磷酸測(cè)序(Pyrosequencing)、微測(cè)序(SNaPshot)等。焦磷酸測(cè)序技術(shù)適于對(duì)已知的短序列的測(cè)序分析，其原理是引物與模板DNA退火后，在DNA聚合酶(DNA polymerase)、ATP 硫酸化酶(ATP sulfurytase)、突光素酶(Iuciferase)和三憐酸腺苷雙磷酸酶(Apyrase) 4種酶的協(xié)同作用下,將引物上每一個(gè)dNTP的聚合與一次突光信號(hào)的釋放偶聯(lián)起來，通過檢測(cè)熒光的釋放和強(qiáng)度，達(dá)到實(shí)時(shí)測(cè)定DNA序列的目的。SnaPshot技術(shù)平臺(tái)是Applied Biosystems, ABI公司推出了專為檢測(cè)SNP設(shè)計(jì)的分析軟件和試劑盒,可對(duì)多個(gè)SNP位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行基因分型，也被稱為minisequencing，該方法針對(duì)不同突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)不同長度的引物SNaPshot反應(yīng)后,產(chǎn)物通過電泳分離、五色突光檢測(cè)、Gene mapper分析，可在一次電泳膠內(nèi)檢測(cè)多個(gè)SNP位點(diǎn)。也可以采用基于雜交的方法,具體包括Taqman探針法,DNA芯片法等。TaqMan SNP基因分型原理利用核酸外切酶對(duì)5’特異等位基因染色標(biāo)記的切除產(chǎn)生持續(xù)的檢驗(yàn)信號(hào)，反應(yīng)體系包括以基因組DNA或PCR產(chǎn)物為模板；一對(duì)PCR引物，以及分別用FAM和VIC標(biāo)記的2條MGB探針檢測(cè)SNP的兩種類型；在PCR反應(yīng)終點(diǎn)讀取分型數(shù)據(jù)。DNA芯片技術(shù)待 測(cè)基因經(jīng)提取后，被切成長短不一的片段，經(jīng)熒光化學(xué)物質(zhì)標(biāo)記后，注射到嵌有芯片的載片上，由于DNA和探針雜交的程度與熒光強(qiáng)度相關(guān)，因此通過激光掃描，即可根據(jù)熒光強(qiáng)弱測(cè)出被檢測(cè)序列的變異。還可以采用基于引物延伸的方法，如基質(zhì)輔助激光解析離子飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-Tof-MS)。基質(zhì)輔助激光解析離子飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)原理緊挨SNP位點(diǎn)設(shè)計(jì)一段探針，在反應(yīng)體系中以ddNTP替代dNTP，使探針僅在SNP位點(diǎn)處延伸一個(gè)堿基即終止，根據(jù)SNP位點(diǎn)的不同，探針將結(jié)合不同的ddNTP，從而具有不同的分子量，質(zhì)譜儀即可檢測(cè)出這種分子量差異，從而實(shí)現(xiàn)SNP分型的目的。還可以采用基于構(gòu)象的方法，具體例如限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析、單鏈構(gòu)象多態(tài)性(single-strand conformational polymorphism, SSCP)分析、變性梯度凝膠電泳(denauring gradient gel electrophoresis, DGGE)分析、變性高效液相色譜技術(shù)(denaturing high performance liquid chromatography, dHPLC)等分析技術(shù)。其中，RFLP的原理有些SNP多態(tài)位點(diǎn)正好處于限制性內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)處，其中一種多態(tài)對(duì)應(yīng)的PCR擴(kuò)增片斷能夠被相應(yīng)的內(nèi)切酶切動(dòng)，而另一種卻不能，因此通過對(duì)酶切后的PCR產(chǎn)物電泳后的片斷長度分析可知檢測(cè)樣本在該位點(diǎn)處的基因型；如果檢測(cè)SNP位點(diǎn)不存在合適的酶切位點(diǎn)，往往可以通過在PCR引物3’端改變個(gè)別堿基引入限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)，通過這種引物修飾法可以實(shí)現(xiàn)絕大多數(shù)SNP位點(diǎn)的分型都能用RFLP分析來實(shí)現(xiàn)。SSCP :在非變性的條件下，單鏈DNA具有一定的折疊結(jié)構(gòu)，這種折疊結(jié)構(gòu)是由它的核苷酸序列決定的，SSCP的靈敏性依賴于SNP對(duì)折疊的影響和折疊如何影響目的序列的電泳遷移率，其策略是，將PCR擴(kuò)增的待測(cè)片段與去離子甲酰胺混合，接著95°C變性解鏈，再驟冷到冰中，然后通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離；穩(wěn)定的理想條件下，凝膠電泳分離的結(jié)果是在某一位置范圍內(nèi)雜合子包含分隔很近的兩條帶，正常的DNA片段居于其中一條帶，純合突變SNP的DNA片段居于另一條帶。DGGE :利用雙鏈DNA分子在一定梯度變性劑濃度的凝膠中電泳時(shí)，會(huì)在一定變性劑濃度下發(fā)生部分解鏈，導(dǎo)致電泳遷移率下降；分別具有一種SNP等位基因型的兩種DNA分子間即使只有一個(gè)堿基對(duì)的差異，也會(huì)在不同時(shí)間發(fā)生部分解鏈，從而被分離成兩條帶。DHPLC :該技術(shù)是一項(xiàng)在SSCP和DGGE基礎(chǔ)上發(fā)展起來的檢測(cè)SNP的突變技術(shù)，此技術(shù)將未知的DNA片段與野生型DNA混和，經(jīng)加熱變性后再使其降溫重退火，若為有突變的DNA，此時(shí)所形成的雙螺旋有兩種，即為同源雙螺旋和異源雙螺旋，基于同源雙螺旋和異源雙螺旋解鏈溫度的不同，通過控制DHPLC的溫度，使其維持在接近DNA分子Tm值下運(yùn)行，然后進(jìn)行洗脫，越小的DNA分子與柱的親和力越小，就越容易洗脫下來；DNA經(jīng)過PCR擴(kuò)后，由于錯(cuò)配堿基的存在而形成異源雙鏈，因?yàn)閱捂淒NA所帶的電荷比雙鏈少，先被洗脫下來，而與正常的配對(duì)雙鏈分開，最后根據(jù)色譜峰的峰型或數(shù)目來確定SNP的有或無。還可以采用高分辨率溶解曲線分析技術(shù)(HRM)。該分析技術(shù)是依據(jù)在一定的溫度范圍內(nèi)將PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行變性，期間實(shí)時(shí)檢測(cè)體系內(nèi)熒光信號(hào)。熒光值隨著溫度變化，可繪制溶解曲線。每一段DNA都有其獨(dú)特的序列，因而也就有了獨(dú)特的熔解曲線形狀，如同DNA指紋圖譜一樣，具有很高的特異性、穩(wěn)定性和重復(fù)性。根據(jù)曲線準(zhǔn)確區(qū)分野生型純合子、雜合子和突變性純合子。 在具體實(shí)施時(shí)，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以根據(jù)實(shí)際情況選擇上述的任一種技術(shù)體外檢測(cè)本發(fā)明所述多個(gè)基因標(biāo)簽單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)。也可以采用多種技術(shù)的組合來體外檢測(cè)所述多個(gè)基因標(biāo)簽單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)。例如，當(dāng)限制性片斷長度多態(tài)性分析方法與PCR結(jié)合后，檢測(cè)靈敏性和特異性更高。當(dāng)直接測(cè)序法與PCR結(jié)合使用時(shí)，檢測(cè)靈敏性大大提高。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式
中，應(yīng)用的是Taqman MGB方法,使用的是Fludigm EP1 GENETIC ANALYSIS system平臺(tái)，由于該平臺(tái)是屬于較高通量的基因分型平臺(tái)，在樣本數(shù)為96個(gè)樣本檢測(cè)96個(gè)位點(diǎn)(使用96. 96動(dòng)態(tài)芯片)或48個(gè)樣本檢測(cè)48個(gè)位點(diǎn)(使用48. 48動(dòng)態(tài)芯片)時(shí)，具有經(jīng)濟(jì)高效的優(yōu)點(diǎn)。而在具體到本發(fā)明的方案應(yīng)用于少量待測(cè)樣品的分析檢測(cè)時(shí)，采用Fludigm@EPl GENETIC ANALYSIS system平臺(tái)就不具備經(jīng)濟(jì)性和效率上的優(yōu)勢(shì)，此時(shí)可采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)，如Applied Biosystems的7900HT (Fast)real time PCR系統(tǒng)、7500real time PCR系統(tǒng)等，應(yīng)用Taqman-MGB探針法對(duì)單個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行 基因分型；也可以應(yīng)用PCR-RFLP、HRM等其他基因分型方法。此外，本發(fā)明還可進(jìn)一步包括對(duì)所述多個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，對(duì)由本發(fā)明的標(biāo)簽單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并建立了用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的模型，進(jìn)而提供了一種用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)裝置。根據(jù)本發(fā)明所提供的用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)裝置，包括檢測(cè)單元以及數(shù)據(jù)分析單元，其中所述檢測(cè)單元是用于檢測(cè)待測(cè)個(gè)體遺傳信息和環(huán)境因素情況，獲得檢測(cè)結(jié)果；其中檢測(cè)遺傳信息情況包括檢測(cè)待測(cè)個(gè)體攜帶所述9個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的危險(xiǎn)等位基因情況，所述9個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的危險(xiǎn)等位基因分別是rs2123536多態(tài)性位點(diǎn)為T、rsl842896多態(tài)性位點(diǎn)為T、rs9349379多態(tài)性位點(diǎn)為G、rs9268402多態(tài)性位點(diǎn)為G、rsl2524865多態(tài)性位點(diǎn)為C、rsl0757274多態(tài)性位點(diǎn)為G、rsl333042多態(tài)性位點(diǎn)為G、rs7136259多態(tài)性位點(diǎn)為T、rsl 1066280多態(tài)性位點(diǎn)為A ;檢測(cè)環(huán)境因素情況包括檢測(cè)待測(cè)個(gè)體是否吸煙、是否飲酒、體重指數(shù)信息以及靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值；所述數(shù)據(jù)分析單元是用于對(duì)檢測(cè)單元的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析處理，其中包括
按照以下公式計(jì)算待測(cè)個(gè)體冠心病遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分=Σ Iog(ORi) XNi,其中ORi指第i個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的相對(duì)危險(xiǎn)度，Ni指待測(cè)個(gè)體所攜帶第i個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的危險(xiǎn)等位基因數(shù)目；按照評(píng)分值判斷待測(cè)個(gè)體分組，第I組Gl :0. 115 I. 200、第2組G2 :1. 201 I. 473、第 3 組 G3 1. 474 I. 737、第 4 組 G4 1. 738 2. 021、第 5 組 G5 2. 022 2. 972 ；按照以下公式計(jì)算患冠心病相對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分患冠心病相對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分=exp(-0. 220+0. 232XG2+0. 403XG3+0. 534XG4+0.852XG5+0. 178X 飲酒+1. IlOX 吸煙+0.010X 血糖值+0. 074X 體重指數(shù)+ (-0. 080) X 高密度脂蛋白膽固醇值)/0. 222 ;吸煙、飲酒為“是”或者“否”，“是”為1，“否”為O ;體重指數(shù)為BMI =體重/身高2，單位為Kg/m2 ;血糖、高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定方法為空腹12小時(shí)，單位為mg/dl。 本發(fā)明所述的用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)裝置，可以是虛擬裝置，只要能實(shí)現(xiàn)所述檢測(cè)單元以及數(shù)據(jù)分析單元的功能即可。所述的檢測(cè)單元可以是包括各種檢測(cè)試劑、試劑盒或檢測(cè)儀器；所述的數(shù)據(jù)分析單元可以是任何可以實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)單元的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析處理而得出待測(cè)個(gè)體冠心病遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分的運(yùn)算儀器、模塊或是虛擬設(shè)備，例如可以是預(yù)先按照上述遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分公式而制定的數(shù)據(jù)圖表，將檢測(cè)單元的檢測(cè)結(jié)果對(duì)照該數(shù)據(jù)圖表即能得出遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分?jǐn)?shù)值。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，本發(fā)明中，所述患冠心病相對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分的高低反映待測(cè)個(gè)體患冠心病危險(xiǎn)性的高低。在本發(fā)明的具體實(shí)施方式
中，為了實(shí)際應(yīng)用中方便評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)，檢測(cè)了 8579個(gè)健康人和7012個(gè)冠心病患者攜帶所述9個(gè)SNP基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的危險(xiǎn)等位基因情況，按照以下公式計(jì)算每個(gè)研究對(duì)象進(jìn)行冠心病遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分=Σ Iog(ORi) XNi,其中ORi指第i個(gè)SNP的相對(duì)危險(xiǎn)度，Ni指研究對(duì)象(待測(cè)個(gè)體)所攜帶第i個(gè)SNP的危險(xiǎn)等位基因數(shù)目；并根據(jù)所有研究對(duì)象冠心病遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分將研究對(duì)象等分為5組，建立了冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)對(duì)照模型。在本發(fā)明的具體實(shí)時(shí)方式中，所述的5組分別為第I組O. 115 I. 200、第2組I. 201 I. 473、第3組1.474 I. 737、第4組I. 738 2. 021和第5組2. 022 2. 972 ;冠心病遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分最低組到最高組，冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)逐漸升高。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步結(jié)合環(huán)境因素，建立了預(yù)測(cè)模型，可以計(jì)算患冠心病相對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分患冠心病相對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分=exp (-0. 220+0. 232XG2+0. 403XG3+0. 534XG4+0. 852XG5+0. 178X 飲酒+1. IlOX 吸煙+0. OlOX 血糖值+0. 074X體重指數(shù)+(-0. 080) X高密度脂蛋白膽固醇值)/0. 222。本發(fā)明中，所述多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)組合狀態(tài)能提供待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)率信息，所述rs2123536攜帶T等位基因、rsl842896攜帶T等位基因、rs9349379攜帶G等位基因、rs9268402攜帶G等位基因、rsl2524865攜帶C等位基因、rsl0757274攜帶G等位基因、rsl333042攜帶G等位基因、rs7136259攜帶T等位基因和rsll066280攜帶A等位基因的個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)升高I. 13到I. 36倍。所述環(huán)境因素對(duì)于個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)也有一定相關(guān)性。從而，另一方面，本發(fā)明還提供了所述的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素組合在制備用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)裝置和模型中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明還提供了檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259 和 rsll066280的試劑以及檢測(cè)所述環(huán)境因素的試劑組合在制備用于體外檢測(cè)冠心病相關(guān)因素(包括冠心病相關(guān)基因、環(huán)境因素)的制劑、試劑盒或用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)裝置或模型中的應(yīng)用。其中所述檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259 和 rsll066280 的試劑可以前述方法中用到的試劑，例如為用于直接測(cè)序法的試劑；或用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與限制性片斷長度多態(tài)性分析相結(jié)合的試劑；或用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與直接測(cè)序法相結(jié)合的試劑；或用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與直接測(cè)序法相結(jié)合的試劑；或用于以下任一種SNP分型方法的試齊IJ:基于雜交的方法、基于引物延伸的方法、基于構(gòu)象的方法或高分辨率溶解曲線分析技術(shù)。檢測(cè)所述環(huán)境因素的試劑可以為所屬領(lǐng)域中的常規(guī)試劑。另一方面，本發(fā)明還提供了體外檢測(cè)來自待測(cè)個(gè)體的樣品中單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259和rsll066280的試劑以及檢測(cè)所述環(huán)境因素的試劑組合在制備預(yù)測(cè)待測(cè)個(gè)體患冠心病的危險(xiǎn)性的制劑、試劑盒或檢測(cè)裝置中的應(yīng)用，其中，所述rs2123536攜帶T等位 基因、rsl842896攜帶T等位基因、rs9349379攜帶G等位基因、rs9268402攜帶G等位基因、rsl2524865攜帶C等位基因、rsl0757274攜帶G等位基因、rsl333042攜帶G等位基因、rs7136259攜帶T等位基因和rsll066280攜帶A等位基因的個(gè)體患冠心病的危險(xiǎn)性顯著升高。含有本發(fā)明的基因的待測(cè)樣品可以從受試者的細(xì)胞獲得，如來自血液、尿、唾液、胃液、頭發(fā)或活組織檢查。優(yōu)選來自血液。可以先從受試者的細(xì)胞獲得含有本發(fā)明的基因的待測(cè)樣品，然后按照常規(guī)方法提取基因的DNA。所述待測(cè)個(gè)體優(yōu)選為中國漢族人。在本發(fā)明大樣本的統(tǒng)計(jì)分析的基礎(chǔ)上，可以單獨(dú)使用本發(fā)明的方法，體外檢測(cè)來自待測(cè)個(gè)體的樣品中單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259 和 rsll066280 的攜帶等位基因情況以及所述的環(huán)境因素情況，以體外預(yù)測(cè)待測(cè)個(gè)體患冠心病的危險(xiǎn)性，達(dá)到體外預(yù)測(cè)待測(cè)個(gè)體患冠心病危險(xiǎn)性的目的。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，在利用本發(fā)明的技術(shù)評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，可按照以下操作進(jìn)行(I)收集研究對(duì)象(待測(cè)個(gè)體)環(huán)境暴露因素包括吸煙、飲酒、體重指數(shù)信息，其中體重指數(shù)等于體重(Kg)除以身高(m)的平方。抽取靜脈血，測(cè)定血糖和高密度脂蛋白膽固醇。(2)獲取個(gè)體遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分。對(duì)9個(gè)冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)的多態(tài)性位點(diǎn)(SNP)(2ρ24· I 區(qū)域 rs2123536、4q32. I 區(qū)域 rsl842896、6p24. I 區(qū)域 rs9349379、6p21. 32 區(qū)域rs9268402、6q23. 2 區(qū)域 rsl2524865、9p21. 3 區(qū)域 rsl0757274、9p21. 3 區(qū)域 rsl333042、12q21. 33區(qū)域rs7136259和12q24. 13區(qū)域rsll066280進(jìn)行基因分型。綜合個(gè)體攜帶9個(gè)SNP位點(diǎn)的危險(xiǎn)等位基因情況，進(jìn)行冠心病遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分，評(píng)分方法是研究對(duì)象攜帶風(fēng)險(xiǎn)等位基因的數(shù)目與風(fēng)險(xiǎn)等位基因效應(yīng)值(Iog(OR))相乘獲得每個(gè)SNP位點(diǎn)遺傳效應(yīng)，然后對(duì)9個(gè)SNP的遺傳效應(yīng)求和得到該研究對(duì)象的冠心病遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分。按照評(píng)分值判斷研究對(duì)象分組，第I組O. 115 I. 200 (G1)、第2組I. 201 I. 473 (G2)、第3組I. 474 I. 737 (G3)、第 4 組 I. 738 2. 021 (G4)和第 5 組 2. 022 2. 972 (G5)。(3)將上述遺傳信息和環(huán)境因素暴露信息放入已建立好的預(yù)測(cè)模型患冠心病相對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)=exp (-0. 220+0. 232 X G2+0. 403 X G3+0. 534 X G4+0. 852 X G5+0. 178 X 飲酒+1.110X吸煙+0.010X血糖值+0.074X體重指數(shù)+(-0.080) X高密度脂蛋白膽固醇值)/0· 222。(4)計(jì)算患病風(fēng)險(xiǎn)根據(jù)模型計(jì)算獲得該研究對(duì)象患冠心病的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)，判斷該研究對(duì)象是否為冠心病的高危人群。(5)完成個(gè)體化健康指導(dǎo)報(bào)告，報(bào)告研究對(duì)象患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的高低。個(gè)體化健康指導(dǎo)報(bào)告是在基因型結(jié)果的基礎(chǔ)上，結(jié)合冠心病生活方式危險(xiǎn)因素評(píng)估研究對(duì)象患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)，并制定出針對(duì)研究對(duì)象的個(gè)體化健康行動(dòng)方案。
綜上所述，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了與冠心病相關(guān)的9個(gè)重要變異位點(diǎn)rs2123536、rsl842896、 rs9349379、 rs9268402、 rsl2524865、 rsl0757274、 rsl333042、 rs7136259 和rsll066280，這幾個(gè)位點(diǎn)的特定組合，大大增加了個(gè)體罹患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步結(jié)合環(huán)境因素，用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)，能夠很好的識(shí)別冠心病的高危人群。據(jù)此，醫(yī)生可以計(jì)算冠心病遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分，完成研究對(duì)象基因型檢測(cè)報(bào)告和個(gè)體化健康指導(dǎo)報(bào)告，并報(bào)告研究對(duì)象患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的高低，制定出針對(duì)研究對(duì)象的個(gè)體化健康行動(dòng)方案。進(jìn)一步可有針對(duì)性的進(jìn)行干預(yù)，指導(dǎo)該個(gè)體改變不良生活習(xí)慣，降低環(huán)境因素對(duì)疾病的誘發(fā)，從而達(dá)到延緩和預(yù)防冠心病發(fā)生的目的?？梢?，本發(fā)明的技術(shù)在冠心病的預(yù)測(cè)和預(yù)防中有重要的應(yīng)用前景。


圖I為冠心病危險(xiǎn)等位基因遺傳貢獻(xiàn)速查圖表。圖2為冠心病遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分分組速查圖表。圖3為遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分分組和環(huán)境因素暴露信息預(yù)測(cè)冠心病風(fēng)險(xiǎn)的ROC曲線。
具體實(shí)施例方式為了更清楚地理解本發(fā)明，現(xiàn)參照下列實(shí)施例及附圖進(jìn)一步描述本發(fā)明。實(shí)施例僅用于解釋而不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法為所屬領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法和常規(guī)條件，或按照制造商所建議的條件。實(shí)施例一首先在中國漢族人群中選取7012例冠心病患者和8579例正常人為研究對(duì)象，采集空腹血并收集年齡、性別、血壓水平、血脂水平、身高、體重、吸煙、飲酒和疾病史等相關(guān)信息，具體如下病例對(duì)照樣本入選標(biāo)準(zhǔn)冠心病病例包括心肌梗死患者和心絞痛患者。心肌梗死病例的入選診斷標(biāo)準(zhǔn)為急性心肌梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)(根據(jù)WHO 1979年的診斷標(biāo)準(zhǔn))即典型胸痛癥狀持續(xù)30分鐘以上；心電圖連續(xù)2個(gè)導(dǎo)聯(lián)ST段抬高(肢體導(dǎo)聯(lián)O. Imv,胸導(dǎo)聯(lián)O. 2mv)并有系列動(dòng)態(tài)變化；心肌壞死的血清標(biāo)記物濃度升高，如肌鈣蛋白(TNT/TNI)升高，心肌同工酶(CK-MB)升高大于正常值高限的2倍。心絞痛病例的入選診斷標(biāo)準(zhǔn)為經(jīng)冠脈造影發(fā)現(xiàn)冠狀動(dòng)脈至少ー個(gè)主要分支狹窄超過70%。經(jīng)各項(xiàng)檢查除外心臟瓣膜疾病、先天性心臟病、心カ衰竭、嚴(yán)重的腎臟及肝臟疾病、繼發(fā)性高血壓、心肌病、家族性高膽固醇血癥及可疑冠心病患者。符合上述診斷的病例可以入選本研究。對(duì)照組入選標(biāo)準(zhǔn)既往無冠心病或其他動(dòng)脈粥樣硬化病史，無胸痛、胸悶等心臟病癥狀，心電圖無明顯缺血性改變。病例組和對(duì)照組均為中國漢族人，且無血緣關(guān)系。研究人群包括7012例冠心病患者和8579例正常人，其基本特征如下表
病例對(duì)照
樣本量70128579
男性/女性5887/11255865/2714年齡51.65±8.0355. 31±8.80
BMI (kg/m2)26.27±3.6424.65±3.64
收縮壓(mmHg)124.09±17.80140.23±22.86
舒張壓 OnmHg)77. 33±11.4286.23±12.89
血糖(mg/dL)107. 02 土 33. 7394. 56 土 30. 07
TC(mg/dL)173.35±41.65182. 53±34. 58
TG(mg/dL)161. 13±101.04 145.99± 106.07
HDLC(mg/dL)39. 48 ±10. 0550. 74 ±12. 43
LDLC(mg/dL)95. 10±32.62103.68±29.21
高血壓(％ )57. 0656. 52
糖尿病(％)24. 573. 76
吸煙(％ )67. 6137. 87
飲酒(％ )44.4132.51本實(shí)施例的分析冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)方法，結(jié)合研究對(duì)象遺傳信息和環(huán)境因素暴露來綜合評(píng)估研究對(duì)象患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的高低，該預(yù)測(cè)方法包括以下步驟(I)建立冠心病信息數(shù)據(jù)庫，包括基因型信息和環(huán)境因素暴露信息。(2)基因型信息通過對(duì)9個(gè)冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)的多態(tài)性位點(diǎn)(SNP) (2p24. I區(qū)域rs2123536、4q32. I 區(qū)域 rsl842896、6p24. I 區(qū)域 rs9349379、6p21. 32 區(qū)域 rs9268402、6q23. 2 區(qū)域 rsl2524865、9p21. 3 區(qū)域 rsl0757274、9p21. 3 區(qū)域 rsl333042、12q21. 33 區(qū)域rs7136259和12q24. 13區(qū)域rsll066280進(jìn)行基因分型獲得。9個(gè)單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)及其兩翼序列如下rs2123536AAAGAGGGA0GGGGAATCAGAAAGTG[T/C]GCGTOGTATTTCAGACATCAAAOGT(SEQ ID No. I)rsl842896AGTATTATTTAAAATAGCACCAAAAT[G/T]CATTCCCTTAAAAGCACTAGTTATC (SEQ ID No. 2)rs9349379GTCTATGCCCTTGAGATCATATAAAA[G/A]TAGCTTAAAATCATTGGCCATAGTT (SEQ ID No. 3)rs9268402aaatcttgagagggatatgaacatcc[A/G]gattgaagacgatcaaagcatccca(SEQID No . 4 ) r s I 2 5 2 4 8 6 5 GA A GGTG AA TGGG A AA A A T A A CTT AA [ A / C]GTCAGTCCCAAAGGCTAAAGTGGTA (SEQ ID No. 5)rsl0757274GTGGGTCAAATCTAAGCTGAGTGTTG[A/G]GACATAATTGAAATTCACTAGATAG(SEQ ID No. 6)
rsl333042GGCAAGGGGACATACCAAACACTAAC[A/G]GGCACATTGGGGTTTTCTGGCTATT(SEQ ID No. 7)rs7136259aggtttgtgtagtacactgtgtgaat[C/T]tgcacaataacgaaattgcaacgca(SEQ ID No. 8)rsl 1066280GAGAGGTTCTTTCCTTTGAAAACCAT [ A / T ]CTTCTGTGGAAATAGCTGACAAATT(SEQ IDNo. 9)分析結(jié)果顯示，上述9個(gè)基因型多態(tài)性位點(diǎn)(rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259 和 rsll066280)與冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)顯著關(guān)聯(lián)。其中，rs2123536攜帶T等位基因、rsl842896攜帶T等位基因、rs9349379攜帶G等位基因、rs9268402攜帶G等位基因、rsl2524865攜帶C等位基因、rsl0757274攜帶G等位基因、rsl333042攜帶G等位基因、rs7136259攜帶T等位基因和rsll066280攜帶A等位基因的個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)明顯升高，冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)升高I. 13到I. 36倍(見表I)。表I. 9個(gè)單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)與冠心病患病之間的關(guān)聯(lián)關(guān)系
權(quán)利要求
1.多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素組合，其中， 所述的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)包括以下位點(diǎn)rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259 和 rsll066280； 所述的環(huán)境因素包括個(gè)體吸煙、飲酒、體重指數(shù)信息以及靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素組合，其中， 所述rs2123536攜帶T等位基因、rsl842896攜帶T等位基因、rs9349379攜帶G等位基因、rs9268402攜帶G等位基因、rsl2524865攜帶C等位基因、rsl0757274攜帶G等位基因、rsl333042攜帶G等位基因、rs7136259攜帶T等位基因和rsll066280攜帶A等位基因； 所述的環(huán)境因素包括個(gè)體是否吸煙、是否飲酒、體重指數(shù)信息以及靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值。
3.權(quán)利要求I或2的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素組合在制備用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)裝置中的應(yīng)用。
4.檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259 和 rsll066280 的試劑、以及檢測(cè)個(gè)體環(huán)境因素包括靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值的試劑組合，在制備用于體外檢測(cè)冠心病相關(guān)因素的制劑、試劑盒或用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)裝置中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其中，所述用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)裝置包括檢測(cè)單元以及數(shù)據(jù)分析單元； 所述檢測(cè)單元是用于檢測(cè)待測(cè)個(gè)體遺傳信息和環(huán)境因素情況，獲得檢測(cè)結(jié)果；其中檢測(cè)遺傳信息情況包括檢測(cè)待測(cè)個(gè)體攜帶所述9個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的危險(xiǎn)等位基因情況，所述9個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的危險(xiǎn)等位基因分別是rs2123536多態(tài)性位點(diǎn)為T、rsl842896多態(tài)性位點(diǎn)為T、rs9349379多態(tài)性位點(diǎn)為G、rs9268402多態(tài)性位點(diǎn)為G、rsl2524865多態(tài)性位點(diǎn)為C、rsl0757274多態(tài)性位點(diǎn)為G、rsl333042多態(tài)性位點(diǎn)為G、rs7136259多態(tài)性位點(diǎn)為T、rsl 1066280多態(tài)性位點(diǎn)為A ;檢測(cè)環(huán)境因素情況包括檢測(cè)待測(cè)個(gè)體是否吸煙、是否飲酒、體重指數(shù)信息以及靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值； 所述數(shù)據(jù)分析單元是用于對(duì)檢測(cè)單元的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析處理，其中包括 按照以下公式計(jì)算待測(cè)個(gè)體冠心病遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分 遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分=E Iog(ORi) XNi,其中ORi指第i個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的相對(duì)危險(xiǎn)度，Ni指待測(cè)個(gè)體所攜帶第i個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的危險(xiǎn)等位基因數(shù)目； 按照評(píng)分值判斷待測(cè)個(gè)體分組，第I組Gl :0. 115 I. 200、第2組G2 :1. 201 I. 473、第 3 組 G3 :1. 474 I. 737、第 4 組 G4 :1. 738 2. 021、第 5 組 G5 :2. 022 2. 972 ； 按照以下公式計(jì)算患冠心病相對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分 患冠心病相對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分=exp (-0. 220+0. 232XG2+0. 403XG3+0. 534XG4+0. 852XG5+0. 178X 飲酒 +1. IlOX 吸煙 +0. OlOX 血糖值+0. 074X 體重指數(shù)+(-() 080) X 高密度脂蛋白膽固醇值)/0. 222 ;吸煙、飲酒為“是”或者“否”，“是”為1，“否”為0 ;體重指數(shù)為BMI =體重/身高2，單位為Kg/m2 ;血糖、高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定方法為空腹12小時(shí)，單位為mg/dl ；其中，患冠心病相對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分的高低反映待測(cè)個(gè)體患冠心病危險(xiǎn)性的高低。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其中，所述多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)組合狀態(tài)提供待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)率信息，所述rs2123536攜帶T等位基因、rsl842896攜帶T等位基因、rs9349379攜帶G等位基因、rs9268402攜帶G等位基因、rsl2524865攜帶C等位基因、rsl0757274攜帶G等位基因、rsl333042攜帶G等位基因、rs7136259攜帶T等位基因和rsll066280攜帶A等位基因的個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)升高I. 13到I. 36倍。
7.體外檢測(cè)來自待測(cè)個(gè)體的樣品中單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259 和 rsll066280 的試劑、以及檢測(cè)個(gè)體靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值的試劑組合，在制備預(yù)測(cè)待測(cè)個(gè)體患冠心病的危險(xiǎn)性的制劑、試劑盒或檢測(cè)裝置中的應(yīng)用，其中，所述rs2123536攜帶T等位基因、rsl842896攜帶T等位基因、rs9349379攜帶G等位基因、rs9268402攜帶G等位基因、rsl2524865攜帶C等位基因、rsl0757274攜帶G等位基因、rsl333042攜帶G等位基因、rs7136259攜帶T等位基因和rsll066280攜帶A等位基因的個(gè)體患冠心病的危險(xiǎn)性顯著升高。
8.根據(jù)權(quán)利要求3、4或7所述的應(yīng)用，其中所述的待測(cè)個(gè)體為中國漢族人；優(yōu)選地，待測(cè)樣品來自待測(cè)個(gè)體的血液、尿、唾液、胃液、頭發(fā)或活組織檢查。
9.根據(jù)權(quán)利要求4或7所述的應(yīng)用，其中所述檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs2123536、rsl842896、rs9349379、rs9268402、rsl2524865、rsl0757274、rsl333042、rs7136259 和rsll066280的試劑為用于直接測(cè)序法的試劑；或用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與限制性片斷長度多態(tài)性分析相結(jié)合的試劑；或用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與直接測(cè)序法相結(jié)合的試劑；或用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與直接測(cè)序法相結(jié)合的試劑；或用于以下任一種SNP分型方法的試劑基于雜交的方法、基于引物延伸的方法、基于構(gòu)象的方法或高分辨率溶解曲線分析技術(shù)。
10.一種用于評(píng)估待測(cè)個(gè)體患冠心病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)裝置，該裝置包括檢測(cè)單元以及數(shù)據(jù)分析單元，其中 所述檢測(cè)單元是用于檢測(cè)待測(cè)個(gè)體遺傳信息和環(huán)境因素情況，獲得檢測(cè)結(jié)果；其中檢測(cè)遺傳信息情況包括檢測(cè)待測(cè)個(gè)體攜帶所述9個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的危險(xiǎn)等位基因情況，所述9個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的危險(xiǎn)等位基因分別是rs2123536多態(tài)性位點(diǎn)為T、rsl842896多態(tài)性位點(diǎn)為T、rs9349379多態(tài)性位點(diǎn)為G、rs9268402多態(tài)性位點(diǎn)為G、rsl2524865多態(tài)性位點(diǎn)為C、rsl0757274多態(tài)性位點(diǎn)為G、rsl333042多態(tài)性位點(diǎn)為G、rs7136259多態(tài)性位點(diǎn)為T、rsll066280多態(tài)性位點(diǎn)為A ;檢測(cè)環(huán)境因素情況包括檢測(cè)待測(cè)個(gè)體是否吸煙、是否飲酒、體重指數(shù)信息以及靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值； 所述數(shù)據(jù)分析單元是用于對(duì)檢測(cè)單元的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析處理，其中包括 按照以下公式計(jì)算待測(cè)個(gè)體冠心病遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分 遺傳危險(xiǎn)因素評(píng)分=E Iog(ORi) XNi,其中ORi指第i個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的相對(duì)危險(xiǎn)度，Ni指待測(cè)個(gè)體所攜帶第i個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的危險(xiǎn)等位基因數(shù)目； 按照評(píng)分值判斷待測(cè)個(gè)體分組，第I組Gl :0. 115 I. 200、第2組G2 :1. 201 I. 473、第 3 組 G3 :1. 474 I. 737、第 4 組 G4 :1. 738 2. 021、第 5 組 G5 :2. 022 2. 972 ； 按照以下公式計(jì)算患冠心病相對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分 患冠心病相對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分=exp (-0. 220+0. 232XG2+0. 403XG3+0. 534XG4+0. 852XG5+0 . 178X 飲酒 +1. IlOX 吸煙 +0. OlOX 血糖值 +0. 074X 體重指數(shù) +(-0. 080) X 高密度脂蛋白膽固醇值)/0. 222 ;吸煙、飲酒為“是”或者“否”，“是”為1，“否”為0 ;體重指數(shù)為BMI =體重/身高2，單位為Kg/m2 ;血糖、高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定方法為空腹12小時(shí)，單位為mg/dl。
全文摘要
本發(fā)明涉及與冠心病相關(guān)的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與環(huán)境因素組合及其應(yīng)用，其中，所述的多個(gè)基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)包括以下位點(diǎn)rs2123536、rs1842896、rs9349379、rs9268402、rs12524865、rs10757274、rs1333042、rs7136259和rs11066280；所述的環(huán)境因素包括個(gè)體吸煙、飲酒、體重指數(shù)信息以及靜脈血中血糖值和高密度脂蛋白膽固醇值。本發(fā)明基于這樣的組合因素建立了個(gè)體水平冠心病預(yù)測(cè)模型，其在評(píng)估人群冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)中具有重要應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102758010SQ201210189390
公開日2012年10月31日 申請(qǐng)日期2012年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月7日
發(fā)明者李宏帆, 王來元, 陳恕鳳, 顧東風(fēng), 魯向鋒, 黃建鳳 申請(qǐng)人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外心血管病醫(yī)院